體外診斷檢驗(yàn)系統(tǒng) 核酸擴(kuò)增法檢測(cè)新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）的要求和建議 征求意見稿

1GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022體外診斷檢驗(yàn)系統(tǒng)核酸擴(kuò)增法檢測(cè)新型冠狀病毒的要求和建議本文件對(duì)核酸擴(kuò)增檢測(cè)SARS-CoV-2分析測(cè)試的設(shè)計(jì)、開發(fā)、驗(yàn)證、確認(rèn)和實(shí)施提出要求和建議。本文件涉及人體標(biāo)本的檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)和檢驗(yàn)后過程步驟。本文件適用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室。本文件也供體外診斷開發(fā)人員、制造商以及支持SARS-CoV-2研究和診斷的機(jī)構(gòu)和組織使用。本文件不適用于環(huán)境樣品。本文件沒有規(guī)范性引用文件。下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。ISO和IEC維護(hù)的用于標(biāo)準(zhǔn)化的術(shù)語(yǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)如下：—ISO在線瀏覽平臺(tái)：https://www.ISO.org/obp—IEC電子百科:/3.1嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2/新型冠狀病毒severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2SARS-CoV-2引起新型冠狀病毒感染疾?。–OVID-19）的病毒。3.2標(biāo)本specimen原始樣品primarysample為檢驗(yàn)、研究或分析一種或多種量或特性而取出的認(rèn)為可代表全部的一獨(dú)立部分的體液、呼出氣、毛發(fā)或組織等。注1：全球協(xié)調(diào)工作組（GHTF）在其協(xié)調(diào)指導(dǎo)文件中用“specimen”表示醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)[來源：GB/T22576.1—2018[1]，有修改]3.3取自原始樣品（3.2）一部分或多部分。示例：取自一較大體積血清的一定體積血清。[來源：GB/T22576.1—2018[1]]。3.4逆轉(zhuǎn)錄reversetranscription2GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022在適當(dāng)?shù)臈l件下，利用與一個(gè)或多個(gè)寡核苷酸引物相關(guān)聯(lián)的逆轉(zhuǎn)錄酶的酶活性，從RNA（3.20）模板（3.22）合成互補(bǔ)DNA[cDNA（3.6）]的過程。[來源：ISO16577:2016,3.180[8]，有修改]3.5脫氧核糖核酸deoxyribonucleicacidDNA以雙鏈（dsDNA）或單鏈（ssDNA）形式存在的脫氧核糖核苷酸聚合物。[來源：ISO22174:2005,3.1.2[9]]3.6互補(bǔ)DNAcomplementaryDNAcDNA[來源：GB/T42077—2022[2]]3.7分析特異性analyticalspecificity測(cè)量系統(tǒng)的能力，用指定的測(cè)量程序，對(duì)一個(gè)或多個(gè)被測(cè)量給出的測(cè)量結(jié)果互不依賴也不依賴于接受測(cè)量的系統(tǒng)中的任何其它量。[來源：GB/T29791.1—2013[3]]3.8檢出限limitofdetectionLOD由給定測(cè)量程序得到的測(cè)得量值，對(duì)于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為0.05時(shí)，聲稱不存在該成分的誤判概率為0.05。[來源：ISO/IECGUIDE99:2007,2.18[10]，有修改]3.9驗(yàn)證verification為給定項(xiàng)目滿足規(guī)定要求提供客觀證據(jù)。[來源：ISO/IECGUIDE99:2007,2.44[10]，有修改]3.10確認(rèn)validation通過提供客觀證據(jù)，對(duì)規(guī)定預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。[來源：ISO9000:2015,3.8.13[11]，有修改]3.11通過DNA擴(kuò)增技術(shù)產(chǎn)生的特定DNA（3.5）片段，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR3.12）。[來源：ISO13495:2013,3.3.1[12]]3.12聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreactionPCR體外擴(kuò)增DNA（3.5）或RNA（3.20）的酶促反應(yīng)過程。[來源：ISO22174:2005,3.4.1[9]，有修改]3GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:20223.13參考物質(zhì)referencematerial指定特性足夠均勻和穩(wěn)定，已被證明適合在測(cè)量過程中或名義特性檢驗(yàn)中預(yù)期應(yīng)用的物質(zhì)。[來源：ISO/IECGUIDE99:2007,5.13[10]，有修改]3.14假病毒pseudo-virus逆轉(zhuǎn)錄病毒病毒或病毒樣顆粒，可以整合另一種病毒的包膜糖蛋白，形成具有外源病毒包膜的病毒，基因組保留了逆轉(zhuǎn)錄病毒本身的特征。3.15數(shù)字PCRdigitalPCRdPCR將核酸模板（3.22）分布在多個(gè)名義上等體積的反應(yīng)單元，每個(gè)反應(yīng)單元中包含或不包含模板，對(duì)靶序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)檢測(cè)特定的PCR產(chǎn)物，從而給出目標(biāo)模板陽(yáng)性和陰性信號(hào)反應(yīng)單元計(jì)數(shù)的過程。注2：陽(yáng)性分割/反應(yīng)單元分配和陰性分割/反應(yīng)單元分配的計(jì)[來源：GB/T42077—2022[2]]3.16實(shí)時(shí)定量定量PCRquantitativereal-timePCRqPCR將特定的DNA或RNA片段體外擴(kuò)增與擴(kuò)增過程中特定PCR產(chǎn)物檢測(cè)和定量相結(jié)合的酶反應(yīng)過程。反向計(jì)算來推斷PCR開始前存在于樣品中的特定DNA[來源：GB/T42077—2022[2]，有修改]3.17定量循環(huán)quantificationcycleCq實(shí)時(shí)定量定量PCR（qPCR3.16）的循環(huán)數(shù)，在該循環(huán)中，反應(yīng)產(chǎn)生的熒光超越特定閾值水平，在該閾值水平下信號(hào)能與背景水平區(qū)分開。[來源：GB/T42077—2022[2]，有修改]3.18臨床特異性clinicalspecificity診斷特異性diagnosticspecificity體外診斷檢驗(yàn)程序可以識(shí)別特定疾病或狀態(tài)相關(guān)的目標(biāo)標(biāo)志物不存在的能力。4GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022[來源：GB/T29791.1—2013[3]]3.19臨床靈敏度clinicalsensitivity診斷靈敏度diagnosticsensitivity體外診斷檢驗(yàn)程序可以識(shí)別與特定疾病或狀態(tài)相關(guān)的目標(biāo)標(biāo)志物存在的能力。[來源：GB/T29791.1—2013[3]]3.20核糖核酸ribonucleicacidRNA以雙鏈或單鏈的形式存在的核糖核苷酸聚合物。[來源：ISO22174:2005,3.1.3[9]]3.21校準(zhǔn)物calibrator用于校準(zhǔn)的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)。[來源：GB/T42077—2022[2]，有修改]。3.22模板templateDNA（3.5）或RNA（3.21）鏈，規(guī)定新合成DNA或RNA鏈的堿基序列，該兩條鏈互補(bǔ)。[來源：ISO16577:2016，3.206[8]]3.23唾液saliva全唾液wholesaliva口腔生物液，主要由三大唾液腺（腮腺、下頜下腺和舌下腺）和口腔中的唾液腺分泌物組成。[來源：ISO4307:2021,3.15[13]]3.24逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)reversetranscriptionpolymerasechainreaction；RT-PCR結(jié)合RT（3.4）和PCR（3.12）的過程，通過擴(kuò)增cDNA（的途徑。3.25體外診斷醫(yī)療器械invitrodiagnosticmedicaldeviceIVD醫(yī)療器械IVDmedicaldevice5GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022單獨(dú)或組合使用，被制造商預(yù)期用于人體標(biāo)本體外檢驗(yàn)的器械，檢驗(yàn)單純或主要以提供診斷、監(jiān)測(cè)或相容性信息為目的，器械包括試劑、校準(zhǔn)物、控制物質(zhì)、樣品容器、軟件和相關(guān)的儀器或裝置或其它物品。[來源：GB/T21415—2008[4]]3.26檢驗(yàn)前過程pre-examinationprocesses包括患者準(zhǔn)備和識(shí)別、原始標(biāo)本采集、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傳遞以及分離RNA的過程。3.27定量限limitofquantificationLOQ在方法規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，能夠以合理的統(tǒng)計(jì)確定性一致地測(cè)量的在規(guī)定基質(zhì)（3.31）中的相關(guān)分析物的最低濃度或含量。[來源：ISO16577:2016,3.91[8]]3.28陽(yáng)性PCR對(duì)照positivePCRcontrol特征明確的陽(yáng)性樣品（3.3）材料的可靠來源，含有用于PCR（3.12）的完整靶核酸序列。[來源：ISO16577:2016,3.150[8]，有修改—?jiǎng)h除注]3.29內(nèi)部抑制性對(duì)照internalinhibitioncontrol并通過添加DNA（3.5）或引物，在目標(biāo)片段擴(kuò)增反應(yīng)中獲得的作為內(nèi)部控制的材料。3.30實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)laboratorydevelopedtestLDT在一個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部開發(fā)（或變更）和使用，以對(duì)樣品（3.3）進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果預(yù)期用于輔助臨床診斷或做出相關(guān)臨床管理決策的試驗(yàn)。3.31基質(zhì)matrix一個(gè)物質(zhì)系統(tǒng)中除分析物之外的所有成分[來源：GB/T19702—2021[6]]3.32基質(zhì)效應(yīng)matrixeffect獨(dú)立于分析物存在的對(duì)測(cè)量和測(cè)得的量值產(chǎn)生影響的樣品（3.3）特性。[來源：GB/T19703—2020[7]，有修改]3.33無模板對(duì)照notemplatecontrolNTC6GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022包含除提取檢測(cè)樣品（3.3）模板（3.22）核酸以外所有試劑的對(duì)照反應(yīng)。[來源：GB/T42077—2022[2]]3.34環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增loopmediatedisothermalamplificationLAMP利用兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)特設(shè)計(jì)的引物組和具有高鏈置換活性的聚合酶實(shí)現(xiàn)等溫DNA（3.5）擴(kuò)增的策略。[來源：ISO16577:2016,3.94[8]]4.1.1通用要求采用核酸擴(kuò)增測(cè)試進(jìn)行SARS-CoV-2分子檢測(cè)的過程通常包括檢驗(yàn)前和檢驗(yàn)步驟。檢驗(yàn)前步驟包括臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、樣品裂解以及核酸提取和富集。檢驗(yàn)步驟包括逆轉(zhuǎn)錄（cDNA合成）和適宜的擴(kuò)增方法。此外，還包括廢棄物管理和測(cè)試結(jié)果報(bào)告等檢驗(yàn)后處理步驟?；诤怂釘U(kuò)增的檢測(cè)過程，其質(zhì)量屬性包括但不限于：適宜提取程序的性能評(píng)估、滿足最低測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試試劑評(píng)估、全面的分析特異性評(píng)估、檢出限（LimitofDetection，LOD）評(píng)估以及試劑穩(wěn)定性評(píng)估。評(píng)價(jià)上述質(zhì)量屬性的技術(shù)流程如圖1所示，涵蓋了全過程評(píng)估及關(guān)鍵分析性能評(píng)估。7GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022圖1基于核酸擴(kuò)增測(cè)試的SARS-CoV-2檢測(cè)方法質(zhì)量評(píng)價(jià)流程4.1.2檢驗(yàn)前針對(duì)SARS-CoV-2的檢測(cè)，在檢驗(yàn)前工作過程中，宜考慮以下通用注意事項(xiàng)：a)宜使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備（PersonalProtectiveEquipment，PPE）。b)標(biāo)本類型的選擇：鑒于SARS-CoV-2主要感染呼吸系統(tǒng)，標(biāo)本類型的選擇宜參考與SARS-CoV-2相關(guān)暴露或感染的特征來確定。c)標(biāo)本采集：根據(jù)選擇的標(biāo)本類型，宜按照標(biāo)準(zhǔn)化采樣要求采集臨床標(biāo)本。d)標(biāo)本包裝：標(biāo)本包裝宜考慮適當(dāng)?shù)纳锇踩胧?。e)標(biāo)本運(yùn)輸與儲(chǔ)存：在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過程中，宜考慮對(duì)病毒核酸降解的影響。f)SARS-CoV-2的滅活：在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)試前，所有標(biāo)本的初步處理（滅活前）宜在驗(yàn)證過的生物安全柜（BiosafetyCabinet，BSC）或一級(jí)防護(hù)裝置中進(jìn)行。若初步處理步驟涉及對(duì)原始標(biāo)本的操作（例如，用滅活試劑稀釋宜將這些步驟納入驗(yàn)證和確認(rèn)。8GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:20224.1.3檢驗(yàn)概述通用要求在進(jìn)行SARS-CoV-2核酸的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試時(shí)，宜考慮以下通用注意事項(xiàng)：a)所有檢驗(yàn)宜使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備。b)所有活動(dòng)宜使用獨(dú)立設(shè)備、一次性用品或兩者兼用，以避免交叉污染。c)樣品提取、反應(yīng)試劑配制和擴(kuò)增子處理宜在獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室房間內(nèi)進(jìn)行。使用商業(yè)化可獲得的檢測(cè)試劑，閉管方法和自動(dòng)化儀器，可在一定程度上降低對(duì)獨(dú)立房間數(shù)量的要求。全自動(dòng)方法只需要一個(gè)房間或?qū)嶒?yàn)室專用區(qū)域僅使用基于商業(yè)化可獲得的檢測(cè)試劑盒。閉管方法是在一個(gè)試管中進(jìn)行擴(kuò)增和分析的方法，無需轉(zhuǎn)移PCR產(chǎn)物作進(jìn)一步分析。d)除非用于擴(kuò)增后的步驟，否則宜盡量避免打開管蓋。e)為防止交叉污染，建議避免在不同工作區(qū)域間移動(dòng)儀器或共用設(shè)備。f)對(duì)于采用傳統(tǒng)核酸擴(kuò)增技術(shù)的檢測(cè)方法，在進(jìn)行測(cè)試時(shí)宜嚴(yán)格遵守核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)要求。g)可在反應(yīng)體系中加入脫氧尿苷三磷酸（DeoxyuridineTriphosphate，dUTP）和尿嘧啶-DNA糖基化酶（Uracil-DNAGlycosylase，UDG以消除擴(kuò)增子污染。h)在樣品測(cè)試期間，宜考慮廢棄物的臨時(shí)儲(chǔ)存和處置。i)如需保存標(biāo)本以備后續(xù)使用（例如，保存有價(jià)值的生物材料等可能考慮建立生物標(biāo)本庫(kù)相關(guān)基礎(chǔ)設(shè)施。關(guān)于生物標(biāo)本庫(kù)的質(zhì)量和能力的更多信息，可參見ISO20387[14]。j)實(shí)驗(yàn)室宜始終建立信息系統(tǒng)，用于收集、處理、記錄、報(bào)告、儲(chǔ)存或檢索檢驗(yàn)和檢驗(yàn)前數(shù)據(jù)及相關(guān)信息。計(jì)量可追溯性檢測(cè)試劑性能的設(shè)計(jì)輸入特征宜使用已建立的參考物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。參考物質(zhì)宜可溯源至已驗(yàn)證的新型冠狀病毒參考物質(zhì)（例如，世界衛(wèi)生組織（WHO）關(guān)于SARS-CoV-2的標(biāo)準(zhǔn)品）或適當(dāng)?shù)牡刃?，或者檢測(cè)試劑宜根據(jù)外部質(zhì)量保證方案對(duì)檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證。參考物質(zhì)宜妥善儲(chǔ)存及處理，對(duì)于商業(yè)化可獲得的參考物質(zhì)，宜按照供應(yīng)商的說明進(jìn)行操作。不同來源的參考物質(zhì)宜具有定量可追溯性，即不同來源的參考物質(zhì)的測(cè)試結(jié)果宜一致。關(guān)于計(jì)量可追溯性的更多信息，參見GB/T21415—2008[4]。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)以下要求，自行制備用于試劑的可行性研究和使用的參考物質(zhì)（內(nèi)部參考物質(zhì)）：a)可用于制備參考物質(zhì)的材料包括與測(cè)試樣品同類或具有相同成分的物質(zhì)，以及滅活的新型冠狀病毒或假病毒；b)滅活病毒或制備的假病毒在使用前，宜先采用數(shù)字PCR（digitalPCR，dPCR）等已經(jīng)驗(yàn)證的定量方法的參考測(cè)量程序進(jìn)行濃度測(cè)定，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。自制的參考物質(zhì)的儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間宜予以明確和驗(yàn)證，以避免目標(biāo)核酸的損失。此過程可使用數(shù)字PCR或?qū)崟r(shí)定量PCR（quantitativePCR，qPCR）進(jìn)行。參考物質(zhì)宜儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)臏囟认?，若為商業(yè)化可獲得的，則宜在供應(yīng)商指定的溫度下儲(chǔ)存，并在有效期內(nèi)使用，否則可能影響測(cè)試結(jié)果。陽(yáng)性閾值對(duì)于基于PCR的核酸擴(kuò)增方法，陽(yáng)性閾值指的是用作判定目標(biāo)核酸是否存在的臨界Cq值，它定義9GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022了哪些測(cè)量結(jié)果報(bào)告為“檢出”，哪些報(bào)告為“未檢出”。合理設(shè)置陽(yáng)性閾值對(duì)于確定檢驗(yàn)方法的臨床特異性和臨床靈敏度至關(guān)重要。確認(rèn)增強(qiáng)的擴(kuò)增信號(hào)可用于結(jié)果的解釋。Cq值宜與擴(kuò)增曲線的形態(tài)相匹配。設(shè)計(jì)良好且經(jīng)優(yōu)化的SARS-CoV-2PCR，在SARS-CoV-2RNA不存在時(shí)不宜產(chǎn)生Cq信號(hào)。用于區(qū)分陰性和陽(yáng)性結(jié)果的Cq判斷值均宜經(jīng)過臨床標(biāo)本驗(yàn)證。高Cq值常用于排除可因病毒載量過低或非特異性擴(kuò)增引起的非常弱的信號(hào)。然而，除非結(jié)果經(jīng)過協(xié)調(diào)（例如，使用經(jīng)認(rèn)證的參考物質(zhì)否則不同實(shí)驗(yàn)室獲得的Cq值之間不宜直接比較。包裝無論是商業(yè)化獲得的還是實(shí)驗(yàn)室自制的試劑盒，實(shí)驗(yàn)室僅宜在包裝完好且標(biāo)識(shí)清晰（例如，產(chǎn)品名稱、批號(hào)、組分、有效期、儲(chǔ)存條件）的情況下使用。說明書（InstructionsforUse，IFU）無論是商業(yè)化獲得的還是實(shí)驗(yàn)室自制的試劑盒，其說明書宜詳細(xì)說明預(yù)期用途和使用的操作步驟。說明書的內(nèi)容宜包括目標(biāo)用戶、適用范圍、測(cè)試結(jié)果的解釋、操作步驟和注意事項(xiàng)。4.1.4檢驗(yàn)后由于SARS-CoV-2具有致病性，在任何情況下均應(yīng)遵循適當(dāng)?shù)纳镲L(fēng)險(xiǎn)管理程序，并宜在實(shí)驗(yàn)室測(cè)試后妥善執(zhí)行以下步驟：a)剩余臨床標(biāo)本的保存和處理；b)擴(kuò)增后廢棄樣品的處置；c)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試后提供適當(dāng)?shù)臏y(cè)試報(bào)告：測(cè)試報(bào)告宜至少包含以下信息：標(biāo)本的基本信息、測(cè)試標(biāo)本類型、測(cè)試方法、標(biāo)本采集時(shí)間、儲(chǔ)存和運(yùn)輸時(shí)間及條件、報(bào)告出具時(shí)間、測(cè)試結(jié)果判定與解釋信息、結(jié)果審核和授權(quán)發(fā)布人員的信息；d)實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒，包括使用過的房間和設(shè)備；e)擴(kuò)增后產(chǎn)物的儲(chǔ)存和處理。有關(guān)生物風(fēng)險(xiǎn)管理的更多指南，可參見ISO35001[15]。4.2.1逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR（ReverseTranscriptionqPCR，RT-qPCR）RT-qPCR是一種測(cè)試SARS-CoV-2RNA的方法，它結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄（ReverseTranscription，RT）與實(shí)時(shí)定量PCR（quantitativePCR，qPCR在用戶完成校準(zhǔn)步驟后能夠?qū)崿F(xiàn)RNA的檢測(cè)與定量。在此過程中，RNA序列首先經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（complementaryDNA，cDNA在此基礎(chǔ)上進(jìn)行qPCR反應(yīng)。在每個(gè)循環(huán)后，對(duì)qPCR擴(kuò)增的cDNA進(jìn)行測(cè)量（通常采用熒光讀數(shù)）。熒光可能通過非特異性嵌合染料或含有熒光基團(tuán)的特異性寡核苷酸雜交探針來引入。后者由于引入了第三條寡核苷酸，從而進(jìn)一步增強(qiáng)了分析特異性，因此在SARS-CoV-2的測(cè)試中更為常用。目前，最常用的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)方法是水解熒光探針技術(shù)（其中包含熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)）。診斷用RT-qPCR的常見靶標(biāo)為SARS-CoV-2基因組的ORF1ab、RdRp、S、E或N基因（見圖2）。使用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)SARS-CoV-2核酸需要實(shí)時(shí)定量PCR儀器。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022圖2SARS-CoV-2基因組如果標(biāo)本中存在SARS-CoV-2的cDNA，引物和探針將特異性地結(jié)合到目標(biāo)區(qū)域，并生成新的核酸序列，該序列由分別結(jié)合在相隔大約60至150個(gè)堿基的互補(bǔ)DNA鏈上的相應(yīng)引物所啟動(dòng)?；パa(bǔ)分子被合成，聚合酶的外切酶活性會(huì)消化水解探針，從而將熒光基團(tuán)與同樣連接在探針上的淬滅基團(tuán)分離。熒光基團(tuán)從它的淬滅基團(tuán)釋放后，就可以檢測(cè)到熒光信號(hào)。隨著反應(yīng)循環(huán)次數(shù)的增加，樣品中標(biāo)記目標(biāo)核酸序列的濃度增加，熒光信號(hào)也隨之增強(qiáng)。熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)到熒光信號(hào)的增強(qiáng)，即表明樣品中檢測(cè)到SARS-CoV-2核酸序列。在RT-qPCR反應(yīng)中添加已知濃度的參考校準(zhǔn)物，根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品梯度所設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可建立Cq值與校準(zhǔn)物拷貝數(shù)之間的關(guān)系，SARS-CoV-2核酸可被定量。4.2.2逆轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR（RT-dPCR）RT-dPCR使用與RT-qPCR相同的試劑，但采用極限稀釋、終點(diǎn)PCR和泊松統(tǒng)計(jì)方法，無需使用校準(zhǔn)物。模板在極限稀釋條件下隨機(jī)分布到各自的反應(yīng)分區(qū)（通過油包水液滴或預(yù)制微孔板實(shí)現(xiàn)）中，使每個(gè)分區(qū)中不含模板或含有一個(gè)或多個(gè)模板。每個(gè)反應(yīng)分區(qū)內(nèi)均進(jìn)行擴(kuò)增直至終點(diǎn)，然后計(jì)數(shù)確定陽(yáng)性分區(qū)的數(shù)量和比例，并通過泊松分布模型估算濃度。在該反應(yīng)中，定量結(jié)果受擴(kuò)增效率低下和樣品中可存在的擴(kuò)增抑制劑的影響較小，即減少了重復(fù)性和再現(xiàn)性誤差引起的偏差。在該過程中，反應(yīng)體系可被分為數(shù)萬個(gè)納升級(jí)別的分區(qū)。該技術(shù)已用于臨床樣本中絕對(duì)病毒載量的分析，并證明具有高度的再現(xiàn)性。關(guān)于數(shù)字PCR使用的更多指南，可參見GB/T42077—2022[2]。4.2.3等溫?cái)U(kuò)增方法盡管基于PCR的方法廣泛用于SARS-CoV-2的確認(rèn)性診斷，等溫?cái)U(kuò)增方法為檢測(cè)SARS-CoV-2和識(shí)別感染患者提供了一種替代方案。等溫?cái)U(kuò)增方法可無需昂貴的熱循環(huán)設(shè)備，常與采用新型檢測(cè)方法（如CRISPR或DNA測(cè)序）的其他診斷解決方案聯(lián)合使用。等溫?cái)U(kuò)增方法的實(shí)例可參見附錄A。讀者宜查閱已發(fā)表的文獻(xiàn)，以確定最適合其預(yù)期用途的方法，并了解其潛在的優(yōu)點(diǎn)和局限性。進(jìn)行SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室宜考慮生物風(fēng)險(xiǎn)和生物安全等級(jí)、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、設(shè)備使用和人員防護(hù)的相關(guān)要求。例如，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備包括儀器的硬件和軟件、檢測(cè)系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)室宜了解與標(biāo)本采集和使用相關(guān)的國(guó)家、地區(qū)和國(guó)際倫理要求、法律和法規(guī)。實(shí)驗(yàn)室即使是出于質(zhì)量控制的目的使用來自患者的標(biāo)本時(shí)也應(yīng)考慮本條款中的注意事項(xiàng)。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:20225.2.1實(shí)驗(yàn)區(qū)域SARS-CoV-2的安全檢測(cè)需要在實(shí)驗(yàn)室中設(shè)計(jì)一個(gè)防止氣溶膠污染的工作區(qū)?？梢钥紤]使用合適的生物安全柜（BSCs）和獨(dú)立的專用工作區(qū)。用于SARS-CoV-2病毒NAAT的實(shí)驗(yàn)室宜設(shè)置合適的生物安全等級(jí)，建議至少為2級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室。此外，實(shí)驗(yàn)室至少宜有三個(gè)獨(dú)立的區(qū)域用于SARS-CoV-2的NAAT，分別用于試劑制備、樣品處理、NAAT。5.2.2風(fēng)險(xiǎn)管控實(shí)驗(yàn)室宜進(jìn)行本地風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以確保其有能力通過適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)控制措施安全地進(jìn)行預(yù)期的檢測(cè)。宜評(píng)估實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)處理SARS-CoV-2標(biāo)本相關(guān)的感染風(fēng)險(xiǎn)，以檢查工作程序產(chǎn)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)。宜對(duì)所有工作程序、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作環(huán)境進(jìn)行徹底的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。產(chǎn)生氣溶膠的步驟（混勻和加樣步驟）宜在生物安全柜（BSCs）中進(jìn)行。盡管常規(guī)RNA提取試劑盒的外部裂解緩沖液可能在沒有加熱或其他額外手段的情況下有效地滅活SARS-CoV-2。但在實(shí)驗(yàn)操作過程中，任何已知或可能被生物制劑污染的表面或材料都宜進(jìn)行正確消毒，以將感染風(fēng)險(xiǎn)降至最低。在進(jìn)行所有的操作時(shí)宜盡量減少氣溶膠和飛沫的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)室工作宜配備適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備。正確穿戴和脫下個(gè)人防護(hù)裝備以及手衛(wèi)生的能力對(duì)于控制感染至關(guān)重要。分析可能含有SARS-CoV-2活病毒的樣品的人員宜了解處理這些樣品的管理和法規(guī)。所有已識(shí)別的潛在危害的剩余風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)宜在可接受的范圍內(nèi)。關(guān)于生物風(fēng)險(xiǎn)管理的進(jìn)一步指導(dǎo)可詳見ISO3500。5.2.3個(gè)人防護(hù)裝備SARS-CoV-2具有高度傳染性。實(shí)驗(yàn)室工作人員宜穿戴與風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)相匹配的個(gè)人防護(hù)裝備，如防護(hù)服、手套（覆蓋整個(gè)手）和鞋套。強(qiáng)烈推薦佩戴面罩和適當(dāng)?shù)目谡忠约白o(hù)目鏡。呼吸道防護(hù)對(duì)于處理疑似SARS-CoV-2標(biāo)本尤為重要，尤其是在進(jìn)行可能產(chǎn)生氣溶膠和飛沫的操作時(shí)。相關(guān)人員宜了解當(dāng)?shù)靥幚韽U棄物以及穿脫防護(hù)裝備的生物安全要求?！妒佬l(wèi)組織實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》中提供了更多信息，宜定期查閱世衛(wèi)組織或美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心網(wǎng)站上有關(guān)SARS-CoV-2的最新生物安全信息。實(shí)驗(yàn)室建設(shè)宜遵循單向工作流程，以減少污染發(fā)生的機(jī)會(huì)。樣品制備區(qū)的材料、用品或設(shè)備不宜帶入試劑準(zhǔn)備區(qū)。同樣，擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)中的任何物品都不宜帶入樣品制備區(qū)或試劑制備區(qū)。更多信息詳見GB/T39367.1—2020。應(yīng)用這些建議時(shí)宜考慮到效益風(fēng)險(xiǎn)分析后的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和設(shè)施。當(dāng)在相應(yīng)的核酸擴(kuò)增方法中使用SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑時(shí)，制造商和儀器型號(hào)之間的差異可導(dǎo)致檢測(cè)條件和擴(kuò)增效率的差異。如果使用說明書（IFU）中有規(guī)定和聲明，則宜使用各種儀器驗(yàn)證試劑對(duì)多種型號(hào)儀器的適用性。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022臨床實(shí)驗(yàn)室操作人員宜接受包括SARS-CoV-2的檢測(cè)方法和程序、NAAT、體外診斷程序、適用的實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)和結(jié)果解釋相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）的培訓(xùn)，尤其是關(guān)于SARS-CoV-2的高傳染性。此外，宜酌情開展有關(guān)生物安全和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室管理相關(guān)知識(shí)的專門培訓(xùn)，包括SARS-CoV-2標(biāo)本的處理、個(gè)人防護(hù)設(shè)備的正確使用（穿上和脫下）。6.1客戶、患者和利益相關(guān)方的需求客戶、患者和利益相關(guān)方的需求根據(jù)預(yù)期用途進(jìn)行定義和記錄。收集、記錄這些需求和要求對(duì)于后續(xù)定義設(shè)計(jì)輸入規(guī)范至關(guān)重要。呼吸道標(biāo)本中SARS-CoV-2RNA診斷檢測(cè)的目的、益處和用途在于能夠支持臨床、感染控制或公共衛(wèi)生管理做出決策，以及以政策為導(dǎo)向的監(jiān)測(cè)目的。目標(biāo)人群包括個(gè)人初級(jí)護(hù)理或住院患者、衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)中的弱勢(shì)群體、社區(qū)中需要檢測(cè)、跟蹤和隔離的高危人群，以及沒有呼吸道感染跡象或癥狀的人群（例如監(jiān)測(cè)勞動(dòng)力或?qū)W校人群）。除了實(shí)時(shí)應(yīng)用于醫(yī)療或公共衛(wèi)生病例管理和傳播控制外，病毒檢測(cè)還可用于以政策導(dǎo)向的監(jiān)測(cè)目的，以監(jiān)測(cè)感染和疾病的發(fā)病率和流行情況。這種應(yīng)用包括在社區(qū)、初級(jí)護(hù)理或住院患者群體中進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)計(jì)劃。SARS-CoV-2診斷檢測(cè)的標(biāo)本可以從上呼吸道（如鼻咽拭子、口咽拭子、唾液）或下呼吸道（如痰液、氣管抽吸物、支氣管肺泡灌洗液（BAL采集。通過比較RT-PCR檢測(cè)的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)臨床檢測(cè)的靈敏度和LOD可能會(huì)因標(biāo)本類型和疾病進(jìn)程不同而有差異。制造商宜明確預(yù)期用途中的適用標(biāo)本類型，更多需要提供的信息見6.5.1。專用的SARS-CoV-2分析檢測(cè)的預(yù)期用途取決于客戶和利益相關(guān)方的需求和要求。呼吸道標(biāo)本中SARS-CoV-2RNA的分析檢測(cè)可為臨床治療、感染控制或公共衛(wèi)生管理的決策提供支持。對(duì)出現(xiàn)類似COVID-19癥狀的患者進(jìn)行SARS-CoV-2檢測(cè)，這對(duì)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)的患者護(hù)理、分診和隔離至關(guān)重要。此外，SARS-CoV-2檢測(cè)還可用于篩查密切接觸者是否存在無癥狀感染和相關(guān)疾病，作為接觸者追蹤或疫情調(diào)查的一部分。有關(guān)預(yù)期用途，宜查閱制造商和供應(yīng)商提供的說明書。另外，分析檢測(cè)的快速性和易用性也是兩個(gè)重要考慮因素。可以在患者床旁進(jìn)行的檢測(cè)稱為床旁檢6.3.1實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)（LDTs）與體外診斷醫(yī)療器械（IVD醫(yī)療器械）實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)（LDTs）是非商業(yè)性質(zhì)的體外測(cè)試方法，是按照質(zhì)量保證體系（基于國(guó)際臨床實(shí)GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022驗(yàn)室質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）進(jìn)行內(nèi)部性能驗(yàn)證和確認(rèn)后，按照科學(xué)合理的方案在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的。針對(duì)SARS-CoV-2病毒RNA的RT-PCR檢測(cè)方法經(jīng)常與其他各種基于RNA的體外檢測(cè)方法一起用于SARS-CoV-2疑似病例的診斷（見附錄A）。這些PCR檢測(cè)可以通過使用機(jī)械分子平臺(tái)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，以實(shí)現(xiàn)臨床標(biāo)本的高通量批量處理。體外診斷醫(yī)療器械的“預(yù)期用途”是指根據(jù)制造商在標(biāo)簽、說明書和宣傳材料上提供的資料，按照預(yù)期使用該器械。6.3.2應(yīng)急審批有關(guān)當(dāng)局宜確定分析檢測(cè)緊急使用的授權(quán)標(biāo)準(zhǔn)，這些檢測(cè)通常缺乏必要的政府、監(jiān)管、機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)和許可，或此類產(chǎn)品供應(yīng)不足。為應(yīng)對(duì)與SARS-CoV-2相關(guān)的衛(wèi)生保健工作，尋求相關(guān)當(dāng)局（如世衛(wèi)組織、美國(guó)食品和藥物管理局（FDA應(yīng)急審批的制造商宜在向市場(chǎng)提供產(chǎn)品以供緊急使用之前評(píng)估這些標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)整體臨床需求和利益相關(guān)方要求的評(píng)估對(duì)于確定和開發(fā)預(yù)期用途非常重要。良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范會(huì)產(chǎn)生準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，這對(duì)于確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)有利于公共衛(wèi)生應(yīng)對(duì)非常重要。面對(duì)大面積的社區(qū)傳播，實(shí)驗(yàn)室宜為大幅增加的SARS-CoV-2檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量做好準(zhǔn)備。宜調(diào)查檢測(cè)受限因素，并確定優(yōu)先次序，以確保利用現(xiàn)有資源最大程度上減少傳播對(duì)公共衛(wèi)生產(chǎn)生的影響。為了遏制SARS-CoV-2的傳播，宜采取一系列行動(dòng)來擴(kuò)大檢測(cè)能力，并確保國(guó)內(nèi)和國(guó)際的檢測(cè)質(zhì)量，包括：a）評(píng)估全國(guó)檢測(cè)策略中的共同方法（例如，單個(gè)樣本或樣本池檢測(cè)）;b）討論最佳行動(dòng)方案并制定關(guān)于性能評(píng)價(jià)和合格評(píng)定的檢測(cè)指南;c）提供參考物質(zhì)、經(jīng)認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、質(zhì)量控制物質(zhì)或研究級(jí)物質(zhì)以及用于器械比較的常用方法;d）測(cè)試性能的信息共享；e）與行業(yè)和國(guó)家主管當(dāng)局進(jìn)一步交流；f）確保標(biāo)簽使用正確，測(cè)試設(shè)備可正常識(shí)別；g）供需協(xié)調(diào)。6.5.1SARS-CoV-2呼吸道標(biāo)本檢測(cè)的預(yù)檢概述本章節(jié)重點(diǎn)關(guān)注SARS-CoV-2病毒主要侵犯部位—呼吸道。SARS-CoV-2檢測(cè)中，呼吸道標(biāo)本包括鼻咽拭子、咽（口咽）拭子、上鼻甲及中鼻甲拭子、痰液、支氣管/肺泡灌洗液和唾液標(biāo)本。正確的標(biāo)本處理方法對(duì)標(biāo)本的完整性以及定性和/或定量核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。標(biāo)本收集應(yīng)遵循適當(dāng)?shù)纳锇踩改?，同時(shí)需注意相關(guān)潛在干擾物質(zhì)（例如鼻腔或其他藥物）的信息。在檢測(cè)之前，應(yīng)妥善收集、運(yùn)輸和儲(chǔ)存標(biāo)本。如果預(yù)計(jì)標(biāo)本運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室的時(shí)間需延長(zhǎng)，則應(yīng)使用可穩(wěn)定保存病毒RNA的采樣裝GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022置來采集標(biāo)本。樣品處理不當(dāng)可導(dǎo)致核酸降解和檢測(cè)結(jié)果呈假陰性（CLSI-MM13A）[28]。需對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行培訓(xùn)，確保待測(cè)樣品的完整性。標(biāo)本采集正確采集呼吸道標(biāo)本會(huì)極大影響病毒載量的檢測(cè)，且在感染過程中，病毒載量會(huì)發(fā)生顯著變化。因此，為提高核酸檢測(cè)的靈敏度，在標(biāo)本采集時(shí)必須確保采集到被SARS-CoV-2感染的呼吸道液體和上皮細(xì)胞，以捕獲更多的病毒RNA。同樣重要的是，采集呼吸道標(biāo)本的人員必須經(jīng)過良好的培訓(xùn)，確保采樣能準(zhǔn)確地反應(yīng)采樣部位的狀態(tài)。詳盡的呼吸道采樣記錄很復(fù)雜，在需要快速確定潛在的SARS-CoV-2陽(yáng)性病例時(shí)，可參考其他病毒病原體（如流感、麻疹）的現(xiàn)有資料提供有關(guān)最佳拭子或其他采樣系統(tǒng)的有用信息。建議提供采集標(biāo)本的隨附信息，例如患者人口統(tǒng)計(jì)資料、住院患者或門診患者、采集日期和時(shí)間，以便跟蹤結(jié)果呈陽(yáng)性的患者。這些數(shù)據(jù)宜記錄在實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)中，有助于支持制定隔離方案并協(xié)助公共衛(wèi)生人員追蹤可能與陽(yáng)性結(jié)果患者有過接觸的其他人。標(biāo)本采集還宜考慮標(biāo)本類型、所需數(shù)量、容器、標(biāo)本可接收標(biāo)準(zhǔn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間，以及盡量減少核酸降解或污染的因素。在門診場(chǎng)景下，有數(shù)據(jù)表明，相比標(biāo)準(zhǔn)滌綸拭子，植絨尼龍拭子通過液體吸收和上皮細(xì)胞粘附的方式來收集病原體，臨床靈敏度最佳。在最近的研究中，鼻咽拭子顯示出最佳的臨床靈敏度（90%至95%）和良好的特異性，但這些研究通常沒有很好地標(biāo)準(zhǔn)化且受到許多變量的影響?？谘剩ㄑ屎恚?biāo)本的臨床靈敏度可能較低（80%至90%這取決于采樣技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)化。如由于各種原因無法采集鼻咽標(biāo)本時(shí)，鼻-中鼻甲混合標(biāo)本、咽拭子標(biāo)本（如適用）、抽吸標(biāo)本也可以實(shí)現(xiàn)較高的病毒回收率，漱口后采集唾液標(biāo)本也是有效的。病毒定量回收率標(biāo)準(zhǔn)宜考慮檢測(cè)結(jié)果的預(yù)期用途。注：一項(xiàng)Meta分析納入了3000多名患者的標(biāo)本（鼻咽拭子、口咽拭子和痰液研究顯示痰液具有最佳的臨床靈由于標(biāo)本質(zhì)量的重要性，宜始終開展標(biāo)本采集培訓(xùn)。CLSIMM13-A[28]可以作為培訓(xùn)的參考材料。采集標(biāo)本之前，宜將識(shí)別標(biāo)本來源和患者的信息（例如條形碼）貼于采樣管。不同標(biāo)本類型的采集宜遵照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)程序。推薦的采樣方法詳見本文件。標(biāo)本類型.1鼻咽拭子采樣人員宜輕輕托起受試者的頭部，一手握住拭子，將拭子插入鼻孔，然后沿下鼻道底部緩慢向后推拭子。由于鼻道彎曲，宜避免用力過猛，以防外傷性出血。當(dāng)拭子尖端到達(dá)鼻咽腔后壁時(shí)，宜輕輕旋轉(zhuǎn)拭子（如出現(xiàn)反射性咳嗽宜暫停旋轉(zhuǎn)）。拭子宜始終緩慢取出，以避免拭子在鼻腔內(nèi)折斷。將拭子尖端浸入病毒轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)或等效的穩(wěn)定溶液中。在折斷點(diǎn)處，折斷拭子，棄去尾部，擰緊管帽。如有需要，可將鼻咽拭子和咽拭子放在同一管運(yùn)輸介質(zhì)中。患者宜微微抬頭，張大嘴巴，說“啊”，露出雙側(cè)咽扁桃體。強(qiáng)烈建議用拭子在雙側(cè)扁桃體柱上來GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022回輕輕摩擦至少三次，避免接觸舌頭、牙齒和牙齦。然后將拭子尖端浸入病毒運(yùn)輸介質(zhì)中。.3鼻拭子經(jīng)驗(yàn)證的前鼻拭子可用于SARS-CoV-2檢測(cè)，但建議不要單獨(dú)使用此采樣方法。如采集標(biāo)本的人員未經(jīng)過良好的培訓(xùn)，無法確保至少對(duì)兩個(gè)鼻孔進(jìn)行采樣且收集足夠的液體和細(xì)胞，在篩查場(chǎng)景下中可能更頻繁地出現(xiàn)假陰性病例。如果無法進(jìn)行鼻咽拭子檢測(cè)，則可選擇進(jìn)行咽拭子和鼻拭子的混合檢測(cè)。鼻-中鼻甲標(biāo)本較前鼻拭子具有更高的臨床靈敏度。宜將拭子插入鼻孔至中鼻甲，旋轉(zhuǎn)數(shù)次，持續(xù)10秒至15秒，然后在另一個(gè)鼻孔中以相同的拭子重復(fù)此步驟，最后將拭子尖端浸入病毒運(yùn)輸介質(zhì)中。針對(duì)一些SARS-CoV-2流行且缺乏受過培訓(xùn)的采樣人員的地區(qū)，只要在檢測(cè)試劑盒中提供明確的采集說明，就可以使用鼻拭子自行采樣，以減少假陰性檢測(cè)結(jié)果的可能性。.4上呼吸道（唾液）沖洗液和唾液最近的數(shù)據(jù)表明，呼吸道沖洗液可以為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)提供足夠的樣品，此類樣品有時(shí)被稱為“漱口液”樣品?，F(xiàn)有證據(jù)表明，此采樣方式可用于門診患者和兒童的自主采樣，至少針對(duì)此類人群可作為具有同等臨床靈敏度的鼻咽標(biāo)本的替代方法。其他數(shù)據(jù)表明，直接采集唾液并不如鼻咽拭子采集標(biāo)本有效。唾液中含有微生物和外來物質(zhì)（如食物殘?jiān)沟没颊吆筒杉瘜?duì)象的唾液組成更加復(fù)雜和獨(dú)特，造成了SARS-CoV-2降解以及在檢驗(yàn)前工作流程中病毒RNA拷貝數(shù)損失的風(fēng)險(xiǎn)，可能會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。因此，在檢驗(yàn)前過程中保證SARS-CoV-2RNA拷貝數(shù)的穩(wěn)定性是檢測(cè)唾液標(biāo)本的重要前提。研究初步表明，在沒有漱口的情況下直接將唾液吐入采集裝置也可用于更大規(guī)模的篩查，尤其適用于低年齡段的組別。因此，用裝有SARS-CoV-2RNA穩(wěn)定溶液的裝置保存唾液標(biāo)本可能是一種合適的解決方案。強(qiáng)烈建議在SARS-CoV-2檢測(cè)試劑的開發(fā)過程中選定、驗(yàn)證和確認(rèn)檢驗(yàn)前的流程步驟，包括但不限于唾液采集裝置的選擇、標(biāo)本采集、標(biāo)本運(yùn)輸至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)、標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間和條件以及SARS-CoV-2RNA的分離提取。.5呼吸道抽吸液帶采集頭的導(dǎo)管宜與負(fù)壓泵一起使用，從鼻咽部吸出粘液或從氣管吸出呼吸道分泌物。將采集頭插入鼻腔或氣管內(nèi)，然后施加負(fù)壓，并通過旋轉(zhuǎn)移動(dòng)緩慢抽出導(dǎo)管。帶有拇指孔的軟導(dǎo)管可用于控制導(dǎo)管底部的吸力。樣品保存介質(zhì)用于收集吸出的粘液，然后宜用3mL采樣溶液沖洗采集器一次（兒科導(dǎo)管可與50mL注射器連接）。采集的樣品量宜為2mL至3mL。.6深咳痰在采集痰標(biāo)本之前，建議確定患者是否能夠配合深度咳痰，指導(dǎo)患者用生理鹽水漱口2次至3次（佩戴假牙者宜先摘掉假牙）。要求患者深咳后，將咳出的痰液轉(zhuǎn)移到采集器（管）中，采集的樣品量宜為2mL至3mL，同時(shí)宜避免采集到唾液。.7支氣管灌洗液采集器頭經(jīng)鼻孔或氣管窩插入氣管（約30cm深）。注入5mL生理鹽水后，打開負(fù)壓，然后旋轉(zhuǎn)GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022采集器頭，緩慢退出氣管。將吸出的粘液收集在病毒運(yùn)輸介質(zhì)或等效的穩(wěn)定溶液中，并用生理鹽水沖洗收集器一次（兒科導(dǎo)管可與50mL注射器連接）。采集的樣品量宜為2mL至3mL。.8肺泡灌洗液局部麻醉后，經(jīng)口或鼻，再經(jīng)咽，將纖維支氣管鏡插入右肺中葉或左肺舌段氣管。將其頂部楔入支氣管開口后，經(jīng)氣管活檢孔緩慢加入無菌生理鹽水，每次30mL至50mL，總量為100mL至250mL，不宜超過300mL。立即用適當(dāng)?shù)呢?fù)壓（一般推薦100mmHg，相當(dāng)于13.3kPa）吸出肺泡灌洗液，總回收率宜≥30%。回收液中含有終末支氣管和肺泡的分泌物約10mL。棄去可能被污染的分泌物，宜將剩余部分保存于2mL至3mL病毒運(yùn)輸介質(zhì)或等效的穩(wěn)定溶液中。.9混合呼吸道標(biāo)本如需在低流行率人群中進(jìn)行高通量SARS-CoV-2檢測(cè)，呼吸道混合篩查標(biāo)本有助于提升標(biāo)本的檢測(cè)通量，從而提高人群流轉(zhuǎn)率和病例報(bào)告效率。為此，需反復(fù)強(qiáng)調(diào)上述正確采集標(biāo)本的重要性?，F(xiàn)有證據(jù)表明，當(dāng)被檢測(cè)人群中疾病流行率較低（5%≤流行率<10%）且標(biāo)本數(shù)量少于10個(gè)時(shí)，混合標(biāo)本檢測(cè)可能是最有效的方法，并可能將檢測(cè)通量提高5倍。根據(jù)檢測(cè)策略，最好在提取每個(gè)原始標(biāo)本后（以避免交叉污染）再進(jìn)行混合檢測(cè)。當(dāng)樣品池中的病毒RNA濃度較低時(shí)，假陰性的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。在這些人群中，大約可將5個(gè)樣品混合，如果是陰性的，都可以被認(rèn)為是陰性的，并報(bào)告為未檢測(cè)到。如果樣品池呈陽(yáng)性，則宜在報(bào)告前對(duì)該樣品池中的單個(gè)樣品重新進(jìn)行檢測(cè)?？梢詮膯蝹€(gè)標(biāo)本采集設(shè)備或同一設(shè)備中的標(biāo)本池中收集5至10個(gè)呼吸道標(biāo)本。如果明確整個(gè)標(biāo)本池為陰性（根據(jù)RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果則可將池中的單個(gè)結(jié)果報(bào)告為未檢測(cè)到病毒。如果有跡象表明標(biāo)本池中的一個(gè)或多個(gè)樣品呈陽(yáng)性，則需要重復(fù)檢測(cè)來自該標(biāo)本池中的單個(gè)患者標(biāo)本以確認(rèn)陽(yáng)性標(biāo)本，這導(dǎo)致該標(biāo)本池單個(gè)陽(yáng)性結(jié)果延遲報(bào)告。此類技術(shù)宜進(jìn)行驗(yàn)證和臨床確認(rèn)，以確保池內(nèi)和池間樣品進(jìn)行同樣的RT-qPCR檢測(cè)，并且保證同一檢測(cè)池中的單個(gè)樣品可報(bào)告一致的檢測(cè)結(jié)果。.10呼吸道標(biāo)本采集的備選方法本標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前發(fā)布版本的編寫是基于上述采樣方法，這些方法已開展相關(guān)臨床研究進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)，能夠滿足從上述已確認(rèn)的采樣部位中收集SARS-CoV-2的預(yù)期用途。隨著檢驗(yàn)前技術(shù)的發(fā)展，未來可能采用更能為特定群體（如兒童）接受的替代方法進(jìn)行采樣。這些檢驗(yàn)前技術(shù)經(jīng)過驗(yàn)證后，再由制造商確認(rèn)其預(yù)期用途并應(yīng)用于同行評(píng)審的研究，如經(jīng)證明具有較高的臨床靈敏度和特異性后，可接受作為常規(guī)的使用方法。.11其他標(biāo)本類型據(jù)報(bào)道，從COVID-19患者收集的其他標(biāo)本或樣品類型（如血漿、尿液和糞便）含有可被檢測(cè)的SARS-CoV-2RNA，盡管一些用于SARS-CoV-2檢測(cè)口腔外標(biāo)本的準(zhǔn)確性受到質(zhì)疑。如果實(shí)驗(yàn)室將這類標(biāo)本納入其診斷流程，標(biāo)本采集宜采用常規(guī)做法，并將疑似或確診病例通知實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備產(chǎn)生的污水可以有效識(shí)別該環(huán)境中的SARS-CoV-2病毒，特別是在長(zhǎng)期使用的設(shè)備。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:20.12感染期間的采集周期對(duì)于不同標(biāo)本類型的檢測(cè)，表1給出了采集時(shí)間（在感染過程中）。表1建議的采集時(shí)間標(biāo)本類型建議采集時(shí)間鼻咽拭子上鼻甲及中鼻甲拭子上呼吸道（唾液）沖洗液這類標(biāo)本均為上呼吸道標(biāo)本，建議在早期感染時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，尤其適用于無癥狀或輕度病例。呼吸道抽吸液深咳痰支氣管灌洗液肺泡灌洗液如在COVID-19病程后期、住院患者或上呼吸道采樣陰性且臨床疑似COVID-19的患者，建議采集下呼吸道標(biāo)本。血液（血漿）建議在出現(xiàn)癥狀后七天內(nèi)采集有明顯急性期感染的患者的血液標(biāo)本。對(duì)慢性感染或嚴(yán)重疾病患者應(yīng)進(jìn)行血漿檢測(cè)，以評(píng)估疾病嚴(yán)重程度并監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)。結(jié)膜拭子出現(xiàn)眼部感染癥狀的疑似SARS-CoV-2病例，建議采集結(jié)膜拭子。運(yùn)輸除非制造商說明書中另有規(guī)定，在穩(wěn)定溶液中保存的標(biāo)本需經(jīng)過不同運(yùn)輸條件和存儲(chǔ)時(shí)間的驗(yàn)證。如無法滿足標(biāo)本的運(yùn)輸條件，宜在采集后2至4小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。如運(yùn)輸時(shí)間可能超過4小時(shí)，宜將標(biāo)本放入病毒運(yùn)輸介質(zhì)或等效的穩(wěn)定溶液中。如未進(jìn)行不同的驗(yàn)證，應(yīng)酌情放置在冷凍凝膠包裝上或放置于2°C至8°C（冷藏）下運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。如偏遠(yuǎn)地區(qū)交付延遲超過3天~4天，在沒有進(jìn)行驗(yàn)證的情況下，宜將標(biāo)本于-70°C冷凍保存。如上述條件無法滿足，可將標(biāo)本保存在-20°C。在標(biāo)本運(yùn)輸過程中，宜盡量避免反復(fù)凍融，防止病毒核酸降解?，F(xiàn)有的標(biāo)本采集運(yùn)輸管RNA的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表明，SARS-CoV-2RNA具有良好的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。最新的數(shù)據(jù)表明，在各種基質(zhì)（如裂解緩沖液和緩沖鹽水）中保存的SARS-CoV-2RNA，4°C下可保存48小時(shí)至一周不會(huì)發(fā)生降解，冷凍溫度下可保存數(shù)月。境內(nèi)標(biāo)本運(yùn)輸宜符合適用的所在國(guó)家的法規(guī)。國(guó)際運(yùn)輸可能含有SARS-CoV-2病毒的標(biāo)本時(shí)，宜符合《聯(lián)合國(guó)示范條例》等，以及根據(jù)其所采用的運(yùn)輸方式適用的任何其他條例。更多信息可參見WHOGB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022指導(dǎo)文件。所有在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部和實(shí)驗(yàn)室之間運(yùn)輸?shù)牟牧隙家朔胖迷诙伟b中，以最大限度地減少破損或泄漏的可能性。從生物安全柜（BSC）取出的標(biāo)本宜進(jìn)行表面消毒?？蓞⒖糤HO生物安全系列視頻。疑似或確診COVID-19病例的患者標(biāo)本在用于診斷或研究目的時(shí)，宜以UN3373“生物物質(zhì)B類”進(jìn)行運(yùn)輸。病毒培養(yǎng)物或分離物宜以A類UN2814“影響人類的感染性物質(zhì)”進(jìn)行運(yùn)輸。所有運(yùn)輸?shù)臉?biāo)本（無論屬于UN3373或UN2814）都宜如本子條款中引用的文件中所述，具備適當(dāng)?shù)陌b、標(biāo)簽和說明文件。標(biāo)本接收和保存實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本接收人員宜接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，并具備處理容器損壞和樣品泄漏等緊急情況的能力。收到標(biāo)本后，運(yùn)輸箱在打開前宜用消毒劑消毒，二次密封塑料袋也宜消毒。宜在生物安全柜（BSC）中打開二級(jí)密封塑料袋以取出標(biāo)本。宜核實(shí)標(biāo)本的姓名、性別、年齡、編號(hào)、檢測(cè)項(xiàng)目、標(biāo)本的狀態(tài)和標(biāo)本的異常情況。所有信息宜記錄在實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)中。標(biāo)本宜儲(chǔ)存在具有足夠牢固性、完整性和容量容器中，正確地蓋上蓋子或塞子防止泄漏。宜盡可能使用外包裝不含任何生物材料的塑料容器。容器宜始終貼上正確的標(biāo)簽和標(biāo)記以便于識(shí)別，并相應(yīng)地記錄于實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)。容器材質(zhì)宜適用于其所存儲(chǔ)的標(biāo)本類型。儲(chǔ)存標(biāo)本前，無論何時(shí)進(jìn)行滅活步驟，都宜對(duì)滅活方法進(jìn)行驗(yàn)證。如果沒有關(guān)于儲(chǔ)存條件的使用說明書或建議，則宜將標(biāo)本儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)臈l件下或-70°C下。提取后的核酸應(yīng)儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)尿?yàn)證條件下，如無適用規(guī)范，則宜儲(chǔ)存在-70°C或更低的溫度下。存檔.1信息歸檔收到標(biāo)本后，宜及時(shí)對(duì)標(biāo)本信息進(jìn)行記錄和歸檔。這些信息宜記錄在實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)中，其內(nèi)容宜包括但不限于：a)唯一的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)識(shí)；b)患者個(gè)人信息（至少兩個(gè)標(biāo)識(shí)符，包括姓名、唯一醫(yī)療編號(hào)、出生日期）；c)標(biāo)本信息（來源包括，例如拭子類型、采樣日期、樣本量（如必要）、樣本狀態(tài)是用于篩查還是用于臨床診斷）；d)臨床信息（如臨床癥狀、流行病學(xué)信息）。歸檔的信息宜始終妥善保存，最大限度地減少損壞，保護(hù)其機(jī)密性并防止丟失。.2標(biāo)本或樣品存檔應(yīng)提供有關(guān)標(biāo)本采集裝置和樣品儲(chǔ)存裝置的信息，無論它們是穩(wěn)定還是滅活病毒標(biāo)本或樣品。這對(duì)于回顧性分析，例如測(cè)序（允許病毒培養(yǎng)）以及儲(chǔ)存的生物安全措施（另見）都很重要。標(biāo)本處理（包括RNA分離）通常在逆轉(zhuǎn)錄和PCR檢測(cè)之前需要提取和分離病毒RNA。此過程通常使RNA溶液濃縮提高了病毒濃度，潛在地提升了分析特異性和檢出限（LOD）。提取是純化的關(guān)鍵步驟，特別是去除了可能中GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022斷反應(yīng)并導(dǎo)致假陰性結(jié)果的PCR抑制劑。注：測(cè)定核酸總濃度和評(píng)估核酸質(zhì)量的通用方法可參照GB/T42077—2022[2]。為驗(yàn)證整個(gè)程序的性能，宜將該程序（如提取效率、試劑、PCR性能）與用于從類似標(biāo)本或樣品中提取病毒RNA的其他現(xiàn)有檢測(cè)方法進(jìn)行比較，以確保基于PCR的后續(xù)檢測(cè)順利進(jìn)行。這宜包括使用系列稀釋方法確定檢出限（LOD必要時(shí)確定定量限（LOQ還包括比較不同提取方法對(duì)分析靈敏度的影響。對(duì)于包含核酸提取組分的試劑盒，產(chǎn)品說明書宜提供核酸提取的操作指導(dǎo)，并說明核酸提取效率的驗(yàn)證方法。例如，宜說明樣品提取過程中已知的干擾因素及其對(duì)后續(xù)擴(kuò)增過程可能產(chǎn)生的影響。目前也有不含核酸提取組分的檢測(cè)方法。對(duì)于此類檢測(cè)，應(yīng)給用戶提供操作方法，產(chǎn)品說明書應(yīng)充分描述或指定合適的提取程序（試劑盒并明確核酸提取效率和預(yù)期的分析性能。直接擴(kuò)增的試劑盒可以在沒有單獨(dú)提取步驟的情況下使用（樣品直接添加到反應(yīng)中）。核酸提取效率可按照相關(guān)的ISO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如ISO20184系列[18]、ISO20186系列[19]。核酸提取和純度的評(píng)估宜通過在模擬臨床標(biāo)本的標(biāo)本基質(zhì)中使用滅活的SARS-CoV-2來進(jìn)行檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)室中提取的樣品處理宜嚴(yán)格按照器械說明書進(jìn)行，以確保所聲稱的性能和質(zhì)量。宜特別注意以下幾點(diǎn)：a)核酸提取過程中，試劑、樣品正確的溫度和體積對(duì)提取效率和后續(xù)PCR檢測(cè)的性能非常重要。宜采用推薦的核酸提取方法，并嚴(yán)格按照制造商說明書操作。b)宜按照制造商的說明書進(jìn)行反應(yīng)混合物的制備和程序設(shè)置。否則有可能對(duì)測(cè)試的性能產(chǎn)生影響，并可能在測(cè)試中產(chǎn)生非預(yù)期結(jié)果。c)負(fù)責(zé)結(jié)果解釋的技術(shù)人員宜接受培訓(xùn)，以便正確進(jìn)行結(jié)果判讀，根據(jù)需要校準(zhǔn)結(jié)果或按照制造商的說明處理任何復(fù)雜情況。此外，操作人員宜避免任何可能導(dǎo)致核酸降解的因素（例如，長(zhǎng)時(shí)間暴露在環(huán)境溫度下，手直接接觸標(biāo)本導(dǎo)致酶失活）。除非制造商說明書明確要求不同的溫度，通常建議將反應(yīng)組分放在碎冰上。6.5.2檢驗(yàn)設(shè)計(jì)規(guī)范（分析測(cè)試規(guī)范）定性和定量試驗(yàn).1定性檢測(cè)定性檢測(cè)適用于只需要對(duì)樣品進(jìn)行陰性或陽(yáng)性測(cè)定而不需要測(cè)量病毒載量的情況。不需要使用已知濃度梯度的參考物質(zhì)來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，只需要最終的信號(hào)強(qiáng)度，并且獲得的結(jié)果可以是樣品的陰性或陽(yáng)性描述。適用于疑似感染者的篩查和檢測(cè)。實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）和等溫?cái)U(kuò)增常用于定性評(píng)估。等溫?cái)U(kuò)增方法見附錄A。讀者宜查閱已發(fā)表的文獻(xiàn)以確定最適合的方法，包括其預(yù)期用途的潛在優(yōu)勢(shì)和局限性。.2定量檢測(cè)定量檢測(cè)適用于需要測(cè)量樣品中的病毒載量的情況。對(duì)于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）檢測(cè)，宜始終使用已知濃度梯度的參考物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)，宜始終實(shí)時(shí)記錄樣品的熒光信號(hào)強(qiáng)度，以便對(duì)指數(shù)增長(zhǎng)期的熒光信號(hào)進(jìn)行定量分析。獲得的結(jié)果是明確的值，例如病毒載量。適用于觀察治療效果或疾病進(jìn)GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022展，確定疾病嚴(yán)重程度及科學(xué)研究。實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）和數(shù)字PCR（dPCR）適用于定量評(píng)估。等溫?cái)U(kuò)增方法見附錄A。讀者宜查閱已發(fā)表的文獻(xiàn)，以確定最適合的方法，包括其預(yù)期用途的潛在優(yōu)勢(shì)和局限性。核酸擴(kuò)增技術(shù)的選擇實(shí)驗(yàn)室宜根據(jù)檢測(cè)要求和環(huán)境選擇合適的擴(kuò)增技術(shù)。在逆轉(zhuǎn)錄過程（見4.2.1）完成之后，每種擴(kuò)增技術(shù)的特點(diǎn)如下：a）實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）適用于需要對(duì)樣品進(jìn)行定性評(píng)估或定量的情況。始終建議提供熒光定量PCR儀器和穩(wěn)定的能源供應(yīng)。qPCR具有高分析靈敏度和高通量，操作簡(jiǎn)單，但反應(yīng)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。b）數(shù)字PCR（dPCR）適用于需要對(duì)樣品進(jìn)行絕對(duì)定量的情況。由于dPCR只需要很小的樣品量，因此也適用于珍貴的樣品或核酸降解嚴(yán)重的樣品。始終建議提供分析和讀取樣品的專用dPCR儀器、反應(yīng)芯片或液滴發(fā)生器以及穩(wěn)定的能源供應(yīng)。盡管LOD較低，但通量取決于特定的儀器系統(tǒng)。另外，操作比較復(fù)雜，反應(yīng)時(shí)間也相對(duì)較長(zhǎng)。c）等溫?cái)U(kuò)增適用于需要對(duì)樣品進(jìn)行定性評(píng)估的情況。不一定需要熱循環(huán)器和穩(wěn)定的能源供應(yīng)。它具有低LOD、低通量、反應(yīng)時(shí)間短、操作方便等特點(diǎn)。質(zhì)量控制和材料.1材料和環(huán)境控制IVD試劑聲稱的儲(chǔ)存及運(yùn)輸?shù)臈l件和時(shí)間宜根據(jù)穩(wěn)定性研究的證據(jù)來確定。建議按照制造商的說明保存樣品和基于RNA的校準(zhǔn)物材料，如果沒有提供說明，則在-18°C或-70°C下分別保存不超過一周或六個(gè)月。除非另有說明，所有使用的試劑宜不含DNase或RNase。應(yīng)按適用的要求和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行所有試劑的處理、儲(chǔ)存、運(yùn)輸或處置。應(yīng)記錄到達(dá)日期和開封日期。所有實(shí)驗(yàn)室配制的試劑宜在試劑上標(biāo)明名稱、濃度、配制日期和儲(chǔ)存條件。必要時(shí)，試劑宜在生產(chǎn)后通過高壓滅菌進(jìn)行滅菌。對(duì)于不能高壓滅菌的試劑，建議使用過濾滅菌。宜避免反復(fù)凍融試劑。解凍時(shí)，試劑宜始終保持在冰上。宜根據(jù)說明書中描述的關(guān)鍵性能指標(biāo)或經(jīng)實(shí)驗(yàn)室充分驗(yàn)證后確定凍融周期。提取的RNA和相關(guān)的校準(zhǔn)物材料易于降解，因此宜立即進(jìn)行核酸擴(kuò)增檢測(cè)，除非已進(jìn)行單獨(dú)驗(yàn)證過。實(shí)驗(yàn)用水宜具備檢驗(yàn)所需的性能（如無干擾化合物、無核酸酶水、離子含量低）。.2質(zhì)量控制設(shè)置始終建議使用對(duì)照品來監(jiān)測(cè)所開發(fā)方法的性能，并最好在每次擴(kuò)增和檢測(cè)進(jìn)行質(zhì)量控制。應(yīng)始終使用陰性對(duì)照來監(jiān)測(cè)整個(gè)過程中是否存在污染，使用陽(yáng)性PCR對(duì)照來監(jiān)測(cè)檢測(cè)性能。建議采用內(nèi)部抑制對(duì)照來監(jiān)測(cè)標(biāo)本采集、處理、RNA分離和RT-qPCR過程。如果無法在每次檢測(cè)使用對(duì)照品（如POC系統(tǒng)，每次檢測(cè)單一樣本應(yīng)在更換試劑批次時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，或者在預(yù)先確定的時(shí)間間隔內(nèi)（如每天或每周）進(jìn)行對(duì)照品檢測(cè)。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022性能參數(shù)需要評(píng)估的性能參數(shù)包括但不限于陽(yáng)性判斷值的確認(rèn)、較低LOD的確認(rèn)以及在不同儀器系統(tǒng)或型號(hào)中的適用性（如有）。穩(wěn)定性參數(shù)包括但不限于樣品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)和試劑穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)脑u(píng)估方法（如ROC曲線通過測(cè)試一定數(shù)量的已知臨床診斷結(jié)果的樣品來確認(rèn)診斷性能。經(jīng)確認(rèn)的診斷性能應(yīng)通過一定數(shù)量已知臨床診斷結(jié)果的樣品對(duì)感染檢測(cè)的驗(yàn)證。在確定陽(yáng)性判斷值后，建議使用已知SARS-CoV-2濃度的參考物質(zhì)確認(rèn)試劑盒的最低檢測(cè)濃度，以評(píng)估試劑盒的較低LOD。更多信息可參見7.2.2。如果試劑盒適用于不同的儀器系統(tǒng)，如不同廠家的qPCR儀器和核酸提取方法，建議評(píng)估不同的型號(hào)并評(píng)價(jià)其等效性。有關(guān)樣品和試劑穩(wěn)定性評(píng)估的更多信息，可參見。ISO/TS16393提供了開發(fā)定性（二分類算法）PCR檢測(cè)方法的指南[20]。正確度（可靠性、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)）實(shí)驗(yàn)室宜在一定的時(shí)間范圍內(nèi)分散展開檢測(cè)，以反映平常實(shí)驗(yàn)室條件下的檢測(cè)性能。正確度研究應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計(jì)建議和GB/T22576.1—2018[1]進(jìn)行。檢測(cè)樣品量的選擇應(yīng)綜合考慮所建立方法的復(fù)雜性和精密度要求、數(shù)據(jù)分析的統(tǒng)計(jì)方案和可接受的統(tǒng)計(jì)置信水平。建議測(cè)試的樣品不少于20個(gè)。在準(zhǔn)確度研究期間，除非另有說明，否則應(yīng)包括設(shè)計(jì)輸入規(guī)格中規(guī)定的所有測(cè)試標(biāo)本和樣品類型（如咽拭子、鼻拭子、肺泡灌洗液、痰液、全血、糞便、肛門拭子）。如果無法獲得臨床標(biāo)本和樣品，可使用模擬樣品。模擬樣品應(yīng)由SARS-CoV-2陰性樣品基質(zhì)和適當(dāng)?shù)腟ARS-CoV-2靶標(biāo)（如含有內(nèi)部參考序列或SARS-CoV-2靶標(biāo)序列的假病毒）組成，可自行制備或從商業(yè)渠道獲取。為了確定測(cè)試的準(zhǔn)確度，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)以圖形和統(tǒng)計(jì)方式解釋獲得的數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)分析和比較應(yīng)包括使用相關(guān)的散點(diǎn)圖和回歸分析，并說明95%置信區(qū)間的計(jì)算方法。精密度（重復(fù)性、中間精密度、再現(xiàn)性）始終建議對(duì)影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行評(píng)估，包括檢測(cè)試劑（包括核酸提取組分）、分析儀、操作人員、位置、檢測(cè)輪次等因素。如適用，精密度研究宜測(cè)試重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性（見6.6.7）。用于精密度評(píng)價(jià)的樣品測(cè)試可以包括標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)量控制材料、能力驗(yàn)證樣品或足夠數(shù)量的患者標(biāo)本以完成研究。例如，用預(yù)先測(cè)量的特征值足夠均勻和穩(wěn)定的材料制備的加標(biāo)樣品就可用于這一目的。這些材料可以在擴(kuò)增前加進(jìn)樣品（包括患者標(biāo)本或提取的核酸樣品也可以在擴(kuò)增前同時(shí)加到這兩種材料中（如果這兩種材料的擴(kuò)增情況可以區(qū)分）。在監(jiān)測(cè)精密度評(píng)估測(cè)試的所有過程中，即從提取核酸到檢測(cè)的步驟中，宜考慮使用單一的加標(biāo)材料。樣品選擇宜至少包含三個(gè)水平：陰性樣品、接近LOD的陽(yáng)性樣品和陽(yáng)性樣品（中等或強(qiáng)）。宜根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?。測(cè)試精密度宜按照不精密度的統(tǒng)計(jì)測(cè)量來表示，例如標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。分析測(cè)試的性能GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022分析檢測(cè)的性能由幾個(gè)參數(shù)來表征。宜使用可溯源的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋系列來測(cè)量響應(yīng)曲線，以評(píng)估這些參數(shù)。圖3顯示了一個(gè)采用qPCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的測(cè)量示例。標(biāo)引序號(hào)說明：X—log10濃度；LOD—檢出限；LOQ—定量限；a—線性范圍；b—靈敏度；c—Δlog10（濃度）。圖3qPCR檢測(cè)的響應(yīng)曲線示意圖LOQ是在分析測(cè)試規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，能夠以合理的統(tǒng)計(jì)確定性一致地測(cè)量的最低濃度。LOQ設(shè)定了線性范圍的下限。靈敏度是線性范圍內(nèi)的斜率。如果斜率為負(fù)，則宜報(bào)告斜率的絕對(duì)值作為靈敏度。靈敏度研究中至少宜包括三種不同的濃度。宜利用試劑盒從標(biāo)本制備、核酸提取到檢測(cè)所聲稱每種臨床標(biāo)本類型或基質(zhì)的整個(gè)檢測(cè)程序來確定檢測(cè)的LOD。LOD設(shè)定了工作范圍（即測(cè)量范圍）的下限。靈敏度出現(xiàn)顯著異常的濃度即為工作范圍的上限。宜使用臨床相關(guān)型菌株的代表性SARS-CoV-2樣本來確定LOD。LOD還應(yīng)使用其他不同的SARS-CoV-2菌株（包括遺傳變異）的樣本進(jìn)行驗(yàn)證。如果適用于多種標(biāo)本類型基質(zhì)，例如痰液、肺泡灌洗液、鼻咽拭子，建議對(duì)每種聲稱的標(biāo)本類型分別進(jìn)行LOD研究，因?yàn)椴蓸雍吞崛⌒实淖兓瘯?huì)影響LOD，另有理由除外。特異性干擾通過測(cè)試干擾物質(zhì)和潛在的交叉反應(yīng)微生物來評(píng)估分析特異性。對(duì)于常規(guī)PCR檢測(cè)試劑或具有既定提取方法的試劑，在應(yīng)用于測(cè)試新病原體之前，干擾物質(zhì)的影GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022響通常已經(jīng)為人所知。然而，可以測(cè)試它們對(duì)潛在交叉反應(yīng)生物體的特異性。對(duì)于其他核酸擴(kuò)增檢測(cè)產(chǎn)品，如等溫?cái)U(kuò)增或采用新的提取方法，則宜始終對(duì)潛在的干擾進(jìn)行評(píng)估。潛在干擾物質(zhì)包括但不限于血凝塊、鼻腔噴霧劑（苯福林、羥甲唑啉、含防腐劑的氯化鈉）、鼻用藥物（倍氯米松、地塞米松、氟尼縮松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松）、抗過敏藥物（鹽酸組胺）、抗病毒藥物(α-干擾素、扎那米韋、利巴韋林、奧司他韋、帕拉米韋、洛匹那韋、利托那韋、阿比多爾）、抗菌藥物（左氧氟沙星、阿奇霉素、頭孢曲松，美羅培南，妥布霉素）和人類基因組DNA和RNA。建議對(duì)干擾樣本重復(fù)進(jìn)行3次檢測(cè)，以避免單次檢測(cè)造成的隨機(jī)誤差。在進(jìn)行病原體交叉反應(yīng)研究時(shí)，建議將培養(yǎng)分離物混入樣本緩沖液中制備測(cè)試樣本，以避免直接使用病原體培養(yǎng)物。宜通過測(cè)試評(píng)估病原體的交叉反應(yīng)。在不能進(jìn)行濕試驗(yàn)的情況下，宜進(jìn)行生信分析（使用生物信息學(xué)來輔助實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和/或預(yù)測(cè)性能以評(píng)估試驗(yàn)微生物與檢測(cè)試劑盒引物和探針之間的同源性。分析宜盡可能包括每種生物體的所有測(cè)試病原體的多個(gè)代表性菌株。建議參考本款中的a）至e）。如果生信分析結(jié)果顯示交叉反應(yīng)微生物與分析測(cè)試引物和探針之間的同源性≥80%，應(yīng)采取以下措施：a）宜在SARS-CoV-2與測(cè)試引物和探針具有同源性的微生物之間進(jìn)行微生物干擾研究；或b）作為微生物干擾研究的替代方案，宜進(jìn)行合理性研究以確定為什么（例如，預(yù)混液中包含的引物和探針的數(shù)量）設(shè)備的性能不會(huì)受到與測(cè)試引物和探針具有≥80%同源性的微生物的影響；或c）宜解釋為什么生信分析結(jié)果與臨床無關(guān)（例如，MERS-CoV的低流行率）。應(yīng)通過生信分析結(jié)果和濕試驗(yàn)對(duì)鄰近物種和菌株以及對(duì)感染癥狀與COVID-19發(fā)病時(shí)觀察到的癥狀相似的生物體進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)試生物和菌株宜包括但不限于下列所列的微生物和菌株。在SARS-CoV-2檢測(cè)中，為避免已知陰性標(biāo)本出現(xiàn)假陽(yáng)性或已知陽(yáng)性標(biāo)本出現(xiàn)假陰性，以下病原體和核酸可作為交叉反應(yīng)性檢測(cè)的示例：a)地方性人類冠狀病毒（HKU1、OC43、NL63和229E）、SARS冠狀病毒和MERS冠狀病毒；b）其他呼吸道病毒，如H1N1（新型H1N1流感病毒（2009）、季節(jié)性H1N1流感病毒）、H3N2、H5N1、H7N9，乙型流感Yamagata系、Victoria系，呼吸道合胞病毒RSV-A和RSV-B，副流感病毒PIV-1、PIV-2和PIV-3、鼻病毒HRV-A、HRV-B、HRV-C、腺病毒Adv1、Adv2、Adv3、Adv4、Adv5、Adv7、Adv55，腸道病毒A、B、C、D組、人偏肺病毒；c）EB病毒、麻疹病毒、人巨細(xì)胞病毒、輪狀病毒、諾如病毒、腮腺炎病毒；d）肺炎支原體、肺炎衣原體、軍團(tuán)菌、百日咳桿菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎克雷伯菌、結(jié)核分枝桿菌；e）煙曲霉、白色念珠菌、光滑念珠菌、新生隱球菌；此信息適用于制造商或LDTs（實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)宜在技術(shù)交流中明確。生產(chǎn)力（如速度、危害）SARS-CoV-2核酸檢測(cè)體外診斷設(shè)備的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)滿足與其他IVD生產(chǎn)商相同的要求，包括但不限于工廠生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)管理、質(zhì)量控制體系、風(fēng)險(xiǎn)管理體系、生產(chǎn)能力等。工廠的生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)施和設(shè)備、生產(chǎn)管理和質(zhì)量控制系統(tǒng)應(yīng)符合國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如ISO13485[21]GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022或國(guó)家特定標(biāo)準(zhǔn)，如中國(guó)GMP、美國(guó)QSR（21CFR820）、日本厚生勞動(dòng)省第169號(hào)條例。6.5.3設(shè)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)管理設(shè)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)分析應(yīng)具體說明如何降低所開發(fā)的檢測(cè)方法無法檢測(cè)到SARS-CoV-2突變株的風(fēng)險(xiǎn)。典型的PCR檢測(cè)方法設(shè)計(jì)開始于獨(dú)特區(qū)域（特征）的計(jì)算（生信分析）識(shí)別，以支持引物和探針序列的結(jié)合，進(jìn)行靶標(biāo)特異性擴(kuò)增，以檢測(cè)靶標(biāo)生物體的存在。在此步驟之后，使用逆轉(zhuǎn)錄RNA對(duì)引物和探針進(jìn)行濕法實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，并對(duì)選定的檢測(cè)方法進(jìn)行性能優(yōu)化。此外，建議在預(yù)定的臨床基質(zhì)中對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行廣泛測(cè)試，以評(píng)估檢測(cè)參數(shù)，如LOD、臨床靈敏度和特異性。使用一組目標(biāo)菌株（包容性）、近緣菌株（排他性）和基質(zhì)相關(guān)生物（背景）通過實(shí)驗(yàn)確定檢測(cè)方法的臨床靈敏度和特異性。檢測(cè)性能也宜始終在檢測(cè)特異性基質(zhì)（即呼吸道拭子、痰液和唾液）中進(jìn)行測(cè)量。通常情況下，檢測(cè)方法是使用當(dāng)時(shí)可用的一組基因組或基因序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，然后通過在目標(biāo)生物體的所有可用標(biāo)本中驗(yàn)證特征的存在（包容性并在許多不含靶標(biāo)的其他標(biāo)本中驗(yàn)證特征的缺失（排他性和基質(zhì)）。檢測(cè)試劑盒通常是使用當(dāng)時(shí)可用的所有序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，然而這在產(chǎn)品應(yīng)用過程中可能會(huì)發(fā)生變化（參見10.1）。），建議使用WHO或其他可靠來源（例如：GISAID）公布的SARS-CoV-2基因序列進(jìn)行檢測(cè)靶標(biāo)區(qū)域的確定以及檢測(cè)引物的開發(fā)。自主選擇檢測(cè)靶標(biāo)區(qū)域的實(shí)驗(yàn)室，宜定期與序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，以確定是否需要修改或變更。對(duì)于選定的SARS-CoV-2靶標(biāo)區(qū)域，宜充分驗(yàn)證其特異性，包括對(duì)比分析同源物種之間的差異?；谝阎牧餍凶儺愔赀z傳學(xué)特性（基因序列通過對(duì)比新序列與引物探針序列的差異，確定可能產(chǎn)生的影響。在設(shè)計(jì)測(cè)試階段未知的變異株需要在臨床階段單獨(dú)驗(yàn)證（參見10.1）。雖然引物探針結(jié)合區(qū)的序列變異可能不會(huì)產(chǎn)生任何影響，但引物探針在設(shè)計(jì)時(shí)通常不會(huì)有意引入序列錯(cuò)配，而識(shí)別出這種變異表明可能需要重新設(shè)計(jì)方案（選擇另一序列保守的基因區(qū)域，或在檢測(cè)方法中加入簡(jiǎn)并以兼容多種基因序列）。序列變異可能會(huì)降低試劑性能或?qū)е路肿訖z測(cè)失敗，從而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。針對(duì)多個(gè)基因區(qū)域的測(cè)試（通常采用多重模式）可減少因特定基因區(qū)域變化而導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。然而，在同一突變株中序列變異可能具有累積性，開發(fā)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到這種序列變異可能會(huì)影響試劑測(cè)試性能。此外，若把SARS分子診斷納入測(cè)試多種可能病原體的試驗(yàn)中（如包括流感亞型和呼吸道合胞病毒在內(nèi)的呼吸道GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022病毒組合那么針對(duì)同一病毒多個(gè)區(qū)域進(jìn)行檢測(cè)的能力可能會(huì)受到限制。開發(fā)人員宜監(jiān)測(cè)試劑使用區(qū)域的流行變異株與引物探針序列的匹配性。若發(fā)現(xiàn)新變異株會(huì)影響檢測(cè)性能，開發(fā)人員宜提醒試劑使用人員注意此風(fēng)險(xiǎn)。這些信息確定與傳達(dá)的緊迫性與SARS-CoV-2疫情尤為相關(guān)，因?yàn)樽顪?zhǔn)確地使用診斷試劑能有助于及時(shí)有效地控制疫情。若在特定區(qū)域迅速傳播的新VOCs影響試劑檢測(cè)性能，則會(huì)延緩干預(yù)措施的實(shí)施，從而降低阻止疫情傳播的能力。更迅速地確定特定序列變異對(duì)診斷測(cè)試可能產(chǎn)生根據(jù)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、條件和設(shè)施的匹配程度，宜選擇適合實(shí)驗(yàn)室的擴(kuò)增方法，包括但不限于熒光PCR、dPCR、等溫?cái)U(kuò)增及其他擴(kuò)增方法。推薦使用WHO公開的引物序列進(jìn)行測(cè)試。對(duì)于確定和選擇SARS-CoV-2靶標(biāo)區(qū)域進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)室，宜篩選所選靶標(biāo)區(qū)域的擴(kuò)增引物，并考慮引物長(zhǎng)度、GC含量和熔解曲線設(shè)計(jì)參數(shù)，以獲得最佳退火效果且避免形成引物二聚體。在反應(yīng)體系開發(fā)時(shí)，宜通過試驗(yàn)對(duì)體系中各PCR組分（包括但不限于擴(kuò)增酶、試劑和引物）進(jìn)行研究，確定最佳的組分配方。此外，對(duì)于所選的擴(kuò)增程序，宜充分考慮擴(kuò)增效率和穩(wěn)定性，確定高效的擴(kuò)增反應(yīng)條件。陽(yáng)性判斷值宜根據(jù)預(yù)期用途確定，并將其作為鑒定樣本的界值，以表明是否存在某種特定的疾病、狀況或待測(cè)物。用于確定陽(yáng)性判斷值的樣本宜選用臨床樣本。樣本宜選擇不同靶標(biāo)濃度，包括陰性、臨界陽(yáng)性以及強(qiáng)陽(yáng)性。此外，陽(yáng)性判斷值宜使用多批次試劑驗(yàn)證。這些建議適用于制造商和LDTs。用戶宜注意國(guó)家或地方上可能適用的倫理要求，尤其是在使用臨床樣本評(píng)估測(cè)試方法或分析的準(zhǔn)確性時(shí)。GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022注4：對(duì)于基于熒光PCR法的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑，陽(yáng)性判斷值一般為該試劑檢測(cè)病毒核酸可采用ROC曲線分析建立檢測(cè)病毒靶基因的陽(yáng)性判斷值，其中狀變量為本研究試劑的樣品檢測(cè)結(jié)果（Ct值，分析時(shí)對(duì)無Ct值的未檢出結(jié)果賦值為最大循環(huán)Ct值采用專業(yè)性和特異性，選擇約登指數(shù)（YoudenIndex，敏感性+特異性-1）最大時(shí)對(duì)應(yīng)的檢陽(yáng)性判斷值宜根據(jù)相關(guān)的功效和方差系數(shù)的特定置信區(qū)間確定。在開發(fā)SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑盒的過程中，試劑盒的性能和穩(wěn)定性參數(shù)宜根據(jù)預(yù)先確定的驗(yàn)證和確認(rèn)方案進(jìn)行評(píng)估。為確保測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，宜選擇預(yù)期適用人群的臨床標(biāo)本進(jìn)行SARS-CoV-2的檢測(cè)，并根據(jù)研究要求選擇適當(dāng)數(shù)量的樣本進(jìn)行檢測(cè)（參見）。精密度驗(yàn)證研究宜統(tǒng)計(jì)分析間和分析內(nèi)的變異，然后將其合并，能確定檢測(cè)的整體變異情況（參見）。重復(fù)性宜在短時(shí)間內(nèi)于相同實(shí)驗(yàn)室、相同操作人員、相同設(shè)備上對(duì)相同方法的同一測(cè)試項(xiàng)目（如標(biāo)本基質(zhì)、模擬樣本、人工基質(zhì)）進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。建議按照設(shè)計(jì)輸入規(guī)定的驗(yàn)證方案，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試。也能稱為“批內(nèi)精密度”、“分析內(nèi)精密度”或“測(cè)定內(nèi)精密度”。必要時(shí)，宜按照驗(yàn)證方案所述，在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)于相同實(shí)驗(yàn)室，相同操作人員、相同設(shè)備上對(duì)相同方法的同一測(cè)試項(xiàng)目（如標(biāo)本基質(zhì)、模擬樣本、人工基質(zhì)）進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，以評(píng)估中間精密度。再現(xiàn)性宜通過不同操作人員和不同設(shè)備對(duì)相同方法的同一測(cè)試項(xiàng)目（如標(biāo)本基質(zhì)、模擬樣本、人工基質(zhì)）進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。也可稱為“實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性”。分析特異性驗(yàn)證宜考慮使用最高臨床相關(guān)生物水平的測(cè)試標(biāo)本（）。測(cè)試樣本能通過在臨床陰性標(biāo)本基質(zhì)中添加培養(yǎng)分離物或添加經(jīng)官方認(rèn)證方法確認(rèn)為陽(yáng)性的其他臨床標(biāo)本制備獲得。交叉反應(yīng)宜采用臨床感染中醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的微生物濃度進(jìn)行驗(yàn)證。穩(wěn)定性研究宜用于試劑或LDT試劑有效期的確認(rèn)。研究宜確保試劑在聲稱的有效期內(nèi)符合聲稱的性能指標(biāo)。試劑宜置于真實(shí)或模擬運(yùn)輸條件下進(jìn)行效期研究。研究的條件宜包括試劑在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過程中可能暴露的極端條件（如溫度、濕度、振動(dòng)、壓力）。試劑緊急使用時(shí)，由于時(shí)間有限，并非所有研究都能完成。宜制定研究完成的計(jì)劃，確保產(chǎn)品上市GB/TXXXXX—XXXX/ISO/TS5798:2022后能繼續(xù)進(jìn)行穩(wěn)定性研究。在實(shí)際操作中，宜使用已知分析物濃度的參考物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。試劑宜參考ISO23640[22]確定有效期。建議試劑在聲稱的運(yùn)輸條件下，在運(yùn)輸前后對(duì)參考物質(zhì)進(jìn)行測(cè)試，以評(píng)估試劑在運(yùn)輸后的穩(wěn)定性。試劑在使用過程中可能會(huì)經(jīng)歷多次凍融，宜測(cè)定試劑的凍融穩(wěn)定性。建議使用經(jīng)過反復(fù)凍融的試劑對(duì)參考物質(zhì)進(jìn)行測(cè)試，以確定不影響試劑性能的情況下可允許的最大凍融次數(shù)。試劑經(jīng)過不同時(shí)間、不同儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件后宜對(duì)試劑性能進(jìn)行評(píng)估，同時(shí)還宜充分考慮客戶端的運(yùn)輸路線、工具和轉(zhuǎn)運(yùn)方式對(duì)試劑穩(wěn)定性的影響。開發(fā)LDT的規(guī)劃階段應(yīng)通常包括設(shè)計(jì)階段和可行性測(cè)試階段。在可行性階段，宜收集初步性能數(shù)據(jù)，然后根據(jù)GB/T39367.1—2020[5]中的描述，利用故障排除和優(yōu)化流程來確定性能指標(biāo)，并制定有用的驗(yàn)證程序。制造商宜評(píng)估SARS-CoV-2NAAT能為醫(yī)療和公共衛(wèi)生決策提供哪些信息，以及如何驗(yàn)證和確認(rèn)檢測(cè)性能指標(biāo)是否符合該目標(biāo)。檢測(cè)性能指標(biāo)包括但不限于檢出限、分析特異性、可報(bào)告范圍、穩(wěn)健性、干擾物質(zhì)、臨床靈敏度和臨床特異性。在進(jìn)行全面臨床驗(yàn)證之前，宜對(duì)制造商的數(shù)據(jù)進(jìn)行審查，以評(píng)估分子檢測(cè)試劑盒是否符合監(jiān)管當(dāng)局根據(jù)特定程序的緊急授權(quán)使用。檢測(cè)性能驗(yàn)證是認(rèn)定、證實(shí)監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的體外診斷試劑的