GB∕T 39104.1-2020 紡織品 抗真菌性能的測定 第1部分：熒光法

紡織品抗真菌性能的測定國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本部分為GB/T39104的第1部分。本部分按照GB/T1.1—2009給本部分使用重新起草法修改采用ISO13629-1:2012《紡織品抗真菌性能的測定第1部分：熒光本部分與ISO13629-1:2012相——將ISO13629-1:2012的8.5內(nèi)的懸置段內(nèi)——將ISO13629-1:2012第10章內(nèi)的懸置段內(nèi)容調(diào)整為10.1,其后條號順延； ●增加引用了GB/T20944.2—2007(見第2章);———明確了ISO13629-1:2012的8.5.1 補(bǔ)充了14.3抗真菌效果評價(jià)：——將3.1的英文由“controlspecimen”修改為“controlfabric”,與國內(nèi)外其他抗菌標(biāo)準(zhǔn)保持一致；——明確了7.5中生物安全柜的等級；——明確了7.20中血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)單位為“CFU/mL”; 將8.4.2中腺嘌呤核苷-5'-三磷酸酯二鈉鹽三水合物的分子式調(diào)整為“C?H?N?Na?OaP。 明確了第10章、中孢子數(shù)量單位為“CFU/mL”:-—對10.7中的注進(jìn)行了修改。ⅡⅢ基于以上因素，ISO/TC38/WG23在2007年制定了ISO20743,并繼續(xù)開展紡織產(chǎn)本部分采用ATP熒光法作為抗真菌性能的定量分析方法。 GB/T39104的其他部分為： 第2部分：平皿計(jì)數(shù)法。1GB/T39104的本部分規(guī)定了通過檢測酶反應(yīng)[三磷酸腺苷(ATP)法]所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度測定紡織2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引GB/T20944.2—2007紡織品抗菌性能的評價(jià)第2部分：吸收法抗真菌整理antifungaltreatment2測定真菌細(xì)胞中ATP數(shù)量的方法。4原理將試樣和對照樣分別用試驗(yàn)真菌孢子懸液接種，試驗(yàn)用真菌菌株應(yīng)從附錄A的表A.1中選取。7.3干燥滅菌器：溫度能保持在160℃~180℃。7.7L型鉑接種鉤。7.8培養(yǎng)箱：溫度能保持在20℃~37℃,允差為±2℃。7.17試管振蕩器。7.18離心機(jī)：離心加速度約為2000×g。37.23光度計(jì)：測試波長為300nm～650nm,在8.4和第11章規(guī)定的分析條件下能測定濃度為7.25冰箱：溫度能保持在2℃~10℃。4純水250mL(最終定容至)8.4.4ATP熒光劑在8.4和第11章規(guī)定的試驗(yàn)條件下，ATP熒光劑應(yīng)能使光度計(jì)(7.23)檢測濃度為1×10-?mol/L~熒光素酶D-熒光素牛血清白蛋白緩沖液(見8.4.3)一次完全溶解，在使用前置于室溫中15min。制備后在3h內(nèi)使用。8.4.5ATP萃取劑ATP萃取劑應(yīng)具有從培養(yǎng)真菌中萃取細(xì)胞內(nèi)的ATP的能力，萃取率不低于80%。N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸45mg苯扎氯銨，10%水溶液0.2mLpH(使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH)12.0±0.5如果在萃取液中使用除上述成分的其他試劑應(yīng)在報(bào)告中記錄。8.4.6ATP消除劑當(dāng)在SDB(8.5.2)中加入其1/10體積的ATP消除劑時(shí)，應(yīng)在15min內(nèi)將培養(yǎng)基中的ATP濃度降低到10-11mol/L以下。制備后在8h內(nèi)使用。成分如下：三磷酸腺苷雙磷酸酶(EC:)4.6IU/mL腺苷酸脫氨酶(EC:或7)46IU/mL蔗糖37mg牛血清白蛋白20mg0.05mol/L2-嗎啉乙磺酸一水合物緩沖液10mL如果使用其他消除劑，應(yīng)在報(bào)告中記錄其成分。8.4.7生理鹽水溶液將8.5g氯化鈉加入盛有1000mL純水的燒瓶中。使其完全溶解并根據(jù)蒸汽壓力滅菌的需要分裝到試管中。8.4.8含陰離子表面活性劑的無菌水將50mg陰離子表面活性劑溶解到純水中，定容至1000mL,并根據(jù)高壓蒸汽滅菌的需要分裝到試管中。8.5培養(yǎng)基使用按8.5.2～8.5.5制備的培養(yǎng)基。經(jīng)驗(yàn)證后可用商業(yè)培養(yǎng)基代替。5對于制備后不立即使用的培養(yǎng)基，宜在5℃~10℃條件中儲(chǔ)存，保質(zhì)期1個(gè)月。滅菌后pH8.5.3馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)將10mL完全溶解并預(yù)熱后的PDA(8.5.3)倒入試管中。用棉塞封口并用蒸汽滅菌后pH1000mL(最終定容至) 將傳代培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基在25℃±2℃條件下的培養(yǎng)箱(7.8)中放置至少8d,并確認(rèn)在5℃~10℃條件下保存前已經(jīng)產(chǎn)生足夠的孢子。——每3個(gè)月傳代一次。傳代培養(yǎng)的真菌菌落傳代次數(shù)最多應(yīng)不超過5次。不要使用超過3個(gè)月6圖1斜面培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)示意圖9.2真菌的使用為制備第10章中規(guī)定的孢子懸液中的真菌，將9.1中保藏的真菌轉(zhuǎn)移到平板培養(yǎng)基上，在25℃±2℃條件下培養(yǎng)至少8d。當(dāng)培養(yǎng)后的真菌不立即使用時(shí)，將其放置在5℃~10℃條件下保存并在7d內(nèi)使用。10孢子懸液孢子懸液的制備和調(diào)節(jié)過程見圖2。圖2孢子懸液的調(diào)節(jié)步驟7——分5次將其分散到瓊脂平板中心的孢子中，緩慢清洗表面(步驟2)。——用短巴斯德吸管(7.13)或類似裝置吸取10.2中孢子懸液；-—吸吹100次或用試管振蕩器攪拌或用低超聲波清洗5min,以便孢子能充分分散；——過濾后，在25℃±2℃條件下以2000×g加速度離心分離5min,當(dāng)離心機(jī)(7.18)無控溫裝-—加入5mL含陰離子表面活性劑的無菌水(8.4.8);散(步驟5)。a)孢子數(shù)量及形態(tài)：確保孢子數(shù)量為1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL,且90%以上為無菌絲b)當(dāng)孢子數(shù)量較多時(shí)：用含陰離子表面活性劑的無菌水(8.4.8)稀釋懸液，使孢子數(shù)量降至1×節(jié)孢子數(shù)量至1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL,再次檢查孢子數(shù)量；d)對于12.1.3中的轉(zhuǎn)移法，孢子數(shù)量應(yīng)調(diào)節(jié)至1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL,該濃度的孢——用含5%SDB的陰離子表面活性劑溶液將孢子懸液濃度調(diào)至1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL8a)用純水稀釋8.4.2中的ATP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，以制備準(zhǔn)確濃度分別為1×10-?mol/L、1×10-7mol/L和1×10-?mol/L的3個(gè)稀釋度；h)將0.1mLATP萃——系數(shù)B通過式(1)在Y=0時(shí)，代入系數(shù)A并將空白樣2熒光強(qiáng)度的均值代入X計(jì)算9照樣和6個(gè)試樣。c)如果為地毯或具有類似結(jié)構(gòu)的樣品，剪取樣品上的起絨部分作為試b)將覆有鋁箔的螺口玻璃瓶(7.d))將瓶蓋和裝有試樣的螺口玻璃瓶(7.9)放入高壓滅菌鍋(7.4),于121℃(103kPa)滅菌立即按第13章規(guī)定測定試樣的熒光強(qiáng)度。等。樣品宜足夠大(至少0.5m2)以滿足重復(fù)性試驗(yàn)的需求。試樣宜取自同一批且避開布邊或起梗分別稱量并記錄每個(gè)試樣和對照樣的質(zhì)量(mA)。制備6個(gè)對照樣和6個(gè)試樣，其中3個(gè)用于轉(zhuǎn)移后立即使用，3個(gè)用于接種培養(yǎng)后。將每個(gè)試樣放mp=mc一(mA+mg)按轉(zhuǎn)移后，在25℃±2℃的濕度箱中培養(yǎng)42h±2h。熒光強(qiáng)度測定的準(zhǔn)備過程如下(見圖3):5——步驟10;圖3熒光強(qiáng)度測定準(zhǔn)備過程a)將0.1mLATP消除劑加入12.2.1制備的試樣中，并加入4.7mL生理鹽水(步驟6);b)蓋緊瓶蓋并混勻。手工搖晃30次或使用試管振蕩器振蕩5次，每次5s。在室溫中靜置20min(步驟7);c)加入5.0mLATP萃取劑(步驟8);d)蓋緊瓶蓋并混勻。手工搖晃30次或使用試管振蕩器振蕩5次，每次5s。在室溫中靜置10min(步驟9);e)搖勻，將0.2mLd)中制備的溶液分別轉(zhuǎn)移到兩個(gè)塑料試管中(步驟10);f)將0.1mLATP熒光劑分別加入到e)中制備的樣液中，用試管振蕩器攪拌5s,隨后立即用光度計(jì)(7.23)測定熒光強(qiáng)度(步驟11);g)測定兩個(gè)試樣的熒光強(qiáng)度。具體過程如下：b)用吸管吸吹約30次使其混勻，傾斜培養(yǎng)皿以便于移液，在室溫中靜置20min;c)加入5.0mLATP萃取劑；d)用吸管吸吹約30次使其混勻，傾斜培養(yǎng)皿以便于移液，在室溫中靜置10min;注2:若試樣漂浮在真菌懸液上，用玻璃棒按壓使試樣充分沉浸。e)通過吸吹的方式混勻，吸取0.2mLd)溶液分別轉(zhuǎn)移到兩個(gè)塑料試管中；g)測定兩個(gè)試樣的熒光強(qiáng)度。14.1試驗(yàn)有效性的判定a)根據(jù)式(2)計(jì)算對照樣的增長值F;當(dāng)所用對照樣的真菌增長值小于1.5時(shí)，宜使用100%棉織物進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。Aa——抑菌值；lgC?——3個(gè)對照樣接種后立即測得的ATP量均值的對數(shù)；lgC,——3個(gè)對照樣接種并培養(yǎng)42h±2h后的ATP量均值的對數(shù)；lgT?——3個(gè)試樣接種后立即測得的ATP量均值的對數(shù)；lgT,——3個(gè)試樣樣接種并培養(yǎng)42h±2h后的ATP量均值的對數(shù)。a)本部分的編號；h)式(2)中的增長值F;A.1總則表A.1真菌菌株由世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)(WFCC)成員提供。表A.1試驗(yàn)用真菌菌株菌株類型拉丁名菌株編號國內(nèi)保藏號/getinfo.htm?sid=WDCM/getinfo.htm?sid=WDCM芽枝狀枝孢菌/getinfo.htm?sid=WDCM須癬毛癬菌/getinfo.htm?注2:參考WDCM及其網(wǎng)址：http://refs.wdcm.erg/search.htm.(WDCM代表世注3:CICC為中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的英文簡稱，其網(wǎng)址為：.(資料性附錄)抗真菌效果表B.1給出了抗真菌效果的評價(jià)示例。表B.1抗真菌效果示例抗真菌效果說明中等抗真菌[1]GB/T8629紡織品試驗(yàn)用家庭洗滌和干燥程序[3]ISO846:1997Plastics—Evaluationoftheactionof[4]ISO3801:1977Textiles—Wovenfabrics—Determinationofmass[5]ISO7218:2007Micrguidanceformicrobio[6]ISO9022-11:1994Opticsandopticalinstru[7]ISO11721-1:2001Textiles—Determinationofresistanceofcellulose-containingtextilestomicroorganisms—Soilburialtest—Part1:Assess[8]ISO11721-2:2003Textiles—Determinationofresistanceofcellulose-containingtextilestomicroorganisms—Soilburialtest—Part2:Identificationoflong-termresistanceofaro[9]ISO16869:2008Plastics—Assessmentofd[12]AATCCTestMethod174:2007Ant[13]AS1157.2—1999Australianstandard—Methodsoftestingmateriafungalgrowth—Part2:[14]AS1157.3—1999Australianstandard—Methodsoftestingmafungalgrowth—Part3:Resi[15]AS1157.4—1999Australianstandard—Methodsoftestingmafungalgrowth—Part4:Resistanceoftextilestofungalgrowth.Section2—Resistance[16]ASTMDesignationG21-96:2002Standardpracticefo[18]BS6085:1992Methodsfo[19