2025版新高考新教材版選考總復(fù)習(xí)生物專題22基因工程

2025版新高考新教材版選考總復(fù)習(xí)生物專題22基因工程專題22基因工程五年高考考點1重組DNA技術(shù)的基本工具1.(2023重慶,12,3分)某小組通過PCR[假設(shè)引物長度為8個堿基(短于實際長度)]獲得了含有目的基因的DNA片段,并用限制酶進(jìn)行酶切(如圖),再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯誤的是(B)A.其中一個引物序列為5'-TGCGCAGT-3'B.步驟①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠC.用步驟①的酶對載體進(jìn)行酶切,至少獲得了2個片段D.酶切片段和載體連接時,可使用E.coli連接酶或T4連接酶2.(2022福建,21節(jié)選,4分)美西螈具有很強的再生能力。研究表明,美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制,科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體,具體方法如下。回答下列問題:(一)基因工程抗原的制備(1)根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列,合成引物,利用PCR擴(kuò)增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3'-OH與加入的脫氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯鍵,則新合成鏈的延伸方向是5'→3'(填“5'→3'”或“3'→5'”)。

(2)載體和CD14片段的酶切位點及相應(yīng)的酶切序列如圖所示。用XhoⅠ和SalⅠ分別酶切CD14和載體后連接,CD14接入載體時會形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA?？蛇M(jìn)一步用這兩種限制酶對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定,理由是正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點(限制酶的識別序列);而反向連接的重組DNA會形成新的序列,沒有這兩種酶的酶切位點(沒有限制酶的識別序列)。

(3)培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌,分離純化目的蛋白?？键c2基因工程的基本操作程序及應(yīng)用考向1DNA的粗提取、PCR、電泳鑒定3.(2024黑、吉、遼,7,2分)關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實驗,下列敘述正確的是(A)A.瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小B.凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置C.在同一電場作用下,DNA片段越長,向負(fù)極遷移速率越快D.瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來4.(2024山東,13,2分)關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗,下列說法正確的是(A)A.整個提取過程中可以不使用離心機(jī)B.研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后,應(yīng)充分搖勻再倒入燒杯中C.鑒定過程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變D.僅設(shè)置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍(lán)的干擾5.(2024山東,5,2分)制備熒光標(biāo)記的DNA探針時,需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標(biāo)記的dATP)的反應(yīng)管①~④中,分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補配對原則,且在本實驗的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有(D)A.①②B.②③C.①④D.③④6.(2023福建,4,2分)關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”(實驗Ⅰ)和“DNA的粗提取與鑒定”(實驗Ⅱ)的實驗操作,下列相關(guān)敘述正確的是(C)A.實驗Ⅰ中,PCR實驗所需的移液器、槍頭、蒸餾水等必須進(jìn)行高壓滅菌處理B.實驗Ⅰ中,將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳,加樣前應(yīng)先接通電源C.實驗Ⅱ中,取洋蔥研磨液的上清液,加入等體積冷酒精后析出粗提取的DNAD.實驗Ⅱ中,將白色絲狀物直接加入二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴,用于鑒定DNA7.(2022遼寧,12,2分)抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù),采用PCR方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測,反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是(B)A.預(yù)變性過程可促進(jìn)模板DNA邊解旋邊復(fù)制B.后延伸過程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分C.延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制D.轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因后即可上市8.(2021湖北,16,2分)某實驗利用PCR技術(shù)獲取目的基因,實驗結(jié)果顯示除目的基因條帶(引物與模板完全配對)外,還有2條非特異條帶(引物和模板不完全配對)。為了減少反應(yīng)中非特異條帶的產(chǎn)生,以下措施中有效的是(D)A.增加模板DNA的量B.延長熱變性的時間C.延長延伸的時間D.提高復(fù)性的溫度考向2基因工程的基本操作程序及應(yīng)用9.(2024江西,12,2分)γ-氨基丁酸在醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。利用L-谷氨酸脫羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脫羧是高效生產(chǎn)γ-氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L-谷氨酸脫羧酶基因(gadB)導(dǎo)入生產(chǎn)菌株E.coliA,構(gòu)建了以L-谷氨酸鈉為底物高效生產(chǎn)γ-氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是(A)A.圖中表明,可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadBB.E.coliB發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸時,L-谷氨酸鈉的作用是供能C.E.coliA和E.coliB都能高效降解γ-氨基丁酸D.可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構(gòu)建重組質(zhì)粒10.(2023遼寧,8,2分)CD163蛋白是PRRSV(病毒)感染家畜的受體。為實時監(jiān)控CD163蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)運過程,將紅色熒光蛋白RFP基因與CD163基因拼接在一起(如圖),使其表達(dá)成一條多肽。該拼接過程的關(guān)鍵步驟是除去(B)A.CD163基因中編碼起始密碼子的序列B.CD163基因中編碼終止密碼子的序列C.RFP基因中編碼起始密碼子的序列D.RFP基因中編碼終止密碼子的序列11.(2023湖北,4,2分)用氨芐青霉素抗性基因(AmpR)、四環(huán)素抗性基因(TetR)作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒,構(gòu)建基因表達(dá)載體(重組質(zhì)粒),并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯誤的是(D)A.若用HindⅢ酶切,目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B.若用PvuⅠ酶切,在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因C.若用SphⅠ酶切,可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D.若用SphⅠ酶切,攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落12.(2024貴州,21,12分)研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基,培養(yǎng)真菌A的野生型(含NV基因)、突變體(NV基因突變)和轉(zhuǎn)基因菌株(轉(zhuǎn)入NV基因),檢測三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量,結(jié)果如表所示(表中“+”表示有,“-”表示無)。檢測用菌株蔗糖NV酶葡萄糖(培養(yǎng)液中)野生型+++野生型---突變體+--轉(zhuǎn)基因菌株+++回答下列問題:(1)據(jù)表可推測蔗糖誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。NV酶的作用是催化蔗糖轉(zhuǎn)化成葡萄糖。檢測NV酶活性時,需測定的指標(biāo)是單位時間單位體積的培養(yǎng)液中葡萄糖的增加量(或者蔗糖的減少量)(答出1點即可)。

(2)表中突變體由T-DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板,用與NV基因(選填“T-DNA”或“NV基因”)配對的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若突變體擴(kuò)增片段長度>(選填“>”“=”或“<”)野生型擴(kuò)增片段長度,則表明突變體構(gòu)建成功,從基因序列分析其原因是與野生型相比,突變體是由T-DNA插入NV基因中,使NV基因發(fā)生了堿基對的增添而引起的,因此突變體相應(yīng)基因的序列更長。

(3)為進(jìn)一步驗證NV基因的功能,表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞獲得的。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時,需要添加新的標(biāo)記基因,原因是突變體的T-DNA上會存在相應(yīng)的標(biāo)記基因,干擾NV基因表達(dá)載體導(dǎo)入成功與否的檢測。

13.(2024黑、吉、遼,25,12分)將天然Ti質(zhì)粒改造成含有Vir基因的輔助質(zhì)粒(輔助T-DNA轉(zhuǎn)移)和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭質(zhì)粒,共同轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌,可提高轉(zhuǎn)化效率。細(xì)菌和棉花對密碼子偏好不同,為提高翻譯效率,增強棉花抗病蟲害能力,進(jìn)行如下操作?；卮鹣铝袉栴}。注:F1~F3,R1~R3表示引物;T-DNA-LB表示左邊界;T-DNA-RB表示右邊界;Ori表示復(fù)制原點;KanR表示卡那霉素抗性基因;HygBR表示潮霉素B抗性基因。(1)從蘇云金桿菌提取DNA時,需加入蛋白酶,其作用是使蛋白質(zhì)水解。提取過程中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷酒精,其目的是使蛋白質(zhì)等溶解在酒精中,DNA不溶于酒精而析出。

(2)本操作中獲取目的基因的方法是PCR和人工合成。

(3)穿梭質(zhì)粒中p35s為啟動子,其作用是RNA聚合酶識別并結(jié)合的部位,驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄;插入兩個p35s啟動子,其目的可能是使目的基因在植物細(xì)胞中高效表達(dá)(保證目的基因的高水平表達(dá))。

(4)根據(jù)圖中穿梭質(zhì)粒上的KanR和HygBR兩個標(biāo)記基因的位置,用潮霉素B抗性基因?qū)?yīng)的抗生素初步篩選轉(zhuǎn)化的棉花愈傷組織。

(5)為檢測棉花植株是否導(dǎo)入目的基因,提取棉花植株染色體DNA作模板,進(jìn)行PCR,應(yīng)選用的引物是F3和R2。

(6)本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程,理由是D(單選)。

A.通過含有雙質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞B.將蘇云金桿菌Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中表達(dá)C.將1~1362基因序列改變?yōu)槊藁?xì)胞偏好密碼子的基因序列D.用1~1362合成基因序列和1363~1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白14.(2024廣東,21,13分)駒形桿菌可合成細(xì)菌纖維素(BC)并將其分泌到胞外組裝成膜。作為一種性能優(yōu)異的生物材料,BC膜應(yīng)用廣泛。研究者設(shè)計了酪氨酸酶(可催化酪氨酸形成黑色素)的光控表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)入駒形桿菌后構(gòu)建出一株能合成BC膜并可實現(xiàn)光控染色的工程菌株,為新型紡織原料的綠色制造及印染工藝升級提供了新思路(圖1)?；卮鹣铝袉栴}:(1)研究者優(yōu)化了培養(yǎng)基的碳源、氮源(答兩點)等營養(yǎng)條件,并控制環(huán)境條件,大規(guī)模培養(yǎng)工程菌株后可在氣液界面處獲得BC菌膜(菌體和BC膜的復(fù)合物)。

(2)研究者利用T7噬菌體來源的RNA聚合酶(T7RNAP)及藍(lán)光光敏蛋白標(biāo)簽,構(gòu)建了一種可被藍(lán)光調(diào)控的基因表達(dá)載體(光控原理見圖2,載體的部分結(jié)構(gòu)見圖3)。構(gòu)建載體時,選用了通用型啟動子PBAD(被工程菌RNA聚合酶識別)和特異型啟動子PT7(僅被T7RNAP識別)。為實現(xiàn)藍(lán)光控制染色,啟動子①、②及③依次為PT7、PBAD、PBAD,理由是基因2、3可正常表達(dá)出無活性的T7RNAP,藍(lán)光照射時再激活基因1(或酪氨酸酶基因或目的基因)的表達(dá)。

注:基因1編碼酪氨酸酶,基因2編碼T7RNAPN端-nMag,基因3編碼pMag-T7RNAPC端。圖3(3)光控表達(dá)載體攜帶大觀霉素(抗生素)抗性基因。長時間培養(yǎng)時在培養(yǎng)液中加入大觀霉素,其作用為選擇含有重組質(zhì)粒的駒形桿菌,殺死其他雜菌避免污染(答兩點)。

(4)根據(jù)預(yù)設(shè)的圖案用藍(lán)光照射已長出的BC菌膜并繼續(xù)培養(yǎng)一段時間,隨后將其轉(zhuǎn)至染色池處理,發(fā)現(xiàn)只有經(jīng)藍(lán)光照射的區(qū)域被染成黑色,其原因是藍(lán)光照射誘導(dǎo)nMag和pMag結(jié)合,激活T7RNAP,從而與特異型啟動子PT7結(jié)合表達(dá)酪氨酸酶,酪氨酸酶催化酪氨酸形成黑色素。

(5)有企業(yè)希望生產(chǎn)其他顏色圖案的BC膜。按照上述菌株的構(gòu)建模式提出一個簡單思路將酪氨酸酶基因換成合成其他色素酶的基因,催化產(chǎn)生不同的色素。

15.(2024山東,25,12分)研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調(diào)控大豆的逆境響應(yīng)。利用基因工程技術(shù)編輯基因L,可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaⅠ切點處插入大豆基因L的向?qū)NA序列,將載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞后,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可引導(dǎo)核酸酶特異性結(jié)合基因組上的目標(biāo)序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標(biāo)基因L部分序列及相關(guān)結(jié)果等如圖所示。圖甲:載體信息LB/RB:T-DNA的邊界序列;Kanr:卡那霉素抗性基因;Ampr:氨芐青霉素抗性基因圖乙:目標(biāo)基因L部分序列圖丙:限制酶識別序列、切割位點及電泳結(jié)果(1)用PCR技術(shù)從大豆基因組DNA中擴(kuò)增目標(biāo)基因L時,所用的引物越短,引物特異性越低(填“高”或“低”)。限制酶在切開DNA雙鏈時,形成的單鏈突出末端為黏性末端,若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA,理論上可產(chǎn)生的黏性末端最多有44種。載體信息如圖甲所示,經(jīng)BsaⅠ酶切后,載體上保留的黏性末端序列應(yīng)為5'-GTTT-3'和5'-CAAT-3'。

(2)重組載體通過農(nóng)桿菌導(dǎo)入大豆細(xì)胞,使用抗生素卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株①~④。為了鑒定基因編輯是否成功,以上述抗性植株的DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因L,部分序列信息及可選用的酶切位點如圖乙所示,PCR產(chǎn)物完全酶切后的電泳結(jié)果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是SacⅠ,其中純合的突變植株是④(填序號)。

(3)實驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株,該植株具有抗生素抗性,檢測發(fā)現(xiàn)其體細(xì)胞中只有1條染色體有T-DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代,其中突變位點純合且對抗生素敏感的植株所占比例為1/4,篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。

16.(2023河北,22,15分)單細(xì)胞硅藻具有生產(chǎn)生物柴油的潛在價值。研究者將硅藻脂質(zhì)合成相關(guān)的蘋果酸酶(ME)基因構(gòu)建到超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入硅藻細(xì)胞,以期獲得高產(chǎn)生物柴油的硅藻品系?；卮鹣铝袉栴}:(1)根據(jù)DNA和蛋白質(zhì)在特定濃度乙醇溶液中的溶解度差異獲得硅藻粗提DNA,PCR擴(kuò)增得到目的基因。

(2)超表達(dá)載體的基本組件包括復(fù)制原點、目的基因、標(biāo)記基因、啟動子和終止子(答案“啟動子”和“終止子”不分順序)等。本研究中目的基因為蘋果酸酶基因(或“ME基因”)。

(3)PCR擴(kuò)增時引物通過堿基互補配對原則與模板特異性結(jié)合。根據(jù)表達(dá)載體序列設(shè)計了圖1所示的兩條引物,對非轉(zhuǎn)基因硅藻品系A(chǔ)和轉(zhuǎn)ME基因硅藻候選品系B進(jìn)行PCR檢測,擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖2。其中,樣品1為本實驗的對照組,樣品2有特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,結(jié)果表明引物間的載體序列整合到硅藻細(xì)胞基因組中(或“ME基因序列整合到硅藻細(xì)胞基因組中”)。

(4)利用單細(xì)胞硅藻生產(chǎn)生物柴油的影響因素包括胞內(nèi)脂質(zhì)含量和繁殖速率等。圖3為硅藻胞內(nèi)脂質(zhì)含量檢測結(jié)果。據(jù)圖分析,相對于品系A(chǔ),品系B的胞內(nèi)脂質(zhì)含量平均水平明顯增加。同時,還需測定細(xì)胞數(shù)量以比較在相同發(fā)酵條件下品系A(chǔ)與B的繁殖速率。

(5)胞內(nèi)脂質(zhì)合成需要大量ATP。ME催化蘋果酸氧化脫羧反應(yīng)產(chǎn)生NADH。研究表明,品系B線粒體中ME含量顯著高于品系A(chǔ)。據(jù)此分析,ME基因超表達(dá)使線粒體中NADH水平升高,有氧呼吸生成的ATP增多,最終促進(jìn)胞內(nèi)脂質(zhì)合成。

(6)相對于大豆和油菜等油料作物,利用海生硅藻進(jìn)行生物柴油生產(chǎn)的優(yōu)勢之處為節(jié)約土地資源、不受季節(jié)和氣候限制(或“節(jié)約糧食資源”或“節(jié)約淡水”或“能夠通過發(fā)酵大量生產(chǎn)”)。(答出兩點即可)

17.(2023海南,20,13分)基因遞送是植物遺傳改良的重要技術(shù)之一,我國多個實驗室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)(切—浸—生芽Cut-Dip-Budding,簡稱CDB法)。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉(zhuǎn)化法和CDB法在某植物中遞送基因的示意圖?；卮鹣铝袉栴}。(1)圖1中,從外植體轉(zhuǎn)變成愈傷組織的過程屬于脫分化;從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和細(xì)胞分裂素,該過程還需要光照,其作用是誘導(dǎo)葉綠素的形成。

(2)圖1中的愈傷組織,若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié),直接誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的遺傳特性。圖1中,含有外源基因的轉(zhuǎn)化植株A若用于生產(chǎn)種子,其包裝需標(biāo)注轉(zhuǎn)基因種子。

(3)圖1與圖2中,農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時,可將外源基因遞送到植物細(xì)胞中的原因是農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒,當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后,能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。

(4)已知某酶(PDS)缺失會導(dǎo)致植株白化。某團(tuán)隊構(gòu)建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體(含有綠色熒光蛋白標(biāo)記基因),利用圖2中的CDB法將該重組載體導(dǎo)入植株B,長出毛狀根,成功獲得轉(zhuǎn)化植株B。據(jù)此分析,從毛狀根中獲得陽性毛狀根段的方法是選擇發(fā)出綠色熒光的毛狀根段,圖2中,鑒定導(dǎo)入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是觀察幼苗是否白化(或根據(jù)PDS基因的堿基序列設(shè)計引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增),依據(jù)是CRISPR/Cas9基因編輯載體的作用是敲除PDS基因,會導(dǎo)致PDS缺失,使植株白化(若導(dǎo)入幼苗的基因編輯載體成功發(fā)揮作用,則PDS基因被敲除,PCR無法擴(kuò)增出條帶等)。

(5)與常規(guī)轉(zhuǎn)化法相比,采用CDB法進(jìn)行基因遞送的優(yōu)點是無需無菌操作、無需組織培養(yǎng)、操作簡單、成本低等(答出任意2點即可)(答出2點即可)。

熱考點核酸序列的閱讀及引物、限制酶的選擇18.(2023浙江6月選考,19,2分)某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù),將綠色熒光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端,如圖甲所示。實驗得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只,交配以期獲得Gata3-GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型,設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。甲乙下列敘述正確的是(B)A.Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達(dá)B.翻譯時先合成Gata3蛋白,再合成GFP蛋白C.2號條帶的小鼠是野生型,4號條帶的小鼠是Gata3-GFP基因純合子D.若用引物1和引物3進(jìn)行PCR,能更好地區(qū)分雜合子和純合子19.(2024全國甲,38節(jié)選)某同學(xué)采用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)蛋白E。回答下列問題。(1)該同學(xué)利用PCR擴(kuò)增目的基因。PCR的每次循環(huán)包括變性、復(fù)性、延伸3個階段,其中DNA雙鏈打開成為單鏈的階段是變性。

(2)質(zhì)粒載體上有限制酶a、b、c的酶切位點,限制酶的切割位點如圖所示。構(gòu)建重組質(zhì)粒時,與用酶a單酶切相比,用酶a和酶b雙酶切的優(yōu)點體現(xiàn)在避免質(zhì)粒自身環(huán)化,防止目的基因反向連接到質(zhì)粒上(答出2點即可);使用酶c單酶切構(gòu)建重組質(zhì)粒時宜選用的連接酶是T4DNA連接酶。

(3)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌前,通常先將受體細(xì)胞處理成感受態(tài),感受態(tài)細(xì)胞的特點是能吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。若要驗證轉(zhuǎn)化的大腸桿菌中含有重組質(zhì)粒,簡要的實驗思路和預(yù)期結(jié)果是根據(jù)目的基因的序列設(shè)計特異性引物,提取大腸桿菌的DNA進(jìn)行PCR,將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,若出現(xiàn)特異性條帶,說明含有重組質(zhì)粒。

(4)蛋白E基因中的一段DNA編碼序列(與模板鏈互補)是GGGCCCAAGCTGAGATGA,編碼從GGG開始,部分密碼子見表。若第一個核苷酸G缺失,則突變后相應(yīng)肽鏈的序列是甘氨酸—脯氨酸—絲氨酸。

氨基酸密碼子氨基酸密碼子賴氨酸AAG亮氨酸CUG精氨酸AGA甘氨酸GGC絲氨酸AGCGGG脯氨酸CCA終止UGACCC20.(2023山東,25,10分)科研人員構(gòu)建了可表達(dá)J-V5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進(jìn)行了檢測,該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示。其中V5編碼序列表達(dá)標(biāo)簽短肽V5。(1)與圖甲中啟動子結(jié)合的酶是RNA聚合酶。除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外,作為載體,質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有標(biāo)記基因、復(fù)制原點(或限制性酶切位點)(答出2個結(jié)構(gòu)即可)。

(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒后,為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確,需進(jìn)行PCR檢測,若僅用一對引物,應(yīng)選擇圖甲中的引物F2和R1(或“F1和R2”)。已知J基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈,由此可知引物F1與圖甲中J基因的a鏈(填“a鏈”或“b鏈”)相應(yīng)部分的序列相同。

(3)重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)正確表達(dá)后,用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測相應(yīng)蛋白是否表達(dá)以及表達(dá)水平,結(jié)果如圖乙所示。其中,出現(xiàn)條帶1證明細(xì)胞內(nèi)表達(dá)了J-V5融合蛋白,條帶2所檢出的蛋白不是(填“是”或“不是”)由重組質(zhì)粒上的J基因表達(dá)的。

21.(2023江蘇,22,12分)為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達(dá),運用重組酶技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒,如圖1所示。請回答下列問題:圖1(1)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時,配制的兩個反應(yīng)體系中不同的有模板和引物,擴(kuò)增程序中最主要的不同是復(fù)性溫度。

(2)有關(guān)基因序列如圖2。引物F2-F、F1-R應(yīng)在下列選項中選用CD。

圖2A.ATGGTG------CAACCAB.TGGTTG------CACCATC.GACGAG------CTGCAGD.CTGCAG------CTCGTC(3)將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后,在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒,直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過程相比,無需使用的酶主要有限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶。

(4)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選,下列敘述錯誤的有ABC。

A.稀釋涂布平板需控制每個平板30~300個菌落B.抗性平板上未長出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C.抗性平板上常常會出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D.抗性平板上長出的單菌落無需進(jìn)一步劃線純化(5)為了驗證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計,用不同菌落的質(zhì)粒為模板,用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,質(zhì)粒P1~P4的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3。根據(jù)圖中結(jié)果判斷,可以舍棄的質(zhì)粒有P3、P4。

圖3(6)對于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒,通常需進(jìn)一步通過基因測序確認(rèn),原因是電泳條帶僅能顯示擴(kuò)增片段的大致長度,不能呈現(xiàn)堿基序列。

22.(2021遼寧,24,10分)PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為0.9kb(1kb=1000堿基對),利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮鹣铝袉栴}:(1)為獲取phb2基因,提取該動物肝臟組織的總RNA,再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄過程得到cDNA,將其作為PCR的模板,并設(shè)計一對特異性引物來擴(kuò)增目的基因。

(2)圖1為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列)與載體正確連接,在擴(kuò)增的phb2基因兩端分別引入PvuⅡ和EcoRⅠ兩種不同限制酶的識別序列。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時,可選用T4DNA連接酶(填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)。

圖1相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點名稱識別序列及切割位點名稱識別序列及切割位點HindⅢEcoRⅠPvuⅡPstⅠKpnⅠBamHⅠ注:箭頭表示切割位點(3)轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細(xì)胞,使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),以提高轉(zhuǎn)化效率。

(4)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),隨機(jī)挑取單菌落(分別編號為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,用(2)中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,結(jié)果如圖2,3號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

注:M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物;小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中(5)將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中,培養(yǎng)24小時后,檢測處于細(xì)胞周期(示意圖見圖3)不同時期的細(xì)胞數(shù)量,統(tǒng)計結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的G2/M(填“G1”或“S”或“G2/M”)期。

考點3蛋白質(zhì)工程23.(2021遼寧,14,2分)腈水合酶(N0)廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)和醫(yī)藥原料生產(chǎn)等領(lǐng)域,但不耐高溫,利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在N0的α和β亞基之間加入一段連接肽,可獲得熱穩(wěn)定的融合型腈水合酶(N1)。下列有關(guān)敘述錯誤的是(D)A.N1與N0氨基酸序列的差異是影響其熱穩(wěn)定性的原因之一B.加入連接肽需要通過改造基因?qū)崿F(xiàn)C.獲得N1的過程需要進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯D.檢測N1的活性時先將N1與底物充分混合,再置于高溫環(huán)境24.(2023遼寧,25,11分)天然β-淀粉酶大多耐熱性差,不利于工業(yè)化應(yīng)用。我國學(xué)者借助PCR改造β-淀粉酶基因,并將改造的基因與pLN23質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌,最終獲得耐高溫的β-淀粉酶?；卮鹣铝袉栴}:(1)上述過程屬于蛋白質(zhì)工程。

(2)PCR中使用的聚合酶屬于③(填寫編號)。

①以DNA為模板的RNA聚合酶②以RNA為模板的RNA聚合酶③以DNA為模板的DNA聚合酶④以RNA為模板的DNA聚合酶(3)某天然β-淀粉酶由484個氨基酸構(gòu)成,研究發(fā)現(xiàn),將該酶第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺,耐熱性明顯提升。在圖1所示的β-淀粉酶基因改造方案中,含已替換堿基的引物是①或④(填寫編號)。

(4)為了使上述改造后的基因能在大腸桿菌中高效表達(dá),由圖2所示的pLN23質(zhì)粒構(gòu)建得到基因表達(dá)載體。除圖示信息外,基因表達(dá)載體中還應(yīng)該有目的基因(即改造后的基因)和標(biāo)記基因。

(5)目的基因(不含EcoRⅠ酶切位點)全長為1.5kb,將其插入BamHⅠ位點。用EcoRⅠ酶切來自不同大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確定DNA片段長度,這一操作的目的是通過電泳鑒定目的基因是否插入質(zhì)粒中。正確連接的基因表達(dá)載體被EcoRⅠ酶切后長度為5.7kb。

(6)采用PCR還能在分子水平上確定目的基因是否轉(zhuǎn)錄,根據(jù)中心法則,可通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得PCR的模板。

三年模擬綜合基礎(chǔ)練1.(2024九省聯(lián)考貴州卷,5)我國科學(xué)家將外源生長激素基因?qū)膈庺~的受精卵并整合到染色體DNA上,培育出轉(zhuǎn)基因鯉魚。與普通鯉魚相比,轉(zhuǎn)基因鯉魚的生長速率加快。下列敘述正確的是(D)A.外源生長激素基因?qū)膈庺~受精卵后沒有定向改變性狀B.轉(zhuǎn)基因鯉魚的外源生長激素基因的表達(dá)都在細(xì)胞核進(jìn)行C.轉(zhuǎn)基因鯉魚的外源生長激素基因遺傳時不遵循遺傳定律D.外源生長激素基因的氫鍵斷裂后利于該基因復(fù)制或轉(zhuǎn)錄2.(2024遼寧沈陽二模,10)基于AI(人工智能)的蛋白質(zhì)設(shè)計方法可以利用現(xiàn)有蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫以及機(jī)器深度“學(xué)習(xí)算法”來預(yù)測新型蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及功能。下列說法錯誤的是(B)A.AI可幫助人們更深入了解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系B.AI預(yù)測新型蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能依據(jù)原理是中心法則C.可通過改造或合成基因來獲得AI設(shè)計的蛋白質(zhì)D.AI可幫助人們高效地設(shè)計出自然界沒有的蛋白質(zhì)3.(2024安徽合肥一模,1)某同學(xué)在家里進(jìn)行了提取花椰菜DNA的實驗。取綠色的花芽部分,充分研磨獲得勻漿;再加入含有中性洗滌劑的濃度約為2mol/L的鹽水,其作用是[甲],以釋放細(xì)胞核和細(xì)胞器[乙]中的DNA;靜置10min后過濾,然后將濾液輕輕倒入[丙]溶液中,出現(xiàn)白色絮狀物。下列選項中甲、乙、丙對應(yīng)的內(nèi)容,正確的是(C)選項甲乙丙A破壞膜結(jié)構(gòu)核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)植物油B使膜蛋白變性線粒體、葉綠體清水C破壞膜結(jié)構(gòu)、溶解DNA線粒體、葉綠體預(yù)冷的酒精D破壞細(xì)胞壁高爾基體、葉綠體預(yù)冷的酒精4.(2024九省聯(lián)考江西卷,12)螢火蟲的熒光素酶能催化ATP激活的熒光素氧化發(fā)光,這一現(xiàn)象在生物檢測和成像方面有重要的應(yīng)用價值。為了解決天然熒光素酶不能高效催化人工合成的熒光素DTZ發(fā)光的問題,研究人員采用蛋白質(zhì)工程(又稱為第二代基因工程)對它進(jìn)行了改造。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程改造天然熒光素酶的敘述,正確的是(D)A.通過化學(xué)誘變劑可定向改造天然熒光素酶的基因序列B.改造天然熒光素酶所用的基因表達(dá)載體不需要啟動子和終止子C.可用PCR方法檢測突變的熒光素酶基因是否翻譯成蛋白質(zhì)D.改造后的熒光素酶在一定條件下催化DTZ發(fā)光是將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能5.(2024廣東廣州二模,8)科學(xué)家將外源抗蟲基因(Bt抗蟲蛋白基因)轉(zhuǎn)入某茄科植物細(xì)胞中,并整合到該植物的線粒體DNA上,獲得了具有抗蟲性狀的轉(zhuǎn)基因植物。下列敘述錯誤的是(C)A.Bt抗蟲蛋白在線粒體中的成功合成與密碼子的通用性有關(guān)B.葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個線粒體,這有利于增加該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲性C.將該轉(zhuǎn)基因植物與同種非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行正、反交,所得子代均有抗蟲性D.該技術(shù)能有效避免或減少外源基因通過花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移6.(2024九省聯(lián)考貴州卷,21)風(fēng)肉一般以鮮肉為原料,用食鹽腌制后,經(jīng)風(fēng)干和微生物后發(fā)酵而成。在后發(fā)酵期,風(fēng)肉含有耐鹽的微生物。某實驗小組為研究耐鹽微生物的耐鹽基因,設(shè)計實驗如下?；卮鹣铝袉栴}。(1)實驗小組為獲得耐鹽純培養(yǎng)物A,使用的培養(yǎng)基應(yīng)是選擇培養(yǎng)基(選填“普通培養(yǎng)基”或“選擇培養(yǎng)基”),使用的接種方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法。

(2)為獲得純培養(yǎng)物A的耐鹽基因X,實驗小組用純培養(yǎng)物提取了DNA。在一定溫度下,用二苯胺試劑對DNA進(jìn)行檢測,二苯胺檢測DNA的原理是一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑呈藍(lán)色。獲得PCR產(chǎn)物后,用瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,影響DNA分子遷移速率的主要因素有瓊脂糖溶液的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象(答出兩點即可)。

(3)構(gòu)建成功的表達(dá)載體將運用農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)轉(zhuǎn)入某農(nóng)作物,可獲得耐鹽轉(zhuǎn)基因植株。與同種非轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA序列相比,轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA含有耐鹽基因。

(4)為驗證已獲得的耐鹽轉(zhuǎn)基因植株具有耐鹽性,需設(shè)計實驗。寫出實驗思路:用一定濃度的鹽水澆灌。

7.(2024安徽合肥二模,20)環(huán)境DNA(eDNA)是指生物體經(jīng)由體表、排泄物或細(xì)胞死亡裂解等釋放到環(huán)境中的DNA片段。借助eDNA技術(shù)可以檢測樣品中是否存在目標(biāo)生物,相關(guān)技術(shù)流程如圖1所示。研究人員利用該技術(shù)對某地區(qū)不同水體的福壽螺分布情況進(jìn)行了調(diào)查?；卮鹣铝袉栴}:(1)采集到的水樣經(jīng)過濾后可獲取eDNA,為防止污染,所用器材在使用前均需進(jìn)行滅菌處理并分開存放,且每個樣點需使用等體積的無菌水作為陰性對照。

(2)對提取到的eDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,需根據(jù)福壽螺線粒體的特有基因設(shè)計引物。如要擴(kuò)增圖2所示的DNA片段,表中適合的引物是①⑧(填序號)。設(shè)置PCR儀的循環(huán)程序時,①62℃,30s;②72℃,60s;③95℃,10s三組參數(shù),在每一輪循環(huán)中依次經(jīng)歷的順序是③①②(填序號)。

序號引物1①5'-TAAACTTCAGGGT-3'②5'-ATTTGAAGTCCCA-3'③5'-TGGGACTTCAAAT-3'④5'-ACCCTGAAGTTTA-3'序號引物2⑤5'-TGATTTGTTGACC-3'⑥5'-ACTAAACAACTGG-3'⑦5'-CCAGTTGTTTAGT-3'⑧5'-GGTCAACAAATCA-3'(3)eDNA技術(shù)具有非入侵性、高靈敏度、不受環(huán)境條件限制等優(yōu)點,應(yīng)用前景廣泛,除可用于入侵物種的監(jiān)測外,還可以用作以下①②④(填序號)用途。

①物種多樣性的分析②動物食性分析③種群年齡結(jié)構(gòu)的建立④瀕危物種的調(diào)查綜合拔高練11.(2024山東青島一模,15)“DNA粗提取與鑒定”的實驗步驟:研磨→去雜質(zhì)→析出→鑒定。某研究小組欲探究不同的去雜質(zhì)方法對實驗結(jié)果的影響,實驗結(jié)果如表所示。下列說法錯誤的是(B)去雜質(zhì)方式沉淀質(zhì)量(g)DNA濃度(ng/μL)OD260/OD280二苯胺鑒定離心0.06881.51.53藍(lán)色4℃冰箱靜置0.1028336.41.41(注:OD260與OD280的比值可檢查DNA純度。純DNA的OD260/OD280為1.8,當(dāng)存在蛋白質(zhì)污染時,這一比值會明顯降低)A.豬肝和菜花均可作為提取DNA的材料B.對研磨液進(jìn)行離心是為了加速DNA的沉淀C.離心法可以獲得更高純度的DNAD.DNA析出時的離心轉(zhuǎn)速明顯高于去雜質(zhì)時2.(2024T8一聯(lián),13)熒光定量PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上,加入與模板DNA某條鏈互補的熒光探針(一類兩端經(jīng)過特殊基團(tuán)修飾的單鏈DNA片段),當(dāng)子鏈延伸至探針處時DNA聚合酶會水解掉探針一端并生成熒光分子,使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號,即DNA每擴(kuò)增一次,就有一個熒光分子生成,原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是(D)A.該項技術(shù)可用來直接檢測樣本中HIV核酸的含量B.1個雙鏈DNA分子經(jīng)過3輪循環(huán)一共會生成8個熒光分子C.1個雙鏈DNA分子經(jīng)過5輪循環(huán)一共需要消耗15對引物D.該PCR技術(shù)中DNA聚合酶既催化形成磷酸二酯鍵,又催化斷裂磷酸二酯鍵3.(2024T8一聯(lián),18)幽門螺桿菌(Hp)感染會引發(fā)胃炎、消化性潰瘍等多種疾病。研究人員將Hp的Ipp20基因作為目的基因,用限制酶XhoⅠ和XbaⅠ切割,通過基因工程制備相應(yīng)的疫苗,質(zhì)粒及操作步驟如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是(C)A.Ipp20基因整合到大腸桿菌的DNA中屬于基因重組B.基因表達(dá)載體導(dǎo)入之前,可用Ca2+處理大腸桿菌C.培養(yǎng)基A中添加了氯霉素,培養(yǎng)基B中添加了潮霉素D.能用來生產(chǎn)Hp疫苗的大腸桿菌在菌落3和5中4.(2024重慶八中一模,11)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)根據(jù)靶基因序列設(shè)計向?qū)gRNA,精確引導(dǎo)核酸酶Cas9切割與sgRNA配對的DNA,相關(guān)酶在修復(fù)斷裂DNA的過程中會改變連接部位的堿基序列?？蒲腥藛T通過刪除PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白質(zhì)的功能缺失,制作PD-1基因敲除鼠的流程如圖1所示。將體外轉(zhuǎn)錄獲得的Cas9mRNA和sgRNA導(dǎo)入小鼠的受精卵中,獲得了12只基因編輯小鼠。利用PCR鑒定小鼠的基因型,電泳結(jié)果如圖2所示。已知P1和P2是PCR的引物。下列相關(guān)分析正確的是(C)A.敲除2、3、4片段引起的變異屬于染色體變異B.敲除前,根據(jù)敲除的位置需要設(shè)計3個sgRNAC.圖2中,4和12個體雜交的子代均為敲除純合子D.圖2中,3、5、7個體的體內(nèi)均能檢測到PD-1蛋白基因5.(2024江西南昌一模,21)HNF1α基因突變可引發(fā)糖尿病等疾病。HNF1α的第249位絲氨酸(S249)是其重要功能位點,為進(jìn)一步研究S249的重要性,研究人員將249位絲氨酸(S)突變?yōu)楸彼?A),成功構(gòu)建了人源HNF1α-S249A轉(zhuǎn)基因小鼠。如圖為基因表達(dá)載體部分結(jié)構(gòu)示意圖,Myc為標(biāo)記基因,引物F和R之間的序列長度為386bp(堿基對)?；卮鹣铝袉栴}:(1)CMV位于HNF1αcDNA上游,據(jù)此推測CMV的功能為RNA聚合酶識別和結(jié)合位點,驅(qū)動HNF1αcDNA的轉(zhuǎn)錄。

(2)為保證HNF1αcDNA準(zhǔn)確插入載體,可利用PCR技術(shù)在其兩端添加限制酶識別序列HindⅢ和XbaⅠ,應(yīng)將限制酶識別序列添加在引物的5'(填“5'”或“3'”)端。

(3)獲得HNF1αcDNA后,可利用cDNA中間序列設(shè)計引物實現(xiàn)定點突變目的,從而制備HNF1α-S249AcDNA。已知HNF1α中248、249、250三個氨基酸對應(yīng)的密碼子序列為ACCUCUGUG,丙氨酸對應(yīng)的密碼子有GCU、GCC、GCG、GCA四種,為了保證引物與模板的結(jié)合效率及突變目的,請設(shè)計其中一個引物:5'-ACCGCTGTG-3'或3'-TGGCGACAC-5'。

(4)利用上述基因表達(dá)載體制備轉(zhuǎn)基因小鼠,請用文字和箭頭寫出制備流程圖基因表達(dá)載體→顯微注射→受精卵→培養(yǎng)→早期胚胎→胚胎移植→代孕小鼠子宮→轉(zhuǎn)基因小鼠。

(5)提取轉(zhuǎn)基因小鼠DNA作為模板,利用引物F和R進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物。若出現(xiàn)一條386bp的DNA條帶結(jié)果,初步證明轉(zhuǎn)基因小鼠模型構(gòu)建成功。

綜合拔高練21.(2024湖北十一校二模,10)為研究擬南芥植株E基因的功能,科研人員將T-DNA插入E基因中,導(dǎo)致其發(fā)生突變,突變后的基因