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1.2微生物的培育技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培育技術(shù)一、教學(xué)目標(biāo)1.概述培育基的養(yǎng)分構(gòu)成,無菌技術(shù)的原理、常用設(shè)備和方法。2.通過進(jìn)行酵母菌的純培育,說明微生物純培育與的基本操作要求,初步駕馭無菌操作、倒板和平板劃線的基本技能。3.通過評估論點(diǎn)的可信程度發(fā)展批判性思維。4.關(guān)注有害生物的限制、宣揚(yáng)健康的生活方式等。二、教學(xué)重難點(diǎn)1.教學(xué)重點(diǎn)(1)微生物純培育的基本操作要求。(2)酵母菌的純培育。2.教學(xué)難點(diǎn)(1)酵母菌的純培育。教學(xué)思路老師以“自制酸奶”來引起學(xué)生的愛好,通過觀看老師供應(yīng)的視頻資料和教材中的內(nèi)容,了解配制培育基和無菌技術(shù)的操作事項(xiàng),并通過試驗(yàn)“酵母菌的純培育”以學(xué)生小組為單位,自己動(dòng)手操作這個(gè)試驗(yàn),并在此基礎(chǔ)上學(xué)會(huì)倒平板和平板劃線法,通過自己動(dòng)手操作,培育學(xué)生的試驗(yàn)技能和小組合作意識四、教學(xué)過程【新課導(dǎo)入】老師利用教材第9頁的“從社會(huì)中來”制作酸奶來引起學(xué)生的愛好,并利用課件展示相關(guān)操作視頻,并提問,在制作酸奶的過程中,不行避開會(huì)有一些雜菌混入。那么,怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢?從社會(huì)中來經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細(xì)菌,在經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶,由于制作工藝并不困難,一些人會(huì)在家里自制酸奶,自制酸奶雖然便利,但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事務(wù)屢見不鮮,主要緣由是制作過程中有雜菌混入。引發(fā)學(xué)生思索,并組織學(xué)生分為小組相互探討(這須要應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培育技術(shù))【新課講授】(一)培育基的配制老師指導(dǎo)學(xué)生閱讀教材第9-10頁的內(nèi)容,并讓學(xué)生回答相關(guān)問題:1.培育基的概念及分類是什么?2.培育基的養(yǎng)分結(jié)構(gòu)有什么?
3.如何配制培育基?老師利用課件展示“配制培育基”的相關(guān)視頻,在觀看視頻期間,老師讓學(xué)生關(guān)注配制培育基所加的成分、培育基的物理狀態(tài)并學(xué)習(xí)配制方法。通過觀看視頻和回答老師的問題,讓學(xué)生加深對基礎(chǔ)學(xué)問的理解。1.培育基的概念和類型(1)概念:人們依據(jù)微生物對養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的養(yǎng)分基質(zhì),即培育基。(2)培育基的作用:用以培育、分別、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。(3)培育基的類型標(biāo)準(zhǔn)培育基種類培育基特點(diǎn)作用物理性質(zhì)固體培育基加凝固劑,如瓊脂微生物的分別與鑒定,活菌計(jì)數(shù),保藏菌種半固體培育基容器放倒不致流出,猛烈振動(dòng)則破散視察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定液體培育基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)功能選擇培育基依據(jù)某種微生物的特別養(yǎng)分要求配置選擇分別鑒別培育基加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑鑒定成分來源自然培育基含化學(xué)成分不明確的自然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培育基用已知的化學(xué)物質(zhì)配制分類鑒定2.培育基的配制(1)基本成分:水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。①碳源:a.無機(jī)碳源:CO2、CO32-、HCO3-→自養(yǎng)微生物;b.有機(jī)碳源:葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等→異養(yǎng)微生物。②氮源:a.無機(jī)氮源:NH4+、NO3-、NH3等。b.有機(jī)氮源:牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。留意:含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。如氨基酸等。(2)特別需求:某些微生物對pH、特別養(yǎng)分物質(zhì)以及O2的需求。特別養(yǎng)分物質(zhì):維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。(牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有)①培育乳酸桿菌時(shí),須要在培育基中添加維生素;②培育霉菌時(shí),須要將培育基調(diào)至酸性;③培育細(xì)菌時(shí),須要將培育基調(diào)至中性或弱堿性;④培育厭氧微生物時(shí),須要供應(yīng)無氧的條件。(二)無菌技術(shù)老師首先讓學(xué)生閱讀教材第10頁內(nèi)容,讓學(xué)生總結(jié)無菌技術(shù)的主要內(nèi)容,并利用課件展示教材第11頁的“資料卡”補(bǔ)充相關(guān)學(xué)問點(diǎn)和相關(guān)圖片或視頻,幫助學(xué)生完善學(xué)問,結(jié)合教材中的內(nèi)容,老師提出問題:1.說出無菌技術(shù)的原理。2.比較消毒和滅菌對微生物作用效果的差異。3.無菌技術(shù)除用來防止試驗(yàn)室的培育物被其他外來微生物污染外,還有什么作用?學(xué)生小組之間相互探討,并回答問題。老師在學(xué)生回答結(jié)束后對無菌技術(shù)做最終總結(jié)。通過比較分析,讓學(xué)生明白兩種無菌技術(shù)的差異,以便他們在實(shí)踐中精確地應(yīng)用技術(shù)。1.無菌技術(shù)的操作對象消毒和滅菌工作的兩個(gè)方面:(1)對試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。(2)將用于微生物培育的器皿、接種用具和培育基等進(jìn)行滅菌。(3)試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸。留意:避開已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品接觸。為了避開四周環(huán)境中微生物的污染,試驗(yàn)操作應(yīng)在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。2.無菌技術(shù)的分類在微生物探討、醫(yī)療操作、食品生產(chǎn)中實(shí)行的防止其他微生物污染的技術(shù),就是無菌技術(shù)。獲得純凈的微生物培育物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。無菌技術(shù)應(yīng)圍圍著如何避開雜菌的污染綻開,主要包括消毒和滅菌?!鞠尽浚?)概念:指運(yùn)用較為和順的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。(2)常用的消毒方法①煮沸消毒法:100℃煮沸5~6min,可以殺死微生物的養(yǎng)分細(xì)胞和一部分芽孢。②巴氏消毒法:62~65℃下消毒30min或80~90℃處理30s~1min,適合一些不耐高溫的液體,如牛奶。可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物,并且不破壞牛奶的養(yǎng)分成分。③化學(xué)藥劑消毒法:用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。④紫外線消毒法:接種室、接種箱或超凈工作臺在運(yùn)用前可用紫外線照耀30min。在照耀前,適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加強(qiáng)消毒效果。【滅菌】(1)概念:指運(yùn)用猛烈的理化方法殺死物體內(nèi)外全部的微生物,包括芽孢和孢子。(2)常用的滅菌方法①濕熱滅菌:利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌效果最好,100kPa、121℃下維持15~30min,常用于培育基、無菌水等的滅菌。②干熱滅菌:將滅菌物品放入密閉容器如干熱滅菌箱,在160~170℃的熱空氣中維持2~3h。常用于耐高溫的和須要保持干燥的物品(如玻璃器皿、金屬用具等)。③灼燒滅菌:將微生物的接種工具,如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具,干脆在酒精燈火焰的充分燃燒層(外焰)灼燒,可以快速徹底地滅菌。此外,在接種過程中,試管口、瓶口等簡潔被污染的部位,也可以通過火焰灼燒來滅菌。(三)微生物的純培育1.微生物的純培育的概念:在微生物學(xué)中,將接種于培育基內(nèi),在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培育物。由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培育物,獲得純培育物的過程就是純培育。2.微生物的純培育老師利用課件播放“酵母菌的純培育”的相關(guān)視頻,并在觀看視頻時(shí)再復(fù)習(xí)一下配制培育基的方法和試驗(yàn)員的無菌操作技術(shù),并組織學(xué)生利用課前打算好的試驗(yàn)用具和材料,以小組為單位綻開試驗(yàn),【試驗(yàn)的目的要求】:(1)學(xué)會(huì)配制培育酵母菌的培育基并倒平板(2)學(xué)會(huì)無菌操作(3)學(xué)會(huì)通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落【試驗(yàn)原理】:接受平板劃線法和稀釋涂布平板法,能將單個(gè)微生物分散在固體培育基上之后,經(jīng)培育得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖而形成的菌落?!驹囼?yàn)材料用具】酵母菌培育液、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水、天平、小刀、紗布、燒杯、錐形瓶、棉塞、報(bào)紙、皮筋、培育皿、接種環(huán)、酒精燈、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱和恒溫培育箱。【試驗(yàn)步驟】:(1)配置培育基(2)滅菌(3)倒平板(4)接種和分別酵母菌通過接種環(huán)在固體培育基(平板)表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培育,可以分別得到由單個(gè)微生物繁殖而形成的單菌落。留意:①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培育基不同位置連續(xù)劃線多次;②劃線首尾不能相接;③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌;④劃線后,培育皿倒置培育。(5)培育酵母菌完成平板劃線后,待菌液被培育基吸取,將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置,放入28℃左右(培育溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培育箱中培育24~48h。在學(xué)生小組進(jìn)行試驗(yàn)的過程中,老師巡察試驗(yàn)室,并在學(xué)生操作不規(guī)范時(shí)指引出來,視察學(xué)生的操作方法和操作平安。在試驗(yàn)結(jié)束后,要求學(xué)生對整個(gè)試驗(yàn)過程進(jìn)行思索,并以表格的形式記錄培育的結(jié)果平板菌落生長狀況菌落數(shù)形態(tài)顏色大小接種未接種通過學(xué)生自己動(dòng)手操作,可以提高他們的試驗(yàn)技能,培育他們的合作意識?!窘Y(jié)果分析與評價(jià)】(1)培育基滅菌后,須要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么方法來估計(jì)培育基的溫度?答案提示:可以用手觸摸盛有培
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