高考生物一輪復(fù)習(xí)課時(shí)作業(yè)三十五微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用含解析新人教版

一輪復(fù)習(xí)精品資料(高中)PAGE1-微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用(30分鐘100分)1.(10分)(2021·瀘州模擬)纖維素酶是一種重要的酶產(chǎn)品,目前關(guān)于常溫和高溫纖維素酶菌株研究得較多,但有些地方氣溫低,需要應(yīng)用低溫產(chǎn)纖維素酶的菌株。某實(shí)驗(yàn)小組通過(guò)實(shí)驗(yàn)室微生物篩選方法,篩選到了低溫纖維素分解菌,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)纖維素分解菌是能產(chǎn)生纖維素酶的微生物,纖維素酶是復(fù)合酶,其中包括__________和葡萄糖苷酶。纖維素分解菌也能以葡萄糖為碳源,但是實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)纖維素分解菌的培養(yǎng)基一般選用纖維素粉而不選用葡萄糖:該培養(yǎng)基不選用葡萄糖作為碳源的原因是__

_______________________。

(2)自然界中許多真菌能產(chǎn)生胞外纖維素分解酶,其分解纖維素的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于細(xì)菌,真菌與細(xì)菌相比結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是______________________________。若要分離出低溫條件下能分解纖維素的真菌,為了防止其他微生物的繁殖,可采取的措施是__

__________________-__(至少答出兩點(diǎn))。

(3)為方便鑒定、篩選和計(jì)數(shù),將菌液接種到培養(yǎng)基上的一般方法為_(kāi)_____________________。

〖解析〗(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶,至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三種組分,前兩種酶可以將纖維素分解為纖維二糖,葡萄糖苷酶可以將纖維二糖進(jìn)一步分解為葡萄糖。葡萄糖是多數(shù)微生物均可利用的碳源,用葡萄糖作為碳源易造成雜菌污染,因此不選用葡萄糖作為碳源。(2)真菌屬于真核生物,與原核生物相比,其在結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是有以核膜為界限的細(xì)胞核。若要分離出低溫條件下能分解纖維素的真菌,同時(shí)為了防止其他微生物的繁殖,可采取的措施有:制備以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基,并加入一定量的抗生素,在低溫環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。(3)為方便鑒定、篩選和計(jì)數(shù),可選擇稀釋涂布平板法接種菌液?！即鸢浮?(1)C1酶、Cx酶微生物普遍可利用葡萄糖作為碳源,其他微生物也可大量繁殖,易造成雜菌污染(2)具有以核膜為界限的細(xì)胞核在低溫環(huán)境下培養(yǎng);培養(yǎng)基以纖維素為唯一碳源;培養(yǎng)基中加入定量的抗生素(回答出兩項(xiàng)即可)(3)稀釋涂布平板法2.(11分)(2021·龍巖模擬)大腸桿菌是國(guó)際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌,用于指示食品、飲用水等是否直接或間接受到了糞便的污染。少數(shù)微生物能分解乳糖,有些只產(chǎn)酸(酸性物質(zhì)),有些只產(chǎn)氣(氣體),而大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,且產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色。某小組為檢測(cè)某水體中大腸桿菌的污染狀況,選用了如下兩種培養(yǎng)基。培養(yǎng)基名稱配方(L-1)pH乳糖蛋白胨培養(yǎng)基蛋白胨10g,乳糖5g,牛肉膏3g7.4伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基蛋白胨10g,乳糖10g,KH2PO45g,伊紅0.47.4回答下列問(wèn)題:(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型__________(填“相同”或“不同”)。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,為微生物的生長(zhǎng)提供氮源的物質(zhì)有__________;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,還具有________________的作用。

(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121℃高壓滅菌15min的方法,而是選用115℃滅菌20min,(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色。若出現(xiàn)__________時(shí),則〖提示〗水樣可能被大腸桿菌污染。

(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有__________、__________。

〖解析〗(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型不同,乳糖蛋白胨培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基,伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,蛋白胨、牛肉膏含有豐富的蛋白質(zhì),為微生物的生長(zhǎng)提供氮源;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,Na+還具有維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定的作用。(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121℃高壓滅菌15min的方法,而是選用115℃滅菌20min,推測(cè)可能的原因是培養(yǎng)基中有不耐高溫(121℃(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色,大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,若出現(xiàn)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣,則〖提示〗水樣可能被大腸桿菌污染。(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有:大腸桿菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色,故應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落,缺少不接種的空白對(duì)照,未排除其他因素的干擾?！即鸢浮?(1)不同蛋白胨、牛肉膏維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定(2)培養(yǎng)基中有不耐高溫(121℃(3)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣(4)應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落缺少不接種的空白對(duì)照〖易錯(cuò)警示〗不是所有微生物培養(yǎng)基中均需加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)碳源、氮源、水分、無(wú)機(jī)鹽是微生物生長(zhǎng)必需的四大營(yíng)養(yǎng)成分,有些微生物可自行合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而對(duì)那些合成能力有限或不能合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的微生物(如乳酸菌),則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等物質(zhì)。3.(12分)(創(chuàng)新性·乳酸發(fā)酵過(guò)程中的種間關(guān)系)(2021·石家莊模擬)乳酸菌是一類能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱。這類細(xì)菌在自然界分布極為廣泛,具有豐富的物種多樣性,廣泛存在于人體的腸道中,大部分具有改善腸道消化功能的作用,是最具代表性的腸內(nèi)益生菌。某研究者對(duì)市場(chǎng)上常見(jiàn)酸奶中的乳酸菌進(jìn)行分離純化,分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)培養(yǎng)乳酸菌時(shí),根據(jù)其代謝類型,除了在培養(yǎng)液中添加必需的營(yíng)養(yǎng)外,還應(yīng)在______條件下培養(yǎng);乳酸菌培養(yǎng)液中常含有一定濃度的葡萄糖,但當(dāng)葡萄糖濃度過(guò)高時(shí),反而抑制乳酸菌的生長(zhǎng),原因是__________。

(2)在接種前要對(duì)配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行______________,其目的是__________。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)通過(guò)__________法滅菌后再倒掉,防止殘留的微生物污染環(huán)境。

(3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍__________的大小,對(duì)分離出的高效菌株需要長(zhǎng)期保存,采用的方法為_(kāi)_________________。

(4)在制作泡菜過(guò)程中,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸可以抑制異種微生物的生長(zhǎng),這種現(xiàn)象中包括的種間關(guān)系、種內(nèi)關(guān)系有__________。

〖解析〗(1)乳酸菌為厭氧微生物,所以要在無(wú)氧條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)液中葡萄糖的濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致乳酸菌細(xì)胞發(fā)生滲透失水,從而抑制乳酸菌的生長(zhǎng)。(2)配制好的培養(yǎng)基在接種前一般要進(jìn)行滅菌,目的是殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌等微生物,以防雜菌對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)通過(guò)高壓蒸汽滅菌后再倒掉,防止殘留的微生物污染環(huán)境。(3)乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣,使培養(yǎng)基變得透明,所以可根據(jù)菌落周圍透明圈的大小來(lái)篩選出高效菌株。為了保持菌種的純凈,對(duì)于長(zhǎng)期需要保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。(4)“在制作泡菜時(shí),乳酸菌產(chǎn)生的乳酸可以抑制異種微生物的生長(zhǎng)”,異種微生物和乳酸菌之間屬于種間關(guān)系,所以屬于競(jìng)爭(zhēng);“乳酸菌產(chǎn)生的乳酸”,屬于乳酸菌之間的共同協(xié)作,產(chǎn)生乳酸抑制其他微生物的生長(zhǎng),所以屬于種內(nèi)互助?！即鸢浮?(1)無(wú)氧細(xì)胞失水(2)滅菌防止雜菌污染高壓蒸汽滅菌(3)透明圈甘油管藏法(4)種內(nèi)互助、競(jìng)爭(zhēng)〖知識(shí)總結(jié)〗菌種保存方法方法臨時(shí)保存法甘油管藏法適用對(duì)象頻繁使用的菌種長(zhǎng)期保存的菌種培養(yǎng)基類型固體斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基溫度4-20保存菌落長(zhǎng)成后放冰箱中保存,每3～6個(gè)月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后放冷凍箱內(nèi)保存缺點(diǎn)菌種易被污染或產(chǎn)生變異4.(14分)(創(chuàng)新性·高效分解油脂的微生物篩選)(2021·黃岡模擬)隨著人們生活質(zhì)量的提高,餐飲含油脂廢水的排放量大量增加,合理處置油脂廢水也成為新的課題。已知芽孢桿菌中有多種分解油脂產(chǎn)酸的菌種,科研人員欲采用下列流程篩選出能高效分解油脂的微生物。菌種取樣→分離培養(yǎng)→菌株的篩選→形態(tài)特征觀察和生理生化反應(yīng)鑒定?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)選取飯店附近排污渠的含油脂廢水作為樣本,采樣約10g,立即裝于試管內(nèi),此試管使用前需要經(jīng)過(guò)__________(2)樣品分離培養(yǎng)前,一般需要將菌液進(jìn)行__________處理,然后吸取0.2mL菌液涂布到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h,記錄菌落總數(shù)。將分離出的菌株按照菌落的________________________(3)上述步驟篩選出的菌株分別接種到含“花生油”的瓊脂培養(yǎng)基平板上,37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,篩選出油脂降解菌,培養(yǎng)基中“花生油”為菌種繁殖提供__________。該培養(yǎng)基還需要加入中性紅染料(中性紅為脂溶性染料,遇酸為紅色,遇堿為黃色),挑選菌株要挑選顯__________降解圈的菌株,并且選顏色較__________(填“深”或“淺”)(4)實(shí)際操作中,由于油脂易聚集成液滴,常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻,鑒定效果更好,試分析原因_______________________。

〖解析〗(1)微生物實(shí)驗(yàn)需要無(wú)菌操作,所以試管使用前需要經(jīng)過(guò)滅菌處理。(2)菌液一般需要先經(jīng)過(guò)稀釋處理,再進(jìn)行涂布。不同微生物菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色不同,所以可以根據(jù)菌落的特征初步分類。(3)花生油的主要成分是脂肪,所以為菌種提供碳源和能源。脂肪可以被分解為甘油和脂肪酸,使培養(yǎng)基呈酸性,所以選擇紅色降解圈的菌株,顏色較深的脂肪酸含量越高,說(shuō)明分解能力越強(qiáng)。(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定?！即鸢浮?(1)滅菌(2)稀釋形狀、大小、隆起程度和顏色(3)碳源和能源紅色深(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定5.(15分)(2021·雅安模擬)有研究者擬從中藥渣肥堆的樣本中篩選高產(chǎn)纖維素酶菌株,為纖維素酶制劑的研制提供原料。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)從中藥渣肥堆中能分離出纖維素分解菌的原因是

__________________。

纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶,纖維素酶由__________________________________________組成。

(2)從中藥渣肥堆中取樣后,需要選擇培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是________________;選擇培養(yǎng)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)瓶定期振蕩,其目的是__________________________。

(3)篩選獲得纖維素酶高活性菌株3株,分別命名為Z-1、Z-2和Z-3。在相同培養(yǎng)基培養(yǎng)相同時(shí)間后,測(cè)得3種菌株的菌落直徑與產(chǎn)生的透明圈直徑結(jié)果如表:菌株編碼菌落直徑(d)/cm透明圈直徑(D)/cmD/dZ—13.435.431.58Z—21.834.862.66Z—32.154.882.27培養(yǎng)基中的纖維素能與____________________產(chǎn)生紅色復(fù)合物,纖維素被分解后,就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。由表中可知,____________________菌株纖維素酶的活性最強(qiáng)。

〖解析〗(1)纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中,而中藥渣富含纖維素,因此從中藥渣肥堆中能分離出纖維素分解菌。纖維素酶是一種復(fù)合酶,由C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶組成。(2)從中藥渣肥堆中取樣后,為了能夠從樣品中分離得到所需要的纖維素分解菌,需要選擇培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是增加纖維素分解菌的數(shù)量。振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量,同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。(3)剛果紅可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被纖維素酶水解后,剛果紅-纖維素復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。透明圈直徑和菌落直徑的比值表示纖維素酶的活性,據(jù)此分析表中信息可知:Z-2菌株的透明圈直徑和菌落直徑的比值最大,所以Z-2菌株纖維素酶的活性最強(qiáng)?！即鸢浮?(1)纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中,而中藥渣富含纖維素C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶(2)增加目的(纖維素分解)菌的數(shù)量增加培養(yǎng)液內(nèi)的氧氣含(溶解)量、讓培養(yǎng)液與菌體充分接觸(3)剛果紅Z-26.(10分)(2021·江西模擬)新冠病毒疫情過(guò)后,復(fù)工復(fù)學(xué)面臨的問(wèn)題有許多。全體師生需要做好自我防護(hù),戴口罩屬于切斷傳播途徑,還有一條重要的切斷傳播途徑就是消毒。關(guān)于對(duì)微生物的培養(yǎng)、消毒、滅菌,回答下列問(wèn)題:(1)常用的消毒方法有______________________________________(列舉三點(diǎn)),消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括__________。

(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,過(guò)程中要進(jìn)行規(guī)范的無(wú)菌操作,除了防止雜菌污染,還有什么目的?_________________________。

(3)興趣小組想要分離純化土壤中的類地青霉,應(yīng)選用“查氏”培養(yǎng)基。培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至__________。

(4)興趣小組可用______法純化并統(tǒng)計(jì)土壤中的大腸桿菌。測(cè)定微生物數(shù)量還可用__________和__________。若要臨時(shí)保藏該細(xì)菌,先將菌種接種到試管中的__________培養(yǎng)基中,在4℃〖解析〗(1)消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括芽孢和孢子,常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,調(diào)查過(guò)程中需要進(jìn)行無(wú)菌操作,這樣不僅能防止雜菌污染培養(yǎng)物,還能有效保護(hù)操作者自身不被微生物感染。(3)查氏培養(yǎng)基主要用于真菌的培養(yǎng)。真菌適合在酸性條件下培養(yǎng),因此培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至酸性。(4)稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)和濾膜法都可用于微生物計(jì)數(shù),但只有稀釋涂布平板法不僅能純化并且能統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量,因此要純化和分離土壤中的大腸桿菌要用稀釋涂布平板法進(jìn)行。菌種臨時(shí)保藏的做法是先將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基中,然后在合適的溫度條件下培養(yǎng),當(dāng)菌落長(zhǎng)成后,將試管放在4℃〖答案〗:(1)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法芽孢和孢子(2)能有效避免操作者自身被微生物感染(3)酸性(4)稀釋涂布平板顯微鏡直接計(jì)數(shù)濾膜法固體斜面7.(10分)某工廠周邊的河水中含有一種有害的難降解的物質(zhì)W,研究人員用化合物W、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功篩選到能高效降解化合物W的細(xì)菌(目的菌)。(1)該實(shí)驗(yàn)制備的培養(yǎng)基在功能上屬于________培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)上的特點(diǎn)是______________________________。培養(yǎng)基的滅菌方法是__________。

(2)為了檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格,常用的實(shí)驗(yàn)思路是______________________________________________。

(3)可根據(jù)__________(至少填2項(xiàng))等菌落特征初步判斷培養(yǎng)基上菌種的類型。

(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉,這樣做的目的是_______________________________。

(5)將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1L含20mg有機(jī)化合物W的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)(培養(yǎng)液中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充裕、條件適宜)觀察從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到微生物停止生長(zhǎng)所用的時(shí)間,甲、乙、丙分別為18小時(shí)、40小時(shí)、25小時(shí),則應(yīng)選擇微生物__________(填“甲”“乙”或“丙”)作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng),理由是________________________________________________〖解析〗(1)本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選到能高效降解化合物W的細(xì)菌(目的菌),因此選用的培養(yǎng)基從功能上屬于選擇培養(yǎng)基;培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽,因此化合物W在該培養(yǎng)基中作為碳源和氮源;常用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。(2)將若干未接種的(空白)培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生,可用于檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格。(3)菌落的特征包括菌落的大小、形狀、隆起程度和顏色等。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉,是為了避免雜菌對(duì)環(huán)境造成污染。(5)微生物停止生長(zhǎng)意味著化合物W被分解完,甲菌種需要的時(shí)間比乙、丙短,說(shuō)明微生物甲分解化合物W的能力比乙、丙強(qiáng)?！即鸢浮?(1)選擇以化合物W為唯一碳源、氮源高壓蒸汽滅菌法(2)將若干未接種的(空白)培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(3)菌落的大小、形狀、隆起程度和顏色(4)避免雜菌對(duì)環(huán)境造成污染(5)甲微生物甲分解化合物W的能力比乙、丙強(qiáng)〖加固訓(xùn)練〗(2021·沈陽(yáng)三模)某生物興趣小組,進(jìn)行土壤中尿素分解菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)實(shí)驗(yàn)原理:尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,可是并不能直接被農(nóng)作物吸收,需要轉(zhuǎn)變成氨,才能被吸收,這個(gè)轉(zhuǎn)變依賴于土壤中能產(chǎn)生__________的微生物的作用。(2)實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果分析:Ⅰ:配制培養(yǎng)基(成分:葡萄糖、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、尿素、Y、H2O、瓊脂),并制作無(wú)菌平板;Ⅱ:設(shè)置__________組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;Ⅲ:將各組平板置于恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。①為了更好地鑒別出此類微生物,在培養(yǎng)基配方中加入了Y,Y是__________。②為了對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),需要用________法進(jìn)行接種。具體情況如圖:③恒溫培養(yǎng)48小時(shí)后,在稀釋倍數(shù)為105下,平板上的菌落數(shù)目在30～300之間,小組成員進(jìn)行統(tǒng)計(jì),應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為_(kāi)_________菌落進(jìn)行記數(shù)。統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板的菌落數(shù)目,分別為68、73、87,則錐形瓶中每毫升稀釋液中,尿素分解菌的活菌數(shù)為_(kāi)_________。Ⅳ:實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:興趣小組的同學(xué)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),除了上述統(tǒng)計(jì)的菌落外,還發(fā)現(xiàn)有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,試分析這些菌落產(chǎn)生的可能原因(答出一點(diǎn)即可)

__。

(3)欲將上述實(shí)驗(yàn)得到的尿素分解菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存,可采用__________的方法?！冀馕觥?1)尿素分解菌能產(chǎn)生脲酶將尿素分解成氨,土壤中的尿素只有被分解成氨后才能被植物吸收利用,因此可用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)分離尿素分解菌。(2)Ⅱ:為檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到雜菌污染,需要設(shè)置空白對(duì)照組。Ⅲ:①細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,因此可以通過(guò)檢查培養(yǎng)基的pH變化來(lái)鑒別尿素分解菌的存在,在培養(yǎng)基配方中加入的Y可以是酚紅指示劑。②分析圖示實(shí)驗(yàn)過(guò)程可知,采用了稀釋涂布平板法進(jìn)行接種,用于計(jì)數(shù)土壤稀釋液中尿素分解菌的數(shù)量。③當(dāng)尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶將尿素分解為氨后,使pH升高,酚紅指示劑會(huì)變紅,因此應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為紅色的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。在稀釋倍數(shù)為105下,三個(gè)平板的菌落數(shù)目分別為68、73、87,因此錐形瓶中每毫升稀釋液中尿素分解菌的活菌數(shù)為(68+73+87)÷3×105=7.6×106個(gè)。Ⅳ:有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,說(shuō)明這些細(xì)菌不能產(chǎn)生脲酶進(jìn)而利用尿素作為氮源,而氮源為微生物生長(zhǎng)所必需的,因此可推測(cè)可能存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨(不與指示劑作用),所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法?！即鸢浮?(1)脲酶(2)空白對(duì)照酚紅指示劑稀釋涂布平板紅色的7.6×106個(gè)存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨(不與指示劑作用),所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化(3)甘油管藏

8.(9分)(2021·湖南模擬)對(duì)牛奶消毒,常采用巴氏消毒,為檢測(cè)細(xì)菌含量變化情況,做如圖1所示操作。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:(1)巴氏消毒的方法是__________,使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是_____________________________。

(2)取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,應(yīng)選擇的涂布工具是圖2中的____________________________。

(3)圖1中所示方法為稀釋涂布平板法。理想情況下。培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿,菌落數(shù)分別為38個(gè)、42個(gè)、40個(gè),則可以推測(cè)生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為_(kāi)_________個(gè),運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值__________(填“偏大”或“偏小”),原因是__。

(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在操作步驟上應(yīng)做什么改動(dòng)?__。

(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌,從中檢測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入__________,菌落具有__________特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。

〖解析〗(1)常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。巴氏消毒的方法是指在70～75℃煮30min或在80(2)將液體菌種接種在固體培養(yǎng)基上常用的方法主要是稀釋涂布平板法,取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,所用的接種工具是涂布器。即圖2中的B。(3)圖1中所示方法為稀釋涂布平板法。由于圖中稀釋了104倍,則牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為(38+42+40)÷3÷0.1×104=4×106個(gè)。由于經(jīng)此方法接種培養(yǎng)時(shí)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落重疊在一起時(shí)按一個(gè)菌落計(jì)算,所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏小。原因是個(gè)別菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成。(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,由于細(xì)菌數(shù)目減少,故應(yīng)稀釋次數(shù)減少。(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌,為檢測(cè)大腸桿菌采用的方法是在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基,若菌落具有(金屬光澤的紫)黑色特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌?！即鸢浮?(1)在70～75℃煮30min(或在80℃煮15min)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞(2)B(3)4×10〖易錯(cuò)提醒〗平板劃線操作的三個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進(jìn)行取種,以免溫度太高殺死菌種。(2)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(3)劃線時(shí)用力要大小適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。9.(9分)(2021·眉山模擬)多氯聯(lián)苯是一種對(duì)人體有很大危害的有機(jī)物質(zhì),呈油狀液體,污染土壤后,很難清除。研究發(fā)現(xiàn)部分酵母菌具有分解多氯聯(lián)苯的作用,為消除這種污染,科研人員計(jì)劃從受污染的土壤中篩選出高效分解多氯聯(lián)苯的菌株。(1)篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時(shí),應(yīng)將土壤樣品進(jìn)行__________,接種到以__________為唯一__________的培養(yǎng)基上。從功能上講,該培養(yǎng)基屬于__。

(2)對(duì)初步提取到的菌株要進(jìn)行__________,一般操作方法有兩種,如圖是__________法。

(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液酵母菌的菌體數(shù),可在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。若用__________法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),為了檢驗(yàn)培養(yǎng)基平板滅菌是否成功,在涂布接種前,隨機(jī)取若干________培養(yǎng)一段時(shí)間。

(4)將1mL酵母菌溶液稀釋1000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為66、67、68,據(jù)此可得出每升溶液中酵母菌活菌數(shù)為_(kāi)_________。

〖解析〗(1)依題意可知:篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時(shí),應(yīng)將土壤樣品稀釋(溶解)接種到以多氯聯(lián)苯為唯一碳源的培養(yǎng)基上。在該培養(yǎng)基中,只有能降解多氯聯(lián)苯的微生物才能生長(zhǎng),而其他微生物則不能生長(zhǎng),所以從功能上講,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)對(duì)初步提取到的菌株要進(jìn)行純化。如圖采用的操作方法是平板劃線法。(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液酵母菌的菌體數(shù),既可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù),也可選用稀釋涂布平板(或涂布平板)法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目。在涂布接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板進(jìn)行培養(yǎng)一段時(shí)間,這樣做的目的是檢驗(yàn)培養(yǎng)基平板滅菌是否成功(倒平板是否感染雜菌或是否徹底滅菌)。(4)將1mL酵母菌溶液稀釋1000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為66、67、68,據(jù)此可得出每升溶液中酵母菌活菌數(shù)為(66+67+68)÷3÷0.1×1000×103=6.7×108個(gè)/L?！即鸢浮?(1)稀釋多氯聯(lián)苯碳源選擇培養(yǎng)基(2)純化平板劃線(3)稀釋涂布平板滅菌后的空白平板(4)6.7×108個(gè)/L〖加固訓(xùn)練〗(創(chuàng)新性·通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高效降解污染物的工程菌)為了應(yīng)對(duì)干旱和強(qiáng)降雨等災(zāi)害性天氣,很多城市增設(shè)了雨水截流儲(chǔ)存和利用的設(shè)施,如布設(shè)于道路周邊或地勢(shì)較低區(qū)域的生物滯留池。生物滯留池內(nèi)土壤、植物和微生物等構(gòu)成了小型生態(tài)系統(tǒng)。某城市道路收集到的雨水含有高濃度污染物,其中的多環(huán)芳烴(PAHs),會(huì)嚴(yán)重危害城市水環(huán)境?？蒲腥藛T基于解決污染問(wèn)題和維護(hù)生態(tài)安全兩方面考慮,在從當(dāng)?shù)丨h(huán)境中篩選耐受菌的基礎(chǔ)上,通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高效降解污染物的工程菌。(1)經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),生物滯留池內(nèi)PAHs中的芘含量相對(duì)較高。研究者嘗試篩選能降解芘的菌種。①篩選能降解芘的菌種基本操作步驟如下。請(qǐng)將下列“方框”內(nèi)字母后面內(nèi)容補(bǔ)充完整a.____________b.______c.__________d.__________e.__________。②從對(duì)照區(qū)域和生物滯留池中分別培養(yǎng)出占比較高的菌屬,結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。在兩個(gè)區(qū)域中均能檢測(cè)出的菌屬有__________個(gè),此結(jié)果能夠說(shuō)明滯留池土壤中____出現(xiàn)了明顯的變化。③在另一個(gè)篩選對(duì)芘具有耐受性的菌株的實(shí)驗(yàn)中,分離得到四個(gè)菌屬中的菌株,其生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖3。研究人員欲從中選擇一個(gè)構(gòu)建工程菌。結(jié)合圖1、圖2所示結(jié)果,你認(rèn)為應(yīng)選擇__________,理由是

__________________。(2)研究者將能高效降解芘的外源基因重組至所選受體菌的同時(shí),還轉(zhuǎn)入了含lac啟動(dòng)子的核酸酶基因。在半乳糖苷分子的誘導(dǎo)下該啟動(dòng)子會(huì)被激活,表達(dá)的核酸酶會(huì)將自身遺傳物質(zhì)降解進(jìn)而發(fā)生菌體自毀。轉(zhuǎn)入該基因在維護(hù)生態(tài)安全方面的意義是__________。(3)試舉一例說(shuō)明人類在改造自然的過(guò)程中,可能會(huì)帶來(lái)的生物安全隱患__?！冀馕觥?1)①配制以芘(a)為唯一碳源的培養(yǎng)基→為了獲得純凈的培養(yǎng)物需要用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,同時(shí)對(duì)培養(yǎng)皿、接種環(huán)也要進(jìn)行滅菌(b)→對(duì)滅菌完成的培養(yǎng)基進(jìn)行倒平板操作→然后用稀釋涂布平板法對(duì)土壤浸出液進(jìn)行接種(c)→接種時(shí),為避免雜菌污染,需要在酒精燈火焰(外焰)旁進(jìn)行接種(d)→接種完成后需要將平板放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)→待菌落長(zhǎng)出后,挑選顏色、大小等有差異的單個(gè)菌落進(jìn)行進(jìn)一步的接種,進(jìn)而對(duì)菌種進(jìn)行分離和鑒定(e)。②根據(jù)圖1、圖2的結(jié)果可知,在兩個(gè)區(qū)域中均能檢測(cè)出的菌屬有3個(gè),分別為Tha、Pse、Com,該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明滯留池土壤中微生物種類及比例發(fā)生了明顯的變化。③由圖3的生長(zhǎng)曲線可推測(cè)四種菌種對(duì)芘的耐受性均表現(xiàn)較好,但結(jié)合圖1、圖2所示結(jié)果,發(fā)現(xiàn)只有Pse菌株在對(duì)照池和滯留池中均占比較大且對(duì)芘的耐受性較好,因此研究人員應(yīng)選擇Pse來(lái)構(gòu)建工程菌。(2)研究者將能高效降解芘的外源基因重組至所選受體菌的同時(shí),還轉(zhuǎn)入了含lac啟動(dòng)子的核酸酶基因。在半乳糖苷分子的誘導(dǎo)下該啟動(dòng)子會(huì)被激活,表達(dá)的核酸酶會(huì)將自身遺傳物質(zhì)降解進(jìn)而發(fā)生菌體自毀。據(jù)此可知轉(zhuǎn)入該基因的意義在于能防止轉(zhuǎn)基因微生物逃逸到自然界,從而將實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)降到最低,避免引起生態(tài)危機(jī)。(3)人類在改造自然的過(guò)程中,如將外來(lái)物種引入新的環(huán)境,可能會(huì)造成生物入侵問(wèn)題從而使入侵地的生物多樣性銳減;轉(zhuǎn)基因生物可能會(huì)引起基因污染,從而影響原有生態(tài)系統(tǒng)中的生物多樣性等?！即鸢浮?(1)①芘培養(yǎng)基(培養(yǎng)皿、接種環(huán))稀釋涂布平板酒精燈火焰(外焰)菌落②3微生物種類及比例③PsePse菌株在對(duì)照池和滯留池中均占比較大且對(duì)芘的耐受性較好(2)防止轉(zhuǎn)基因微生物逃逸到自然界,將實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)降到最低(3)將外來(lái)物種引入新的環(huán)境,可能會(huì)造成生物入侵問(wèn)題;轉(zhuǎn)基因生物可能會(huì)影響原有生態(tài)系統(tǒng)中的生物多樣性等微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用(30分鐘100分)1.(10分)(2021·瀘州模擬)纖維素酶是一種重要的酶產(chǎn)品,目前關(guān)于常溫和高溫纖維素酶菌株研究得較多,但有些地方氣溫低,需要應(yīng)用低溫產(chǎn)纖維素酶的菌株。某實(shí)驗(yàn)小組通過(guò)實(shí)驗(yàn)室微生物篩選方法,篩選到了低溫纖維素分解菌,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)纖維素分解菌是能產(chǎn)生纖維素酶的微生物,纖維素酶是復(fù)合酶,其中包括__________和葡萄糖苷酶。纖維素分解菌也能以葡萄糖為碳源,但是實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)纖維素分解菌的培養(yǎng)基一般選用纖維素粉而不選用葡萄糖:該培養(yǎng)基不選用葡萄糖作為碳源的原因是__

_______________________。

(2)自然界中許多真菌能產(chǎn)生胞外纖維素分解酶,其分解纖維素的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于細(xì)菌,真菌與細(xì)菌相比結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是______________________________。若要分離出低溫條件下能分解纖維素的真菌,為了防止其他微生物的繁殖,可采取的措施是__

__________________-__(至少答出兩點(diǎn))。

(3)為方便鑒定、篩選和計(jì)數(shù),將菌液接種到培養(yǎng)基上的一般方法為_(kāi)_____________________。

〖解析〗(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶,至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三種組分,前兩種酶可以將纖維素分解為纖維二糖,葡萄糖苷酶可以將纖維二糖進(jìn)一步分解為葡萄糖。葡萄糖是多數(shù)微生物均可利用的碳源,用葡萄糖作為碳源易造成雜菌污染,因此不選用葡萄糖作為碳源。(2)真菌屬于真核生物,與原核生物相比,其在結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是有以核膜為界限的細(xì)胞核。若要分離出低溫條件下能分解纖維素的真菌,同時(shí)為了防止其他微生物的繁殖,可采取的措施有:制備以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基,并加入一定量的抗生素,在低溫環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。(3)為方便鑒定、篩選和計(jì)數(shù),可選擇稀釋涂布平板法接種菌液?！即鸢浮?(1)C1酶、Cx酶微生物普遍可利用葡萄糖作為碳源,其他微生物也可大量繁殖,易造成雜菌污染(2)具有以核膜為界限的細(xì)胞核在低溫環(huán)境下培養(yǎng);培養(yǎng)基以纖維素為唯一碳源;培養(yǎng)基中加入定量的抗生素(回答出兩項(xiàng)即可)(3)稀釋涂布平板法2.(11分)(2021·龍巖模擬)大腸桿菌是國(guó)際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌,用于指示食品、飲用水等是否直接或間接受到了糞便的污染。少數(shù)微生物能分解乳糖,有些只產(chǎn)酸(酸性物質(zhì)),有些只產(chǎn)氣(氣體),而大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,且產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色。某小組為檢測(cè)某水體中大腸桿菌的污染狀況,選用了如下兩種培養(yǎng)基。培養(yǎng)基名稱配方(L-1)pH乳糖蛋白胨培養(yǎng)基蛋白胨10g,乳糖5g,牛肉膏3g7.4伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基蛋白胨10g,乳糖10g,KH2PO45g,伊紅0.47.4回答下列問(wèn)題:(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型__________(填“相同”或“不同”)。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,為微生物的生長(zhǎng)提供氮源的物質(zhì)有__________;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,還具有________________的作用。

(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121℃高壓滅菌15min的方法,而是選用115℃滅菌20min,(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色。若出現(xiàn)__________時(shí),則〖提示〗水樣可能被大腸桿菌污染。

(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有__________、__________。

〖解析〗(1)從物理性質(zhì)上看,兩種培養(yǎng)基的類型不同,乳糖蛋白胨培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基,伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中,蛋白胨、牛肉膏含有豐富的蛋白質(zhì),為微生物的生長(zhǎng)提供氮源;NaCl除了提供無(wú)機(jī)鹽外,Na+還具有維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定的作用。(2)乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),不選用121℃高壓滅菌15min的方法,而是選用115℃滅菌20min,推測(cè)可能的原因是培養(yǎng)基中有不耐高溫(121℃(3)某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B,A管中加入1mL待測(cè)水樣,B管不作處理,然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時(shí)呈黃色,堿性時(shí)(pH高于6.8)呈紫色,大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,若出現(xiàn)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣,則〖提示〗水樣可能被大腸桿菌污染。(4)該小組為計(jì)數(shù)大腸桿菌的數(shù)目,同時(shí)還各取0.1mL水樣直接涂布到三個(gè)伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),分別統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)為34、36、38,估算出每毫升水樣中含360個(gè)大腸桿菌。有同學(xué)指出,估算的大腸桿菌數(shù)目不可信,其原因有:大腸桿菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色,故應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落,缺少不接種的空白對(duì)照,未排除其他因素的干擾?！即鸢浮?(1)不同蛋白胨、牛肉膏維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定(2)培養(yǎng)基中有不耐高溫(121℃(3)A管呈黃色并產(chǎn)氣,B管呈紫色不產(chǎn)氣(4)應(yīng)統(tǒng)計(jì)平板上呈現(xiàn)黑色的菌落缺少不接種的空白對(duì)照〖易錯(cuò)警示〗不是所有微生物培養(yǎng)基中均需加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)碳源、氮源、水分、無(wú)機(jī)鹽是微生物生長(zhǎng)必需的四大營(yíng)養(yǎng)成分,有些微生物可自行合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而對(duì)那些合成能力有限或不能合成特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的微生物(如乳酸菌),則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等物質(zhì)。3.(12分)(創(chuàng)新性·乳酸發(fā)酵過(guò)程中的種間關(guān)系)(2021·石家莊模擬)乳酸菌是一類能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱。這類細(xì)菌在自然界分布極為廣泛,具有豐富的物種多樣性,廣泛存在于人體的腸道中,大部分具有改善腸道消化功能的作用,是最具代表性的腸內(nèi)益生菌。某研究者對(duì)市場(chǎng)上常見(jiàn)酸奶中的乳酸菌進(jìn)行分離純化,分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)培養(yǎng)乳酸菌時(shí),根據(jù)其代謝類型,除了在培養(yǎng)液中添加必需的營(yíng)養(yǎng)外,還應(yīng)在______條件下培養(yǎng);乳酸菌培養(yǎng)液中常含有一定濃度的葡萄糖,但當(dāng)葡萄糖濃度過(guò)高時(shí),反而抑制乳酸菌的生長(zhǎng),原因是__________。

(2)在接種前要對(duì)配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行______________,其目的是__________。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)通過(guò)__________法滅菌后再倒掉,防止殘留的微生物污染環(huán)境。

(3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍__________的大小,對(duì)分離出的高效菌株需要長(zhǎng)期保存,采用的方法為_(kāi)_________________。

(4)在制作泡菜過(guò)程中,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸可以抑制異種微生物的生長(zhǎng),這種現(xiàn)象中包括的種間關(guān)系、種內(nèi)關(guān)系有__________。

〖解析〗(1)乳酸菌為厭氧微生物,所以要在無(wú)氧條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)液中葡萄糖的濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致乳酸菌細(xì)胞發(fā)生滲透失水,從而抑制乳酸菌的生長(zhǎng)。(2)配制好的培養(yǎng)基在接種前一般要進(jìn)行滅菌,目的是殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌等微生物,以防雜菌對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)通過(guò)高壓蒸汽滅菌后再倒掉,防止殘留的微生物污染環(huán)境。(3)乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣,使培養(yǎng)基變得透明,所以可根據(jù)菌落周圍透明圈的大小來(lái)篩選出高效菌株。為了保持菌種的純凈,對(duì)于長(zhǎng)期需要保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。(4)“在制作泡菜時(shí),乳酸菌產(chǎn)生的乳酸可以抑制異種微生物的生長(zhǎng)”,異種微生物和乳酸菌之間屬于種間關(guān)系,所以屬于競(jìng)爭(zhēng);“乳酸菌產(chǎn)生的乳酸”,屬于乳酸菌之間的共同協(xié)作,產(chǎn)生乳酸抑制其他微生物的生長(zhǎng),所以屬于種內(nèi)互助?！即鸢浮?(1)無(wú)氧細(xì)胞失水(2)滅菌防止雜菌污染高壓蒸汽滅菌(3)透明圈甘油管藏法(4)種內(nèi)互助、競(jìng)爭(zhēng)〖知識(shí)總結(jié)〗菌種保存方法方法臨時(shí)保存法甘油管藏法適用對(duì)象頻繁使用的菌種長(zhǎng)期保存的菌種培養(yǎng)基類型固體斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基溫度4-20保存菌落長(zhǎng)成后放冰箱中保存,每3～6個(gè)月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后放冷凍箱內(nèi)保存缺點(diǎn)菌種易被污染或產(chǎn)生變異4.(14分)(創(chuàng)新性·高效分解油脂的微生物篩選)(2021·黃岡模擬)隨著人們生活質(zhì)量的提高,餐飲含油脂廢水的排放量大量增加,合理處置油脂廢水也成為新的課題。已知芽孢桿菌中有多種分解油脂產(chǎn)酸的菌種,科研人員欲采用下列流程篩選出能高效分解油脂的微生物。菌種取樣→分離培養(yǎng)→菌株的篩選→形態(tài)特征觀察和生理生化反應(yīng)鑒定?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)選取飯店附近排污渠的含油脂廢水作為樣本,采樣約10g,立即裝于試管內(nèi),此試管使用前需要經(jīng)過(guò)__________(2)樣品分離培養(yǎng)前,一般需要將菌液進(jìn)行__________處理,然后吸取0.2mL菌液涂布到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h,記錄菌落總數(shù)。將分離出的菌株按照菌落的________________________(3)上述步驟篩選出的菌株分別接種到含“花生油”的瓊脂培養(yǎng)基平板上,37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,篩選出油脂降解菌,培養(yǎng)基中“花生油”為菌種繁殖提供__________。該培養(yǎng)基還需要加入中性紅染料(中性紅為脂溶性染料,遇酸為紅色,遇堿為黃色),挑選菌株要挑選顯__________降解圈的菌株,并且選顏色較__________(填“深”或“淺”)(4)實(shí)際操作中,由于油脂易聚集成液滴,常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻,鑒定效果更好,試分析原因_______________________。

〖解析〗(1)微生物實(shí)驗(yàn)需要無(wú)菌操作,所以試管使用前需要經(jīng)過(guò)滅菌處理。(2)菌液一般需要先經(jīng)過(guò)稀釋處理,再進(jìn)行涂布。不同微生物菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色不同,所以可以根據(jù)菌落的特征初步分類。(3)花生油的主要成分是脂肪,所以為菌種提供碳源和能源。脂肪可以被分解為甘油和脂肪酸,使培養(yǎng)基呈酸性,所以選擇紅色降解圈的菌株,顏色較深的脂肪酸含量越高,說(shuō)明分解能力越強(qiáng)。(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定?！即鸢浮?(1)滅菌(2)稀釋形狀、大小、隆起程度和顏色(3)碳源和能源紅色深(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面,分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯,便于快速分離和鑒定5.(15分)(2021·雅安模擬)有研究者擬從中藥渣肥堆的樣本中篩選高產(chǎn)纖維素酶菌株,為纖維素酶制劑的研制提供原料。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)從中藥渣肥堆中能分離出纖維素分解菌的原因是

__________________。

纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶,纖維素酶由__________________________________________組成。

(2)從中藥渣肥堆中取樣后,需要選擇培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是________________;選擇培養(yǎng)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)瓶定期振蕩,其目的是__________________________。

(3)篩選獲得纖維素酶高活性菌株3株,分別命名為Z-1、Z-2和Z-3。在相同培養(yǎng)基培養(yǎng)相同時(shí)間后,測(cè)得3種菌株的菌落直徑與產(chǎn)生的透明圈直徑結(jié)果如表:菌株編碼菌落直徑(d)/cm透明圈直徑(D)/cmD/dZ—13.435.431.58Z—21.834.862.66Z—32.154.882.27培養(yǎng)基中的纖維素能與____________________產(chǎn)生紅色復(fù)合物,纖維素被分解后,就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。由表中可知,____________________菌株纖維素酶的活性最強(qiáng)。

〖解析〗(1)纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中,而中藥渣富含纖維素,因此從中藥渣肥堆中能分離出纖維素分解菌。纖維素酶是一種復(fù)合酶,由C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶組成。(2)從中藥渣肥堆中取樣后,為了能夠從樣品中分離得到所需要的纖維素分解菌,需要選擇培養(yǎng)一段時(shí)間,其目的是增加纖維素分解菌的數(shù)量。振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量,同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。(3)剛果紅可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被纖維素酶水解后,剛果紅-纖維素復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。透明圈直徑和菌落直徑的比值表示纖維素酶的活性,據(jù)此分析表中信息可知:Z-2菌株的透明圈直徑和菌落直徑的比值最大,所以Z-2菌株纖維素酶的活性最強(qiáng)?！即鸢浮?(1)纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中,而中藥渣富含纖維素C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶(2)增加目的(纖維素分解)菌的數(shù)量增加培養(yǎng)液內(nèi)的氧氣含(溶解)量、讓培養(yǎng)液與菌體充分接觸(3)剛果紅Z-26.(10分)(2021·江西模擬)新冠病毒疫情過(guò)后,復(fù)工復(fù)學(xué)面臨的問(wèn)題有許多。全體師生需要做好自我防護(hù),戴口罩屬于切斷傳播途徑,還有一條重要的切斷傳播途徑就是消毒。關(guān)于對(duì)微生物的培養(yǎng)、消毒、滅菌,回答下列問(wèn)題:(1)常用的消毒方法有______________________________________(列舉三點(diǎn)),消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括__________。

(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,過(guò)程中要進(jìn)行規(guī)范的無(wú)菌操作,除了防止雜菌污染,還有什么目的?_________________________。

(3)興趣小組想要分離純化土壤中的類地青霉,應(yīng)選用“查氏”培養(yǎng)基。培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至__________。

(4)興趣小組可用______法純化并統(tǒng)計(jì)土壤中的大腸桿菌。測(cè)定微生物數(shù)量還可用__________和__________。若要臨時(shí)保藏該細(xì)菌,先將菌種接種到試管中的__________培養(yǎng)基中,在4℃〖解析〗(1)消毒能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物,不包括芽孢和孢子,常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。(2)某興趣小組欲研究校園土壤微生物的種類,調(diào)查過(guò)程中需要進(jìn)行無(wú)菌操作,這樣不僅能防止雜菌污染培養(yǎng)物,還能有效保護(hù)操作者自身不被微生物感染。(3)查氏培養(yǎng)基主要用于真菌的培養(yǎng)。真菌適合在酸性條件下培養(yǎng),因此培養(yǎng)基除了滿足營(yíng)養(yǎng)需求外,還需將pH調(diào)至酸性。(4)稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)和濾膜法都可用于微生物計(jì)數(shù),但只有稀釋涂布平板法不僅能純化并且能統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量,因此要純化和分離土壤中的大腸桿菌要用稀釋涂布平板法進(jìn)行。菌種臨時(shí)保藏的做法是先將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基中,然后在合適的溫度條件下培養(yǎng),當(dāng)菌落長(zhǎng)成后,將試管放在4℃〖答案〗:(1)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法芽孢和孢子(2)能有效避免操作者自身被微生物感染(3)酸性(4)稀釋涂布平板顯微鏡直接計(jì)數(shù)濾膜法固體斜面7.(10分)某工廠周邊的河水中含有一種有害的難降解的物質(zhì)W,研究人員用化合物W、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功篩選到能高效降解化合物W的細(xì)菌(目的菌)。(1)該實(shí)驗(yàn)制備的培養(yǎng)基在功能上屬于________培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)上的特點(diǎn)是______________________________。培養(yǎng)基的滅菌方法是__________。

(2)為了檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格,常用的實(shí)驗(yàn)思路是______________________________________________。

(3)可根據(jù)__________(至少填2項(xiàng))等菌落特征初步判斷培養(yǎng)基上菌種的類型。

(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉,這樣做的目的是_______________________________。

(5)將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1L含20mg有機(jī)化合物W的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)(培養(yǎng)液中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充裕、條件適宜)觀察從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到微生物停止生長(zhǎng)所用的時(shí)間,甲、乙、丙分別為18小時(shí)、40小時(shí)、25小時(shí),則應(yīng)選擇微生物__________(填“甲”“乙”或“丙”)作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng),理由是________________________________________________〖解析〗(1)本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選到能高效降解化合物W的細(xì)菌(目的菌),因此選用的培養(yǎng)基從功能上屬于選擇培養(yǎng)基;培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽,因此化合物W在該培養(yǎng)基中作為碳源和氮源;常用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。(2)將若干未接種的(空白)培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生,可用于檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否滅菌合格。(3)菌落的特征包括菌落的大小、形狀、隆起程度和顏色等。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉,是為了避免雜菌對(duì)環(huán)境造成污染。(5)微生物停止生長(zhǎng)意味著化合物W被分解完,甲菌種需要的時(shí)間比乙、丙短,說(shuō)明微生物甲分解化合物W的能力比乙、丙強(qiáng)?！即鸢浮?(1)選擇以化合物W為唯一碳源、氮源高壓蒸汽滅菌法(2)將若干未接種的(空白)培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(3)菌落的大小、形狀、隆起程度和顏色(4)避免雜菌對(duì)環(huán)境造成污染(5)甲微生物甲分解化合物W的能力比乙、丙強(qiáng)〖加固訓(xùn)練〗(2021·沈陽(yáng)三模)某生物興趣小組,進(jìn)行土壤中尿素分解菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)實(shí)驗(yàn)原理:尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,可是并不能直接被農(nóng)作物吸收,需要轉(zhuǎn)變成氨,才能被吸收,這個(gè)轉(zhuǎn)變依賴于土壤中能產(chǎn)生__________的微生物的作用。(2)實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果分析:Ⅰ:配制培養(yǎng)基(成分:葡萄糖、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、尿素、Y、H2O、瓊脂),并制作無(wú)菌平板;Ⅱ:設(shè)置__________組和若干實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行相關(guān)操作;Ⅲ:將各組平板置于恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。①為了更好地鑒別出此類微生物,在培養(yǎng)基配方中加入了Y,Y是__________。②為了對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),需要用________法進(jìn)行接種。具體情況如圖:③恒溫培養(yǎng)48小時(shí)后,在稀釋倍數(shù)為105下,平板上的菌落數(shù)目在30～300之間,小組成員進(jìn)行統(tǒng)計(jì),應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為_(kāi)_________菌落進(jìn)行記數(shù)。統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板的菌落數(shù)目,分別為68、73、87,則錐形瓶中每毫升稀釋液中,尿素分解菌的活菌數(shù)為_(kāi)_________。Ⅳ:實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:興趣小組的同學(xué)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),除了上述統(tǒng)計(jì)的菌落外,還發(fā)現(xiàn)有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,試分析這些菌落產(chǎn)生的可能原因(答出一點(diǎn)即可)

__。

(3)欲將上述實(shí)驗(yàn)得到的尿素分解菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存,可采用__________的方法。〖解析〗(1)尿素分解菌能產(chǎn)生脲酶將尿素分解成氨,土壤中的尿素只有被分解成氨后才能被植物吸收利用,因此可用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)分離尿素分解菌。(2)Ⅱ:為檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到雜菌污染,需要設(shè)置空白對(duì)照組。Ⅲ:①細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,因此可以通過(guò)檢查培養(yǎng)基的pH變化來(lái)鑒別尿素分解菌的存在,在培養(yǎng)基配方中加入的Y可以是酚紅指示劑。②分析圖示實(shí)驗(yàn)過(guò)程可知,采用了稀釋涂布平板法進(jìn)行接種,用于計(jì)數(shù)土壤稀釋液中尿素分解菌的數(shù)量。③當(dāng)尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶將尿素分解為氨后,使pH升高,酚紅指示劑會(huì)變紅,因此應(yīng)注意統(tǒng)計(jì)周圍為紅色的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。在稀釋倍數(shù)為105下,三個(gè)平板的菌落數(shù)目分別為68、73、87,因此錐形瓶中每毫升稀釋液中尿素分解菌的活菌數(shù)為(68+73+87)÷3×105=7.6×106個(gè)。Ⅳ:有些菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化,說(shuō)明這些細(xì)菌不能產(chǎn)生脲酶進(jìn)而利用尿素作為氮源,而氮源為微生物生長(zhǎng)所必需的,因此可推測(cè)可能存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨(不與指示劑作用),所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。〖答案〗:(1)脲酶(2)空白對(duì)照酚紅指示劑稀釋涂布平板紅色的7.6×106個(gè)存在固氮微生物,它們能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?而不利用培養(yǎng)基中的尿素分解成氨(不與指示劑作用),所以看到有些菌落產(chǎn)生而菌落周圍的培養(yǎng)基沒(méi)有變化(3)甘油管藏

8.(9分)(2021·湖南模擬)對(duì)牛奶消毒,常采用巴氏消毒,為檢測(cè)細(xì)菌含量變化情況,做如圖1所示操作。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:(1)巴氏消毒的方法是__________,使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是_____________________________。

(2)取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,應(yīng)選擇的涂布工具是圖2中的____________________________。

(3)圖1中所示方法為稀釋涂布平板法。理想情況下。培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿,菌落數(shù)分別為38個(gè)、42個(gè)、40個(gè),則可以推測(cè)生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為_(kāi)_________個(gè),運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值__________(填“偏大”或“偏小”),原因是__。

(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,則在操作步驟上應(yīng)做什么改動(dòng)?__。

(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌,從中檢測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入__________,菌落具有__________特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。

〖解析〗(1)常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。巴氏消毒的方法是指在70～75℃煮30min或在80(2)將液體菌種接種在固體培養(yǎng)基上常用的方法主要是稀釋涂布平板法,取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,所用的接種工具是涂布器。即圖2中的B。(3)圖1中所示方法為稀釋涂布平板法。由于圖中稀釋了104倍,則牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為(38+42+40)÷3÷0.1×104=4×106個(gè)。由于經(jīng)此方法接種培養(yǎng)時(shí)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落重疊在一起時(shí)按一個(gè)菌落計(jì)算,所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏小。原因是個(gè)別菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成。(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死,若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量,由于細(xì)菌數(shù)目減少,故應(yīng)稀釋次數(shù)減少。(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌,為檢測(cè)大腸桿菌采用的方法是在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基,若菌落具有(金屬光澤的紫)黑色特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌?！即鸢浮?(1)在70～75℃煮30min(或在80℃煮15min)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞(2)B(3)4×10〖易錯(cuò)提醒〗平板劃線操作的三個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進(jìn)行取種,以免溫度太高殺死菌種。(2)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(3)劃線時(shí)用力要大小適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。9.(9分)(2021·眉山模擬)多氯聯(lián)苯是一種對(duì)人體有很大危害的有機(jī)