血清蛋白電泳的臨床應(yīng)用

王連升法國(guó)賽比亞公司上海代表處蛋白電泳的應(yīng)用與臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解讀主要內(nèi)容血清蛋白電泳免疫分型電泳電泳技術(shù)的發(fā)展歷程1809年發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年建立了界面電泳技術(shù)1948年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)1950年后區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟1980年

毛細(xì)管電泳技術(shù)2001年

sebia首次推出全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀19世紀(jì)21世紀(jì)sebia蛋白電泳技術(shù)的變遷濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳—臨床聚丙烯酰胺凝膠電泳—科研毛細(xì)管電泳電泳技術(shù)的革命4蛋白電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用描繪出蛋白組分的全貌各種體液血清、血漿尿液腦脊液胸腹水全血臨床疾病肝病腎病腫瘤心腦血管疾病、代謝病、中樞神經(jīng)病變、血紅蛋白分子病……5CapillarysElectrophoresisPrinciple正極負(fù)極檢測(cè)器氘光源200nm約1萬(wàn)伏高壓毛細(xì)管(內(nèi)徑25微米）樣本進(jìn)入-+溫控裝置電泳方向毛細(xì)管電泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++毛細(xì)管的內(nèi)表面是帶負(fù)電荷當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)部充滿緩沖液被活化后，在毛細(xì)管內(nèi)表面的負(fù)電荷層上形成了一正電荷層毛細(xì)管電泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽(yáng)極陰極+電滲流作用方向內(nèi)部充滿電泳緩沖液的毛細(xì)管帶電后，

-毛細(xì)管內(nèi)的正電荷層整體向陰極移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱之為電滲流++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽(yáng)極-陰極

+電滲流作用方向電場(chǎng)力作用方向在毛細(xì)管內(nèi)部的正電荷粒子同時(shí)到受電滲流和電場(chǎng)力的作用，兩種作用力方向一致→快速向負(fù)極端遷移+--++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽(yáng)極-陰極

+電滲流作用方向電場(chǎng)力作用方向（負(fù)電荷）在毛細(xì)管內(nèi)部的負(fù)電荷粒子同時(shí)到受電滲流和電場(chǎng)力的作用，兩種作用力方向相反；電滲流>>>電場(chǎng)力→向負(fù)極端遷移---------------++++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽(yáng)極-陰極+電滲流作用方向負(fù)電荷電場(chǎng)力作用方向樣品進(jìn)入到毛細(xì)管之中的運(yùn)動(dòng)正電荷電場(chǎng)力作用方向無(wú)論是帶正電、帶負(fù)電或不帶電的粒子，都在電滲流的作用下，向陰極遷移，帶正電的，受到同方向的電場(chǎng)力作用，遷移最快，不帶電的遷移速度次之，帶負(fù)電的遷移速度最慢，因?yàn)樗艿脚c電滲流反方向的電場(chǎng)力作用。優(yōu)點(diǎn)性能特征減少手工操作全自動(dòng),人機(jī)分離操作操作簡(jiǎn)單,可根據(jù)用戶需求調(diào)整操作模式提供多種檢測(cè)項(xiàng)目供溯源性,減少誤差原管條碼識(shí)別增加用戶滿意度高通量?jī)?yōu)化的工作流程持續(xù)進(jìn)樣、雙向通訊、快捷的數(shù)據(jù)讀取優(yōu)化結(jié)果用200nm氘光直接檢測(cè)蛋白，無(wú)需染色簡(jiǎn)化結(jié)果分析高分辨率、高清晰度M蛋白檢測(cè)的高靈敏度毛細(xì)管電泳技術(shù)的優(yōu)勢(shì)毛細(xì)管血清蛋白電泳圖譜白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補(bǔ)體α-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結(jié)合蛋白臨床疾病的識(shí)別炎癥肝病腎病……“M”蛋白的篩查及定量對(duì)疑似骨髓瘤患者檢測(cè)單克隆免疫球蛋白早期檢出無(wú)癥狀的骨髓瘤患者對(duì)骨髓瘤疾病進(jìn)行隨訪及療效觀察血清蛋白電泳的臨床應(yīng)用14CapillarysElectrophoresis

毛細(xì)管血清蛋白電泳15正常血清蛋白電泳圖譜白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補(bǔ)體α-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結(jié)合蛋白電泳圖譜---急性炎癥免疫球蛋白C3補(bǔ)體α-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結(jié)合蛋白急性期反應(yīng)蛋白17電泳圖譜---慢性炎癥電泳圖譜---肝臟肝臟是血清蛋白合成的主要器官白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補(bǔ)體α-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結(jié)合蛋白電泳圖譜---肝病20beta2區(qū)：多克隆IgA↑gamma區(qū)：多克隆IgG↑電泳圖譜---肝硬化Beta-Gamma橋21BetaGamma橋電泳圖譜---腎病23電泳圖譜---腎病腎小球?yàn)V過(guò)屏障損傷→白蛋白流失低白蛋白高α-2賈曉輝,馬彧旻.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2009,30(16):2015Alpha-2巨球蛋白24Alba1a2b1b2g總蛋白濃度降低(低于60g/l)α-2巨球蛋白脂蛋白低白蛋白電泳圖譜---腎病綜合征三高一低：高脂蛋白血脂25電泳圖譜---腎病綜合征性別：男

年齡：24 科室：腎臟內(nèi)科

診斷：腎病綜合征原因:免疫缺陷病、免疫抑制劑、游離輕鏈病電泳圖譜---低免疫球蛋白27電泳圖譜---高免疫球蛋白原因:慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽腫血清蛋白電泳圖譜常見(jiàn)類型圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑急性炎癥/急性時(shí)相反應(yīng)N↓N↑↑/N慢性炎癥型

↓↑↑↑彌漫性肝損害↓N↓↓↑↓↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋腎病↓↓↓↓↑↑↑不定彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑M蛋白血癥型

在α2-γ區(qū)出現(xiàn)異常峰高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑妊娠（高α型）↓N↓↑↑N蛋白質(zhì)缺陷個(gè)別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)免疫球蛋白是機(jī)體的正常生理成分多克隆分類重鏈：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM輕鏈：κ、λ10種類型10種免疫球蛋白IgDLambdaIgELambdaIgEKappaIgDKappaIgALambdaIgGKappaIgGLambdaIgMLambdaIgAKappaIgMKappaB淋巴細(xì)胞

轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞3漿細(xì)胞

合成抗體,即免疫球蛋白.4漿細(xì)胞免疫球蛋白造血干細(xì)胞分化為3類細(xì)胞:紅細(xì)胞

粒細(xì)胞巨核細(xì)胞免疫球蛋白

在免疫系統(tǒng)中被用來(lái)識(shí)別和消滅如細(xì)菌或病毒等外源物52骨髓

(顱骨,盆骨,肋骨,胸骨)1免疫球蛋白的合成過(guò)程正常漿細(xì)胞多克隆免疫球蛋白P1P2P3P4P5正常電泳結(jié)果免疫球蛋白電泳結(jié)果正常

所有漿淋巴細(xì)胞同步合成免疫球蛋白=多克隆免疫球蛋白33漿細(xì)胞惡性增殖多克隆免疫球蛋白單克隆免疫球蛋白異常電泳結(jié)果M蛋白免疫球蛋白電泳結(jié)果骨髓瘤34IgG

LambdaIgG

KappaIgM

KappaIgM

LambdaIgA

LambdaIgA

Kappa200nm35多克隆Igs單克隆Ig---“M”蛋白正常異常什么是M蛋白單克隆漿細(xì)胞惡性增殖產(chǎn)生的均一蛋白“M”MultipleMyeloma 多發(fā)性骨髓瘤Macroglobulinemia 巨球蛋白血癥Malignantlymphoma 惡性淋巴瘤MonoclonalGammapathies 單克隆丙種球蛋白病電泳曲線：?jiǎn)沃攴鍚盒詽{細(xì)胞增殖僅次于白血?。ㄑ耗[瘤）發(fā)病率占所有腫瘤的1~2%，血液腫瘤的10%美國(guó)：白人4/10萬(wàn)；黑人10/10萬(wàn)歐洲：2.5~3.0/10萬(wàn)亞洲：1~2/10萬(wàn)中國(guó)：無(wú)確切數(shù)據(jù)發(fā)病年齡老年病，隨年齡↑發(fā)病率↑歐美：高峰65~70歲，中位年齡68歲中國(guó)：高峰55~65歲，中位年齡57歲男女比例男：女=2~2.5:1多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥CalciumRenalAnemiaBoneCRAB39骨髓瘤相關(guān)器官/組織損傷（ROTI）CRAB血清鈣升高>2.8mmol/L或升高0.25mmol/L以上腎功能不全肌酐>176.8mmol/L貧血<100g/L或低于正常下限20g/L骨損傷溶骨性損害、骨質(zhì)疏松、病理性骨折其他高粘血癥、反復(fù)細(xì)菌感染（≥2次/年）、淀粉樣變……多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥臨床特征缺乏特異性臨床表現(xiàn)骨痛、病理性骨折：最常見(jiàn)貧血高鈣血癥免疫功能失調(diào)，感染腎功能受損、腎衰心、腦臟器微循環(huán)障礙，心腦血管病變多學(xué)科

骨科、感染科、呼吸科、內(nèi)分泌腎內(nèi)科、泌尿科、心內(nèi)科、神經(jīng)科、消化科多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥41多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告肱骨顱骨盆骨42臨床特征缺乏特異性臨床表現(xiàn)骨痛、病理性骨折：最常見(jiàn)貧血高鈣血癥免疫功能失調(diào)，感染腎功能受損、腎衰心、腦臟器微循環(huán)障礙，心腦血管病變多學(xué)科

骨科、感染科、呼吸科、內(nèi)分泌腎內(nèi)科、泌尿科、心內(nèi)科、神經(jīng)科、消化科多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥我院實(shí)例-1患者信息性別：女年齡：69科室：血液科診斷：多發(fā)性骨髓瘤44我院實(shí)例-2患者信息性別：女年齡：69科室：消化內(nèi)科診斷：慢性胃炎45我院實(shí)例-3患者信息性別：女年齡：73科室：中醫(yī)科診斷：貧血？46

就診晚2/3確診時(shí)已達(dá)中晚期

誤診率高1/3非血液科首診>60%多發(fā)性骨髓瘤診治現(xiàn)狀晚骨折預(yù)后差增加負(fù)擔(dān)感染發(fā)生率高腎臟病變不可逆死亡率↑↑47多發(fā)性骨髓瘤誤診分析481557例多發(fā)性骨髓瘤誤診分析呂鴻雁,張金巧.河北醫(yī)藥.2009,31(9):1052-54誤診率：65.17%重視實(shí)驗(yàn)診斷39.8%15.6%19.8%7.6%15.6%國(guó)際骨髓瘤基金會(huì)2010推薦的M蛋白早期篩查流程50

多發(fā)性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性漿細(xì)胞

/漿細(xì)胞瘤ROTI有癥狀MM√≥10%√無(wú)癥狀MM

(冒煙型,SMM)√≥10%意義未明M蛋病

MGUS√<10%早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療腫瘤

多發(fā)性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性漿細(xì)胞

/漿細(xì)胞瘤ROTI有癥狀MM√≥10%√無(wú)癥狀MM

(冒煙型,SMM)√≥10%意義未明M蛋病

MGUS√<10%早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療腫瘤M蛋白篩查是關(guān)鍵52正常血清單克隆Ig單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)血清蛋白電泳是檢測(cè)M蛋白的唯一方法若在區(qū)出現(xiàn)異常的峰，且高寬比大于2:1,可以初步判定為M蛋白峰53

單克隆M蛋白的電泳位置常見(jiàn)于gamma球蛋白區(qū)亦可出現(xiàn)在其他區(qū)Beta2beta1

alpha2單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)54白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1徐玲令,楊再興,趙文靜,屠小卿,高春芳,孔憲濤.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào).2004,25(12):1343-45單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)單克隆M蛋白的電泳位置M蛋白陽(yáng)性患者2007例的體液免疫特征分析

55單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)gamma區(qū)：峰56單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)微量M蛋白gamma區(qū)：曲線異常單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)Beta2區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)Beta1區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)Beta1與beta2融合單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)alpha2區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測(cè)3個(gè)單克隆Mode‘’fromthetoptothebottom

’’Mode‘’fromvalleytovalley’’M蛋白定量的兩種方法對(duì)患者的M蛋白隨訪過(guò)程只能使用其中一種方法，并堅(jiān)持使用難以辨別的圖譜血紅蛋白-觸珠蛋白復(fù)合物游離HbAlba1a2b1b2g溶血標(biāo)本電泳圖譜特征Alba1a2b1b2g纖維蛋白原beta2區(qū)抗凝血蛋白電泳圖譜特征Alba1a2b1b2gAlba1a2b1b2g可能原因:基因突變藥物：beta內(nèi)酰胺類胰腺炎

白蛋白區(qū)雙峰白蛋白區(qū)干擾Alba1a2b1b2g可能原因:

脂蛋白升高膽紅素升高造影劑8/3/202468CRPAlba1a2b1b2g

急性炎癥期CRP>200mg/LGamma區(qū)：多克隆Ig，異常峰C反應(yīng)蛋白---CRPAlba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）缺乏癥Alba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）雜合子表型表型I-II表型I-I表型II-IIα2區(qū)：觸珠蛋白的不同表型寡克隆免疫球蛋白異常的電泳圖譜常見(jiàn)于

:自身免疫病類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，干燥綜合癥，紅斑狼瘡等)病毒、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)引起的感染H.I.V.病毒性肝炎巨細(xì)胞病毒感染與移植相關(guān)的自身免疫反應(yīng)免疫抑制治療寡克隆免疫球蛋白M蛋白可能類型完整的免疫球蛋白分子重鏈輕鏈半分子IgM單體（7S-IgM）……

型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24上海新華醫(yī)院,2005年出現(xiàn)異常血清蛋白結(jié)果需要免疫分型電泳進(jìn)一步確認(rèn)646例M蛋白類型分類免疫分型:檢測(cè)請(qǐng)求

在血清蛋白電泳的程序下:“ITRequest”77稀釋液(380μL)LKMAGELP抗血清/ELPsolution(20μL)免疫分型:抗血清稀釋杯+上機(jī)、分析KLIgGIgAIgMELPIgGXIgAXIgMXIgkIglELPGAMklDILUENT抗血清參考稀釋液免疫分型:全自動(dòng)化血清稀釋樣本與5種抗血清反應(yīng)(IgG,IgA,IgM,κ,λ

)在液態(tài)環(huán)境中,抗原抗體反應(yīng)非常迅速無(wú)需專門孵育未加入抗血清的標(biāo)本,作為參照條帶(ELP)毛細(xì)管電泳分析稀釋液(380μL)LKMAGELP抗血清/ELP液(20μL)對(duì)照曲線與反應(yīng)曲線自動(dòng)疊加單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的鑒定免疫減法與相應(yīng)抗血清發(fā)生反應(yīng)后,M蛋白峰消失免疫分型:結(jié)果分析IgG

LambdaIgG

KappaIgM

Kappa