芒果品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子標(biāo)記法地方標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明

芒果品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子標(biāo)記法地方標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明

一、制定意義及任務(wù)來(lái)源

1目的意義

目前，通過(guò)分子生物學(xué)和生物信息學(xué)相結(jié)合的方法在基因

水平對(duì)種質(zhì)資源生物多樣性進(jìn)行鑒定已經(jīng)成為作物學(xué)領(lǐng)域研

究熱點(diǎn)。20xx年4月，農(nóng)業(yè)部印發(fā)《農(nóng)作物品種DNA身份鑒

定體系構(gòu)建實(shí)施方案》中指出“現(xiàn)代種業(yè)是國(guó)家戰(zhàn)略性、基礎(chǔ)

性核心產(chǎn)業(yè)，品種創(chuàng)新是現(xiàn)代種業(yè)發(fā)展的核心，品種保護(hù)與管

理是品種創(chuàng)新的必要保障。目前，生物技術(shù)的快速發(fā)展，移動(dòng)

互聯(lián)、大數(shù)據(jù)引發(fā)的產(chǎn)業(yè)變革，為品種管理向田間表型身份鑒

定與室內(nèi)基因型（DNA,即脫氧核糖核酸）身份鑒定相結(jié)合的

方向發(fā)展提供了有力的技術(shù)支撐”。因此構(gòu)建品種DNA身份鑒

定體系是加強(qiáng)種子管理、保障市場(chǎng)公平競(jìng)爭(zhēng)、保護(hù)農(nóng)民合法權(quán)

益、提升品種創(chuàng)新能力和推進(jìn)種業(yè)信息化發(fā)展的需要。

分子標(biāo)記鑒定是從DNA水平直接反映品種或親子間的差

異，不受植物發(fā)育階段、組織器官、季節(jié)、環(huán)境和表達(dá)等條件

的限制，同時(shí)DNA標(biāo)記數(shù)量大、多態(tài)性豐富等諸多特點(diǎn)，現(xiàn)已

在品種鑒定、圖譜構(gòu)建、基因定位等研究中廣泛應(yīng)用。分子標(biāo)

記技術(shù)之一SSR即簡(jiǎn)單重復(fù)序列(SimpleSequenceRepeat)

或微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA)。它通常是指以2?5

個(gè)核甘酸為單位的多次串聯(lián)重復(fù)DNA序列，長(zhǎng)度大多在

100^200bpoSSR在基因組中分布廣泛，由于重復(fù)次數(shù)的不同

而引起不同材料間的差異，通常表現(xiàn)為共顯性。SSR兩端有一

段相對(duì)保守的序歹U,根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增就可

獲得SSR片段。由于SSR分布廣泛，具有多態(tài)性好、表現(xiàn)為共

顯性、對(duì)DNA質(zhì)量要求低且用量少的諸多特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用

于植物遺傳多樣性分析、雜種鑒定、指紋圖譜構(gòu)建、基因定位

等方面。可以用于植物品種權(quán)精準(zhǔn)授權(quán)、打假與維權(quán)，為《種

子法》的實(shí)施提供了可靠的技術(shù)手段。

芒果(MangiferaindicaL.),漆樹(shù)科，杞果屬。果皮顏

色有紅中帶黃、黃中帶青、青中帶黃、純青色等。果肉為黃色,

鮮美多汁，有濃郁的芳香氣味。內(nèi)部有一粒種子，種子為扁平

形。素有“熱帶果王”之美譽(yù)，是世界上著名的熱帶水果，據(jù)

世界糧農(nóng)組織(FA0)統(tǒng)計(jì)，20xx年全世界芒果實(shí)際收獲面積

和產(chǎn)量分別為9616.6萬(wàn)畝和5127.9萬(wàn)噸；芒果亦是我國(guó)重

要的熱帶水果之一，我國(guó)主要種植地區(qū)為廣東、XX、海南、云

南、福建和臺(tái)灣等地，5-9月為盛產(chǎn)期。在面積上僅次于香蕉、

荔枝和龍眼，居第四位，據(jù)農(nóng)業(yè)部南亞辦數(shù)據(jù)顯示，20xx年

全國(guó)芒果種植面積達(dá)484.2萬(wàn)畝，產(chǎn)量278.2萬(wàn)噸（臺(tái)灣未

計(jì)入），產(chǎn)值190.3億元。20xx年，xx芒果產(chǎn)量超過(guò)海南成

為最大的芒果產(chǎn)地，居全國(guó)首位。20xx年xx芒果果園面積

153.93萬(wàn)畝，產(chǎn)量79.81萬(wàn)噸，產(chǎn)值50.7億元。xx百色與海

南、攀枝花并稱我國(guó)三大芒果之鄉(xiāng)，百色市是我國(guó)最大的芒果

生產(chǎn)基地，近年來(lái)百色為xx芒果貢獻(xiàn)了大部分產(chǎn)量，芒果產(chǎn)

業(yè)已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)支柱產(chǎn)業(yè)之一，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民收入的主要來(lái)

源。

xx芒果品種主要有臺(tái)農(nóng)1號(hào)芒、金煌芒、紅象牙芒、桂

熱芒82號(hào)、桂七芒、貴妃芒、桂熱芒10號(hào)、凱特芒、新世紀(jì)

芒等29個(gè)品種。單從形態(tài)上鑒定存在一定困難，這就給芒果

品種的選育、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)和使用等方面造成不同程度的困擾,

同時(shí)也給種子管理部門帶來(lái)一定的挑戰(zhàn)。我國(guó)已出臺(tái)了一系列

主要農(nóng)作物品種的SSR分子標(biāo)記鑒定行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)，而

目前尚無(wú)利用SSR標(biāo)記技術(shù)鑒定芒果品種真?zhèn)蔚姆椒?biāo)準(zhǔn)。制

定相應(yīng)的xx地方標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范利用SSR標(biāo)記技術(shù)鑒定芒果品種

真實(shí)性，對(duì)品種管理、質(zhì)量監(jiān)控等方面具有重要意義，且對(duì)雜

種優(yōu)勢(shì)群的劃分、種質(zhì)創(chuàng)新及新品種的選育等具有指導(dǎo)意義。

2任務(wù)來(lái)源

20xx年由xx檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出的《芒果品

種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子標(biāo)記法》的制定計(jì)劃，20xx年xx區(qū)

質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局在關(guān)于下達(dá)《20xx年第一批xx地方標(biāo)準(zhǔn)制定

項(xiàng)目計(jì)劃的通知》附件文中批準(zhǔn)將其列入20xx年第一批xx

地方標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目計(jì)劃(序號(hào)：20xx-0114),由xx益譜檢測(cè)技

術(shù)有限公司、xx出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、南寧維爾凱生

物科技有限公司等主要負(fù)責(zé)起草該地方標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)。

二、工作概述

1國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究

忙果(Mango/MangiferaindicaL.),別名芒果、檬果、

望果、滲果、悶果、蜜望子、庵波羅果等，為漆樹(shù)科

(Anacardiaceae)忙果屬(Mangifera^)植物，常綠果樹(shù)，

有“熱帶果王”之美譽(yù)，世界五大名果之一。由于松果從起源

到馴化的過(guò)程復(fù)雜、不同地區(qū)之間引種、地方品種沒(méi)有確切的

科學(xué)名稱等，近年來(lái)，我國(guó)各地科研工作者在種質(zhì)資源調(diào)查和

收集研究時(shí)，大多都局限于某一地區(qū)，各自從不同的角度對(duì)忙

果進(jìn)行了種下分類，同一個(gè)品種在不同省份的參試和審定的進(jìn)

程往往也不一致，同一品種在不同省份通過(guò)審定后該品種的標(biāo)

準(zhǔn)樣品存在差異，另外，在多個(gè)省份審定的情況下，不同單位

對(duì)同一品種的不同命名，還有竊用他人品種后換名審定的，從

而導(dǎo)致一定數(shù)量上的仿冒雷同，品種間親緣關(guān)系不明確，而且

從形態(tài)特征上很難將其準(zhǔn)確歸類,給忙果品種管理帶來(lái)一定的

混亂。因此，為了更好的保護(hù)現(xiàn)有松果的品種權(quán)和新品種的鑒

定，應(yīng)堅(jiān)持品種命名的唯一性原則，需要建立起一種快速、準(zhǔn)

確、可靠、高效的松果種質(zhì)資源鑒定方法，而傳統(tǒng)鑒定評(píng)價(jià)方

法，都有一定的局限性。目前世界上約有機(jī)果品種1000多

個(gè)，我國(guó)約有200個(gè)忙果品種或品系。杞果具有豐富的遺傳

多樣性，果實(shí)的大小、形狀、色澤、纖維多少、核大小等是區(qū)

別松果品種的主要依據(jù)，但忙果的品種、品系很多，過(guò)去多用

實(shí)生苗繁殖，產(chǎn)生了許多自然雜交種，新的品種又不斷地被人

工培育出來(lái)，由于存在飾變和觀察標(biāo)準(zhǔn)不同，依據(jù)植物學(xué)性狀

難以對(duì)忙果資源進(jìn)行準(zhǔn)確分類，導(dǎo)致同物異名、同名異物和資

源重復(fù)保存等現(xiàn)象嚴(yán)重。

M.T.%力而〃等利用SSR標(biāo)記對(duì)42對(duì)引物進(jìn)行了篩選，

其中36對(duì)引物具有可重復(fù)的多態(tài)性可擴(kuò)增模式。在這兩個(gè)

品種的水果中，60.7%的得分片段被認(rèn)為是假定的基因型特異

性標(biāo)記。多態(tài)信息含量QPIC)在0.25~0.75之間，平均為

0.51。Hania和Ami品種的水果的雜合度分別為0.68和0.53。

通過(guò)對(duì)這36對(duì)引物的條帶分析，可以區(qū)分出不同的品種的水

果，說(shuō)明利用SS7?引物進(jìn)行是一種有效的基因型鑒定方法，

可以利用DNA指紋圖譜描述和鑒定兩個(gè)埃及芒果新品系的園

藝初步研究(PreliminaryHorticulturalStudiesTo

DescribeAndIdentifyOfTwoNewEgyptianMangoStrains

UsingDNAFingerprint.?；A.Sennhenn等用19個(gè)簡(jiǎn)單序列

重復(fù)標(biāo)記對(duì)38棵芒果干葉片進(jìn)行分子分類，研究肯尼亞?wèn)|部

和中部芒果地方品種的形態(tài)和分子特征。利用Nei，s遺傳距

離和鄰居連接方法建立了芒果樣品間的遺傳親緣關(guān)系樹(shù)狀圖o

形態(tài)學(xué)鑒定得出6個(gè)不同的聚類(7加ofmango

(MangiferaindicaL.)landracesfromEasternandCentral

Kenyausingamorphologicalandmolecularapproach)；

ManalEidt等采用-簡(jiǎn)單序列重復(fù)(SSRs)技術(shù)對(duì)25個(gè)埃及芒

果品種的遺傳變異程度進(jìn)行了分析，并建立了指紋圖譜。根據(jù)

35個(gè)SSR標(biāo)記的可重復(fù)性、可分離性和品種間的分離能力，

選擇了35個(gè)SSR標(biāo)記。35個(gè)SSR位點(diǎn)產(chǎn)生219個(gè)多態(tài)性高的

等位基因（約100%）o通過(guò)多態(tài)位點(diǎn)百分比、觀察到的等位基

因數(shù)、有效等位基因數(shù)、觀察到的雜合度、預(yù)期雜合度、固定

指數(shù)和基因流等參數(shù)，計(jì)算了栽培種質(zhì)的等位基因初變異率和

遺傳基礎(chǔ)（EfficiencyParametersofSSRMarkersfor

CharacterizationofSomeMangoCultivarsandTheir

SuitabilityinMolecularBar-codingSSRyo

石勝友，張燕梅，武紅霞等采用SSR標(biāo)記方法，對(duì)來(lái)自7

個(gè)國(guó)家的36份忙果品種進(jìn)行了遺傳相似性分析，目的是為忙

果育種親本合理選配、現(xiàn)有國(guó)外種質(zhì)的充分發(fā)掘利用提供科學(xué)

依據(jù)；王靜毅等人應(yīng)用SSR技術(shù)對(duì)xx主要忙果資源遺傳關(guān)系

進(jìn)行SSR分析，對(duì)48個(gè)松果品種（系）的遺傳關(guān)系進(jìn)行了檢

測(cè)。xx主要忙果資源品種間的遺傳相似系數(shù)在0.45591）.9412

之間，平均為0.7053,以桂熱忙06-3號(hào)與桂熱忙06-5號(hào)兩

者之間的相似系數(shù)最小，而Keitt與紅凱特忙及玉文忙與蜜

桃松之間相似系數(shù)最大。UPGMA聚類分析將48個(gè)品種分為5

大類群。聚類結(jié)果表明，在分子水平上，杞果品種間的親緣關(guān)

系與胚性無(wú)直接關(guān)系；且xx本地忙果品種（系）多是象牙松、

青皮杞、呂宋杞或秋杜等的雜交子代或?qū)嵣蟠Ｃ⒐N質(zhì)資

源真?zhèn)舞b定的相關(guān)文獻(xiàn)資料有：

1、王靜毅等.XX主要忙果資源遺傳關(guān)系的SSR分析[J].熱帶

作物學(xué)2009,30(9):1301-1307；

2、石勝友,張燕梅.武紅霞,等.36個(gè)忙果引進(jìn)品種的遺傳相似

性研究[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)20xx,27(6):914-917；

3、黃麗芳,雷新濤,姚全勝,等.芒果SSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化

[J].熱帶作物學(xué)20xx,31(3):410-414；

4、黃麗芳，閆林,范睿,等人.芒果實(shí)生資源遺傳多樣性的SSR

分析[J].熱帶作物學(xué)20xx,32(10):1828-1832；

5、羅純,武紅霞,姚全勝,等人.芒果轉(zhuǎn)錄組中SSR位點(diǎn)信息分

析與引物篩選[J].熱帶作物學(xué)報(bào)20xx,36(7):1261-1266;

6、覃昱茗,張宇,黃國(guó)弟,等.松果SC-SSR分子標(biāo)記反應(yīng)體系

的建立與優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)研究與應(yīng)用，20xx,34(3)：37-43.

7、王明,應(yīng)東山，王琴飛,等.我國(guó)芒果主栽品種遺傳多樣性分

析及指紋圖譜構(gòu)建[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)JournalofSouthern

Agriculture20xx,46(7):1154-1159;

8、閆慧清,劉澤標(biāo),吉海旺,等.芒果EST-SSR位點(diǎn)分析及引物

開(kāi)發(fā)[J].分子植物育種，20xx,18(11)

9、周立,羅聰，何堂熹,等.基于EST-SSR標(biāo)記的芒果品種遺傳

多樣性與親緣關(guān)系分析[J].分子植物育種.20xx,18(11)

10、PreliminaryHorticulturalStudiesToDescribeAnd

IdentifyOfTwoNewEgyptianMangoStrainsUsingDNA

Fingerprint(利用DNA指紋圖譜描述和鑒定兩個(gè)埃及芒果新

品系的園藝初步研究)[J].JournalofAmericanScience,

20xx,7(2):641-650;

11>A.Sennhenn?K.Prinz?J.Gebauer?,A.Whitbread?R.

Jamnadass?K.Kehlenbeck.Identificationofmango

(MangiferaindicaL.)landracesfromEasternandCentral

Kenyausingamorphologicalandmolecularapproach(肯

尼亞?wèn)|部和中部芒果地方品種的形態(tài)學(xué)和分子鑒定)[J].

GenetResourCropEvol,20xx,61:7-22.

12>ManalEid,M.A.Hussein.EfficiencyParametersofSSR

MarkersforCharacterizationofSomeMangoCultivarsand

TheirSuitabilityinMolecularBar-codingSSR(標(biāo)記在

芒果品種鑒定中的有效性參數(shù)及其在分子條形碼中的適用

性)[J].NewYorkScienceJournal20xx;10(8):68~76.

上述這引些研究都表明：SSR標(biāo)記與毛細(xì)管凝膠電泳相結(jié)

合的分子標(biāo)記技術(shù)可以鑒定芒果品種，可為芒果的遺傳分析、

指紋圖譜構(gòu)建、雜交效率評(píng)定等提供可靠、快速的方法。

2標(biāo)準(zhǔn)起草的主要工作過(guò)程

2.1引物的來(lái)源

本技術(shù)規(guī)范編制過(guò)程中使用的38對(duì)SSR引物主要來(lái)源于

中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所、xx大學(xué)農(nóng)學(xué)院、

農(nóng)業(yè)部熱帶果樹(shù)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等科研院所和高校發(fā)表的

文章中所使用的，以及查閱其它文獻(xiàn)上使用的芒果基因組序列

引物。

2.2芒果品種類型的收集

本實(shí)驗(yàn)收集了20個(gè)芒果品種，分別是桂熱芒07-2號(hào)、桂

熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08-10號(hào)、桂熱芒10-1號(hào)、桂熱芒16-1

號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60

號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七,

其主要來(lái)源于xx區(qū)亞熱帶作物研究所芒果種質(zhì)資源圃種植基

地（南寧市邕武路）。

2.3技術(shù)路線與實(shí)驗(yàn)

選取20個(gè)xx區(qū)內(nèi)種植的不同芒果品種。用篩選出的38

對(duì)SSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，對(duì)

SSR引物的擴(kuò)增穩(wěn)定性及多態(tài)性進(jìn)行分析，并采用毛細(xì)管電泳

對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行同步分析驗(yàn)證。

根據(jù)峰圖簡(jiǎn)單易讀取、多態(tài)性高、擴(kuò)增穩(wěn)定性高、染色體

上分布均勻的原則，最終確定了38對(duì)核心引物用于芒果品種

鑒定。

2.4技術(shù)驗(yàn)證

經(jīng)xx益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司、xx作物遺傳改良生物技

術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室和南寧國(guó)拓生物科技有限公司等三家單位,

對(duì)技術(shù)規(guī)程的可操作性和檢測(cè)數(shù)據(jù)的可重現(xiàn)性進(jìn)行了驗(yàn)證。其

中xx益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司對(duì)20個(gè)xx區(qū)內(nèi)種植的不同芒果

品種的38對(duì)SSR引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電

泳檢測(cè)驗(yàn)證；6個(gè)xx區(qū)內(nèi)種植的不同芒果品種的6對(duì)SSR引

物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)驗(yàn)證。xx作物遺傳改

良生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室和南寧國(guó)拓生物科技有限公司分

別對(duì)6個(gè)xx區(qū)內(nèi)種植的不同芒果品種的38對(duì)SSR引物的PCR

擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)驗(yàn)證；6個(gè)xx區(qū)內(nèi)種

植的不同芒果品種的6對(duì)SSR引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管

電泳檢測(cè)驗(yàn)證。經(jīng)驗(yàn)證，《芒果品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子標(biāo)

記法》技術(shù)規(guī)程中的DNA提取、PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測(cè)方法具有

可操作性，按照技術(shù)規(guī)程中的聚丙烯酰胺凝膠電泳條帶明顯,

清晰可辯;毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法中擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物均能獲得清

晰、穩(wěn)定的主峰，且易于識(shí)別。

三、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容

1標(biāo)準(zhǔn)編制原則

規(guī)范性原則：本技術(shù)規(guī)范的制定符合法律法規(guī)，符合有關(guān)

標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的要求，包括GB/T1.l-20xx《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第

1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、NY/T2594《植物

品種鑒定DNA分子標(biāo)記法總則》、NY/T2440-20xx《植物新

品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南芒果》、GB/T6682《分

析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》。

適用性原則：本規(guī)程的全部?jī)?nèi)容具有可操作性。

統(tǒng)一性原則：本規(guī)程與現(xiàn)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)統(tǒng)一，不發(fā)生沖

突。

先進(jìn)性原則：本規(guī)程采用目前國(guó)際國(guó)內(nèi)外品種鑒定領(lǐng)域均

認(rèn)可的、成熟的SSR標(biāo)記技術(shù)，以非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

平臺(tái)為主，兼顧毛細(xì)管電泳檢測(cè)平臺(tái)的芒果品種鑒定技術(shù)，與

田間小區(qū)鑒定方法對(duì)比，該方法的先進(jìn)性在于不受環(huán)境影響和

季節(jié)約束，檢驗(yàn)周期短。

2標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)主要內(nèi)容包括樣品處理、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法

（PCR）、聚丙烯酰胺凝膠電泳、毛細(xì)管電泳操作過(guò)程以及結(jié)果

判定，適用于芒果種質(zhì)資源真?zhèn)蔚臋z測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程編制的過(guò)程主要進(jìn)行了以下試驗(yàn)和工作：

2.1原理

不同品種芒果的遺傳組成不同，其基因組（DNA）中SSR

的重復(fù)次數(shù)存在差異，根據(jù)SSR的差異，通過(guò)PCR擴(kuò)增及電泳技

術(shù)可以鑒定芒果品種。

2.2樣品來(lái)源

樣品采自xx區(qū)亞熱帶作物研究所芒果種質(zhì)資源圃種植基

地（南寧市邕武路）的芒果葉片。

2.3儀器

電子天平、高速冷凍離心機(jī)、水浴鍋、PCR擴(kuò)增儀、垂直

板電泳系統(tǒng)、毛細(xì)管電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、膠片觀察燈等。

2.4試劑

液氮、無(wú)水乙醇、三氯甲烷、甲醛、三羥甲基氨基甲烷、

DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、2XTaqPlusPCR預(yù)混試劑、40%丙烯酰胺/

甲叉雙丙烯酰胺溶液、氯化鈉、氫氧化鈉、硝酸銀、硼酸、過(guò)

硫酸鏤、十六烷基三甲基澳化鏤、乙二胺四乙酸二鈉、四甲基

乙二胺、瓊脂糖、去離子甲酰胺、DNA分析儀用丙烯酰胺膠液、

DNA分析儀用LIZ500分子量?jī)?nèi)標(biāo)、DNA分析儀用電泳緩沖液、

DNA分析儀用光譜校準(zhǔn)基質(zhì)。

2.5SSR引物

引物序列見(jiàn)表1

表1引物編號(hào)及引物擴(kuò)增信息

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5,-3，)

小(bp)

(℃)

序引物退

條帶大

號(hào)

引物名稱火溫度引物序列(5,-3,)

小(bp)

(℃)

正向：

CTTCCTTTCTCTCATCACTTCCA

1mangoESl1148-24855

反向：

CTTCAATAGTAGCCCCATCACTG

正向：

CAGTAACTACTACCACCGCAACC

2mangoES24157-27055

反向：

ATATTCTCGCTCTCGTTGTTTTG

正向：

TCCATTTTTGACAAATCTCCACT

3mangoES35156-24655

反向：

TAGCCTTGAATTCCTCAAACAAA

正向：

GGTTGTTATCGTCGTTATTGTGG

4mangoES39143-16355

反向：

CGGAAAATGTTCGACTTGTAACT

序引物退

條帶大

號(hào)

引物名稱火溫度引物序列(5,-3,)

小(bp)

(℃)

正向：

GGGACATTGACTTAACAGCTTTC

5mangoES40144-24455

反向：

CTTCTGCCTGAATGTACTGGACT

正向：

CCTGTGCTTACCACCCATATTAG

6mangoES69150-21055

反向：

AAAGATTGCAAGTCTGAGCAAAA

正向：

TGATGAGAATGAACAAGCAGCTA

7mangoES71125-18055

反向：

TATCTGCAGTAACAGCACTCAGC

正向：

CGGGTAAACCCACTATGTATTCC

8mangoES126143-20055

反向：

TGGTGGTGGTAAAAAGAAGAAAA

序引物退

條帶大

號(hào)

引物名稱火溫度引物序列(5,-3,)

小(bp)

(℃)

正向：

TCGAGAGCTACTCTTTATCGGAA

9mangoES170150-15855

反向：

AATTAAGCGTGCAAACCTGTAGA

正向：

TATCATCAGAACTACCGCCATTT

10mangoES172146-19655

反向：

CTCTTTTCTTCGCTGTGTTTTGT

正向：

ATTATCCCTATAATGCCCTAT

11EST14175-29050

反向：

CTCGGTTAACCTTTGACTAC

正向：

AGGACATCTGTGACCAAGAGC

12MCR55170-22058

反向：

TTCCCACCCACAACTCCAAC

序引物退

條帶大

號(hào)

引物名稱火溫度引物序列(5,-3,)

小(bp)

(℃)

正向：

TGTCTTTCAGCTTCACCGCT

13MCR130250-26058

反向：

CGCAGTGGAGAGTTGTTGTG

正向：

CGGGACCATGTCACCAGAAA

14MCR220250-51060

反向：

GGCGAATGCGTAGTCAGAGA

正向：

ATGGAGACTAGAATGTACAGAG

15Lmmal205-25550

反向：

ATTAAATCTCGTCCACAAGT

正向：

AGATTTAAAGCTCAAGAAAAA

16Lmma4240-38047

反向：

AAAGACTAATGTGTTTCCTTC

表1引物編號(hào)及引物擴(kuò)增信息(續(xù))

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5'-3')

小(bp)

(℃)

正向：

AGAATAAGCTGATACTCACAC

17Lmma5280-39047

反向：

TAACAAATATCTAATTGACAGG

正向：ATATCTCAGGCTTCGAATGA

18Lmma6105-20550反向：

TATTAATTTTCACAGACTATGTTCA

正向：

ATTTAACTCTTCAACTTTCAAC

19Lmma7210-25050

反向：

AGATTTAGTTTTGATTATGGAG

正向：CATGGAGTTGTGATACCTAC

20Lmma8260-36050反向：

CAGAGTTAGCCATATAGAGTG

21Lmma9205-23047正向：

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5'-3')

小(bp)

(℃)

TTGCAACTGATAACAAATATAG

反向：

TTCACATGACAGATATACACTT

正向：

TTCTTTAGACTAAGAGCACATT

22LmmalO155-21050

反向：

AGTTACAGATCTTCTCCAATT

正向：

ATTATTTACCCTACAGAGTGC

23Lmmall240-41049

反向：

GTATTATCGGTAATGTCTTCAT

正向：

AAAGAATAGCATTTAATTAAGGA

24Lmmal2210-25047

反向：

GTAAGTATCGCTGTTTGTTATT

25Lmmal3180-23047正向：

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5'-3')

小(bp)

(℃)

CACAGCTCAATAAACTCTATG

反向：

CATTATCCCTAATCTAATCATC

正向：AACTACTGTGGCTGACATAT

26Lmmal5220-27050反向：

CTGATTAACATAATGACCATCT

正向：

ATAGATTCATATCTTCTTGCAT

27Lmmal6220-25050

反向：

TATAAATTATCATCTTCACTGC

正向：

28AY942818125-15055CCACGAATATCAACTGCTGCC

反向：TCTGACACTGCTCTTCCACC

正向：AAACGAGGAAACAGAGCAC

29AY94281990-14053

反向CAAGTACCTGCTGCAACTAG

30AY942820170-23053正向：AGGTCTTTTATCTTCGGCCC

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5'-3')

小(bp)

(℃)

反向：AAACGAAAAAGCAGCCCA

正向：TGTAGTCTCTGTTTGCTTC

31AY942821280-41049

反向：TTCTGTGTCGTCAAACTC

正向：

32AY94282323055AGAATAAAGGGGACACCAGAC

反向：CCATCATCGCCCACTCAG

正向：TTGATGCAACTTTCTGCC

33AY942824220-32050反向：

ATGTGATTGTTAGAATGAACTT

正向：

CGAGGAAGAGGAAGATTATGAC

34AY942825240-39053

反向：

CGAATACCATCCAGCAAAATAC

正向：TGTGAAATGGAAGGTTGAG

35AY94282624050

反向：ACAGCAATCGTTGCATTC

36AY942827180-24049正向：

序引物退

條帶大

號(hào)引物名稱火溫度引物序列(5'-3')

小(bp)

(℃)

GTTTTCATTCTCAAAATGTGTG

反向：

CTTTCATGTTCATAGATGCAA

正向：CTCGCATTTCTCGCAGTC

37AY942828130-29053

反向：TCCCTCCATTTAACCCTCC

正向：GAACGAGAAATCGGGAAC

38AY942829370-50050

反向：GCAGCCATTGAATACAGAG

(一)XX益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司

表2聚丙烯酰胺凝膠電泳所用的6個(gè)品種芒果與19對(duì)引物

序芒果品引物名

序號(hào)引物名稱

號(hào)種名稱稱

桂熱芒

AY94281

107-311AY942828

8

號(hào)

桂熱芒AY94282

212Lmmal

290號(hào)3

AY94281

3金煌芒13Lmmal5

9

AY94282

4圣心14Lmmal3

0

AY94282

5臺(tái)農(nóng)15Lmma9

1

AY94282

6桂七16Lmmal1

7

AY94282

717Lmmal2

9

AY94282

818Lmma4

4

AY94282

919Lmma5

5

AY94282

10

6

表3聚丙烯酰胺凝膠電泳所用的20個(gè)品種與19對(duì)引物

芒果品種名

序號(hào)引物名稱

稱

桂熱芒07-2

1mangoES39

口

桂熱芒07-3

2mangoES40

號(hào)

桂熱芒08-10

3mangoES126

號(hào)

桂熱芒10-1

4mangoES170

號(hào)

桂熱芒16-1

5mangoES69

號(hào)

6桂熱芒285號(hào)Lmma7

7桂熱芒290號(hào)LmmalO

8二轉(zhuǎn)MCR55

9PULMERmangoES24

10安寧紅芒mangoES35

ALdrr

12桂熱芒10號(hào)mangoES172

13圣心MCR130

14桂熱芒82號(hào)Lmma6

15桂熱芒60號(hào)Lmma8

16桂熱芒4號(hào)EST14

17泰國(guó)芒14號(hào)MCR220

桂熱芒08-6

18Lmmal6

號(hào)

19臺(tái)農(nóng)mangoESll

20桂七

（二）XX作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室和南寧國(guó)拓

生物科技有限公司

表4聚丙烯酰胺凝膠電泳所用的6個(gè)品種與38對(duì)引物

序芒果品引物名

序號(hào)引物名稱

號(hào)種名稱稱

桂熱芒

AY94281mangoESl

107-320

81

號(hào)

桂熱芒AY94282mangoES2

221

290號(hào)34

AY94281mangoES3

3金煌芒22

95

AY94282mangoES3

4圣心23

09

AY94282mangoES4

5臺(tái)農(nóng)24

10

AY9428225mangoES6

6桂七

79

AY94282mangoES7

726

91

AY94282mangoESl

827

426

AY94282mangoESl

928

570

AY94282mangoESl

1029

672

11AY9428230EST14

8

12Lmmal31MCR220

13Lmmal532MCR55

14Lmmal333MCR130

15Lmma934Lmma6

16Lmmal135Lmma7

17Lmmal236Lmma8

18Lmma437Lmmal0

19Lmma538Lmmal6

一、毛細(xì)管電泳

XX益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司、XX作物遺傳改良生物技術(shù)重

點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室、南寧國(guó)拓生物科技有限公司均選擇6個(gè)芒果品

種，6對(duì)引物，每個(gè)品種分別做6對(duì)引物的毛細(xì)管電泳，品種

名稱及引物名稱如下表6：

表5毛細(xì)管電泳驗(yàn)證所用的6個(gè)芒果品種與6對(duì)引物

序芒果品種名稱引物名稱

號(hào)

1桂熱芒07-3號(hào)mangoES39

2桂熱芒290號(hào)mangoES126

3金煌芒mangoES172

4圣心Lmmal6

5臺(tái)農(nóng)AY942819

6桂七AY942820

2.6.1樣品采集

用不銹鋼剪刀采集種植的已知品種的芒果嫩葉放入塑料

樣品袋中，做好標(biāo)識(shí)，放入0-8℃保溫箱中，帶回實(shí)驗(yàn)室，于

-18℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.6.2DNA的提取

取2.6.1中適量芒果葉片用自來(lái)水沖洗干凈，再用去離子

水沖洗兩遍，自然晾干后用不銹鋼剪刀剪碎放入研缽中，加入

液氮研磨成粉末狀，分取lOOmg放入1.5mL離心管中，加入

750HLeTAB提取溶液，渦旋振蕩混勻后于65°。水浴

45nlin~60nlin,期間每隔15min顛倒離心管混勻；加入500ML

的三氯甲烷，顛倒混勻，12000rpm離心3min,轉(zhuǎn)移上清液

約0.5mL至新離心管中，加入等體積即0.5mL預(yù)冷至約4℃的

無(wú)水乙醇，顛倒混勻，T8C冰箱下靜置lh,12000rpm離心

3min,去上清，室溫下干燥沉淀。加入50叱無(wú)菌純水于-18℃

中保存?zhèn)溆谩?/p>

注：以上為推薦的DNA提取方法。其他能夠達(dá)至UPCR擴(kuò)增質(zhì)

量要求的DNA提取方法也適用于本規(guī)程。

2.6.3PCR擴(kuò)增

2.6.3.1PCR反應(yīng)體系

PCR反應(yīng)體系見(jiàn)表7。

表6PCR反應(yīng)體系

二十京II奴欣曲彳木大口

j1/是19由7kQ二ill

QTanTacP111a1V19Kill

1A1Jmn1/TIP1n1已1Azlllmcl/T1Alli

1flUmcl/]FV7Iri1已1A41Imcl/11HlJl

/illBMA精木后QAnrr/III9nuT

日侏和2AAlli

2.6.3.2PCR反應(yīng)程序

94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s,退火30s（退火溫度見(jiàn)

表1推薦引物表），72℃延伸30s,35個(gè)循環(huán)；最后72℃下延

伸7min。

2.6.4PCR產(chǎn)物檢測(cè)

2.6.4.1非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)

2.6.4.1.1聚丙烯酰胺凝膠制備

在一對(duì)玻璃板間插入1.0mm寬的間隔片，在封口處注入1%

瓊脂糖溶液，讓其凝固密封。在50mL量杯中依次加入7.5mL5

XTBE緩沖液,7.5mL40%Acryl/BisSolution（29:1）,攪拌

并用純凈水定容至30mL；加入200NL10%過(guò)硫酸鏤和12HL四甲

基乙二胺溶液，混勻后倒入凝膠板之間，隨即插好樣品梳，使

其在50n）irT60min內(nèi)聚合凝固，凝膠高度應(yīng)不小于10cm。

2.6.4.1.2電泳

將玻璃板固定于垂直電泳槽上，在電泳槽中加入電泳緩沖

液，小心拔下樣品梳。用加樣器吸取1叱不同引物（表1）PCR

產(chǎn)物，加入樣品孔中，同時(shí)在同一塊膠中加入1ALDNAmarker。

電泳選用的電壓梯度為l~5V/cm,2XTaqPlus預(yù)混試劑的藍(lán)

色指示帶從上到下分別到達(dá)膠板1/2、2/3處（大約lh）后結(jié)束

電泳。

2.6.4.1.3銀染顯色

將附著凝膠的玻璃板用去離子水沖洗30s?60s后,將凝膠

放入方形不銹鋼盤中，加入染色液覆蓋凝膠，輕搖5min^l0min

進(jìn)行染色；倒掉染色液，用去離子水快速漂洗，放入顯色液中,

輕搖至顯色出清晰帶紋；取出凝膠用去離子水沖洗兩遍，瀝干

后進(jìn)行拍照。

2.6.4.2毛細(xì)管電泳檢測(cè)

2.6.4.2.1PCR產(chǎn)物樣品準(zhǔn)備

分別取等體積的稀釋后不同引物（表5）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物溶液

混合，從混合液中吸取1應(yīng)按序號(hào)加入到DNA分析儀專用96孔板

孔中，板中各孔分別再加入0.1MLDNALIZ500分子量?jī)?nèi)標(biāo)和

8.9叱去離子甲酰胺。將樣品在PCR儀上95℃變性5min,取出，

迅速置于碎冰塊上，冷卻10-15min。將整個(gè)96孔板置于離心機(jī)

中，離心10s后放置到DNA分析儀上待檢。

2.6.4.2.2電泳檢測(cè)

按照儀器操作規(guī)程，編輯樣品表及運(yùn)行程序，執(zhí)行運(yùn)行

程序，儀器自動(dòng)給出檢測(cè)結(jié)果，保存并記錄數(shù)據(jù)。

2.7數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)

樣品每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位變異采用擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的形式表

示。對(duì)于毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，通過(guò)使用對(duì)照品種，消除同型

號(hào)不同批次間或不同型號(hào)DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差，

使用片段分析軟件讀取待檢樣品在該位點(diǎn)的等位變異。對(duì)于非

變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)方法，將每個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn)的等位變

異與相應(yīng)的對(duì)照品種的等位變異片段大小進(jìn)行比較，確定待檢

樣品在該位點(diǎn)的等位變異。

純點(diǎn)結(jié)合的等位變異大小數(shù)據(jù)記為X/X,其中X為該位點(diǎn)等

位變異的大?。浑s合位點(diǎn)的等位變異大小數(shù)據(jù)記錄為X/Y,其

中X、Y分別為該位點(diǎn)上的2個(gè)等位變異的大小，小片段數(shù)據(jù)在

前、大片段數(shù)據(jù)在后。缺失位點(diǎn)在等位變異大小數(shù)據(jù)記錄為

0/0o

示例L樣品在某個(gè)位點(diǎn)上僅出現(xiàn)1個(gè)等位變異，大小為

160bp,則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為160/160。

示例2：樣品在某個(gè)位點(diǎn)上僅出現(xiàn)2個(gè)等位變異，大小為

160bp>165bp,則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為160/165。

2.8判定方法

當(dāng)待檢樣品和對(duì)照品種間差異位點(diǎn)數(shù)22,則判定為“不

同品種”；當(dāng)待檢樣品和對(duì)照品種間差異位點(diǎn)數(shù)二1,判定為

“近似品種”；當(dāng)樣品間差異位點(diǎn)數(shù)加，判定為“極近似

品種或相同品種”。

2.9結(jié)果與記錄

2.9.1用瓊脂糖凝膠檢測(cè)毛細(xì)管電泳和非變性聚丙烯酰胺凝

膠電泳，結(jié)果見(jiàn)附件原始記錄圖譜。

2.9.1.1xx益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司結(jié)果原始記錄圖譜（見(jiàn)附

件1）

2.9.1.2xx作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室結(jié)果原始

記錄圖譜（見(jiàn)附件2）

2.9.1.3南寧國(guó)拓生物科技有限公司結(jié)果原始記錄圖譜（見(jiàn)附

件3）

四、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關(guān)系，與

有關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)情況。

本標(biāo)準(zhǔn)的編制依據(jù)現(xiàn)行的法律、法規(guī)和國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn),

與這些文件中的規(guī)定不存在矛盾，協(xié)調(diào)一致。

五、重大意見(jiàn)分歧的處理結(jié)果和依據(jù)

無(wú)

六、提出標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制實(shí)施或推薦實(shí)施的建議和理由

本項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的制訂，已經(jīng)實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證，可作為推薦性地方

標(biāo)準(zhǔn)，用于芒果種質(zhì)資源真?zhèn)蔚臋z測(cè)。

附件1:

XX益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司結(jié)果原始記錄及圖譜

1非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

圖1.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種順序依次為：桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒290號(hào)、金煌芒、圣心、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：1-6:AY942818,7-12:AY942823,13-18:AY942819,19-24:AY942820,25-30：

AY942821,31-36:AY942827,37-42:AY942829。

11*■1wBVWIB1Bwl■1aWBVA14I

M123456789101112131415161718M1920xx222324252627282930313233343536373839404142

-500

-400

-350

-300

-2SO

-200

-150

-100

-50

圖2.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種順序依次為：桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒290號(hào)、金煌芒、圣心、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：1-6:AY942824,7-12:AY942826,13-18:AY942825,19-24：AY942828,25-30：

Lmmal,31-36：Lmmal5,37-42：Lmmal30

23456789101112131415161718192021222324252627282930

圖3.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種順序依次為：桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒290號(hào)、金煌芒、圣心、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：l-6:Lmma9,7-12：Lmmal2,13-18：Lmmal1,19-24：Lmma4,25-30：Lmma5o

M1234567891011121314151617181920

圖4.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)1-20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂才芒08-10號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16-1號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PUNIER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱整10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱奢答國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：mangoES39

圖5.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)卜20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08To號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16-1號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：mangoES40

HE〃即

M123456789101112131415^1617181920

圖6.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)L20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08To號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16-1號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：mangoES126

M1234567891011121314151617181920

H35O

圖7.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)1-20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08To號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16-1號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱:mangoES170

WI1尸"川引碎

M1234567891011121314151617181920

備注：芒果品種編號(hào)1-20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08-10號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16T號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：mangoES69

圖9.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)L20順序依次為：桂熱芒07-2號(hào)、桂熱芒07-3號(hào)、桂熱芒08To號(hào)、

桂熱芒10T號(hào)、桂熱芒16-1號(hào)、桂熱芒285號(hào)、桂熱芒290號(hào)、三年芒、PULMER、安寧紅

芒、金煌芒、桂熱芒10號(hào)、圣心、桂熱芒82號(hào)、桂熱芒60號(hào)、桂熱芒4號(hào)、泰國(guó)芒14號(hào)、

桂熱芒08-6號(hào)、臺(tái)農(nóng)、桂七

引物名稱：Lmma7

圖10.不同芒果品種SSR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

備注：芒果品種編號(hào)1