土壤羥胺還原酶（hydroxylaminereductase,HR）試劑盒說明書

第第頁土壤羥胺還原酶（hydroxylaminereductase,HR）試劑盒說明書土壤羥胺還原酶（hydroxylaminereductase,HR）試劑盒說明書微量法100T/48S注意：正式測定之前選擇23個預期差別大的樣本做猜測定。測定意義：土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中心產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。測定原理：硫酸鐵銨中的Fe3+可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為Fe2+，F(xiàn)e2+在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色搭配物，在510nm處有吸取峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使搭配物形成量削減，510nm處吸光值的削減可反映羥胺還原酶的活性。自備試驗用品及儀器：天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、氮吹儀。試劑構(gòu)成和配制：試劑一：液體4mL×1瓶，4℃保管。試劑二：粉劑×1瓶，4℃保管。臨用前加4mL蒸餾水充分溶解。試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保管。試劑四：液體8mL×1瓶，4℃保管。試劑五：液體4mL×1瓶，4℃保管。試劑六：液體2mL×1瓶，4℃避光保管。試劑七：液體2mL×1瓶，4℃避光保管。樣品處理：新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30～50目篩。測定操作表：空白管對比管測定管風干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）4040蒸餾水（μL）40試劑二（μL）404040試劑三（μL）120120120混勻后，用N2氣流排出管中空氣，趕忙密封，于30℃反應1h試劑四（μL）808080充分震蕩10min，8000rpm，25℃，離心10min上清液（μL）202020試劑五（μL）404040試劑六（μL）202020試劑七（μL）202020蒸餾水（μL）100100100充分混勻，25℃靜置顯色10min，用蒸餾水調(diào)零，于微量石英比色皿/96孔板測定510nm各管吸光值，分別記為A空白管、A標準管、A對比管、A測定管，△A＝A空白管—（A測定管—A對比管）。計算公式：a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y=0.185x0.1828，R2=0.9992酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化1μg羥胺為一個酶活力單位。HR活性（μg/d/g土樣）=（△A+0.1828）÷0.185×V反總÷W÷T=36.32×（△A+0.1828）÷Wb.使用96孔板測定的計算公式如下標準曲線：y=0.0925x0.1828，R2=0.9992酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化1μg羥胺為一個酶活力單位。HR活性（μg/d/g土樣）=（△A+0.1828）÷0.0925×V反總÷W÷T=72.64×（△A+0.1828）÷WV反總：加入提取液體積，0.28mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：1/24h注意事項：1.土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。2.試劑