PCR考試第二套試卷及答案

一、單選題（每題2分，共30分）1.熒光定量PCR檢測(cè)過(guò)程中，基線(xiàn)漂移的可能原因有：（D）A.蒸發(fā)B.探針?biāo)釩.相鄰熒光通道干擾D.以上都是2.核酸分子中儲(chǔ)存遺傳信息的關(guān)鍵部分時(shí)：（D）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA3.在PCR檢測(cè)中，分析前的質(zhì)量影響因素包括（D）A.標(biāo)本采集室間B.標(biāo)本運(yùn)送時(shí)間C.標(biāo)本保存時(shí)間和溫度D.以上全是4.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)新型冠狀病毒2個(gè)靶標(biāo)（ORFlab和N基因），陽(yáng)性結(jié)果判斷錯(cuò)誤的是：（B）A.同一份標(biāo)本中檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，判定為陽(yáng)性B.同一份標(biāo)本單個(gè)靶標(biāo)陽(yáng)性后對(duì)該樣本重復(fù)檢測(cè)，如果仍為單靶標(biāo)陽(yáng)性，判定為陽(yáng)性C.兩種標(biāo)本同時(shí)出現(xiàn)單靶標(biāo)陽(yáng)性，可判定為陽(yáng)性D.兩種類(lèi)型標(biāo)本兩次采樣檢測(cè)中均出現(xiàn)單個(gè)靶標(biāo)陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，可判定為陽(yáng)性5.新冠病毒河段檢測(cè)樣本送檢：（D）A.樣本采集后室溫放置不超過(guò)4hB.應(yīng)按照《可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)生部令第45號(hào)）辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書(shū)》C.樣本應(yīng)單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)，不能和其他物品混雜D.以上都對(duì)6.一下哪些有利于DNA的保存：（A）A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性B.加入少量DNaseC.溶于pH3.0的溶液中D.加入少量RNase7.如果一個(gè)PCR反應(yīng)體系中加入模板200個(gè)，經(jīng)過(guò)30個(gè)循環(huán)后，理論上擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量將達(dá)到：（C）A.200×30×2B.2002×30C.200×230D.200×3028.新冠病毒核酸檢測(cè)過(guò)程中為最大限度監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室假陽(yáng)性結(jié)果，陰性室內(nèi)質(zhì)控建議：（D）A.建議每批檢測(cè)設(shè)立1個(gè)陰性質(zhì)控B.建議每批檢測(cè)設(shè)立2個(gè)陰性質(zhì)控，二份陰性質(zhì)控固定C.建議每批檢測(cè)設(shè)立3個(gè)陰性質(zhì)控，三份陰性質(zhì)控固定D.建議每批檢測(cè)設(shè)立3個(gè)陰性質(zhì)控，三份陰性質(zhì)控隨機(jī)放在臨床樣本中間，與待檢測(cè)樣本同時(shí)參與全過(guò)程檢測(cè)9.PCR擴(kuò)增檢測(cè)采用內(nèi)標(biāo)，可以識(shí)別擴(kuò)增檢測(cè)的：（C）A.假陰性B.假陽(yáng)性C.假陰性、假陽(yáng)性都可以預(yù)防D.假陰性、假陽(yáng)性都不能預(yù)防10.在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中，影響結(jié)果正確與否的重要因素，除了試劑盒質(zhì)量外，其他還有：（D）A.人員素質(zhì)B.儀器設(shè)備狀態(tài)C.室內(nèi)質(zhì)控措施D.以上全是11.核酸探針的標(biāo)志性特征是：（A）A.一小段已知序列的單鏈核酸B.一小段未知序列的單鏈核酸C.一小段未知序列的雙鏈核酸D.有同位素或非同位素標(biāo)志物12.使用PCR技術(shù)檢測(cè)新冠核酸病毒時(shí)，PCR體系所必需的組分是：（C）①模板②引物③四種脫氧核苷酸④DNA聚合酶⑤16sRNA⑥反轉(zhuǎn)錄酶A.12345B.23456C.12346D.1345613.生物安全水平的級(jí)別共分為幾個(gè)等級(jí)：（D）A.1個(gè)B.2個(gè)C.3個(gè)D.4個(gè)14.基因突變的實(shí)質(zhì)是指：（A）A.染色體上的DNA序列變化了B.染色體上的DNA變成了蛋白質(zhì)C.染色體上的DNA變成了RNAD.染色體上的DNA高級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了局部改變15.在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品發(fā)生失控，常見(jiàn)原因有下述各項(xiàng)，但除外（D）A.核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本擴(kuò)增抑制物的殘留等B.擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性C.Taq酶和/或反轉(zhuǎn)錄酶的失活D.擴(kuò)增產(chǎn)物的污染二、判斷題（每題2分，共10分）1.應(yīng)當(dāng)由經(jīng)過(guò)適當(dāng)培訓(xùn)的人員使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備和設(shè)備處理新型冠狀病毒危險(xiǎn)廢棄物。（Y）2.擴(kuò)增管沒(méi)有蓋好會(huì)造成PCR過(guò)程中反應(yīng)液產(chǎn)生熱蒸發(fā)，直接影響檢測(cè)結(jié)果，但不會(huì)成為一個(gè)污染源。（X）3.未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方法滅活前進(jìn)行的新型冠狀病毒核酸提取，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)。（Y）4.使用NGS技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣本中包括點(diǎn)突變（SNV）、插入缺失（Indel）、拷貝數(shù)變異（CNV）和結(jié)構(gòu)變異（SV）等多種變異的識(shí)別。（Y）5.NGS技術(shù)檢測(cè)結(jié)果具有很高的準(zhǔn)確性，不需要進(jìn)行性能驗(yàn)證或性能確認(rèn)。（X）三、填空題（每題2分，共10分）1.PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響因素有引物，模板，DNA聚合酶和DNTP,反轉(zhuǎn)錄酶等。2.分子診斷實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理要求宜重點(diǎn)關(guān)注設(shè)備標(biāo)識(shí)、設(shè)備檔案、設(shè)備校準(zhǔn)、設(shè)備保養(yǎng)和設(shè)備報(bào)廢。3.全血標(biāo)本如用于DNA檢測(cè)，可2-8°c下短期保存；如用于RNA檢驗(yàn)，則應(yīng)-20°C保存。4.針對(duì)常規(guī)分子診斷定性檢測(cè)試劑不同批號(hào)性能驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)選擇陰性和弱陽(yáng)性的樣品，結(jié)果符合預(yù)期。5.全血標(biāo)本如用于DNA檢測(cè)，可2-8°c下短期保存；如用于RNA檢驗(yàn)，則應(yīng)-20°C保存長(zhǎng)期-70°C保存。四、問(wèn)答題（每題8分，共32分）1.分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中，不同批號(hào)試劑的批間差異質(zhì)檢該如何做？2.有一基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)新冠病毒核酸標(biāo)本時(shí)，以新冠病毒核酸（RNA）擴(kuò)增片段的cDNA為標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)結(jié)果除了試劑盒所帶的cDNA標(biāo)準(zhǔn)品為陽(yáng)性外，所有臨床標(biāo)本及陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)本、陰性質(zhì)控標(biāo)本均為陰性，顯然該次RT-PCR擴(kuò)增檢測(cè)存在問(wèn)題，進(jìn)一步查找原因，發(fā)現(xiàn)在血清標(biāo)本的收集運(yùn)送及保存中均嚴(yán)格按要求進(jìn)行。那么，你能幫助該實(shí)驗(yàn)室分析一下檢測(cè)失敗的原因嗎？1.室內(nèi)質(zhì)控：建議每批檢測(cè)設(shè)立一個(gè)弱陽(yáng)性、三個(gè)陰性質(zhì)控（建議1份生理鹽水、2份陰性樣本），三份陰性質(zhì)控隨機(jī)放在臨床樣本中間。與待測(cè)樣本同時(shí)參與全過(guò)程檢測(cè)。弱陽(yáng)性質(zhì)控測(cè)定應(yīng)為陽(yáng)性，三份陰性質(zhì)控全部為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報(bào)告，應(yīng)及時(shí)分析原因，必要時(shí)重新檢測(cè)樣本。質(zhì)量控制基本要求注意：每次檢測(cè)后，記錄弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)的ct值3.簡(jiǎn)述新冠病毒核酸檢測(cè)中陰、陽(yáng)室內(nèi)質(zhì)控品失控常見(jiàn)原因有哪些？4.有一實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備使用ARMS法開(kāi)展腫瘤EGFR基因突變檢測(cè)，是否需要做性能驗(yàn)證？如果做，至少需要做哪些參數(shù)？該如何做？五、論述題（18分） 某一開(kāi)展巨細(xì)胞病毒CMV-DNA定性檢測(cè)的臨床實(shí)驗(yàn)室，參加盲樣測(cè)試（包括三個(gè)陽(yáng)性樣本、兩個(gè)陰性樣本），該實(shí)驗(yàn)室做出的結(jié)果為5份樣本全部陽(yáng)性，工作人員將盲樣全部陽(yáng)性的結(jié)果確認(rèn)后立即發(fā)出，第二天