TNAIA 0287-2024 枸杞中6種黃酮類物質(zhì)含量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

ICS65.020.01CCSA017

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0287-2024枸杞中6種黃酮類物質(zhì)含量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法DeterminationofflavanoidsinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry2024-05-10發(fā)布 2024-05-30實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024II前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口?；瘜W(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)。翔、開建榮、張學(xué)玲、張小飛。本文件為首次發(fā)布。T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024PAGEPAGE1枸杞中6種黃酮類物質(zhì)含量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了枸杞中黃酮類物質(zhì)的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定方法。-7-O-ft奈酚-3-O-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定。1.00mg/kg，異槲皮苷和槲皮素-7-O-葡萄糖0.010mg/kg，ft奈酚-3-O-6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的方法定量限均為0.050mg/kg。規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要規(guī)定的術(shù)語和定義。原理70%甲醇溶液提取，渦旋超聲，微孔濾膜過濾，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)和確證，外標(biāo)法定量。試劑與材料除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。甲酸（CH2O2）：色譜純。 蘆丁（rutin，CAS153-18-4）、異槲皮苷（isoquercitrin，CAS482-35-9）、槲皮素-7-O-葡萄糖苷（quercetin-7-O-glucoside，CAS491-50-9）、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，CAS17650-84-9）、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷（6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside，CAS號(hào)403861-33-6）和水仙苷（narcissin，CAS號(hào)604-80-8）。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量的蘆丁、異槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷標(biāo)準(zhǔn)品（0.011000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，-18下保存。10mg/L標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，-18℃下保存。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（0.01mg/L~30mg/L）用甲醇定容至刻度。70%甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)）：70mL100mL。0.1%甲酸溶液（體積分?jǐn)?shù)）：1mL1000mL。濾膜：0.22μm，有機(jī)相。離心管：50mL，塑料。儀器與設(shè)備液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2 0.01g0.0001g。高速萬能粉碎機(jī)：10000r/min。超聲波清洗機(jī)。離心機(jī)：4000r/min。渦旋混合器。分析步驟試樣的制備-18℃（可加少量的液氮（30gs），分別置于樣品瓶中，-18冷凍備用。試樣的提取鮮果稱取試樣2g（精確至0.0001g）于50mL離心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振搖混勻，超聲提取30min，放入離心機(jī)，4000r/min離心5min，上清液過0.22μm濾膜，待測(cè)定。干果稱取試樣1g（精確至0.0001g）于50mL離心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振搖混勻，超聲提取30min，放入離心機(jī)，4000r/min離心5min，上清液過0.22μm濾膜，待測(cè)定。測(cè)定液相色譜參考條件a）色譜柱：C18柱，150mm×2.1mm（i.d），1.8μm，或性能相當(dāng)者；b）柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；流動(dòng)相：A0.1%甲酸溶液（5.7），Be）進(jìn)樣量：2.0μL。表1流動(dòng)相及其梯度條件（VA+VB）時(shí)間(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)0.000.390101.000.3901014.000.3109016.000.3109018.000.3901020.000.39010質(zhì)譜參考條件a）離子源類型：電噴霧離子源；b）掃描方式：選擇離子監(jiān)測(cè)模式；c）電噴霧電壓：3.5kV；d）毛細(xì)管傳輸溫度：300℃e）碰撞壓力：1.5mTorr；f）鞘氣：30arb；g）輔氣：10arb。表2黃酮類物質(zhì)的選擇離子監(jiān)測(cè)分析參數(shù)名稱保留時(shí)間/min定性離子對(duì)/m/z定量離子對(duì)/m/z碰撞能量/eV蘆丁rutin4.73609.14/271.071609.14/300.042609.14/300.042-43.25-26.61異槲皮苷isoquercitrin4.91462.98/301.042462.98/301.042-21.474.9槲皮素-7-O-葡萄糖苷quercetin-7-O-glucoside4.90463.21/151.071463.21/301.113463.21/301.113-38.11-22.78ft奈酚-3-O-蕓香糖苷5.17593.27/255.042593.27/285.042-54.24kaempferol-3-O-rutinoside593.27/285.042-29.856-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside5.25623.3/271.042623.3/315.113623.3/315.113-53.82-27.83水仙苷narcissin5.25623.21/300.042623.21/315.042623.21/315.042-43.42-43.42定性測(cè)定苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷4.73、4.91、4.90、5.17、5.25、5.25minA1品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。表3定性確證相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%定量測(cè)定采用外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。保證所測(cè)樣品中組分的響應(yīng)值均在儀器的線性范圍內(nèi)?？瞻自囼?yàn)除不加入試樣外，其他過程與試樣處理相同。結(jié)果計(jì)算和表達(dá)試樣中蘆丁、異槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）計(jì)，按式（1）計(jì)算：1000

……（1）式中：

m 1000——試樣中被測(cè)物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；——試樣溶液中被測(cè)物的含量，單位為毫克每升（mg/L）；V——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。注：測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的10%。色譜圖各目標(biāo)化合物的選擇離子監(jiān)測(cè)（SRM）色譜圖參見圖A。附錄A（資料性）黃酮類物質(zhì)的選擇離子監(jiān)測(cè)（SRM）質(zhì)量色譜圖黃酮類物質(zhì)的選擇離子監(jiān)測(cè)（SRM）質(zhì)量色譜圖見圖A。

160000

140000120000100000800006000040000

200004.904.90

04.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6

響應(yīng)值

5.17響應(yīng)值4.735.17響應(yīng)值4.73

6000040000 2000004.44.64.85.05.25.45.65.86.06.2

ft奈酚-3-O-蕓香糖苷

t,minrutin

t,min5.25350000響應(yīng)值5.25

5.25350000響應(yīng)值5.25300000

3000002500