動物血液基因組DNA的提取專家講座

動物基因組DNA提取

常祖明動物血液基因組DNA的提取第1頁背景知識動物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA？與植物細(xì)胞差異？動物血液基因組DNA的提取第2頁背景知識DNA存在形式動物血液基因組DNA的提取第3頁背景知識DNA存在形式動物血液基因組DNA的提取第4頁背景知識DNA存在形式動物血液基因組DNA的提取第5頁背景知識DNA存在形式核苷酸雙螺旋結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)-核小體二級機(jī)構(gòu)-螺線管三級結(jié)構(gòu)-超螺旋管四級機(jī)構(gòu)-染色體+組蛋白動物血液基因組DNA的提取第6頁DNA為白色類似石棉樣纖維狀物，大都呈酸味。DNA是極性化合物，普通都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們鈉鹽比游離酸易溶于水。在酸性溶液中，易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。DNA理化性質(zhì)動物血液基因組DNA的提取第7頁試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握CTAB法提取植物DNA原理掌握CTAB法提取植物DNA試驗(yàn)方法注意：此方法會把少許RNA提取出來，故后面通稱核酸提取。動物血液基因組DNA的提取第8頁試驗(yàn)原理

哺乳動物成熟紅細(xì)胞已經(jīng)高度分化，因而當(dāng)中沒有細(xì)胞核，無法提取DNA。禽類血細(xì)胞則能夠。禽類代謝旺盛，血液中紅細(xì)胞更多，而且紅細(xì)胞中有完整細(xì)胞核、大量染色體。且材料易得、經(jīng)濟(jì)。用雞血細(xì)胞做試驗(yàn)材料有兩個原因：一是因?yàn)殡u血細(xì)胞核DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細(xì)胞作試驗(yàn)材料經(jīng)常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。動物血液基因組DNA的提取第9頁試驗(yàn)原理固定血樣采集抗凝血裂解細(xì)胞蛋白質(zhì)降解蛋白質(zhì)變性沉淀DNA洗滌去雜質(zhì)動物血液基因組DNA的提取第10頁普通家雞無水乙醇、檸檬酸、檸檬酸鈉、尿素、十二烷基硫酸鈉(SDS)、1MTris-HCl(PH8.0)緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)

、蛋白酶K、Tris飽和酚、氯仿(三氯甲烷)、異戊醇 試驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)儀器取血針及管離心機(jī)：3臺/12管離心管：水浴鍋：65℃移液槍（包含槍頭）動物血液基因組DNA的提取第11頁試驗(yàn)試劑1.75%乙醇2.ACD抗凝劑100ml（共需48ml，每管0.8ml）3.禽血裂解液100ml（共需51ml，每管1.7ml）4.氯仿-異戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml5.酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml6.TE緩沖液PH8.050ml動物血液基因組DNA的提取第12頁試驗(yàn)步驟75%乙醇20ml翅下取血5ml5ml離心管800ulACD抗凝劑800ulACD抗凝劑8000轉(zhuǎn)離心1分鐘棄上清液8000轉(zhuǎn)離心1分鐘棄上清液取680ul8000轉(zhuǎn)離心1分鐘55℃水浴過夜1700ul裂解液10ul蛋白酶K動物血液基因組DNA的提取第13頁試驗(yàn)步驟2ml飽和酚搖勻至無塊狀1轉(zhuǎn)離心10分鐘DNA酚蛋白層5ml離心管取上層透明DNA溶液2ml酚-氯仿-異戊醇1轉(zhuǎn)離心10分鐘5ml離心管取上層DNA液1.8ml氯仿-異戊醇1轉(zhuǎn)離心10分鐘5ml離心管取上層DNA液無水乙醇75%無水乙醇1000ulTE緩沖液晾干-20℃保留動物血液基因組DNA的提取第14頁在整個試驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作；部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護(hù)；剛投入水浴時能夠稍快速晃動，之后晃動一定要輕柔！

再每一次加入藥劑后，都要輕輕晃動離心管，使之混勻。

注意事項(xiàng)動物血液基因組DNA的提取第15頁思索題本試驗(yàn)中用到各種試劑作用是什么？本試驗(yàn)中進(jìn)行了幾次離心操作，每次目標(biāo)？動物血液基因組DNA的提取第16頁試驗(yàn)安排按照學(xué)號分組進(jìn)行試驗(yàn)，每6人一組，一組做3管，用一個研缽。每3組共用1臺離心機(jī)同時進(jìn)行離心操作。6人一組動物血液基因組DNA的提取第17頁級生物技術(shù)專業(yè)分子生物學(xué)試驗(yàn)匯報姓名：學(xué)