蛋白質(zhì)檢測(cè)方法

關(guān)于蛋白質(zhì)檢測(cè)方法Contents1、蛋白質(zhì)簡(jiǎn)介2、蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法3、蛋白質(zhì)與疾病的關(guān)系第2頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月蛋白質(zhì)簡(jiǎn)介

蛋白質(zhì)是由氨基酸脫水縮合形成的空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子有機(jī)物，其主要化學(xué)元素為C（約50%）、O（約23%）、N（約16%）、H（約7%）、S（約0~3%）。氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位，蛋白質(zhì)既具有氨基酸的部分理化特性，也具有其它有機(jī)物的一些共性以及眾多的自身獨(dú)有特點(diǎn)與性質(zhì)：高分子、兩性解離及等電點(diǎn)、水合作用、變性作用、顯色反應(yīng)（雙縮脲反應(yīng)、Folin-酚反應(yīng)、茚三酮反應(yīng)、米倫反應(yīng)、黃蛋白反應(yīng)、乙醛酸反應(yīng)、坂口反應(yīng)、偶氮反應(yīng)、考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)、氨基酸的α-氨基及α-羧基反應(yīng)、）蛋白質(zhì)的異常表達(dá)與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)

第3頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法傳統(tǒng)蛋白質(zhì)檢測(cè)方法：免疫印跡法；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)常規(guī)方法：物理法：紫外吸收法化學(xué)法：凱氏定氮法；比色法高效液相色譜法毛細(xì)管凝膠電泳法近紅外光譜法質(zhì)譜法熒光法第4頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月免疫印跡法（Westernblot）原理：蛋白樣品經(jīng)過(guò)電泳分離后，轉(zhuǎn)移并固定于膜上，然后應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測(cè)的方法。Western雜交是將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測(cè)定相結(jié)合的特異性蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法免疫印跡法是檢測(cè)蛋白質(zhì)混合溶液中某種特定目的蛋白的定性方法，也可以作為確定同一種蛋白質(zhì)在不同細(xì)胞或同一種細(xì)胞在不同條件下的相對(duì)含量的半定量方法。第5頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月免疫印跡法檢測(cè)樣品中特異蛋白質(zhì)的基本流程樣品的凝膠電泳蛋白印跡封閉反應(yīng)與特異性抗體（一抗）孵育與酶耦聯(lián)的二抗孵育顯色或化學(xué)發(fā)光顯影觀察和記錄結(jié)果第6頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbantassay，ELISA）是一種固相免疫測(cè)定技術(shù)，先將已知的抗原或抗體包被到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。測(cè)定時(shí)，將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗原或抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其光密度（OD）值的大小進(jìn)行定性或定量分析。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高；特異性好；簡(jiǎn)便；重復(fù)性好。ELISA和Western雜交都利用抗原抗體間的分子識(shí)別作用，借助不同的抗體分子標(biāo)記實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的檢測(cè)。第7頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月紫外吸收法理論基礎(chǔ)：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基使其在280nm處具有紫外吸收，其吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比。此外，蛋白質(zhì)溶液在238nm的吸光度值與肽鍵含量成正比。利用一定波長(zhǎng)下蛋白質(zhì)溶液的吸光度值與蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān)系可以測(cè)定蛋白質(zhì)含量。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、靈敏、快速，不消耗樣品，測(cè)定后能回收缺點(diǎn):準(zhǔn)確度較差、專一性差、干擾物質(zhì)多，若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質(zhì)，會(huì)出現(xiàn)較大的干擾第8頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月凱氏定氮法理論基礎(chǔ)：各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，通常占其總重量的16％左右。蛋白質(zhì)樣品用濃硫酸消化后，可以轉(zhuǎn)變?yōu)榱蛩徜@，硫酸銨中的NH4+與NaOH反應(yīng)又可轉(zhuǎn)變?yōu)镹H3，用硼酸液吸收后，可由標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定并定量。凱氏定氮法由于蛋白質(zhì)是體內(nèi)的主要含氮物，因此，通過(guò)測(cè)定生物樣品的含氮量便可估算出樣品中的總蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)含量＝含氮量Х6.25此方法的測(cè)定范圍為0.2～1.0mg氮。優(yōu)點(diǎn)：應(yīng)用范圍廣，重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高缺點(diǎn)：局限于樣品中總蛋白的檢測(cè)，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，易受到被測(cè)樣品中其它有機(jī)含氮化合物的干擾第9頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-雙縮脲法原理：蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵，故有雙縮脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）反應(yīng)。在堿性條件下，肽鍵的質(zhì)子被解離，Cu2+和失去質(zhì)子的多肽鏈的氮相結(jié)合產(chǎn)生穩(wěn)定的紫色絡(luò)合物，在540～560nm的光吸收值與蛋白質(zhì)的含量在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。由于與雙縮脲試劑與不同種類的蛋白質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物的顏色差別極小，使得該方法比較適合總蛋白質(zhì)的檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、測(cè)量速度快缺點(diǎn)：靈敏度較差，精度不高第10頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-Folin-酚試劑/Lowry法原理：1、蛋白質(zhì)在堿性條件下與試劑甲（雙縮脲試劑）中的Cu2+形成絡(luò)合物。2、由于蛋白質(zhì)含芳香族氨基酸殘基（如Tyr和Trp），生成的絡(luò)合物可還原試劑乙（Folin-酚試劑）中的磷鉬酸和磷鎢酸而產(chǎn)生鉬藍(lán)和鎢藍(lán)復(fù)合物，該復(fù)合物顯藍(lán)色，其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，可用于定量分析。優(yōu)點(diǎn)：反應(yīng)靈敏，檢測(cè)限低，比較適合微量蛋白質(zhì)的測(cè)量缺點(diǎn)：Folin-酚試劑在堿性條件下極不穩(wěn)定因而要求精確控制操作時(shí)間，且容易受去酚類、糖類、尿素等多種物質(zhì)的干擾。此外，而不同的蛋白質(zhì)的酪氨酸和色氨酸的含量不同，導(dǎo)致在不知道蛋白質(zhì)種類的情況下測(cè)量結(jié)果存在部分偏差。第11頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-BCA法BCA（Bicinchoninicacid)試劑的主要成分為二喹啉甲酸鈉。BCA并不能直接與蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)或是物理上的反應(yīng)，而是對(duì)雙縮脲反應(yīng)的強(qiáng)化。BCA極易與Cu+結(jié)合形成紫色的復(fù)合物，該復(fù)合物在562nm處有最大吸收峰，對(duì)入射光的吸收程度與Cu+的濃度成正比。第12頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-BCA法優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好、顯色靈敏度高，顯色靈敏度與Folin-酚法相當(dāng)，且不受去垢劑、變性劑的影響缺點(diǎn)：反應(yīng)速度慢，易受糖類、尿素、B2

巰基乙醇等物質(zhì)的干擾，比Folin-酚法對(duì)糖類更加敏感第13頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-考馬斯亮藍(lán)法理論基礎(chǔ)：1、考馬斯亮藍(lán)屬于三苯甲烷類染料，分為G-250和R-250兩種，是目前使用最為廣泛的一種蛋白質(zhì)染色劑。2、考馬斯亮藍(lán)G-250在游離狀態(tài)下呈紅色，吸收峰位置為488nm左右，容易與蛋白質(zhì)中的精氨酰和賴氨酰殘基結(jié)合，結(jié)合后顏色變?yōu)樗{(lán)色，最大吸收峰的位置轉(zhuǎn)移到595nm。優(yōu)點(diǎn)：結(jié)合穩(wěn)定、反應(yīng)速度快、顯色靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，不受酚類、游離氨基酸、絡(luò)合劑等成分干擾缺點(diǎn)：不同蛋白質(zhì)中的精氨酰和賴氨酰殘基的含量不同，因此其與不同的蛋白質(zhì)結(jié)合有強(qiáng)有弱，導(dǎo)致測(cè)量不同的蛋白質(zhì)時(shí)存在較大偏差第14頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-茚三酮法茚三酮，又名苯并戊三酮，溶于水后與水分子結(jié)合形成水合茚三酮，進(jìn)而可與氨、一級(jí)胺、二級(jí)胺發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成紫藍(lán)色或黃色縮合物。茚三酮法可用于水解蛋白質(zhì)的檢測(cè)。第15頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色法-茚三酮法以氨基酸為例，首先在弱酸性加熱條件下氨基酸與水合茚酸酮發(fā)生氧化反應(yīng)，氨基酸脫去氨基和羥基變成醛類化合物，水合茚三酮吸收氨基并脫去分水子變成胺合茚三酮。隨后胺合茚三酮與茚三酮反應(yīng)生成席夫堿，并最終形成紫藍(lán)色或黃、棕色化合物，產(chǎn)物顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度相關(guān)，最大吸收波長(zhǎng)為570nm左右。優(yōu)點(diǎn)：極高的顯色靈敏度和良好的檢出限缺點(diǎn)：水合茚三酮和不同的氨基酸顯色程度有所差異，蛋白質(zhì)水解程度的不同容易對(duì)測(cè)量結(jié)果造成較大誤差。此外，茚三酮顯色劑的穩(wěn)定性較差，不利于長(zhǎng)期存儲(chǔ)第16頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月高效液相色譜法原理：1、利用組分在兩相中的熱力學(xué)分配系數(shù)和動(dòng)力學(xué)擴(kuò)散系數(shù)差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合組分分離2、由于不同的物質(zhì)的溶解度、蒸汽壓、吸附能力等物理化學(xué)性質(zhì)存在差異，它們?cè)诹鲃?dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)有所不同，當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)樣品組分在兩相之間進(jìn)行多次連續(xù)分配，最終實(shí)現(xiàn)各組分的彼此分離優(yōu)點(diǎn)：其分離柱壽命長(zhǎng)、分離效率高、分析時(shí)間短、進(jìn)樣量小、檢測(cè)靈敏度高

缺點(diǎn)：對(duì)組成單位相似、分子極性相近、分子大小不同的動(dòng)植物蛋白組分分離效果不佳

第17頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月近紅外光譜法原理：當(dāng)紅外光照射樣品分子時(shí)，極性共價(jià)鍵選擇性地吸收某些波長(zhǎng)的光后產(chǎn)生振動(dòng)能級(jí)躍遷，吸收光子的頻率與躍遷前后的能量差相關(guān)，吸收的強(qiáng)度取決于化學(xué)鍵振動(dòng)的非諧性。分子的基頻振動(dòng)產(chǎn)生的吸收譜帶位于波長(zhǎng)2500-25000nm的中紅外區(qū)域，發(fā)生780-1100nm的短波近紅外區(qū)1100-2500nm的長(zhǎng)波近紅外區(qū)的吸收譜帶對(duì)應(yīng)著基頻振動(dòng)的倍頻和組合頻。含氫基團(tuán)（X-H）的振動(dòng)躍遷非諧性常數(shù)最高，其在有機(jī)物的近紅外吸收光譜中占主導(dǎo)地位。優(yōu)點(diǎn)：絕大多數(shù)的有機(jī)物都有吸收響應(yīng)，所以測(cè)量時(shí)幾乎無(wú)需進(jìn)行樣品前處理缺點(diǎn)：吸收系數(shù)小，其檢測(cè)限通常不到0.1%，不利于對(duì)蛋白質(zhì)的衡量分析第18頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月質(zhì)譜法原理：質(zhì)譜分析法是將化合物形成母離子和碎片離子,根據(jù)離子的質(zhì)荷比(m/z)進(jìn)行分離,從而對(duì)化合物的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析的方法質(zhì)譜分析的一般過(guò)程是:樣品由合適的進(jìn)樣裝置引入并進(jìn)行氣化,氣化后的樣品進(jìn)入離子源后被電離,電離后的離子經(jīng)過(guò)適當(dāng)加速后進(jìn)入質(zhì)量分析器,根據(jù)不同的m/z進(jìn)行分離,到達(dá)檢測(cè)器,產(chǎn)生不同的信號(hào),利用專業(yè)的生物軟件進(jìn)行后續(xù)分析。優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高，靈敏度高，與傳統(tǒng)的生物學(xué)技術(shù)手段相比,基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)更適合于臨床疾病的研究缺點(diǎn)：技術(shù)發(fā)展不夠完善第19頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月毛細(xì)管凝膠電泳法原理：電泳也稱作電遷移，是指溶液中帶電粒子在電場(chǎng)中所發(fā)生的遷移運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)的遷移率與組分分子的大小、極性、親和能力、等電點(diǎn)、相分配系數(shù)以及所帶電荷的多少等多個(gè)因素有關(guān)。毛細(xì)管電泳又稱為毛細(xì)管電分離，是以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力、根據(jù)帶電粒子遷移率的不同來(lái)實(shí)現(xiàn)組分分離的一種液相分離技術(shù)。在毛細(xì)管內(nèi)充滿凝膠介質(zhì)的電泳稱為毛細(xì)管凝膠電泳。電泳過(guò)程中，不同分子在電場(chǎng)作用下發(fā)生電泳遷移時(shí)受到網(wǎng)狀凝膠的阻礙作用不同，使其遷移速度不同，最終被分離。優(yōu)點(diǎn)：分離度極高，分離速度較快、樣品消耗量少（進(jìn)樣量為nL級(jí)）缺點(diǎn)：分離檢測(cè)成本高，大分子容易積留、清洗困難，重現(xiàn)性差第20頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月熒光法熒光探針具有靈敏度高，選擇性好，體積小，受生物體內(nèi)活性小分子及金屬離子干擾小等優(yōu)點(diǎn)基于小分子熒光探針檢測(cè)蛋白質(zhì)小分子與蛋白質(zhì)相互作用后可引起小分子熒光光譜和蛋白質(zhì)自身熒光內(nèi)源熒光光譜以及同步熒光光譜的變化,如熒光強(qiáng)度和偏振度的改變、新熒光峰的出現(xiàn)等,這些均可以提供小分子與蛋白質(zhì)結(jié)合的信息。小分子與蛋白質(zhì)作用引起體系熒光性質(zhì)改變有兩種情況：小分子無(wú)熒光,在蛋白質(zhì)溶液中加入小分子后,蛋白質(zhì)的內(nèi)源熒光淬滅小分子有熒光,蛋白質(zhì)與小分子作用后,內(nèi)源熒光被淬滅,而小分子的熒光被敏化增強(qiáng)第21頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月基于蛋白質(zhì)疏水作用：在水介質(zhì)中球狀蛋白質(zhì)的折疊總是傾向于把疏水性殘基包埋在分子內(nèi)部而形成疏水空腔。疏水作用及親水和疏水平衡在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能方面起著關(guān)鍵作用。利用極性敏感有機(jī)小分子熒光探針與蛋白質(zhì)結(jié)合前后基于其疏水空腔提供了一個(gè)非極性環(huán)境從而導(dǎo)致探針熒光性質(zhì)的改變第22頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月基于蛋白質(zhì)與有機(jī)染料結(jié)合作用蛋白質(zhì)與熒光染料結(jié)合后,能使溶液熒光強(qiáng)度增強(qiáng)或淬滅,并且其變化量與蛋白質(zhì)濃度成正比。有機(jī)染料包括：血管黃素，曙紅Y，鉻天青S，溴酚藍(lán)，四羧基苯基卟啉，Evansblue，偶氮染料，方酸菁染料，酞菁染料等

曙紅Y鉻天青S第23頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月溴酚藍(lán)四羧基苯基卟啉Evansblue第24頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月偶氮染料方酸菁染料酞菁染料第25頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月基于AIE機(jī)理檢測(cè)蛋白質(zhì)此外，小分子熒光探針還可基于熒光能量共振轉(zhuǎn)移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(photo-inducedelectrontransferPET）,分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(Intramolecularchargetransfer,ICT)等效應(yīng)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行選擇性識(shí)別第26頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月基于自組裝機(jī)理檢測(cè)蛋白質(zhì)

超分子化學(xué)：分子聚集體結(jié)構(gòu)和功能為研究對(duì)象,旨在研究分子基于弱相互作用的組裝、自組裝和自組織行為,并研究這些行為可能帶來(lái)的結(jié)構(gòu)和功能的改變,以期建立結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系。超分子的組裝的實(shí)現(xiàn)依賴于分子間鍵.它包括氫鍵、范德華力、親脂-疏水作用、金屬離子的配位鍵、π-π堆積作用等PalapuravanAnees,etal.J.Am.Chem.Soc.2014,136,13233?13239第27頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月比色/比率型熒光探針檢測(cè)蛋白質(zhì)利用催化消除氨基甲酸酯保護(hù)基團(tuán)合成了反應(yīng)型探針，BSA的存在使得氨基萘二甲酰亞胺的綠色熒光增強(qiáng)，根據(jù)溶液顏色變化和熒光強(qiáng)度比值識(shí)別并定量檢測(cè)。X.Zhang.etal.Analyst,2011,136(19):4008-4012.第28頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月基于熒光有機(jī)納米材料檢測(cè)蛋白質(zhì)納米材料，是指在三維空間中至少有一維處于納米尺度范圍（＜100nm）或由該尺度范圍的物質(zhì)作為基本單元構(gòu)成的材料。納米材料的特殊結(jié)構(gòu)，使其具有不同于常規(guī)材料和單個(gè)分子的一些特性，主要包括比表面積大、高化學(xué)活性、特殊的光、電、磁性質(zhì)等。而熒光納米材料，由于其特殊的結(jié)構(gòu)與光學(xué)特性，為化學(xué)、物理、醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的發(fā)展帶來(lái)了新的機(jī)遇。第29頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月半導(dǎo)體量子點(diǎn)量子點(diǎn)是主要由Ⅱ-Ⅵ族及Ⅲ-Ⅴ族元素構(gòu)成的半導(dǎo)體納米顆粒。量子點(diǎn)在研究蛋白質(zhì)方面具有許多優(yōu)勢(shì)。首先，可以用同一激發(fā)波長(zhǎng)的光源同時(shí)激發(fā)多種不同熒光的量子點(diǎn)，并且由于其發(fā)射譜帶窄而對(duì)稱，多種顏色的發(fā)射峰不易出現(xiàn)重疊與紅移拖尾，熒光光譜易于區(qū)分和識(shí)別。另外，量子點(diǎn)的斯托克斯位移較大，可以有效避免激發(fā)峰與發(fā)射峰的重疊，減少干擾。此外，量子點(diǎn)的光學(xué)特征可以通過(guò)控制反應(yīng)條件有效控制

量子點(diǎn)熒光可調(diào)的光學(xué)特征為蛋白質(zhì)多色標(biāo)記及同步檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。第30頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月嵌入式核殼熒光納米顆粒嵌入式核殼熒光納米顆粒是指一些負(fù)載有機(jī)熒光染料分子的無(wú)機(jī)納米顆?；蚨嗑凵锎蠓肿影恍图{米顆粒。這種材料在蛋白質(zhì)標(biāo)記成像中有固有優(yōu)點(diǎn)。

首先，納米顆粒對(duì)內(nèi)部所包裹的熒光染料有保護(hù)作用，使其熒光穩(wěn)定性增強(qiáng)，可以克服外界環(huán)境對(duì)熒光材料的影響。

其次，一個(gè)納米顆粒內(nèi)所包裹的熒光分子往往多達(dá)幾千甚至幾萬(wàn)個(gè)，因此，更多的熒光分子可以連接在生物分子上，當(dāng)產(chǎn)生信號(hào)響應(yīng)時(shí)，很多熒光分子同時(shí)產(chǎn)生熒光信號(hào)，起到了信號(hào)放大的作用，從而提高檢測(cè)靈敏度第31頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月碳點(diǎn)碳點(diǎn)是一種近似球型且直徑小于10nm的零維半導(dǎo)體納米晶體，是由極少分子或是原子組成的納米團(tuán)簇。熒光性能是碳點(diǎn)最突出的性能，碳點(diǎn)具有熒光穩(wěn)定性高、熒光波長(zhǎng)可調(diào)、抗光漂白能力強(qiáng)、激發(fā)光寬且連續(xù)、能夠?qū)崿F(xiàn)一元激發(fā)、多元發(fā)射等特點(diǎn)。制備碳點(diǎn)的碳源來(lái)源豐富且價(jià)廉、毒性低。利用碳點(diǎn)表面的—NH2和—OH，在碳點(diǎn)表面接上對(duì)生物分子有特異性識(shí)別作用的核酸適體或分子印跡聚合物，可提高分析的靈敏度和選擇性。在蛋白質(zhì)研究中，碳點(diǎn)通過(guò)與蛋白質(zhì)的作用，改變了表面電子空穴對(duì)之間的復(fù)合效率，從而發(fā)生熒光的增強(qiáng)或猝滅，實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的標(biāo)記和分析。第32頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月貴金屬元素納米簇貴金屬元素納米簇的尺寸通常小于2nm，具有強(qiáng)的可見(jiàn)-近紅外熒光。同其他熒光納米材料相比，貴金屬元素納米簇更加穩(wěn)定，分散性更好。近幾年來(lái)，貴金屬納米簇分子橋的研究是一大熱點(diǎn)。由于金屬納米簇的低毒性，近紅外光譜特征，超小尺寸及優(yōu)良的熒光性質(zhì)，它們已廣泛用于蛋白質(zhì)檢測(cè)、標(biāo)記成像及蛋白質(zhì)間相互作用的研究領(lǐng)域。第33頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月磁性熒光納米顆粒磁性熒光納米顆粒是一種結(jié)合了磁性和發(fā)光性能的納米材料。磁性熒光納米材料集合了磁性納米顆粒的快速磁響應(yīng)性以及熒光材料的光致發(fā)光能力，在分離的同時(shí)還能進(jìn)行光學(xué)檢測(cè)。第34頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月第35頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月蛋白質(zhì)與疾病的關(guān)系妊娠期高血壓疾病妊娠期特有的疾病，發(fā)生率為9.4%～10.4%，可導(dǎo)致腦出血、腦水腫、心力衰竭、肺水腫、新生兒死亡等不良妊娠結(jié)局，尤其是早發(fā)型重度子癇前期，是導(dǎo)致產(chǎn)婦及新生兒死亡的主要原因之一，嚴(yán)重危害母嬰健康。該疾病以“妊娠20周后高血壓、蛋白尿、水腫”為主要表現(xiàn)。（正常人每日自尿中排出約40-80mg蛋白，上限不超過(guò)150mg，其中主要為白蛋白，其次為糖蛋白和糖肽。）通過(guò)檢測(cè)尿蛋白含量，可以有效預(yù)防妊娠期高血壓疾病的發(fā)生。第36頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月慢性腎臟病及糖尿病

慢性腎臟病(CKD)的進(jìn)展是一個(gè)不可逆轉(zhuǎn)的過(guò)程,其發(fā)展是以腎功能進(jìn)行性下降,細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在細(xì)胞外大量聚集而致的廣泛腎纖維化為特征,最終出現(xiàn)終末期腎功能衰竭。非選擇性蛋白尿是大多數(shù)腎臟病共有的表現(xiàn)之一,其中存在的大量毒性/炎性物質(zhì)。大量蛋白尿,特別是大量非選擇性蛋白尿出現(xiàn)時(shí),能夠通過(guò)一系列不同的機(jī)制表現(xiàn)出腎臟毒性加速腎臟病的進(jìn)展。蛋白尿不僅僅是腎臟病進(jìn)行性發(fā)展過(guò)程中的表現(xiàn),又是其重要危險(xiǎn)因素之一。第37頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月冠心病指由于脂質(zhì)代謝不正常，血液中的脂質(zhì)沉著在原本光滑的動(dòng)脈內(nèi)膜上，在動(dòng)脈內(nèi)膜一些類似粥樣的脂類物質(zhì)堆積而成白色斑塊，稱為動(dòng)脈粥樣硬化病變。這些斑塊漸漸增多造成動(dòng)脈腔狹窄，使血流受阻，導(dǎo)致心臟缺血，產(chǎn)生心絞痛。高密度脂蛋白(HDL)富含大量結(jié)構(gòu)、功能、代謝特點(diǎn)異質(zhì)性的蛋白質(zhì)成分，約占55%，是蛋白質(zhì)含量最高的脂蛋白．HDL蛋白質(zhì)成