血細(xì)胞分析儀與臨床應(yīng)用

關(guān)于血細(xì)胞分析儀與臨床應(yīng)用傳統(tǒng)的血細(xì)胞檢查完全采用手工方法,不僅操作繁瑣費(fèi)時(shí),而且由于多種原因,計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度難以保證.20世紀(jì)50年代末,庫(kù)爾特采用電阻率變化與電子技術(shù)相結(jié)合的方法,發(fā)明了性能比較穩(wěn)定的電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,開(kāi)創(chuàng)了血細(xì)胞分析的新紀(jì)元.第2頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月公司創(chuàng)辦人貝克曼儀器公司

始創(chuàng)于1935年

Dr.ArnoldO.Beckman庫(kù)爾特電子公司始創(chuàng)于1958年WallaceH.&JosephR.Coulter第3頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月庫(kù)爾特先生(1913-1998)“ScienceServingHumanity”(科學(xué)服務(wù)人類(lèi))庫(kù)爾特原理發(fā)明者，早期單克隆抗體研究者直至1998年，曾獲6項(xiàng)美國(guó)科學(xué)榮譽(yù)，及多項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利第4頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月主要服務(wù)對(duì)象

生物研究診斷醫(yī)療大學(xué)研究所生物技術(shù)生化制藥醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室私人實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療所第5頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月血細(xì)胞分析儀的發(fā)展史

從庫(kù)爾特公司的發(fā)展史開(kāi)始…1947年，華萊士.庫(kù)爾特先生發(fā)明庫(kù)爾特原理；

“當(dāng)一個(gè)不良導(dǎo)體顆粒，例如血細(xì)胞，通過(guò)兩個(gè)電極之間時(shí)，導(dǎo)致電路的電阻抗發(fā)生變化?！?華萊士.庫(kù)爾特，

1947第6頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月1953年庫(kù)爾特家族研制出全世界第一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀：ModelA;現(xiàn)在，95%的血細(xì)胞分析儀采用庫(kù)爾特原理；第7頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月

庫(kù)爾特原理三要素：小孔、負(fù)壓、電極

檢測(cè)：細(xì)胞大小和數(shù)量

負(fù)壓血細(xì)胞懸液外電極內(nèi)電極小孔小孔管小孔電流樣品杯小孔近觀在等滲電解質(zhì)溶液（稀釋液）中，有一個(gè)用于細(xì)胞計(jì)數(shù)的小孔管，其內(nèi)側(cè)充滿了稀釋液，并有一個(gè)內(nèi)電極，其外側(cè)細(xì)胞懸液中有個(gè)外電極，小孔兩側(cè)的電極之間有穩(wěn)定的電流。細(xì)胞為相對(duì)不良導(dǎo)體，其導(dǎo)電性質(zhì)比稀釋液低，當(dāng)有個(gè)細(xì)胞通過(guò)小孔，于瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)脈沖信號(hào)，脈沖的數(shù)量與細(xì)胞的數(shù)量成正比，高度與細(xì)胞體積成正比。脈沖信號(hào)經(jīng)放大，閾值調(diào)節(jié)，甄別，整形后，送入計(jì)數(shù)系統(tǒng)進(jìn)行處理，得出被測(cè)細(xì)胞的數(shù)量和體積分布直方圖。第8頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月檢測(cè)區(qū)域紅細(xì)胞紅細(xì)胞通過(guò)小孔庫(kù)爾特原理Oscilloscope示波鏡第9頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月檢測(cè)區(qū)域白細(xì)胞白細(xì)胞通過(guò)小孔庫(kù)爾特原理示波鏡第10頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月庫(kù)爾特技術(shù)第11頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月高頻度分析-直方圖直方圖-X軸：體積（fL）-Y軸：相對(duì)數(shù)量通道劃分RBC直方圖：36-360fLPLT直方圖：2-20fLWBC直方圖：35-450fL第12頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月脈沖編輯（專(zhuān)利技術(shù)）作用：刪除不規(guī)則脈沖對(duì)體積測(cè)量的影響。第13頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月重疊校正（專(zhuān)利技術(shù)）

小孔近觀

作用：糾正因重疊而導(dǎo)致的對(duì)顆粒計(jì)數(shù)和體積測(cè)量的影響。第14頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月三次計(jì)數(shù)/延長(zhǎng)計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)以三次擬合的均值為依據(jù)；對(duì)血小板濃度小于67X109/L的標(biāo)本，儀器自動(dòng)延長(zhǎng)1-2個(gè)三次計(jì)數(shù)。三次計(jì)數(shù)：統(tǒng)計(jì)補(bǔ)償；監(jiān)控計(jì)數(shù)過(guò)程的穩(wěn)定性。延長(zhǎng)計(jì)數(shù)：針對(duì)低濃度的標(biāo)本。第15頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月掃流技術(shù)(專(zhuān)利技術(shù))測(cè)試區(qū)域紅細(xì)胞回流示波鏡紅細(xì)胞血小板+-第16頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月測(cè)試區(qū)域紅細(xì)胞被掃流液沖走示波鏡RBCPLT+-掃流液掃流技術(shù)(專(zhuān)利技術(shù))第17頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月掃流技術(shù)(專(zhuān)利技術(shù))作用：防止紅細(xì)胞回流對(duì)血小板計(jì)數(shù)的干擾；防止細(xì)胞再度進(jìn)入感應(yīng)區(qū)被兩次計(jì)數(shù)。第18頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月擬合曲線（專(zhuān)利技術(shù)）在血小板的直方圖上可見(jiàn)兩條曲線：一條是2fl-20fl的原始數(shù)據(jù)曲線;另一條是0fl-70fl的擬合曲線.由最小平方回歸法定義出一條對(duì)數(shù)正態(tài)曲線，即擬合曲線；第19頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月擬合曲線血小板計(jì)數(shù)的干擾主要來(lái)自:2fl以下：噪音;細(xì)菌的干擾20fl以上：裂紅細(xì)胞;小紅細(xì)胞;白細(xì)胞的干擾第20頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月擬合曲線的作用對(duì)曲線下的面積進(jìn)行積分計(jì)算；將該面積值校準(zhǔn)到參考的PLT計(jì)數(shù)；獲得與參考方法最具相關(guān)性的血小板數(shù)值.在0-70fL范圍的非血小板脈沖被擬合曲線排除于血小板計(jì)數(shù)之外；大大增加了血小板的線性范圍(0-1,500,000)第21頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月燃燒電路（專(zhuān)利技術(shù)）作用：預(yù)防蛋白堆積于計(jì)數(shù)孔；取消小孔的日常保養(yǎng)程序。

第22頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月酶清潔劑（專(zhuān)利配方）操作：每24小時(shí)浸泡0.5小時(shí)。作用：令儀器的流式通道、計(jì)數(shù)池、分血片、和血紅蛋白檢測(cè)室保持潔凈性。圖示：計(jì)數(shù)孔在用CLENZ清潔劑浸泡前后的潔凈度比較。

第23頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月自我清潔的分血片庫(kù)爾特另一個(gè)免日常保養(yǎng)的關(guān)鍵部件是專(zhuān)利的、是具自我清潔功能的分血片。第24頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月庫(kù)爾特CBC分析技術(shù)計(jì)數(shù)和體積分析的技術(shù)脈沖編輯重疊校正三次計(jì)數(shù)/延長(zhǎng)計(jì)數(shù)高頻度分析血小板分析的技術(shù)掃流技術(shù)擬合曲線三次計(jì)數(shù)/延長(zhǎng)計(jì)數(shù)免日常保養(yǎng)的技術(shù)燃燒電路酶清潔劑自我清潔的分血片其他技術(shù)第25頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月白細(xì)胞分類(lèi)原理三分類(lèi)原理：庫(kù)爾特直方圖分類(lèi)五分類(lèi)原理：VCS三維分析原理第26頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月從三分類(lèi)到五分類(lèi)三分類(lèi)：淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞嗜酸細(xì)胞嗜堿細(xì)胞五分類(lèi)：淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞嗜酸細(xì)胞嗜堿細(xì)胞第27頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月在進(jìn)行白細(xì)胞分析時(shí),,由于白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中除加入一定量的稀釋液外還加入了溶血?jiǎng)?此溶血?jiǎng)┮环矫媸辜t細(xì)胞溶解,另一方面使白細(xì)胞質(zhì)經(jīng)胞膜滲出,胞膜緊裹在細(xì)胞核或存在的顆粒周?chē)?使白細(xì)胞成為”膜包核”.儀器將體積在35-450fl的這種顆粒認(rèn)定為白細(xì)胞,并根據(jù)其體積大小在直方圖上從左至右初步確認(rèn)其相應(yīng)的三個(gè)細(xì)胞群.第28頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月在正常白細(xì)胞直方圖上,小細(xì)胞群是位于左側(cè)又高又陡的峰,分布在35-90fl,以成熟淋巴細(xì)胞為主要特征細(xì)胞,大細(xì)胞群是位于右側(cè)較低且分布寬的峰,跨越160-450fl,以中性粒細(xì)胞為主要特征細(xì)胞,位于大、小細(xì)胞群之間的較平坦的區(qū)域，分布在90-160fl，是單個(gè)核細(xì)胞，也稱(chēng)為中間細(xì)胞，以單核細(xì)胞為主要特征細(xì)胞。淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞粒細(xì)胞第29頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月儀器根據(jù)各細(xì)胞群占總體的比例計(jì)算出相應(yīng)的百分比，從而得到白細(xì)胞三分類(lèi)結(jié)果，如果再與該標(biāo)本的白細(xì)胞總數(shù)相乘，即得到各類(lèi)細(xì)胞的絕對(duì)值。電阻抗法的白細(xì)胞分類(lèi)只是根據(jù)加溶血?jiǎng)┖蟀准?xì)胞體積的大小獲得，由于多種因素可影響白細(xì)胞分類(lèi)的真實(shí)性，因此，準(zhǔn)確的白細(xì)胞分類(lèi)還不能完全脫離手工顯微鏡檢查。第30頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月白細(xì)胞五項(xiàng)分類(lèi)：VCS技術(shù)分析外周血液中的淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞嗜中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞運(yùn)用VCS技術(shù),對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行多參量分析大小、核形、顆粒特性第31頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月嗜酸細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞血小板

嗜堿細(xì)胞紅細(xì)胞第32頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月淋巴嗜堿單核嗜酸中性粒細(xì)胞第33頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月V.C.S.三維分析原理運(yùn)用V、C、S三種探針,在流式通道的某一位點(diǎn),對(duì)通過(guò)的單列白細(xì)胞，進(jìn)行逐個(gè)的、同時(shí)的、三重的檢測(cè)，以及三維分析,以確定其亞群性質(zhì)。V-低頻波，分析細(xì)胞體積；C-高頻波，分析細(xì)胞核型；S-激光，分析細(xì)胞的顆粒特性。第34頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月VCS檢測(cè)八千多個(gè)白細(xì)胞逐個(gè)、直接、同時(shí)地接受VCS三重檢測(cè)，得到各自的三維座標(biāo)值VCS第35頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月增強(qiáng)型流式通道VCS增強(qiáng)型流式通道運(yùn)用三種獨(dú)立的能量探針來(lái)分析細(xì)胞第36頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月更好的大小測(cè)量方法

0-3

(相對(duì)大小)V是以參考的直流電阻方法檢測(cè)整個(gè)細(xì)胞的體積普通流式方法根據(jù)激光的前向散射估計(jì)細(xì)胞的相對(duì)大小激光VCS

-DC第37頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月更好的內(nèi)部結(jié)構(gòu)測(cè)量方法

7-10

(復(fù)雜性)RF運(yùn)用類(lèi)似于超聲波的高頻波測(cè)量細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)普通流式方法根據(jù)激光的低角度散射估計(jì)細(xì)胞的復(fù)雜性激光VCS-RF第38頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月射頻(RF)信號(hào)的問(wèn)題細(xì)胞越大，它發(fā)出射頻信號(hào)所需要的時(shí)間就越長(zhǎng)；因此，細(xì)胞大小對(duì)射頻信號(hào)具有影響；這種影響可以減弱對(duì)LY、MO、和GR的分辨效果。VolumeRF第39頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月將射頻轉(zhuǎn)換為阻光性已知細(xì)胞體積，可對(duì)射頻信號(hào)作體積補(bǔ)償；使信號(hào)的變化只受細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的影響；阻光性測(cè)量核的密度和分葉性，使更好地區(qū)分細(xì)胞。VolumeOpacity第40頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月高頻傳導(dǎo)信號(hào)大的細(xì)胞嗜中性、嗜酸性、嗜堿性粒細(xì)胞高頻傳導(dǎo)信號(hào)小的細(xì)胞淋巴、單核細(xì)胞高頻傳導(dǎo)（阻光性）第41頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月9Odeg.激光VCS-LaserS是運(yùn)用一個(gè)寬角度的散射范圍（10

-70

）來(lái)測(cè)量細(xì)胞的顆粒特性普通流式方法運(yùn)用單角度/側(cè)向激光散射測(cè)量細(xì)胞的顆粒特性更好的顆粒特性測(cè)量方法第42頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月激光散射信號(hào)大的細(xì)胞嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞激光散射信號(hào)小的細(xì)胞淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞激光散射第43頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月三維分析技術(shù)將檢測(cè)過(guò)的8,192個(gè)細(xì)胞分布到一個(gè)以V、C、S為三維坐標(biāo)的空間內(nèi)，顯示出細(xì)胞群特征。高智能的計(jì)算機(jī)軟件分析分析細(xì)胞群的位置、相對(duì)密度、輪廓、和大小。三維坐標(biāo)的數(shù)據(jù)分析位點(diǎn)多過(guò)16×106個(gè)。第44頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月三維空間的立體表示第45頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月VCS三維分析的技術(shù)特點(diǎn)接近原態(tài)的白細(xì)胞分析一個(gè)分類(lèi)試劑包ScatterPak雙試劑系統(tǒng)的作用去紅細(xì)胞:紅細(xì)胞溶解劑通過(guò)滲透壓差溶解紅細(xì)胞；保持白細(xì)胞原態(tài):溶解終止液令白細(xì)胞恢復(fù)到“接近原態(tài)”大小。第46頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月接近原態(tài)的WBC分析接近原態(tài)的白細(xì)胞進(jìn)入流式通道第47頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月VCS三維分析的技術(shù)特點(diǎn)1流體動(dòng)力聚焦的流式通道單細(xì)胞流在鞘液的包裹下呈最適排列通過(guò)流式通道；將重疊限制到最低限度。第48頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月正常壓力差：標(biāo)本壓力小于鞘流壓力第49頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月異常壓力差：標(biāo)本與鞘流壓力差過(guò)小第50頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月異常壓力差：標(biāo)本壓力與鞘流壓力相等第51頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月2增強(qiáng)型流式通道，VCS直接、同時(shí)、三重檢測(cè)分析細(xì)胞的視角與手工相似VCS，匯集最全面的物理檢測(cè)工具3三維分析的高分辨率(256

256

256)五分類(lèi)10種異常細(xì)胞第52頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月十種異常細(xì)胞的報(bào)警提示第53頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月紅細(xì)胞檢測(cè)原理根據(jù)各參數(shù)的檢測(cè)原理不同，大致分為三個(gè)部分1紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測(cè)定原理與白細(xì)胞檢測(cè)相同，當(dāng)紅細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少代表RBC的數(shù)量，脈沖的高度代表單個(gè)細(xì)胞的體積。脈沖高度疊加，經(jīng)換算即可得血細(xì)胞比積（HCT）。第54頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月2血紅蛋白檢測(cè)原理在稀釋的血液中加入溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)，后者與溶血濟(jì)中有關(guān)成分結(jié)合形成Hb衍生物，進(jìn)入Hb測(cè)試系統(tǒng)，在特定波長(zhǎng)（一般在530-550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成正比，儀器便可顯示其濃度。第55頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月HGB測(cè)量庫(kù)爾特的HGB測(cè)量方法：改良的氰化高鐵血紅蛋白試劑；溶血?jiǎng)┝罴t細(xì)胞破碎溶解，并將血紅蛋白轉(zhuǎn)換為氰化血紅蛋白一個(gè)具寬光譜的鎢燈光源；一個(gè)紅外濾光器過(guò)濾熱吸收；一個(gè)以525nm為中心的寬幅通帶濾光器；沒(méi)有來(lái)自磺基血紅蛋白的干擾；多重試劑空白。第56頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月窄幅通帶濾光器光吸收波長(zhǎng)第57頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月寬幅通帶濾光器波長(zhǎng)光吸收第58頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月吸收峰偏移如果吸收峰頻率發(fā)生偏移，窄幅通帶濾光器可能會(huì)漏掉曲線的大部分；寬幅通帶濾光器對(duì)吸收峰偏移現(xiàn)象會(huì)有所補(bǔ)償。光吸收光吸收波長(zhǎng)第59頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月3血小板檢測(cè)原理隨紅細(xì)胞一起在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)不同的域值，計(jì)算機(jī)分別給出血小板與紅細(xì)胞的數(shù)目。第60頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月血細(xì)胞分析儀

檢測(cè)參數(shù)的臨床意義白細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義

1生理性增多主要見(jiàn)于初生兒，妊娠期與分娩時(shí)，運(yùn)動(dòng)，疼痛和情緒變化，體力勞動(dòng)，冷熱水浴，日光或紫外線照射等以及日間變化。第61頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月病理性增多

急性感染（化膿性感染）嚴(yán)重組織損傷或大量血細(xì)胞破壞（大手術(shù)）急性大出血（脾破裂，宮外孕輸卵管破裂）急性中毒（安眠藥，敵敵畏）腫瘤性增多（白血病）

第62頁(yè),共69頁(yè)，星期六，2024年，5月數(shù)量減少革蘭陰性桿菌或病毒感染某些血液?。ㄔ僬希┞岳?、化損傷（電離輻射，長(zhǎng)期服用氯霉素）