有助于維持尿酸健康水平功能性食品功效評(píng)價(jià)方法（征求意見(jiàn)稿）

1有助于維持尿酸健康水平功能性食品功效評(píng)價(jià)方法本文件規(guī)定了有助于維持尿酸健康水平功能性食品功效評(píng)價(jià)的試驗(yàn)分類(lèi)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、人體試食試4.1有助于維持尿酸健康水平功效試驗(yàn)分為b)藥物誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型。以受試樣品給予自發(fā)高尿酸小鼠動(dòng)物模型或通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法造成的高尿酸動(dòng)物模型，觀察受試樣品對(duì)高尿酸動(dòng)物模型的血清尿酸、尿尿酸等指標(biāo)的影響，評(píng)價(jià)受試樣品對(duì)尿酸的調(diào)節(jié)作用。5.1UOX基因敲除自發(fā)高尿酸小鼠模型5.1.1原理鼠、兔等常用作動(dòng)物模型的哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在尿酸氧化酶（UOX），UOX可催化體內(nèi)尿酸氧化成尿囊素或其他物質(zhì)。UOX基因敲除小鼠可以大幅提高血尿酸水平，尿酸水平穩(wěn)定，能較好的模擬人類(lèi)高尿自發(fā)高尿酸小鼠（Uoxem1Cli），Uoxem1Cli宜選用8-12周齡，體重20±2g，雌雄可以兼用，每組實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組、一個(gè)模型對(duì)照組和空白對(duì)照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑組，另設(shè)二個(gè)劑量組，高劑量一般不超過(guò)30倍。同時(shí)設(shè)給予受試樣品高劑量的正常動(dòng)物組。受試樣品給予時(shí)25.1.5.1正常動(dòng)物降尿酸實(shí)驗(yàn)選健康成年動(dòng)物按血尿酸水平分組，隨機(jī)選1個(gè)對(duì)照組和1個(gè)劑量組。對(duì)照組給予溶劑，劑量組給5.1.5.2高尿酸模型動(dòng)物降尿酸實(shí)驗(yàn)選高尿酸模型動(dòng)物按血尿酸水平隨機(jī)分組，設(shè)1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組（組間血尿酸差不大于30μmol/L），每組8只。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予溶劑，連續(xù)30天，測(cè)血尿酸，5.1.6觀察指標(biāo)血尿酸：實(shí)驗(yàn)前后，測(cè)血尿酸，比較各組動(dòng)物血尿酸值及血尿酸下（實(shí)驗(yàn)前血尿酸值?實(shí)驗(yàn)后血尿酸值）5.1.7數(shù)據(jù)處理一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)5.1.8結(jié)果判定5.1.8.1正常動(dòng)物降尿酸試驗(yàn)：血尿酸指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，血尿酸下降或血尿酸下降百分率升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品對(duì)5.1.8.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：血清尿酸指標(biāo)陽(yáng)性，且對(duì)正常動(dòng)物血清尿酸無(wú)影響，即可判定該受試樣5.1.9注意事項(xiàng)5.1.9.1高尿酸動(dòng)物模型構(gòu)建：氧嗪酸鉀誘導(dǎo)模型小鼠形成的高尿酸血癥存在時(shí)效性，氧嗪酸鉀注射5.1.9.2高尿酸小鼠模型成立的判定：模型小鼠平均血尿酸是正常小鼠平均值的25.2藥物誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型5.2.1原理鼠、兔等常用作動(dòng)物模型的哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在尿酸氧化酶（UOX），UOX可催化體內(nèi)尿酸氧化成尿囊素或其他物質(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)基因誘導(dǎo)或環(huán)境誘導(dǎo)的方法，抑制或者消除尿酸酶的活性建立高尿酸小鼠氧嗪酸鉀是抑制UOX造模的常用藥物，其結(jié)構(gòu)與尿酸的嘌呤環(huán)相似，可競(jìng)爭(zhēng)性地與尿酸酶結(jié)合，部分抑制尿酸酶的活性，導(dǎo)致尿酸分解減少，造成短時(shí)間內(nèi)體內(nèi)尿酸蓄積增多，聯(lián)合高酵母飼料，提高乙胺丁醇會(huì)抑制尿酸經(jīng)過(guò)腎小管排泄，進(jìn)而造成血液尿酸升高，聯(lián)合高酵母飼料，提高小鼠體內(nèi)5.2.2儀器及試劑全自動(dòng)生化儀、天平、氧嗪酸鉀（C4H2KN3O4，分子量195.17）、羧甲基纖維素鈉、乙胺丁醇3推薦用雄性C57BL/6J小鼠，8～12實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組、一個(gè)模型對(duì)照組和空白對(duì)照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑組，另設(shè)二個(gè)劑量組，高劑量一般不超過(guò)30倍。同時(shí)設(shè)5.2.5.1正常動(dòng)物降尿酸實(shí)驗(yàn)選健康成年動(dòng)物按血尿酸水平分組，隨機(jī)選1個(gè)對(duì)照組和1個(gè)劑量組。對(duì)照組給予溶劑，劑量組給5.2.5.2高尿酸模型動(dòng)物降尿酸實(shí)驗(yàn)5.2.5.2.1高酵母飼料聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型購(gòu)入成年動(dòng)物，適應(yīng)3～5天后，隨機(jī)取15只動(dòng)物測(cè)血尿酸，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血尿酸值。隨機(jī)分為5各組，即空白對(duì)照組，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組15只?？瞻讓?duì)照組不作處理，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)15天?？瞻讓?duì)照組給與維持飼料飼養(yǎng)，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組給予高酵母飼料，在此基礎(chǔ)上，給予模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組氧嗪酸鉀2505.2.5.2.2氧嗪酸鉀聯(lián)合乙胺丁醇誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型購(gòu)入成年動(dòng)物，適應(yīng)3～5天后，隨機(jī)取15只動(dòng)物測(cè)血尿酸，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血尿酸值。隨機(jī)分為5各組，即空白對(duì)照組，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組15只。空白對(duì)照組不作處理，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)15天。給予模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組氧嗪酸鉀250mg/kgBW腹腔注射，同時(shí)乙胺丁醇灌胃2505.2.6.1血尿酸：實(shí)驗(yàn)前后，測(cè)血尿酸，比較各組動(dòng)物血尿酸值及血尿酸下降百分率。（實(shí)驗(yàn)前血尿酸值?實(shí)驗(yàn)后血尿酸值）5.2.6.2尿尿酸：實(shí)驗(yàn)前后，收集24h尿，測(cè)尿尿酸，計(jì)算尿尿尿酸排泄量增加率%=（實(shí)驗(yàn)后尿尿酸排泄量?實(shí)驗(yàn)前尿尿酸排泄量）×100%一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方5.2.8.1正常動(dòng)物降尿酸試驗(yàn)：血尿酸指標(biāo)：受試樣品劑量組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定對(duì)正a)血尿酸指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，血尿酸下降或血尿酸下降百分率升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品對(duì)血b)尿尿酸：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，尿尿酸升高或尿尿酸排血45.2.8.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：血清尿酸和尿酸排泄量?jī)身?xiàng)中任一項(xiàng)為陽(yáng)性，且對(duì)正常動(dòng)物血尿酸無(wú)影5.2.9注意事項(xiàng)5.2.9.1高尿酸動(dòng)物模型構(gòu)建：氧嗪酸鉀誘導(dǎo)模型小鼠形成的高尿酸血癥存在時(shí)效性，氧嗪酸鉀注射5.2.9.2高尿酸小鼠模型成立的判定：模型小鼠平均血尿酸是正常小鼠平均值的26.1.1年齡18～65歲，不限制性別；420μmol/L≤血清尿酸水平＜540μmol/L（無(wú)合并癥）或6.2.3有心、肝、腎等主要臟器并發(fā)癥，或合并有其它嚴(yán)重疾病，精神病患者，服用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥6.2.4不能配合飲食控制而影響觀察6.2.7凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定服用采用組間對(duì)照設(shè)計(jì)。根據(jù)隨機(jī)盲法的要求進(jìn)行分組。按受試者的血尿酸水平隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、飲食等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比6.5.1.1一般狀況（包括精神、睡眠、飲食、大小血尿酸下降百分率=試驗(yàn)前血血尿酸值×100%524小時(shí)尿尿酸排泄量增加百分率=試驗(yàn)后24小時(shí)?尿尿酸排泄量×100%試驗(yàn)前對(duì)每一位受試者按性別、年齡、不同勞動(dòng)強(qiáng)度、理想體重參照原來(lái)生活習(xí)慣規(guī)定相應(yīng)的飲食，試食期間堅(jiān)持飲食控制。試食組在飲食指導(dǎo)的基礎(chǔ)上，按推薦服用方法和服用量每日服用受試樣品，對(duì)照組可服用安慰劑或采用空白對(duì)照。受試樣品給予時(shí)間3個(gè)月，必要時(shí)可延長(zhǎng)至6凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿(mǎn)足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；方差齊但變異系數(shù)太大（如CV＞50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。有效率及總有效率采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用a)試食前后自身比較，血尿酸