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備案號：37939-2013DB22DB22/T1820—2013糧食中串珠鐮刀菌的PCR檢測PCRdetectionofFusariummoniliformingrains2013-05-15發(fā)布2013-09-0吉林省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā)布I1GB4789.15食品微生物學檢GB/T4789.16食品衛(wèi)生微生物學檢驗WS/T230臨床診斷中聚合酶鏈式反應（PCR）技術串珠鐮刀菌是一種重要的農(nóng)作物病原真菌，能引起禾本科作物的根腐、莖腐和穗腐，是玉米青枯模板DNA先經(jīng)高溫變性成為單鏈，在DNA聚合酶作用和適宜的反應條件下，根據(jù)模板序列設計的兩條引物分別與模板DNA兩條鏈上相應的一段互補序列發(fā)生退火而相互結合，接著在DNA聚合酶的作4.2馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基（Po2）；），上游：5’-CTTGGTCATGGGCCAGTCAA4.15分子量標記：2000bpDNAMa5.10紫外分光光度計。3加入500μLCTAB、40μL蛋白酶K，震蕩均勻，65℃水浴30min；加入500μL酚：三氯甲烷：異戊醇的異丙醇，震蕩混勻，12000r/min離心10min；棄上清液，用預熱至65℃TE緩沖液溶解DNA（TE量1)，強烈震蕩，12000r/min離心15min；吸取上層水相至新的1.5mL離心管中，加入等體積的異采用紫外分光光度法測定DNA，所測得OD值為將DNA溶液做適當?shù)南♂?，放入紫外分光光度計的比色皿中，?60nm處測定其吸收值，1檢驗過程中分別設空白對照、陰性對照、陽性對照?？瞻讓φ赵O為以水代替DNA模板；陰性對照采4用電泳緩沖液（1×TAE）制備1.0%~1.2%瓊脂糖凝膠（55℃~60℃時加入溴化乙錠至終濃度為0.5用2000bpDNAMarker作參照。9V/cm恒壓電在陰性對照未出現(xiàn)條帶，陽性對照出現(xiàn)預期1.6kb的擴增條帶條件下，如測試樣擴增條帶，表示樣品中無串珠鐮

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