農(nóng)業(yè)部2122號公告-1-2014 轉(zhuǎn)基因動物及其產(chǎn)品成分檢測 豬內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法_第1頁
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農(nóng)業(yè)部2122號公告—1—2014轉(zhuǎn)基因動物及其產(chǎn)品成分檢測豬內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法I農(nóng)業(yè)部2122號公告—1—20141農(nóng)業(yè)部2122號公告—1—2014本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬(Susscrofa)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因Linc_CAB的定性PCR檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因動物及其產(chǎn)品中豬成分的定性PCRGB/T6682分析實驗室用水規(guī)格豬Susscrofa哺乳綱(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、豬科(Suidee)、豬屬(Sus)、豬種(Susscrof鈣結(jié)合蛋白基因旁序列(calciumbindingprotein39linking-sequence)。根據(jù)豬Linc_CAB基因序列設(shè)計特異性引物，對試樣進(jìn)行PCR擴(kuò)增。依據(jù)是否擴(kuò)增獲得預(yù)期的5.310mol/L氫氧化鈉溶液：在160mL水中加入80.0g氫氧化鈉(NaOH),溶解后再加水定容至5.4500mmol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液(pH8.0):稱取18.6g乙二銨四乙酸二鈉(EDTA-Na?),加5.51mol/L三羥甲基氨基甲烷一鹽酸溶液(pH8.0):稱取121.1g三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶解于800mL水中，用鹽酸(HCl)調(diào)pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)條件25.10Tris-飽和酚5.11氯仿/異戊醇(24:1):將氯仿和異戊醇按照24:1的比例配制。體積混合Linc_CAB-F:5'-GCCCATCATAAAAGLinc_CAB-R:5'-CAAGGCCAGGACAT5.20石蠟油37.3.1將消化后的血樣裂解液或組織裂解液加入等體積的Tris-飽和酚(5.10),緩慢顛倒混勻107.3.2加入0.5倍體積的Tris-飽和酚和0.5倍體積的氯仿/異戊醇(24:1),緩慢顛倒混勻10min,終濃度水10XPCR緩沖液4終濃度dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積7.4.2

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