農(nóng)業(yè)部2122號公告-15-2014 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測 抗蟲和耐除草劑玉米Bt176及其衍生品種定性PCR方法_第1頁
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農(nóng)業(yè)部2122號公告—15—2014轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抗蟲和耐除草劑玉米Bt176及其衍生品種定性PCR方法I農(nóng)業(yè)部2122號公告—15—2014本標準代替農(nóng)業(yè)部869號公告—8—2007《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抗蟲和耐除草劑玉米Bt176及其衍生品種定性PCR方法》。本標準與農(nóng)業(yè)部869號公告—8—2007相比，除編輯性修改外，——修改并增加了規(guī)范性引用文件(見2,2007年版的2);——修改了PCR檢測反應(yīng)體系(見表1,2007年版的表1);——修改了PCR檢測實驗操作的技術(shù)細節(jié)(見7,2007年版的7);——修改了樣品檢測結(jié)果分析和表述(見8.2,2007年版的8.2);—增加了檢出限(見9)——增加了資料性附錄(見附錄A)。1農(nóng)業(yè)部1861號公告-3—2012轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分2zSSIIb-1F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-1R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGBt176-F1:5'-TTCAAGCACGGGAABt176-R1:5'-GAGCGAGAACACGAGAA37.5.1.2.1每個試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)Taq酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達到25.0μL。7.5.2對照PCR反應(yīng)米基因組DNA,或采用Bt176轉(zhuǎn)化體特異性序列與非轉(zhuǎn)基因玉米基因組相比的拷貝數(shù)分數(shù)為0.1%~農(nóng)業(yè)部2122號公告—15—20148的規(guī)定對PCR擴增結(jié)果進行分析。如需通過序列分析確認PCR擴增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。將回收的PCR產(chǎn)物克隆測序，與轉(zhuǎn)基因抗蟲和耐除草劑玉米Bt176轉(zhuǎn)化體特異性序列(參見附錄陽性對照PCR反應(yīng)中，玉米內(nèi)標準基因和Bt176轉(zhuǎn)化體特異性序列得到擴增，且擴8.2.1玉米內(nèi)標準基因和Bt176轉(zhuǎn)化體特異性序列均得到擴增，且擴增片段大小與預(yù)期片段大小一551CCTGCCGGTACTGCCCCGTCCGGTCCTGCCC201AGTCGATA

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