第章腫瘤免疫及其免疫檢測課件

第二十七章腫瘤免疫與免疫學檢驗27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測思考題小結第一節(jié)腫瘤抗原一、根據腫瘤抗原的特異性分類二、根據腫瘤抗原產生機制分類第二節(jié)機體抗腫瘤的免疫學效應機制一、抗腫瘤的細胞免疫機制二、抗腫瘤的體液免疫機制第三節(jié)腫瘤免疫學檢驗一、腫瘤標志物二、腫瘤患者免疫功能狀態(tài)的檢測及臨床意義27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測腫瘤免疫學(tumorimmunology)是研究腫瘤抗原性質、機體對腫瘤的免疫應答、機體免疫功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相互關系以及腫瘤免疫學診斷和免疫學防治的科學。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測第一節(jié)腫瘤抗原腫瘤抗原（tumorantigen）是指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現的或過度表達的抗原物質。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測機體產生腫瘤抗原的可能機制為：①基因突變；②細胞癌變過程使原本不表達的某些基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常，如糖基化異常；④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；⑤某些基因產物尤其是信號轉導分子的過度表達；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測1．腫瘤特異性抗原（tumorspecificantigen,TSA）

是腫瘤細胞所特有的新抗原，它只表達于腫瘤細胞，而不存在于正常組織細胞。2．腫瘤相關性抗原(tumorassociatedantigen,TAA)

是指非腫瘤細胞所特有的，正常組織或細胞也可表達的抗原物質，但此類抗原在癌變細胞的表達水平遠遠超過正常細胞。一、根據腫瘤抗原的特異性分類27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測1．理化因素誘發(fā)的腫瘤抗原2．病毒誘生的腫瘤抗原3．自發(fā)性腫瘤抗原4．正常細胞成分的異常表達⑴分化抗原：⑵過度表達的抗原：⑶胚胎抗原：⑷細胞突變產生的獨特型抗原：二、根據腫瘤抗原產生機制分類27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測病毒誘生的腫瘤抗原27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

第二節(jié)機體抗腫瘤的免疫學效應機制機體抗腫瘤的免疫學效應十分復雜，涉及特異性和非特異性抗腫瘤機制相互交錯，體液免疫與細胞免疫機制相互協調和補充，從而共同執(zhí)行免疫監(jiān)視功能。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測㈠T細胞

1.CD4+T細胞2.CD8+T細胞(在抗腫瘤效應中起關鍵作用)

3.γδ+T細胞㈡

NK細胞㈢巨噬細胞一、抗腫瘤的細胞免疫機制27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測1．補體的溶細胞效應

2．抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應3．抗體的免疫調理作用4．抗體封閉腫瘤細胞表面某些受體5．抗體干擾腫瘤細胞粘附作用6．其他機制二、抗腫瘤的體液免疫機制27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

第二節(jié)腫瘤免疫學檢驗腫瘤免疫學檢驗是指用免疫學的方法檢測腫瘤抗原、抗體等腫瘤標志物和腫瘤患者的免疫功能狀態(tài)，為腫瘤的診斷、觀察病情、評價療效及預后具有重要價值。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測近年來隨著現代科技的不斷發(fā)展，免疫學，分子生物學，細胞生物學，生物化學的深入研究，發(fā)現了許多特異性較強，有一定臨床價值的腫瘤標志物100多種，受到國內外學者的高度重視。一、腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測腫瘤標志物（tumormarker，TM）是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，包括蛋白質、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因產物等?；颊哐夯蝮w液中腫瘤標志物的檢測，對腫瘤的輔助診斷、鑒別診斷、療效觀察、病情監(jiān)測以及預后的評價具有一定的價值。（一）腫瘤標志物的慨述1.腫瘤標志物的定義27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測特異性好與腫瘤類型(大小/分期)有關靈敏度高，能腫瘤能早期發(fā)現。具有器官特異性監(jiān)測腫瘤治療效果監(jiān)測腫瘤的復發(fā)

理想的腫瘤標志物預測腫瘤的預后27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測體液腫瘤標志物的分類和命名尚未完全統(tǒng)一，一般分為：⑴胚胎抗原類：如AFP，CEA等，⑵糖鏈抗原類：如CA125，CA15-3，CA19-9等。⑶激素類：如患甲狀腺髓樣癌時降鈣素升高，患絨毛膜細胞癌時hCG明顯升高。⑷酶和同工酶類：γGT，PAP等。⑸蛋白質類：β2微球蛋白，鐵蛋白，本周蛋白等⑹癌基因產物類如ras基因蛋白，myc基因蛋白，p53抑癌基因蛋白等。2.腫瘤標志物的分類27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測⑴腫瘤的大小和腫瘤細胞的數目⑵腫瘤細胞合成和分泌腫瘤標志物的速度⑶腫瘤組織的血液供應好壞⑷腫瘤細胞是否有壞死和壞死的程度⑸腫瘤細胞的分化程度和腫瘤的分期⑹腫瘤細胞是否表達和合成腫瘤標志物⑺腫瘤標志物在體內的降解和排泄速度3.影響血液和體液中腫瘤標志物濃度的因素27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

4.腫瘤標志物的臨床應用⑴高危人群的篩查⑵腫瘤的輔助診斷⑶腫瘤治療效果的評價⑷腫瘤復發(fā)的監(jiān)測和預后判斷27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測1.胚胎抗原類腫瘤標志物（二）常見腫瘤標志物⑴甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）AFP是胎兒發(fā)育早期合成的一種糖蛋白(α1球蛋白)，分子量70kD，胎兒出生后不久即逐漸消失。參考值：血清AFP

<20μg/L27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測①原發(fā)性肝癌，77%的患者AFP>300μg/L，但有部分患者AFP始終不升高；②病毒性肝炎與肝硬化患者，血清中AFP可有不同程度的增高，但一般在300μg/L以下；③生殖系統(tǒng)腫瘤和胚胎性腫瘤，如睪丸癌、畸胎瘤等升高；④妊娠三個月后，血清AFP含量開始升高，分娩后三周恢復正常。若孕婦血清中AFP異常升高，應考慮有胎兒神經管缺損畸形的可能性。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測⑵癌胚抗原（carcino-embryonicantigen，CEA）①結腸癌、直腸癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌，轉移性惡性腫瘤也有不同程度的陽性率；在惡性腫瘤的隨訪，病情監(jiān)測，療效評價等方面有重要價值。②腸道息肉、憩室炎、結腸炎、肝硬化、肝炎、胰腺炎和肺部疾病也可有不同程度的升高；③吸煙者中約有33%的人CEA＞5μg/L。1965年CEA發(fā)現于成人結腸癌組織中，分子量約為200kD，可溶性糖蛋白，主要存在于成人癌組織以及胎兒的胃腸管組織中，故名癌胚抗原，是一種廣譜腫瘤標志物。參考值：血清CEA<5.0μg/L27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

2.糖鏈抗原類腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測（1）糖鏈抗原15-3(CA15-3)

①乳腺癌，但在乳腺癌的早期陽性率較低約為30%，轉移性乳腺癌陽性率可達80%；②其他惡性腫瘤，如肺癌，結腸癌，胰腺癌，卵巢癌，子宮頸癌，原發(fā)性肝癌等，也有不同程度的陽性率；③肝臟，胃腸道，肺，乳腺，卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽性率一般低于10%。CA15-3是一種乳腺癌相關抗原，屬糖蛋白，分子量超過400kD，可用一對單克隆抗體（MAb115D8和MAbDF3）進行雙抗體夾心法來識別。與CA15-3同類的多態(tài)性上皮粘蛋白抗原還有MCA，CA27-29，CA549等。參考值：血清CA15-3<28kU/L27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

（2）糖鏈抗原125(CA125)CA125是很重要的卵巢癌相關抗原，1981年Bast發(fā)現。CA125是一種大分子多聚糖蛋白。參考值：血清CA125

<35kU/L①卵巢癌，陽性率約為61.4%。手術和化療有效者CA125水平很快下降，若有復發(fā)，CA125升高可先于臨床癥狀出現之前。②其他惡性腫瘤，如乳腺癌40%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌41.4%，結腸直腸癌34.2%，其他婦科腫瘤43%。③非惡性腫瘤，如子宮內膜異位癥，盆腔炎，卵巢囊腫，胰腺炎，肝炎，肝硬化等疾病也有不同程度升高。④妊娠早期，CA125有升高。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測（3）糖鏈抗原19-9(CA19-9)CA19-9是一種與胰腺癌，膽囊癌，結腸癌和胃癌相關的腫瘤標志物，又稱胃腸癌相關抗原。參考值：血清CA199<37kU/L①胰腺癌，膽囊癌，膽管壺腹癌時，血清CA19-9水平明顯升高，陽性率約為74.9%，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9濃度可達40萬kU/L，是重要的輔助診斷指標；②胃癌，陽性率約為50%，結腸癌，陽性率約為60%；③急性胰腺炎，膽囊炎，膽汁淤積性膽管炎，肝硬化，肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，注意與惡性腫瘤的鑒別。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

3.酶類腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測⑴前列腺特異性抗原(PSA)

參考值：血清t-PSA<4.0μg/L，

f-PSA<0.8μg/L，

f-PSA/t-PSA>25％PSA是一種由前列腺上皮細胞分泌的蛋白酶。在血清中PSA以兩種生化形式存在：一部分(5%～40%)是以低分子量(33kD)的游離PSA（f-PSA）形式存在；大部分(60%～90%)是以PSA和α1–抗糜蛋白酶、α2-巨球蛋白等結合的形式存在，稱復合PSA(c-PSA)?？侾SA（t-PSA）,包括血清中f-PSA和c-PSA。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

【注意事項】在采集病人的血標本前進行直腸指診、前列腺按摩，導尿等，將會導致血清PSA升高，應注意避免。血清PSA升高①前列腺癌患者升高，但大約25%患者，其PSA水平正常；而大約有50%的良性前列腺疾病患者PSA水平增高。為增加PSA對前列腺癌檢測的敏感性和特異性，可使用PSA年齡特異性參考范圍，PSA密度、PSA速率、f-PSA/t-PSA比值等；②前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病，也可見血清PSA水平升高，故當PSA在4.0μg/L～10.0μg/L的灰區(qū)時，須進行f-PSA和f-PSA/t-PSA比值的測定。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

NSE是烯醇化酶的一種同功酶，烯醇化酶同功酶根據α，β，γ三個亞基的不同，可分為αα、ββ、γγ、αβ和αγ五種二聚體同功酶。γγ亞基組成的同功酶屬神經元和神經內分泌細胞特有，故命名為神經元特異性烯醇化酶，NSE是一種酸性蛋白酶，參與糖酵解。腫癌組織糖酵解作用加強，細胞增殖周期加快，細胞內的NSE釋放進入血液增多，導致此酶在血清內含量增高。

參考值：血清NSE<15μg/L⑵神經元特異性烯醇化酶（NSE）27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測【注意事項】NSE也存在于正常紅細胞中，標本溶血會影響測定結果，因此采血時要特別注意避免溶血。血清NSE升高見于①小細胞肺癌（SCLC）?？捎糜阼b別診斷，監(jiān)測小細胞肺癌放療、化療后的治療效果。②神經母細胞瘤，患者NSE水平異常增高，而Wilms瘤則升高不明顯，因此測定NSE的水平可用于上述疾病的診斷和鑒別診斷。③神經內分泌細胞腫瘤，如嗜鉻細胞瘤，胰島細胞瘤，甲狀腺髓樣癌，黑色素瘤，視網膜母細胞瘤等血清NSE也可增高。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

AFU是一種溶酶體酸性水解酶，以往主要用于遺傳性AFU缺乏引起的巖藻糖貯積病的診斷。Deugnier等（1984）首先發(fā)現原發(fā)性肝癌患者血清中AFU活性升高。參考值：血清<420μmol/L⑶α-L-巖藻糖苷酶測定（AFU）

①原發(fā)性肝癌，患者血清中AFU活性明顯升高，AFP陰性的肝癌患者中AFU也可見升高，因此，兩者聯合檢測有較好的互補作用。②其他惡性腫瘤，如肺癌、結腸癌、乳腺癌、子宮癌等也可有部分病例升高。③慢性肝炎、肝硬化患者中部分病例AFU升高，隨病情好轉AFU下降，動態(tài)監(jiān)測有助于與肝癌的鑒別。④妊娠期間，AFU升高，分娩后迅速下降。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

4.激素類腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

hCG是胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白類激素，是監(jiān)測早孕的重要指標。在異常情況下，惡性腫瘤也可產生hCG。參考值上限為:5IU/L⑴人絨毛膜促性腺激素(hCG)①滋養(yǎng)層腫瘤和生殖細胞腫瘤hCG升高，如絨毛膜細胞癌、葡萄胎、精原細胞睪丸癌等②其他腫瘤如乳腺癌、胃腸道癌、肺癌等也可見升高。③良性疾病如卵巢囊腫、子宮內膜異位癥、肝硬化等hCG也可見增高。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測CT是由甲狀腺濾泡旁細胞即C細胞分泌的多肽激素，主要生理作用是降低血鈣。參考值＜100ng/L⑵降鈣素（calcitonin,CT）

①甲狀腺髓樣癌血清降鈣素升高，其他腫瘤如肺癌、乳腺癌、胰腺癌等也見增高。②腎功能衰竭患者降鈣素常升高?！咀⒁馐马棥坑捎诮碘}素在血液中的半壽期短約為10min，樣本收集后應及時處理，冷凍保存。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

5.蛋白質類腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測β2M是一種低分子蛋白，人體除成熟紅細胞和胎盤滋養(yǎng)層細胞以外，所有的有核細胞都有β2M。因為β2M分子量小，易于由腎小球濾過，但幾乎全部由近曲小管重吸收，因此正常人血和尿中β2M含量很低。參考值：血清<2.4mg/L；尿<320μg/L⑴β2-微球蛋白(β2M)

β2M升高見于:①惡性腫瘤，慢性淋巴細胞白血病等。②腎臟疾?。杭甭阅I盂腎炎，腎小管藥物性損害等③腎移植排斥反應時。④免疫性疾?。合到y(tǒng)性紅斑性狼瘡，艾滋病等?！咀⒁馐马棥磕驑吮静杉?，為避免β2M分解，應加適當的NaOH緩沖液調PH至7.0左右，然后置4℃保存，2天內測定。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測鐵蛋白是判斷體內是否缺鐵的敏感指標。Fer升高還與腫瘤有關，癌細胞具有較強合成鐵蛋白的能力，因此也是一種腫瘤標志物。

血清參考值：男性15~200μg/L女性12~150μg/L⑵鐵蛋白（ferritin,Fer)①各種惡性腫瘤和白血病可見血清鐵蛋白升高。②各種炎癥感染、急性心肌梗死、反復輸血等，見鐵蛋白升高。③鐵蛋白<12μg/L

時即可診斷為缺鐵。是診斷隱性缺鐵性貧血的可靠指標。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測腫瘤標志物

參考值

相關腫瘤CA50<24kU/L胰腺癌、結腸癌、胃癌等

CA72-4<6kU/L胃癌、粘液性卵巢癌等

CA242<20kU/L胰腺癌、結腸癌、胃癌等

前列腺酸性磷酸酶（PAP）<2.0μg/L前列腺癌鱗狀上皮細胞癌抗原（SCC）

<1.5μg/L宮頸癌、肺和頭頸部鱗癌等

組織多肽抗原（TPA）

<80U/L膀胱癌、前列腺癌、消化道

惡性腫瘤細胞角蛋白19片段

<3.3μg/L非小細胞肺癌（NSCLC）（CYFRA21-1）唾液酸

<1.8mmol/L肺癌、胃癌、黑色素瘤等

6.其它常用腫瘤標志物27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測（三）腫瘤標志物檢測的注意事項1.標本采集:

各種物理檢查對TM檢測的影響藥物對TM檢測的影響標本保存對TM檢測的影響溶血標本對TM檢測的影響酶類和激素類腫瘤標志物的特點27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測2.檢測方法和試劑：方法學的差異試劑盒的差異測定標準化的問題

因此，在工作中要盡量使用同一種方法，同一種儀器和同一廠家的試劑盒進行測定。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測

3.TM檢測的干擾因素

⑴攜帶污染(carry-over)⑵“鉤狀效應”（hookeffect）⑶嗜異性抗體：可導致在無抗原的情況下，出現腫瘤標志物濃度增高的假象。嗜異性抗體可出現在曾被鼠或寵物咬過的人，以及使用過動物免疫劑（如單克隆抗體）治療過的人。27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測一種腫瘤可分泌多種腫瘤標志物，而不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有相同的腫瘤標志物。因此，單獨檢測一種腫瘤標志物，可能會因為測定方法的敏感性不夠而出現假陰性，聯合檢測多種腫瘤標志物有利于提高檢出的陽性率。為此，選擇一些特異性較高，可以互補的腫瘤標志物聯合測定，對提高腫瘤的檢出率是有價值的。常用腫瘤標志物的聯合使用。（四）腫瘤標志物的聯合應用27第27章腫瘤免疫及其免疫檢測常用腫瘤標志物聯合檢測的臨床應用

腫瘤

首選標志物

補充標志物肺癌NSE、CYFRA21-1CEA、TPA、SCC、ACTH、降鈣素肝癌AFPAFU、γGT、CEA、ALP乳腺癌CA15-3、CA549CEA、hCG、降鈣素、鐵蛋白胃癌CA72-4CEA、CA19-9、CA50前列腺癌PSAf-PSA、c-PSA、PAP結腸直腸癌CEACA19-9、CA50胰腺癌CA19-9CA50、CEA、CA125卵巢癌CA125CEA、hCG、CA72-4睪丸腫瘤AFP、hCG宮頸癌SCCCEA、CA125、TPA膀胱癌無