2014年微米大黃炭治療胃潰瘍出血作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究【藥學(xué)論文】

1/12014年微米大黃炭治療胃潰瘍出血作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究【藥學(xué)論文】藥學(xué)論文-微米大黃炭治療胃潰瘍出血作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究作者：

時(shí)昭紅，張介眉，張書，馮云霞，侯光華【摘要】【目的】探討微米大黃炭治療胃潰瘍出血的止血作用機(jī)制。

【方法】選用昆明種小鼠和SD大鼠為研究對(duì)象，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、云南白藥組（劑量為9gkg-1d-1）和微米大黃炭高、中、低劑量組（劑量分別為8、4、2gkg-1d-1），灌胃給藥6d后檢測(cè)小鼠出、凝血時(shí)間及血小板計(jì)數(shù)；測(cè)定大鼠血小板功能及纖溶活性等指標(biāo)。

【結(jié)果】與空白對(duì)照組比較，微米大黃炭各劑量組均能縮短小鼠出、凝血時(shí)間（Ｐ＜００1），增加血小板計(jì)數(shù)（Ｐ＜００5或Ｐ＜００1），提高大鼠血小板聚集性，上調(diào)血栓烷素B2（TXB2）而下調(diào)6酮前列腺素F1（6ketoPGF1）水平（Ｐ＜００５或Ｐ＜００1），升高血小板顆粒膜蛋白140（GMP140）含量（Ｐ＜００5或Ｐ＜００1）；縮短大鼠凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）（Ｐ＜００1），而對(duì)組織型纖溶酶原激活劑（tPA）和組織型纖溶酶原抑制劑（PAI1）活性無顯著影響（Ｐ＞００５）。

【結(jié)論】通過激活內(nèi)源性和外源性途徑的多種凝血因子而促進(jìn)凝血過程中的凝血酶原和凝血活酶的生成，增加血小板計(jì)數(shù)和聚集性可能是微米大黃炭止血的重要作用機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】微米大黃炭/藥理學(xué)；胃腸出血/中藥療法；疾病模型，動(dòng)物；大鼠；小鼠微米大黃炭為武漢市第一醫(yī)院治療消化性潰瘍并出血的新型中藥制劑，臨床運(yùn)用療效確切［1］。

本研究觀察了該制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物凝血時(shí)間、血液凝固系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)及血小板的影響，闡明其治療胃潰瘍出血的止血作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法11藥物微米大黃炭由武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑科制備（批號(hào)：

200506）；云南白藥由云南白藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：

20051113）。

12動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠180只，體質(zhì)量（202）g，雌雄各半，由同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，合格證號(hào)：

SCXK（鄂）20040007；清潔級(jí)SD大鼠100只，體質(zhì)量200~250g，雌雄各半，由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：

SCXK（鄂）20040007。

13試劑與儀器大鼠組織型纖溶酶原激活劑及其抑制劑（tPA/PAI1）試劑盒及血小板顆粒膜蛋白140（GMP140）試劑盒均由大連泛邦化工有限公司提供；125I6酮前列腺素F1（6ketoPGF1）放射免疫分析藥盒、125I血栓烷素B2（TXB2）放射免疫分析藥盒均購(gòu)自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：

20060725）；LBYNJ2型血液凝聚儀（北京普利生公司產(chǎn)品）；MK3型Thermo酶標(biāo)儀（上海熱電儀器有限公司）；DFM96型多管放射免疫計(jì)數(shù)器（合肥眾成機(jī)電技術(shù)公司）。

14指標(biāo)檢測(cè)141凝血時(shí)間和出血時(shí)間的測(cè)定取昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為微米大黃炭低、中、高劑量組（簡(jiǎn)稱大黃炭低、中、高劑量組），云南白藥組和空白對(duì)照組5組，每組12只，大黃炭低、中、高劑量組分別以2、4、8gkg-1d-1劑量灌胃給藥，云南白藥組給予云南白藥，劑量為9gkg-1d-1，空白對(duì)照組給予等容積生理鹽水。

連續(xù)給藥6d，1次/d。

于末次給藥1h后，按毛細(xì)血管法［2］測(cè)定凝血時(shí)間，以斷尾法［3］記錄小鼠出血時(shí)間。

142血小板計(jì)數(shù)的測(cè)定取昆明種小鼠60只，分組方法及給藥方法同141，每組12只，于末次給藥1h后摘取右側(cè)眼球取血05mL，在全自動(dòng)血小板計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)。

143血小板凝集性測(cè)定取SD大鼠50只，雌雄各半，分組方法及給藥方法同141，每組10只。

于末次給藥05h后，30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血18mL，按說明書要求分離富含血小板血漿（PRP）和血小板血漿（PPP），分別置于比色杯中，調(diào)整好透光度后，將誘導(dǎo)劑二磷酸腺苷（ADP）2mol(1mol/mL)加入PRP中，記錄濁度改變曲線及最大聚集率（pMA/%）。

144TXB2、6ketoPGF1及血小板GMP140含量測(cè)定取清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同141，每組10只。

末次給藥后05h后，按002mL/kg劑量腹腔內(nèi)注射20mg/L戊巴比妥鈉麻醉，心臟穿刺取血2mL，用消炎痛乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2）抗凝備檢，以3000r/min離心10min，分離血漿，嚴(yán)格按試劑盒說明書步驟操作，采用放射免疫法測(cè)定TXB2和6ketoPGF1含量，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法測(cè)定GMP140含量。

145組織型纖溶酶原激活劑（tPA）及其抑制劑（PAI1）水平測(cè)定取清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同141，每組10只。

末次給藥后1h，以30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血2mL，用EDTANa2抗凝備檢，3500r/min離心15min，分離血漿，采用ELISA法檢測(cè)tPA、PAI1水平。

146凝血酶原時(shí)間（PT）和活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)定取清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法同141，每組10只。

末次給藥后1h,以30mg/L戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心臟穿刺取血18mL，38mg/L枸椽酸鈉（與血液容積比為1∶9）抗凝，以3000r/min離心10min分離血漿后，在全自動(dòng)血凝分析儀上檢測(cè)PT和APTT值。

15統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果21各組對(duì)小鼠出、凝血時(shí)間及血小板計(jì)數(shù)的影響表1結(jié)果顯示，大黃炭高、中、低劑量組和云南白藥組均能縮短小鼠出、凝血時(shí)間，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜001）；與云南白藥組比較，大黃炭高劑量組作用顯著（P＜005）。

各給藥組均能顯著提高小鼠血小板計(jì)數(shù)（P＜005），其中大黃炭高、中劑量組作用顯著（P＜001）；與云南白藥組比較，大黃炭高劑量組可顯著提高小鼠血小板計(jì)數(shù)（P＜005）。

22各組對(duì)大鼠血小板聚集性及TXB2、6ketoPGF1、GMP140含量的影響表2結(jié)果顯示，各給藥組均能顯著提高血小板最大聚集率及TXB2、GMP140含量（P＜005或P＜001），顯著降低6ketoPGF1含量（P＜005或P＜001），大黃炭低、中、高劑量作用呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，且大黃炭高劑量組除GMP140含量外，作用均優(yōu)于云南白藥組（P＜005）。

23各組對(duì)大鼠PT、APTT和tPA、PIA1活性的影響表3結(jié)果顯示，各給藥組均可顯著縮短大鼠PT、APTT（P＜001）,且大黃炭中、高劑量組縮短PT的作用優(yōu)于云南白藥組（P＜005），但大黃炭各劑量組對(duì)tPA及PAI1活性無顯著影響（P＞005）。

表1各組對(duì)小鼠出、凝血時(shí)間及血小板計(jì)數(shù)的影響表2各組對(duì)大鼠血小板凝集性及TXB2、6ketoPGF1、GMP140含量的影響3討論大黃止血最早文獻(xiàn)記載于漢代張仲景《傷寒論》，臨床運(yùn)用于各種血證，故有血證要藥之稱。

《血證論》中亦云：

大黃一味，既是氣藥，又是血藥，止血而不留瘀，尤為妙藥。

大黃有效止血成分單體d兒茶素和沒食子酸為闡述大黃止血功能提供了物質(zhì)依據(jù)［4］。

根據(jù)中藥燒炭存性的原理［5］，我們?cè)诓捎矛F(xiàn)代超微粉碎技術(shù)與傳統(tǒng)炮制技術(shù)相結(jié)合的基礎(chǔ)上研制新型中藥制劑，該藥物采用超微粉碎儀將大黃炭粉碎過200目篩制成微米中藥，使其在保持原有藥性的基礎(chǔ)上又最大限度地提高藥物的吸收和生物利用度，同時(shí)縮短了藥物的起效時(shí)間。

凝血時(shí)間可反映內(nèi)源性凝血途徑凝血因子的活性，活化部分凝血活酶時(shí)間的測(cè)定亦是用于檢測(cè)對(duì)內(nèi)源性凝血途徑的影響，涉及因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ等多種凝血因子的功能，而凝血酶原時(shí)間測(cè)定主要用于檢測(cè)外源性途徑的有關(guān)因子，因而可反映藥物對(duì)外源性凝血途徑的作用［6］。

本文結(jié)果表明，微米大黃炭組的凝血時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間以及凝血酶原時(shí)間均顯著縮短，說明其對(duì)內(nèi)源性和外源性凝血途徑的多種凝血因子具有可靠的激活作用而實(shí)現(xiàn)內(nèi)促凝血。

正常止血與凝血機(jī)制包括血管壁、血小板和凝血因子等多方面的作用，而血小板的黏附、聚集作用在止血初期具有重要意義［7］。

TXA2是目前已發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)與血小板聚集劑之一［8］。

PGI2則是較強(qiáng)的血小板功能的抑制劑，具有抑制血小板的黏附、聚集和釋放反應(yīng)，抑制血小板的促凝活性等作用［9］。

PGI2和TXA2之間的動(dòng)態(tài)平衡是維持正常止血功能的基礎(chǔ)，血小板與血管壁接觸時(shí)被激活，合成和釋放TXA2并促進(jìn)血小板聚集，而血管壁利用自身或外源性的花生四烯酸合成PGI2。

由于TXA2和PGI2的半衰期很短，一般將TXA2和PGI2穩(wěn)定的代射產(chǎn)物TXB2和6ketoPGF1作為判斷其濃度的指標(biāo)［10］。

而血漿GMP140是目前所知較能反映血小板活化和釋放反應(yīng)的特異性標(biāo)記物［11］。

本研究結(jié)果表明，微米大黃炭能顯著提高大鼠血小板聚集性，且高劑量組作用最為顯著，效果優(yōu)于云南白藥。

通過TXB2和6ketoPGF1含量的檢測(cè)證實(shí)，微米大黃炭高劑量組能顯著提高大鼠TXB2的含量同時(shí)下調(diào)6ketoPGF1的含量，且調(diào)節(jié)作用優(yōu)于云南白藥，說明微米大黃炭活化血小板的作用優(yōu)于云南白藥。

而在對(duì)GMP140的檢測(cè)中亦證實(shí)了這一點(diǎn)。

在纖溶系統(tǒng)中，產(chǎn)生于血管內(nèi)皮細(xì)胞的組織型纖溶酶原激活劑（tPA）及其抑制劑（PAI1）發(fā)揮重要作用［12］。

tPA能選擇性地激活纖溶酶原形成纖溶酶，繼而催化纖維蛋白水解。

PAI1是tPA活性主要的生理性抑制劑，PAI1能快速與tPA結(jié)合，形成1∶1復(fù)合物而使tPA失活。

tPA與PAI1在纖溶系統(tǒng)激活過程中起著相互拮抗的作用［13］。

在對(duì)tPA及PAI1活性的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，微米大黃炭對(duì)大鼠tPA及PAI1活性無顯著影響，提示微米大黃炭的止血作用與纖溶活性無關(guān)。

因此我們初步認(rèn)為，通過激活內(nèi)源性和外源性途徑的多種凝血因子而促進(jìn)凝血過程中的凝血酶原和凝血活酶的生成，同時(shí)增加血小板計(jì)數(shù)和聚集性可能是微米大黃炭止血作用的重要作用機(jī)制。

【參考文獻(xiàn)】［1］時(shí)昭紅，張書，胡偉，等.微米大黃炭胃鏡下噴灑治療消化性潰瘍出血的臨床觀察［J］.內(nèi)科急危重癥雜志,2007,13(3):134.［2］KooYJ,TaylorNH,HelyDY,etal.Endometrialcellproliferationinthewomenfollowingendometrialablation［J］.HumReprod,1996,11(5):1067.［3］AbbertonKM,TayiorNH,HealyDL,etal.Vascularsmoothmusclecellproliferationinarteriolesofthehumanendometrium［J］.HumReprod,1999,14(4):1072.［4］陳燕,趙輝,謝銳.大黃的藥理及臨床研究近況［