藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

PAGE27PAGE62附件三藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述生殖毒性研究（Reproductivetoxicitystudy）是藥物非臨床安全性評價的重要內(nèi)容，它與急性毒性、長期毒性、遺傳毒性等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系，是藥物進(jìn)入臨床研究及上市的重要環(huán)節(jié)。擬用于人體的藥物，應(yīng)根據(jù)受試物擬用適應(yīng)癥和作用特點等因素考慮進(jìn)行生殖毒性試驗。在藥物開發(fā)的過程中，生殖毒性研究的目的是通過動物試驗反映受試物對哺乳動物生殖功能和發(fā)育過程的影響，預(yù)測其可能產(chǎn)生的對生殖細(xì)胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等親代生殖機(jī)能的不良影響，以及對子代胚胎-胎兒發(fā)育、出生后發(fā)育的不良影響。生殖毒性研究在限定臨床研究受試者范圍、降低臨床研究受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險方面發(fā)揮重要作用。本指導(dǎo)原則重點闡述動物生殖毒性試驗中動物、給藥劑量、給藥方法、試驗方案選擇的基本原則，并介紹一些常用的試驗方案；二、基本原則（一）實驗管理藥物的生殖毒性試驗屬于非臨床安全性評價研究，根據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》的規(guī)定，必須執(zhí)行《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》。（二）具體問題具體分析生殖毒性試驗的設(shè)計，應(yīng)在對受試物認(rèn)知的基礎(chǔ)上，遵循“具體問題具體分析”的原則。應(yīng)根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)特點、理化性質(zhì)、已有的藥理毒理研究信息、適應(yīng)癥和適用人群特點、臨床用藥方案等選擇合理的試驗方法，設(shè)計適宜的試驗方案，并綜合上述信息對試驗結(jié)果進(jìn)行全面分析評價。（三）隨機(jī)、對照、重復(fù)生殖毒性試驗應(yīng)符合一般動物試驗的基本原則，即隨機(jī)、對照和重復(fù)。三、基本內(nèi)容（一）總體考慮1、受試物1.1中藥及天然藥物生殖毒性試驗的受試物應(yīng)能充分代表臨床研究受試物或上市藥品，因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床研究質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，一般用中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn)行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明批號、規(guī)格及生產(chǎn)廠家。1.2化學(xué)藥物生殖毒性試驗的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床研究用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并附有研制單位的自檢報告。2、受試物藥代動力學(xué)研究在開始生殖毒性試驗前，掌握一些受試物藥代動力學(xué)方面的信息，對于是否應(yīng)進(jìn)行動物種屬選擇、試驗設(shè)計與給藥方案的調(diào)整等有重要提示作用。這些藥代動力學(xué)信息可能來源于非妊娠或非哺乳期動物。在進(jìn)行結(jié)果評價時，可能有必要進(jìn)一步研究妊娠或哺乳期動物的藥代動力學(xué)情況。（HYPERLINK注釋1）3、試驗系統(tǒng)3.1實驗動物應(yīng)采用哺乳動物進(jìn)行生殖毒性試驗。在選擇動物種屬和品系時，應(yīng)考慮動物的背景資料、實用性、與人的相關(guān)性等。應(yīng)從受試物、采用的試驗方案和闡明試驗結(jié)果的角度考慮所選擇動物種屬和品系的優(yōu)缺點（HYPERLINK注釋2）。通常應(yīng)采用與其他毒理學(xué)試驗相同的動物種屬和品系，這樣與其他毒理學(xué)試驗結(jié)果具有可比性，并可能避免進(jìn)行過多的預(yù)試驗。大鼠實用性好、與其他試驗結(jié)果的可比性高并已積累了大量的背景資料，因此可作為生殖毒性試驗首選的嚙齒類動物。在胚胎-胎仔發(fā)育毒性研究中，一般還需要采用第二種哺乳動物，其中家兔已積累了豐富的背景資料，且容易獲得和實用，因此家兔為優(yōu)先選用的非嚙齒類動物。家兔不適合時，可根據(jù)具體情況，選擇另一種可替代的非嚙齒類動物或第二種嚙齒類動物。通常選用年輕、性成熟的成年動物，雌性動物未經(jīng)產(chǎn)。個體動物初始體重不應(yīng)超出平均體重±20%。動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求，來源、品系、遺傳背景清楚，并具有實驗動物質(zhì)量合格證。3.2其他試驗系統(tǒng)其他試驗系統(tǒng)指哺乳動物或非哺乳動物的細(xì)胞、組織、器官，體外或體內(nèi)培養(yǎng)體。這些系統(tǒng)的試驗結(jié)果有助于作用機(jī)理的分析，但它們?nèi)狈Πl(fā)育過程的復(fù)雜性以及母體與生長機(jī)體（胚胎）間動態(tài)的相互變化。這些系統(tǒng)不能明確排除某一作用，也不能對其危險性/暴露情況進(jìn)行推測。這些試驗系統(tǒng)尚不能替代目前生殖毒性試驗常用的整體動物（HYPERLINK注釋3）。4、給藥4.1劑量選擇4.1.1中藥及天然藥物可根據(jù)已有的研究資料（藥理、急性毒性和長期毒性、藥代動力學(xué)研究）或預(yù)試驗以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來進(jìn)行劑量設(shè)計。為觀察量效關(guān)系，至少應(yīng)設(shè)三個劑量組，必要時可增加劑量組。高劑量應(yīng)出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng)，或為最大給藥量/最大耐受量。低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的“未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平（NOAEL）”。4.1.2化學(xué)藥物可根據(jù)已有的研究資料（藥理、急性毒性和長期毒性、藥代動力學(xué)研究）或預(yù)試驗以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來選擇高劑量，高劑量范圍內(nèi)應(yīng)該出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng)，在大多數(shù)情況下，1g/kg/天為最大給藥限量。低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的NOAEL。高劑量與低劑量間根據(jù)具體情況可設(shè)計1～2個劑量，以觀察可能的劑量反應(yīng)關(guān)系。（HYPERLINK注釋4）4.2給藥途徑一般情況下，給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑一致。如果擬用途徑有多種，若研究提示不同給藥途徑的藥代動力學(xué)特點（包括分布）類似，建議采用暴露量較高的給藥途徑。此外，腹腔注射時可能會對子宮或胎仔產(chǎn)生直接作用，故采用妊娠動物進(jìn)行試驗時，一般不用該途徑。（HYPERLINK注釋5）4.3給藥頻率通常每天給藥1次。但應(yīng)參考藥代動力學(xué)參數(shù)、預(yù)期臨床給藥情況增加或減少給藥次數(shù)。4.4對照組應(yīng)設(shè)賦形劑對照組，其給藥途徑、頻率應(yīng)與受試物組相同。當(dāng)賦形劑可能產(chǎn)生作用或影響受試物的作用時，應(yīng)另設(shè)空白對照組。此外，根據(jù)具體情況考慮是否設(shè)陽性對照組，如新的動物系統(tǒng)、較長時間未進(jìn)行過試驗、新的試驗設(shè)施等。（二）試驗方案1、試驗方案選擇的一般考慮在選擇試驗方案時，應(yīng)借鑒受試物已有的或同類藥物的藥理、毒理和藥代動力學(xué)資料，特別是在生殖毒性方面的信息。建議優(yōu)先考慮采用較為成熟的試驗設(shè)計方案。對大多數(shù)藥物而言，三段試驗方案（常用的試驗方案）通常比較合適，能夠識別有可能發(fā)生損害的生殖發(fā)育階段。但根據(jù)具體藥物情況的不同，也可選擇其他能充分反映受試物生殖毒性的試驗方案（HYPERLINK注釋6），如單一試驗設(shè)計或兩段試驗設(shè)計等。無論采用哪種試驗方案，各段試驗之間（給藥處理）不應(yīng)留有間隔，并可對生殖過程的各階段進(jìn)行直接或間接評價。應(yīng)說明所選擇試驗方案的合理性。當(dāng)觀察到某一作用時，應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行進(jìn)一步的后續(xù)試驗，以明確其毒性的性質(zhì)、范圍和原因等，包括判斷其劑量-反應(yīng)關(guān)系，以有助于風(fēng)險評估，并有助于區(qū)分給藥所致影響與偶發(fā)情況（HYPERLINK注釋8）：A.從交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的發(fā)育和成熟、交配行為、受精）。B.從受孕到著床（成年雌性生殖功能、著床前發(fā)育、著床）。C.從著床到硬腭閉合（成年雌性生殖功能、胚胎發(fā)育、主要器官形成）。D.從硬腭閉合到妊娠終止（成年雌性生殖功能、胎仔發(fā)育和生長、器官發(fā)育和生長）。E.從出生到離乳（成年雌性生殖功能、幼仔對宮外生活的適應(yīng)性、離乳前發(fā)育和生長）。F.從離乳到性成熟（離乳后發(fā)育和生長、獨立生活的適應(yīng)能力、達(dá)到性成熟的情況）。2、常用的試驗方案常用的試驗方案相當(dāng)于對下述各階段影響的聯(lián)合研究：生育力和早期胚胎發(fā)育、胚胎-胎仔發(fā)育、圍產(chǎn)期發(fā)育（包括母體功能）。2.1生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗（I段）2.1.1試驗?zāi)康陌ㄉ鲜錾芷诘腁階段和B階段，對雌雄動物由交配前到交配期直至胚胎著床給藥，以評價受試物對動物生殖的毒性或干擾作用。評價內(nèi)容包括配子成熟度、交配行為、生育力、胚胎著床前階段和著床等。對于雌性動物，應(yīng)對動情周期、受精卵輸卵管轉(zhuǎn)運（tubaltransport）、著床及胚胎著床前發(fā)育的影響進(jìn)行檢查。對于雄性動物，應(yīng)觀察生殖器官組織學(xué)檢查方法可能檢測不出的功能性影響(如性欲、附睪精子成熟度等)。2.1.2動物選擇至少采用一種動物，推薦用大鼠。動物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要，通常大鼠不少于20只/性別/組（HYPERLINK注釋9）。2.1.3給藥期一般情況下，交配前給藥期可定為雄性動物4～10周，雌性動物2周；雄性動物給藥期應(yīng)持續(xù)整個交配期直至被處死，雌性動物至少應(yīng)持續(xù)至胚胎著床（妊娠第6～7天）。應(yīng)對交配前給藥期長短的選擇進(jìn)行說明并提供依據(jù)（HYPERLINK注釋10）。2.1.4動物處理建議雌雄動物按1:1交配。一般情況下，雌性動物在妊娠第13～15天處死，雄性動物在交配成功后處死（HYPERLINK注釋11）。2.1.5觀察指標(biāo)試驗期間：體征和死亡情況，至少1次/天體重和體重變化，至少2次/周(HYPERLINK注釋12)攝食量，至少1次/周(交配期除外)交配期間至少每日進(jìn)行陰道涂片檢查，以檢查是否對交配或交配前時間有影響其他毒性研究中已證明有意義的指標(biāo)終末檢查：剖檢所有親代動物保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官，必要時進(jìn)行組織學(xué)檢查，同時保留足夠的對照組動物的相應(yīng)器官以便比較保存所有動物的睪丸、附睪或卵巢、子宮，必要時進(jìn)行組織學(xué)檢查，根據(jù)具體情況進(jìn)行評價建議計數(shù)附睪中的精子數(shù)并進(jìn)行精子活力檢查計數(shù)黃體數(shù)，活胎、死胎、吸收胎并計算著床數(shù)(HYPERLINK注釋12)2.2胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗（II段）2.2.1試驗?zāi)康陌ㄉ鲜錾芷诘腃階段至D階段，妊娠動物自胚胎著床至硬腭閉合給藥，評價藥物對妊娠動物、胚胎及胎仔發(fā)育的影響。評價內(nèi)容包括妊娠動物較非妊娠雌性動物增強(qiáng)的毒性、胚胎胎仔死亡、生長改變和結(jié)構(gòu)變化等。2.2.2動物選擇試驗通常采用兩種動物：一種為嚙齒類動物，推薦用大鼠；另一種為非嚙齒類動物，推薦用家兔。應(yīng)說明動物選擇的合理性。（HYPERLINK注釋13）妊娠動物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要，通常大鼠不少于20只/組，家兔不少于12只/組（HYPERLINK注釋9）。2.2.3給藥期由胚胎著床到硬腭閉合(即到C階段末)給藥。通常，大鼠為妊娠第6～15天給藥，家兔為妊娠第6～18天給藥。2.2.4動物處理在大約分娩前處死并檢查雌性動物，正常情況下，大鼠約為妊娠第20/21天，家兔約為妊娠第28/29天。檢查所有胎仔的存活和畸形情況。當(dāng)所用技術(shù)方法要求分別檢查軟組織和骨骼改變時，最好是每窩分配50%的胎仔進(jìn)行骨骼檢查。不管使用何種方法，至少應(yīng)對50%的大鼠胎仔進(jìn)行內(nèi)臟檢查。對于家兔，檢測軟組織改變，采用新鮮顯微解剖技術(shù)較適合，此時，100%的家兔胎仔需進(jìn)行軟組織和骨骼檢查。在評價胎仔的內(nèi)臟和骨骼異常情況時，若高劑量組與對照組無顯著性差異，一般不需要對中、低劑量組動物進(jìn)行檢查。但建議保存固定的標(biāo)本以備檢查。2.2.5觀察指標(biāo)試驗期間：體征和死亡情況，至少1次/天體重和體重變化，至少2次/周(HYPERLINK注釋12)攝食量，至少1次/周其他毒性研究中已證明有意義的指標(biāo)終末檢查：剖檢所有成年動物保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官，必要時進(jìn)行組織學(xué)檢查，同時保留足夠的對照組動物相應(yīng)器官以便比較計數(shù)黃體數(shù)，活胎、死胎、吸收胎并計算著床數(shù)(HYPERLINK注釋12)胎仔體重，胎仔頂臀長胎仔異常（包括外觀、內(nèi)臟、骨骼）胎盤肉眼觀察2.3圍產(chǎn)期毒性試驗（III段） 2.3.1試驗?zāi)康陌ㄉ鲜錾芷谥械腃階段至F階段，檢測從胚胎著床到幼仔離乳給藥對妊娠/哺乳的雌性動物以及胚胎和子代發(fā)育的不良影響；由于對此段所造成的影響可能延遲，試驗應(yīng)持續(xù)觀察至子代性成熟階段。評價內(nèi)容包括妊娠動物較非妊娠雌性動物增強(qiáng)的毒性、出生前和出生后子代死亡情況、生長發(fā)育的改變以及子代的功能缺陷，包括F1代的行為、性成熟和生殖功能。2.3.2動物選擇至少采用一種動物，推薦用大鼠。妊娠動物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要，通常大鼠不少于20只/組（HYPERLINK注釋9）。2.3.3給藥期雌性動物給藥期應(yīng)從胚胎硬腭閉合至哺乳結(jié)束(即上述生命周期中的C階段至E階段)，通常，大鼠為妊娠第15天至離乳（出生后第21天）。該段試驗并不完全包括由離乳期至青春期階段給藥，也不研究育齡期縮短的可能性。為了檢測可能用于嬰幼兒和兒童期藥物的不良影響，應(yīng)考慮具體情況，選擇特定年齡段子代直接給藥，進(jìn)行相關(guān)試驗研究。2.3.4動物處理雌性動物分娩并飼養(yǎng)其子代至離乳，每窩選擇雌、雄子代各1只，飼養(yǎng)至成年，然后進(jìn)行交配檢測其生殖能力。2.3.5觀察指標(biāo)試驗期間(母體動物)：體征和死亡情況，至少1次/天體重及體重變化，分娩前至少2次/周（HYPERLINK注釋12)畸形出生時存活的子代出生時死亡的子代子代出生時體重離乳前后的存活率和生長/體重，性成熟程度和生育力，應(yīng)說明是否進(jìn)行了窩仔動物剔除體格發(fā)育(HYPERLINK注釋14)感覺功能和反射(HYPERLINK注釋14)行為(HYPERLINK注釋14)3、其他試驗方案可根據(jù)受試物、擬用適應(yīng)癥及臨床用藥等特點，綜合考慮其他6）。以下為可采用的其他試驗方案的兩個例子。此外，能全面、合理地反映受試物生殖毒性特點的試驗方案也是可以接受的。3.1單一（全程）試驗設(shè)計（嚙齒類動物）如果將生育力和圍產(chǎn)期試驗連貫在一起全程給藥，則可對生殖過程從A到F各階段的情況進(jìn)行評價。假如該試驗中包括了對胎仔的檢查，且在足夠高的給藥劑量下得出了明確的陰性結(jié)果，可不再進(jìn)行進(jìn)一步的嚙齒類動物生殖毒性試驗。胎仔結(jié)構(gòu)異常檢查也可在附加的一項（或多項）胚胎-胎仔發(fā)育試驗中進(jìn)行，而成為兩段試驗。此外，還應(yīng)進(jìn)行第二種動物胚胎-胎仔發(fā)育影響試驗。推薦采用家兔。3.2兩段試驗設(shè)計（嚙齒類動物）如果其中包括對胎仔的檢查，最簡單的兩段試驗設(shè)計為生育力試驗和圍產(chǎn)期試驗。目前研究認(rèn)為，如果受試物在動物中的暴露量達(dá)到人體暴露量以上的足夠范圍時，圍產(chǎn)期試驗中并未發(fā)現(xiàn)其對產(chǎn)前發(fā)育有影響，那么在大多數(shù)情況下，再進(jìn)行胎仔檢查也不能顯著改變其危險性評價的結(jié)果。生育力試驗中雌性動物給藥期可持續(xù)至胚胎硬腭閉合，并參照胚胎-胎仔發(fā)育試驗中的方法對胎仔進(jìn)行檢查。這種與圍產(chǎn)期試驗聯(lián)合考慮的兩段試驗設(shè)計，可進(jìn)行“常用的試驗方案”中要求的所有檢查。此外，還應(yīng)進(jìn)行第二種動物胚胎-胎仔發(fā)育影響試驗。推薦采用家兔。（三）毒代動力學(xué)本指導(dǎo)原則中的毒代動力學(xué)，系指結(jié)合生殖毒性試驗進(jìn)行的考察藥物系統(tǒng)暴露的代謝動力學(xué)研究。毒代動力學(xué)可以描述實驗動物的系統(tǒng)暴露與暴露劑量、暴露時間和毒理學(xué)結(jié)果之間的關(guān)系。本指導(dǎo)原則中毒代動力學(xué)研究的主要目的在于分析生殖毒性試驗的結(jié)果，并利于不同的毒理學(xué)試驗結(jié)果間進(jìn)行科學(xué)合理的比較，為臨床用藥的風(fēng)險評估提供參考。毒代動力學(xué)試驗應(yīng)選擇合適的時間點采樣測定，從而獲得藥時曲線下面積（AUC）、峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時間（Tmax）等參數(shù)。某些藥物應(yīng)結(jié)合藥物血漿蛋白結(jié)合率來評價系統(tǒng)暴露量。毒代動力學(xué)數(shù)據(jù)可以來自生殖毒性試驗的全部動物，也可以來自部分動物。毒代動力學(xué)數(shù)據(jù)應(yīng)包括胎仔/幼仔數(shù)據(jù)，以評價藥物和/或代謝產(chǎn)物能否通過胎盤屏障、能否通過乳汁分泌。此部分動物可以包括低、中、高劑量組的動物，以便估算高劑量藥物在動物體內(nèi)的動力學(xué)過程是否屬非線性動力學(xué)過程。建議創(chuàng)新性藥物進(jìn)行毒代動力學(xué)研究。四、結(jié)果分析與評價動物生殖毒性試驗的最終目的在于預(yù)測人體可能出現(xiàn)的生殖、發(fā)育相關(guān)的毒性反應(yīng)。試驗結(jié)果的分析和評價是試驗的必要組成部分，應(yīng)對研究結(jié)果進(jìn)行科學(xué)和全面的分析和評價。（一）統(tǒng)計分析選用合適的統(tǒng)計方法，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。應(yīng)說明所選用統(tǒng)計學(xué)方法的合理性?！帮@著性”檢驗可幫助分析試驗結(jié)果。結(jié)果解釋本身必須以生物學(xué)的合理性為依據(jù)。僅僅因為沒有“統(tǒng)計學(xué)意義”而認(rèn)為與對照組結(jié)果的差別并非生物學(xué)因素所致的推論可能是錯誤的。從某種程度上講，認(rèn)為有“統(tǒng)計學(xué)意義”的差別一定與生物性因素有關(guān)也可能是錯誤的。特別是對那些呈偏態(tài)分布的低發(fā)生率的異常表現(xiàn)（例如，胚胎死亡、畸胎），相關(guān)各變量的可信區(qū)間可提示可能的作用大小。應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)程序時，應(yīng)考慮組間比較所采用的指標(biāo)單位：通常用窩而不是胎仔個體為單位，若親代兩種性別動物均給藥，則用交配對（也即兩代試驗研究中親代的配對）為單位。（二）數(shù)據(jù)報告建議將試驗數(shù)據(jù)制成表格，以說明每只動物的試驗結(jié)果。試驗組總體數(shù)據(jù)的表達(dá)形式從生物學(xué)角度看是合理的（即避免不真實的精確度），并反映變量的分布情況。各試驗數(shù)據(jù)（如體重、攝食量、每窩的相應(yīng)數(shù)據(jù)）制成的附錄或表格應(yīng)盡可能簡明，用絕對值而不是計算值來表示各數(shù)據(jù)；應(yīng)避免不必要的重復(fù)。對低發(fā)生率的觀察結(jié)果（如體征、尸解發(fā)現(xiàn)、畸形等）制表時，建議將陽性的幾個試驗數(shù)據(jù)一同列表。尤其是針對結(jié)構(gòu)改變（胎仔畸形）的數(shù)據(jù)，應(yīng)該在表格中清楚地標(biāo)明出現(xiàn)異常胎仔的窩號和各窩受影響的胎仔（號），并寫明受影響各胎仔被觀察到的全部改變。如果必要，可根據(jù)異常改變的類型從原始表中總結(jié)出其他派生的表格。（三）結(jié)果分析通常情況下，應(yīng)對受試物在動物中表現(xiàn)出來的生殖和發(fā)育兩方面的毒性進(jìn)行分析評價。如果出現(xiàn)陽性的生殖毒性或發(fā)育毒性結(jié)果，應(yīng)評估人體中出現(xiàn)生殖毒性和發(fā)育毒性風(fēng)險的可能性，這些陽性的毒性結(jié)果可能是在生殖毒性或一般毒性試驗中出現(xiàn)的，也可能是在人體研究中出現(xiàn)的。以下為常規(guī)需要分析評價的毒性：1、生殖毒性生殖毒性為可能影響F0代生殖能力的結(jié)構(gòu)和功能性改變，包括對生育力、分娩和哺乳的毒性影響等。生育力與給藥相關(guān)的雄性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官的退變或壞死、精子計數(shù)減少、精子活力或形態(tài)學(xué)改變、交配行為異常、不能交配、內(nèi)分泌功能改變或總體生育力降低。與給藥相關(guān)的雌性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官損傷、配子成熟和釋放相關(guān)的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)改變、交配行為異常、不能交配或總體生育力降低。分娩對動物產(chǎn)程和分娩的影響可表現(xiàn)為分娩起始和持續(xù)時間的改變。分娩持續(xù)時間通常報告為平均每胎耗時，或總分娩時間。哺乳哺乳期給藥后，可能對幼仔產(chǎn)生暴露，也可能改變母鼠的哺乳過程（乳汁質(zhì)量和數(shù)量）或改變母鼠的哺乳行為。2、發(fā)育毒性發(fā)育毒性為對F1代的毒性影響，包括死亡、畸形（結(jié)構(gòu)異常）、生長異常和功能性毒性等。死亡由于發(fā)育毒性導(dǎo)致的死亡可能發(fā)生于自妊娠早期到離乳后的任何時間（“胚胎-胎仔死亡”僅是發(fā)育毒性所致死亡的一種）中。陽性結(jié)果可能表現(xiàn)為著床前或著床后丟失、早期或晚期吸收、流產(chǎn)、死產(chǎn)、新生仔死亡或離乳后死亡。畸形即通常所指的結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為子代骨骼或軟組織畸形或變異。生長異常通常表現(xiàn)為生長遲滯，有時生長過快或早熟也被認(rèn)為是生長異常。評估生長速率的最常用指標(biāo)為體重，同時也可測定頂臀長、肛門與生殖器間距離等。功能性毒性包括任何正常生理或生化功能的持續(xù)改變，但通常僅測定神經(jīng)行為和生殖功能。常規(guī)測定指標(biāo)包括自主活動、學(xué)習(xí)記憶、反射、性成熟時間、交配行為和生育力。3、其他很多情況下，親代和子代所表現(xiàn)出來的生殖毒性可能是母體毒性所繼發(fā)的。應(yīng)結(jié)合相關(guān)毒性研究結(jié)果，如長期毒性研究等，判斷表現(xiàn)出來的生殖毒性是否為母體毒性的繼發(fā)結(jié)果。（四）綜合評價生殖毒性研究是藥物安全性評價與藥物整體開發(fā)進(jìn)程的一個有機(jī)組成部分。生殖毒性研究不能與藥效學(xué)、藥代動力學(xué)和其他毒理學(xué)研究割裂，試驗結(jié)果應(yīng)力求與其他藥理毒理試驗結(jié)果互為印證、說明和補(bǔ)充。在對生殖毒性試驗結(jié)果進(jìn)行評價時，應(yīng)結(jié)合以下信息進(jìn)行綜合分析：（1）受試物的藥學(xué)特點；（2）藥效學(xué)、藥代動力學(xué)和其他毒理學(xué)研究的結(jié)果，特別是長期毒性試驗和遺傳毒性試驗結(jié)果；（3）臨床研究受試者人群特征以及已取得的臨床研究的結(jié)果。中藥、天然藥物還應(yīng)結(jié)合處方組成特點、方中藥味毒性情況、臨床應(yīng)用背景情況等進(jìn)行綜合分析。試驗結(jié)果的評價最終應(yīng)落實到臨床研究受試者范圍限定、風(fēng)險效益評估以及必要防治措施的制定和應(yīng)用上。五、生殖毒性研究的階段性1、化學(xué)藥物根據(jù)受試物、擬用適應(yīng)癥特點，特別是臨床研究受試人群的特點，可分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究。通常情況下，應(yīng)在臨床研究開始前提供完整的生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗、胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗資料，圍產(chǎn)期毒性試驗資料可在上市申請時提供。但是，在一些特殊情況下，可能會需要提前提供相關(guān)生殖毒性研究資料，例如用于育齡人群并可能對生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥（如避孕藥、性激素、治療性功能障礙、促精子生成藥以及致突變試驗陽性或有細(xì)胞毒作用等的新藥）；而在另外一些情況下可能會適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時間，例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的藥物等。上述特殊情況下需要進(jìn)行的生殖毒性試驗內(nèi)容也需要根據(jù)具體情況來確定。（HYPERLINK\l"_注釋15：階段性"注釋15）2、中藥及天然藥物新的有效成分及其制劑、新的中藥材及其制劑，可參考化學(xué)藥物要求分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究。對于其他需進(jìn)行生殖毒性研究的中藥、天然藥物，如用于育齡人群并可能對生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥（如避孕藥、性激素、治療性功能障礙、促精子生成藥、保胎藥以及致突變試驗陽性或有細(xì)胞毒作用等的藥物），應(yīng)根據(jù)具體情況提供相應(yīng)的生殖毒性研究資料，這時需根據(jù)具體情況來確定生殖毒性試驗內(nèi)容及進(jìn)行的時間。在一些情況下可能會適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時間，例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的治療藥物等。六、參考文獻(xiàn)1、生殖毒性試驗。見：新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)）。中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，1993:216-2172、生殖毒性和發(fā)育毒性。見：周宗燦主編，毒理學(xué)基礎(chǔ)，第二版。北京醫(yī)科大學(xué)出版社。北京，2000:128-1433、ICHSteeringCommittee.HarmonisedTripartiteGuidelineS5A:Detectionoftoxicitytoreproductionformedicinalproducts.4、ICHSteeringCommittee.HarmonisedTripartiteGuidelineS5B:MaintenanceoftheICHguidelineontoxicitytomalefertility.5、ICHSteeringCommittee.HarmonisedTripartiteGuidelineM3:Non-clinicalsafetystudiesfortheconductofhumanclinicaltrialsforpharmaceuticals.6、生殖發(fā)生毒性試驗。見：日本臨床前研究指導(dǎo)原則解說。藥事日報社，2002：49-627、OmoriY.Principlesandguidelinesareviewofrecommendations(ondetectionoftoxicity)inthethreeregions.In:P.F.D’ArcyandD.W.G.Harronedited,ProceedingsoftheFirstInternationalConferenceonHarmonization.Brussels1991:256-2668、EECguidelines:Detectionoftoxicitytoreproductionformedicinalproductsincludingtoxicitytomalefertility.9、FDA.Reviewerguidance:Integrationofstudyresultstoassessconcernsabouthumanreproductiveanddevelopmentaltoxicities.七、著者《藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組。八、相關(guān)注釋注釋1：妊娠動物的藥代動力學(xué)由于妊娠和哺乳期動物存在生理方面的迅速變化，其藥代動力學(xué)可能出現(xiàn)改變，最好采用分段（分二段或三段）的研究方法。在制定試驗研究計劃的過程中，藥代動力學(xué)資料（常來源于非妊娠動物），可為判斷動物種屬的總體適用性提供信息，也可有助于研究方案的確立和劑量的設(shè)定。在試驗過程中，藥代動力學(xué)研究可以為設(shè)定給藥劑量提供參考，也可提示其與預(yù)期結(jié)果是否存在明顯偏差。注釋2：動物選擇應(yīng)注意選用與人類相關(guān)的動物。如果已有的藥代動力學(xué)、藥理毒理研究信息能顯示某種屬與人類相關(guān)，則可僅采用此一種動物進(jìn)行試驗。如果某一種屬動物未表現(xiàn)出（與第一種動物相同的）與人類的相似性，則將其選作第二種動物的價值很小。所有的動物種屬都有其優(yōu)點，例如，大鼠，其次是小鼠，都可用作進(jìn)行生殖毒性研究通用的較佳動物種屬。家兔作為非嚙齒類動物用于胚胎毒性研究，也可用于生育力研究。家兔和犬的精液樣品可不借助于痛苦性的技術(shù)（如電刺激采精）而獲得，可用于精液分析研究。其他大多數(shù)動物種屬通常不適合用于生殖毒性研究，這些動物可能僅僅適合用于進(jìn)行某些特定的試驗研究。所有動物種屬都有其不足之處，例如：大鼠：對性激素敏感；不適合用于多巴胺受體激動劑的研究，因其早期妊娠的發(fā)生和維持所依賴的激素主要是催乳素；妊娠后期對非甾體抗炎藥高度敏感。小鼠：代謝率高，易驚、群體畸形現(xiàn)象（所有種屬動物均會出現(xiàn)）特別明顯，胎仔小。家兔：常缺乏藥代動力學(xué)和毒理資料，對一些抗生素和消化道功能紊亂敏感，臨床表現(xiàn)的解釋較困難。豚鼠：常缺乏藥代動力學(xué)和毒理資料，對一些抗生素和消化道功能紊亂敏感，胎仔發(fā)育期長，歷史背景資料不足。家豬和/或小型豬：群體畸形的背景情況多變,所需的受試物量大，需要較大飼養(yǎng)空間，歷史背景資料不足。白鼬：如果不采用特殊的管理系統(tǒng)，只能季節(jié)性繁殖（其成功與否主要取決于人和動物的相互影響），歷史背景資料不足。倉鼠：靜脈給藥雖非不可能，但相當(dāng)困難，會將受試物存于頰部小囊中而影響實際給藥量，攻擊性非常強(qiáng)，對腸道功能紊亂敏感，對許多受試物有過度敏感的致畸反應(yīng)，胎仔小。犬：季節(jié)性繁殖，多近親繁殖，歷史背景資料不足。非人靈長類動物：與其他種屬動物一樣，其藥代動力學(xué)情況與人不同，歷史背景資料不足，常常因為其只數(shù)太少而難以進(jìn)行危險性評估。更適合用于進(jìn)行明確生殖毒性物質(zhì)（該毒性已比較肯定）特性的試驗研究，而不是評估其危險性。注釋3：整體動物以外的其他試驗系統(tǒng)已經(jīng)建立了一些整體動物以外的其他試驗系統(tǒng)，并在預(yù)試驗研究（“預(yù)篩選”或“優(yōu)先選擇”）和后續(xù)試驗研究中采用。為對同系的一組受試物進(jìn)行預(yù)試驗，研究清楚其中至少一種受試物對整體動物的可能作用較為重要（可推斷其作用）。據(jù)此，可選擇一些受試物進(jìn)行更進(jìn)一步的試驗。從后續(xù)研究或進(jìn)一步明確受試物的作用特征上考慮，其他試驗系統(tǒng)可能有助于詳細(xì)研究某些可觀察到的發(fā)育過程，例如，揭示具體毒性機(jī)理、明確（藥物）濃度-反應(yīng)關(guān)系、選擇“敏感（生長發(fā)育）階段”，或檢測已知代謝產(chǎn)物的作用。注釋4：劑量選擇劑量選擇是生殖毒性試驗設(shè)計的關(guān)鍵問題之一。可根據(jù)已有的研究資料來選擇高劑量，如果已有資料信息不足，應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗。大約2～4周重復(fù)給藥毒性試驗研究的周期，與各段生殖毒性研究設(shè)計的很接近。若選擇與重復(fù)給藥毒性研究相似的劑量，可參考全身毒性表現(xiàn)，以分析對生育力方面的影響。生殖毒性研究中存在許多可變因素，劑量-反應(yīng)關(guān)系趨勢的存在與否，是判斷效應(yīng)與藥物相關(guān)性的一個關(guān)鍵性依據(jù)。由于劑量-反應(yīng)關(guān)系曲線可能是陡直的，故不建議設(shè)計寬的劑量間距。若試圖通過一項研究來分析效應(yīng)的劑量-反應(yīng)關(guān)系，應(yīng)至少設(shè)三個劑量組和適當(dāng)?shù)膶φ战M。若還不能確定其劑量-反應(yīng)關(guān)系，應(yīng)增設(shè)劑量組，避免劑量間距過大，并應(yīng)確定生殖毒性方面“未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平”。在劑量選擇時參考藥代動力學(xué)研究結(jié)果是重要的，若劑量的增加并不導(dǎo)致血漿和組織中濃度的升高，則增加劑量的意義很小。劑量間距的大小取決于藥代動力學(xué)和其他毒性研究結(jié)果。應(yīng)優(yōu)先考慮盡量小的劑量間距。注釋5：給藥途徑選擇通常，給藥途徑與臨床擬用途徑一致，但如果藥代動力學(xué)研究結(jié)果顯示，某種給藥途徑下機(jī)體中的暴露量（UC）更高，此時，選用暴露量更小或?qū)嶋H操作相當(dāng)困難的給藥途徑（如吸入給藥）的意義可能較小。經(jīng)口給藥，通常使用灌胃給藥法。摻食法（飼料/飲水）給藥時，往往達(dá)不到預(yù)期劑量或不能準(zhǔn)確給藥，因此一般不采用。注射給藥，應(yīng)注意受試物的性狀及其局部安全性。靜脈注射時，應(yīng)注意控制注射速度，防止藥液泄漏。腹腔注射時可能會對子宮或胎仔直接產(chǎn)生作用，故采用妊娠動物進(jìn)行試驗時，一般不用該途徑。有時也可采用皮下或肌內(nèi)注射途徑。對于臨床上局部應(yīng)用（皮膚、眼、耳等）的受試物，可采用其他的給藥途徑替代。皮膚給藥時，應(yīng)避免動物舔食、與籠子摩擦和剃毛時的皮膚損傷。皮膚給藥的替代途徑，可采用吸收途徑類似的皮下注射。當(dāng)選擇的給藥途徑與臨床擬用途徑不同時，應(yīng)說明依據(jù)。注釋6：試驗方案選擇此外，對多巴胺受體激動劑或減少循環(huán)中催乳素水平的受試物，雌性大鼠為較差的模型動物，而家兔可能是用于上述受試物所有生殖毒性研究的更好的動物種屬，但目前似乎尚未進(jìn)行這種嘗試。若有證據(jù)顯示家兔的代謝方式比大鼠與人更接近，則家兔也可用于其他類型受試物的生殖毒性研究。注釋7：常規(guī)試驗與后續(xù)試驗常規(guī)試驗（指導(dǎo)原則規(guī)定的試驗）在不同程度上具有難以判斷的特點，即對某一指標(biāo)影響的產(chǎn)生，可能有多種不同原因。例如，出生時每窩幼仔數(shù)的減少可能是因為排卵率（黃體數(shù)）的減少、著床前死亡率的提高，或因為著床后死亡率或出生后立即死亡率的增加所致。而上述死亡可能是其早期胎體畸形的后果，由于隨后的繼發(fā)性改變等原因，該畸形不能夠再觀察到。尤其是那些在對照組中已表現(xiàn)出的低發(fā)生率的反應(yīng)，給藥所致影響與偶然出現(xiàn)的情況間的區(qū)別，就要根據(jù)其與其他類型影響的關(guān)系來判斷。因此，若發(fā)現(xiàn)對某一指標(biāo)的影響，應(yīng)考慮進(jìn)行后續(xù)試驗以探索其可能的聯(lián)系，明確其毒性的性質(zhì)、范圍和原因，也包括判斷其劑量-反應(yīng)關(guān)系以便有助于其危險性評價。這不同于常規(guī)試驗的情況，此時劑量-反應(yīng)關(guān)系存在與否，將有助于區(qū)別給藥所致影響與偶然情況的不同。注釋8：計時方法本指導(dǎo)原則中，妊娠的計時方法為以觀察到陰道涂片精子陽性和/或陰栓的日期計為妊娠第0天。大鼠和家兔的著床發(fā)生在妊娠的第6～7天，硬腭閉合在第15～18天。其他計時方法也可接受，但必須在報告中明確說明。另外，研究者必須在不同的研究中保持計時方法的一致性，以確保給藥過程中不出現(xiàn)空隙。建議在相關(guān)研究的給藥期之間，應(yīng)設(shè)計至少一天的重疊期。交配時間會影響胎仔和幼仔相關(guān)參數(shù)的變異性，應(yīng)確認(rèn)準(zhǔn)確的交配時間。通常，幼仔動物的出生日即計為產(chǎn)后或哺乳的第0天。可借助準(zhǔn)確的交配日期來判斷是否出現(xiàn)分娩延遲或滯產(chǎn)。注釋9：動物數(shù)對動物數(shù)的要求，總體原則是滿足數(shù)據(jù)分析的需要?？紤]到國內(nèi)的現(xiàn)實情況，本指導(dǎo)原則中仍然保留了對動物數(shù)的最低要求。該注釋10：給藥時間生育力試驗，尤其減少雄性動物交配前給藥期，應(yīng)根據(jù)前期試驗所積累的資料以及對精子發(fā)生過程基礎(chǔ)研究的再評價而設(shè)計（對精子發(fā)生的研究以往尤其要求較長的交配前給藥期）。但選擇性影響雄性生殖功能的受試物是罕見的，通過與雌性動物交配來觀察受試物對精子發(fā)生影響這一方法是不靈敏的；而充分的雄性動物生殖器官病理學(xué)和組織病理學(xué)檢查(如通過Bouin's固定、石蠟包埋、睪丸2～4μm橫切片，附睪縱切片，PAS和蘇木素染色)則是檢查對精子發(fā)生的影響的一種更為敏感和快捷的方法。影響精子發(fā)生的受試物一般作用于分裂后期。尚無僅通過雄性動物給藥9～10周并與雌性交配，來發(fā)現(xiàn)雄性生殖方面毒性的有說服力的例子（試驗）。生育力試驗可對重復(fù)給藥毒性試驗中組織學(xué)檢查不能觀察到的受試物對雄性生育力的功能性影響，以及對雌雄動物交配行為的影響進(jìn)行評價。重復(fù)給藥試驗可提供受試物對精子發(fā)生的潛在影響的信息。評價對精子的影響應(yīng)參考至少1個月的重復(fù)給藥毒性試驗的結(jié)果。如果在1個月以上的重復(fù)給藥毒性試驗中未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用，那么在交配前雄性動物給藥周期可縮短至4周。已有研究顯示大鼠精子