體外診斷試劑分析性能評(píng)價(jià)系列指導(dǎo)原則

附件：《體外診斷試劑分析性能評(píng)估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿）》目錄1.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則――編制說明2.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——檢測限3.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——線性范圍4.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——可報(bào)告范圍5.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——準(zhǔn)確度（回收實(shí)驗(yàn)）6.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對(duì)）7.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——精密度8.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——干擾實(shí)驗(yàn)9.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——穩(wěn)定性10.體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——參考值（參考區(qū)間）附件1：體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則編制說明《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》頒布后，體外診斷試劑產(chǎn)品的注冊過程中要求提供申報(bào)產(chǎn)品的分析性能評(píng)估資料，產(chǎn)品性能評(píng)估是產(chǎn)品研發(fā)、制定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)等過程的重要技術(shù)支持研究過程，并可能對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量造成一定的影響。目前國際上對(duì)體外診斷試劑的性能評(píng)估通常是以美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化組織（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitude以下稱為CLSI）的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，也是美國FDA推薦采用的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，但我國還沒有相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)及指導(dǎo)原則的要求。為進(jìn)一步明確體外診斷試劑分析性能評(píng)估的技術(shù)要求，我中心組織有關(guān)專家起草產(chǎn)品分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則，以明確體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估的技術(shù)要求。體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估包括檢測限、線性范圍、可報(bào)告范圍、準(zhǔn)確度（回收實(shí)驗(yàn)）、準(zhǔn)確度（方法學(xué)比較）、精密度、干擾實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性、參考區(qū)間共九個(gè)項(xiàng)目。起草的主要依據(jù)CLSI發(fā)布的以下標(biāo)準(zhǔn):1.C28-A2:Howtodefineanddeterminereferenceintervalsintheclinicallaboratory;ApprovedGuideline-SecondEdition.2.EP5-A:Evaluationofprecisionperformanceofclinicalchemistrydevices;ApprovedGuideline.3.EP6-A:Evaluationofthelinearityofquantitativemeasurementprocedures;AStatisticalApproach;ApprovedGuideline.4.EP7-A:Interferencetestinginclinicalchemistry;ApprovedGuideline.5.EP9-A2:Methodcomparisonandbiasestimationusingpatientsamples;ApprovedGuideline-SecondEdition.每項(xiàng)性能的主要研究方法均采用以上標(biāo)準(zhǔn)和國內(nèi)實(shí)際采用的評(píng)價(jià)方法相結(jié)合的方法。我中心對(duì)于專家起草的指導(dǎo)原則的初稿進(jìn)行了適當(dāng)?shù)奈淖终{(diào)整，之后將分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則發(fā)給十位相關(guān)專業(yè)的專家征求意見。意見返回后我們對(duì)專家的回復(fù)意見進(jìn)行了整理，對(duì)有些意見進(jìn)行了采納，有些意見暫時(shí)沒有采納。采納的意見，如：線性范圍中的“3.4計(jì)算公式”的描述采用專家意見將公式的書寫進(jìn)行了文字更改，與CLSI文件一致；“3.3剔除離群值”中的Y的均描述由Yave改為y；還有一些文字性錯(cuò)誤也進(jìn)行了修改。有一些專家意見因?yàn)閷?duì)一些概念還存在分歧，因此暫時(shí)未采納，待經(jīng)過專家討論會(huì)后再進(jìn)行確定。如“檢測限評(píng)估”中的檢測方法“連續(xù)測定20次，計(jì)算均值加2SD的方法缺少依據(jù)，建議采用可報(bào)告范圍評(píng)估下限所提供的方法?！?；“建議將批內(nèi)/批間精密度”改為“分析內(nèi)/分析間精密度”；“精密度是用變異系數(shù)表示還是用置信區(qū)間表示”；參考值：“結(jié)果分析中應(yīng)首先驗(yàn)證是否為正態(tài)分布，對(duì)于正態(tài)分布，則應(yīng)根據(jù)臨床應(yīng)用目采用均值±2SD或均值±3SD，對(duì)于偏態(tài)分布則應(yīng)選擇單側(cè)95％分位數(shù)或雙側(cè)2.5％-97.5％分位數(shù)”。由于一些概念在學(xué)術(shù)界還存在分歧，因此我們會(huì)通過上網(wǎng)征求意見和專家會(huì)的形式進(jìn)行討論，找到最理想、最適合企業(yè)及我國國情又能保證產(chǎn)品質(zhì)量的評(píng)價(jià)方法。附件2體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——檢測限（征求意見稿）一、概述檢測限（limitofdetection）是指檢測方法可檢測出的最低被測量濃度，也稱檢測低限（lowerlimitofdetection）或最小檢出濃度（minimumdetectableconcentration），有時(shí)也稱為分析靈敏度（analyticalsensitivity）。檢測限評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)定量檢測方法檢測限的評(píng)估方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行定量檢測方法檢測限評(píng)估提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定量檢測方法檢測限評(píng)估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。檢測限評(píng)估的基本原則實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟悉檢測方法與儀器操作；采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)；用于實(shí)驗(yàn)的試劑應(yīng)為同一批號(hào)，且在有效期內(nèi)。檢測限的評(píng)估和數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)材料和基本要求空白樣本的制備：空白樣本應(yīng)不含被測物，但其基質(zhì)應(yīng)與待測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以得到，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液。或根據(jù)測定項(xiàng)目選用相應(yīng)基質(zhì)的樣本，但應(yīng)注意將基質(zhì)效應(yīng)減至最小。實(shí)驗(yàn)方法在一次運(yùn)行中將空白樣本重復(fù)測定20次。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)記錄：將測定結(jié)果記錄于表格中。如果檢測系統(tǒng)對(duì)于低于零的結(jié)果報(bào)告為零，應(yīng)記錄初始響應(yīng)值，如吸光度值等。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：計(jì)算20次結(jié)果的均值X與標(biāo)準(zhǔn)差SD。結(jié)果報(bào)告：以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差報(bào)告方法的檢測限。（X+2SD）附件3體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——線性范圍（征求意見稿）一、概述線性范圍評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》、《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)定量測定方法的線性評(píng)價(jià)》的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)定量檢測方法中線性范圍的評(píng)估方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行線性范圍評(píng)估及準(zhǔn)備線性范圍評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室建立定量測定方法的線性范圍或?qū)?biāo)稱的線性參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、線性范圍評(píng)估的基本原則（1）實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對(duì)樣本進(jìn)行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正常，采用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。（2）儀器的各項(xiàng)性能指標(biāo)（如精密度）應(yīng)與標(biāo)稱值相符，不存在明顯的攜帶污染等。（3）應(yīng)使用同批號(hào)試劑及校準(zhǔn)品。三、線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法1.實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求和制備方法1.1基本要求（1）樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，但不可采用含有對(duì)測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。進(jìn)行血清學(xué)標(biāo)志物檢測時(shí)，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清。（2）建立一種定量測定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平。如將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。（3）當(dāng)對(duì)標(biāo)稱線性參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，需在已知線性范圍內(nèi)選擇5-7個(gè)濃度水平。（4）無論是建立或驗(yàn)證線性范圍，所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個(gè)預(yù)期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評(píng)價(jià)濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。1.2制備方法（1）不同濃度水平的樣本可通過將高濃度樣本與低濃度樣本進(jìn)行倍比稀釋得到，注意在進(jìn)行液體吸取時(shí)應(yīng)選擇精密度與準(zhǔn)確性好的移液裝置。制備時(shí)應(yīng)將樣本完全混合并避免蒸發(fā)或其他使樣本變質(zhì)的情況。每份樣本的濃度與體積單位應(yīng)統(tǒng)一。（2）如果高/低濃度血清的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個(gè)血清的相對(duì)濃度。對(duì)于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)（如1、2、3、4、5）代表連續(xù)樣本。進(jìn)行數(shù)據(jù)處理時(shí)可用樣本號(hào)代替X值。表1和表2中描述的樣本制備過程是按照等濃度間隔的設(shè)計(jì)進(jìn)行的，每個(gè)濃度水平的樣本量為1.00ml。制備非等濃度間隔的樣本時(shí)應(yīng)明確各樣本間的濃度關(guān)系，測定時(shí)可以這些樣本間的相對(duì)濃度比值做為X值。表1：11個(gè)濃度水平的樣本制備樣本號(hào)123456低濃度血清(ml)1.000.900.800.700.600.50高濃度血清(ml)0.000.100.200.300.400.50樣本號(hào)7891011低濃度血清(ml)0.400.300.200.100.00高濃度血清(ml)0.600.700.800.901.00表2：5個(gè)濃度水平的樣本制備樣本號(hào)12345低濃度血清(ml)1.000.750.500.250.00高濃度血清(ml)0.000.250.500.751.00（3）樣本的特殊處理：在無法得到適用的人血清時(shí)，需對(duì)樣本進(jìn)行一些特殊處理以滿足實(shí)驗(yàn)要求。這些處理過程包括稀釋、加入添加物或透析、熱處理等，無論進(jìn)行何種處理均應(yīng)以保持基質(zhì)恒定為基本原則。在評(píng)價(jià)報(bào)告中應(yīng)對(duì)所使用的稀釋液、添加物、溶劑等的材料來源加以注明。樣本稀釋液應(yīng)選用由廠家推薦或經(jīng)實(shí)驗(yàn)室證明可使用的產(chǎn)品，如可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。欲提高樣本濃度時(shí)可在樣本中添加分析物純品。在添加物為溶液狀態(tài)時(shí)，應(yīng)注意添加液體對(duì)樣本的稀釋作用（小于10%）并注明所用溶劑。2．實(shí)驗(yàn)過程2.1建立線性范圍：需測定9-11個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測定3-4次。2.2驗(yàn)證標(biāo)稱線性參數(shù)：需測定4-6個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測定3-4次。2.3所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測定，最好在一天之內(nèi)完成。3.數(shù)據(jù)處理3.1數(shù)據(jù)記錄（1）可參考表3進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。（2）可采用其它形式進(jìn)行記錄，但應(yīng)注意保留原始數(shù)據(jù)。表3：線性評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)記錄表（11個(gè)濃度水平，重復(fù)測定4次）項(xiàng)目：樣品：儀器：試劑/批號(hào)：校準(zhǔn)品/批號(hào)：操作者：審核者：測定日期：樣本號(hào)測定1測定2測定3測定4均值1234567891011數(shù)據(jù)可用性檢查可通過繪制散點(diǎn)圖對(duì)測定數(shù)據(jù)的可用性進(jìn)行初步檢查。以樣本號(hào)或樣本濃度為X軸，以測定結(jié)果為Y軸做圖，在圖上標(biāo)出針對(duì)每個(gè)樣本的測定值及每個(gè)濃度水平的測定均值，手工或用計(jì)算機(jī)做圖將均值點(diǎn)相連，觀察數(shù)據(jù)點(diǎn)與直線間的偏差，如偏差過大，表明數(shù)據(jù)組存在明顯非線性，需要對(duì)測定過程進(jìn)行檢查，排除因操作錯(cuò)誤所至誤差，并對(duì)樣本進(jìn)行重新測定。如圖形與直線接近，表明可對(duì)數(shù)據(jù)組繼續(xù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3.3剔除離群值離群值可由散點(diǎn)圖初步判斷，標(biāo)準(zhǔn)中建議采用格拉布斯（GRUBBS）法進(jìn)行離群值檢驗(yàn)。檢驗(yàn)步驟如下:每組數(shù)據(jù)中有4個(gè)測定結(jié)果，分別記為y1，y2，y3，y4。(1)將4個(gè)測定值按大小順序排列,最大值記為max,最小值記為min;(2)由4個(gè)測定值計(jì)算均值y和標(biāo)準(zhǔn)差S:y=(y1+y2+y3+y4)/4；s=(3)根據(jù)可疑值max或min分別按下式計(jì)算統(tǒng)計(jì)量t:t1=(max-y)/S，t2=(min-y)/S;(4)根據(jù)給定的顯著性水平a和重復(fù)測定次數(shù)查表得臨界值;(5)如t值大于臨界值，則相應(yīng)的可疑值為離群值。Grubbs檢驗(yàn)臨界值(Ta)值表樣本數(shù)顯著性水平樣本數(shù)顯著性水平0.050.0250.010.0050.050.0250.010.00531.1531.1551.1551.15541.4631.4811.4921.496進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析，得到一級(jí)、二級(jí)與三級(jí)多項(xiàng)式。一級(jí)多項(xiàng)式為直線，二級(jí)多項(xiàng)式表示上升曲線或下降曲線，三級(jí)多項(xiàng)式表示S形曲線（在測量范圍兩端具有明顯的非線性）。多項(xiàng)式方程如下：級(jí)數(shù)多項(xiàng)式回歸自由度（Rdf）一級(jí)Y=b0+b1X2二級(jí)Y=b0+b1X+b2X23三級(jí)Y=b0+b1X+b2X2+b3X343.5對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)多元回歸方程中以bi表示的系數(shù)為回歸系數(shù)。在二級(jí)與三級(jí)方程中，b2與b3為非線性系數(shù)。對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)就是對(duì)每個(gè)非線性系數(shù)作t檢驗(yàn)，判斷回歸系數(shù)與零是否有顯著性差異。b0與b1不反映非線性，故不需對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)。對(duì)b2與b3的檢驗(yàn)方法如下：計(jì)算統(tǒng)計(jì)量t，計(jì)算公式為：t=bi/SEi其中，SEi為每個(gè)非線性系數(shù)的斜率標(biāo)準(zhǔn)誤，計(jì)算公式為：SEi=Syx=(y-Y)其中，Y為回歸方程預(yù)測值，X與Y為測定均值。由公式df=L*R-Rdf計(jì)算自由度，L為樣本數(shù)，R為每個(gè)樣本的測定次數(shù)，Rdf為回歸自由度，即回歸方程中系數(shù)（包括b0）的個(gè)數(shù)。如測定5樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測定4次，則對(duì)測定數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析后其三級(jí)多項(xiàng)式中L=5，R=4，Rdf=4，df=5*4-4=16。在t值表中尋找t界值（雙邊檢驗(yàn)，α=0.05），將計(jì)算出的t值與界值比較，如p>0.05，表示非線性系數(shù)與零無顯著性差異，數(shù)據(jù)組被認(rèn)為具線性，此時(shí)可對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)，具體方法見后。當(dāng)精密度符合線性判斷要求時(shí)，數(shù)據(jù)分析可結(jié)束。如p<0.05，表示此非線性系數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，數(shù)據(jù)組為非線性，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)。臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)上述多項(xiàng)式回歸分析主要是利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行線性判斷，統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的線性可稱為一階線性，對(duì)數(shù)據(jù)組的要求很高。對(duì)于在臨床實(shí)驗(yàn)室中使用的測定方法，在其臨床應(yīng)用實(shí)踐中允許有一定的非線性誤差，此時(shí)通過對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的非線性作程度判斷，可得到臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性，即二階線性。臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性檢驗(yàn)中使用了兩個(gè)統(tǒng)計(jì)量，ADL（偏離直線平均差異averagedeviationfromlinearity）與PctBnd（百分區(qū)界percentbound），對(duì)于大多數(shù)分析物PctBnd取5%。如ADL小于所要求的臨界判斷值，則可認(rèn)為數(shù)據(jù)組具有臨床可接受的線性，所擬合出的最適非線性多項(xiàng)式無臨床意義。ADL值的計(jì)算：ADL表示最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異，其計(jì)算公式如下：ADL=x100%p(x)：最優(yōu)擬合二階或三階方程的擬合值a+bx：擬合一階方程的擬合值L：樣本數(shù)：總平均濃度（全部測量數(shù)據(jù)的平均值）=(y1+y2+y3+……+yn)/n（2）將ADL與臨界值比較一般設(shè)定ADL小于5%為臨床允許誤差，即取PctBnd為5%，通過查表（見附表A與B）得到ADL臨界值。如ADL小于臨界值，可認(rèn)為多項(xiàng)式具有臨床可接受的非線性，為二階線性。如ADL大于臨界值，則為臨床不可接受的非線性。對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)測量數(shù)據(jù)的精密度可直接影響多項(xiàng)式回歸分析的結(jié)果，為提高統(tǒng)計(jì)功效，需對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)。（1）計(jì)算最優(yōu)擬合方程的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤（σ）σ=yi:各個(gè)測量值p(xi):最優(yōu)擬合方程的擬合值n:樣本數(shù)乘以重復(fù)次數(shù)(LxR)d:最優(yōu)擬合方程的階數(shù)（2）計(jì)算不精密度用最優(yōu)擬合方程的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤（σ）與總平均濃度()的百分比代表不精密度。（3）數(shù)據(jù)組的不精密度檢驗(yàn)跟據(jù)以下公式進(jìn)行判斷：σ：最優(yōu)擬合方程的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤：總平均濃度L：樣本數(shù)R：重復(fù)測量的次數(shù)C：常數(shù)(附表C)PctBnd:取5%不精密度滿足判斷式時(shí),說明數(shù)據(jù)的精密度好可作線性評(píng)價(jià)。反之則表示數(shù)據(jù)的精密度差，不能作線性評(píng)價(jià)。當(dāng)PctBnd取5%時(shí),尚可通過查不精密度和臨界值表判斷數(shù)據(jù)是否精密(附表A和B),如此時(shí)不精密度對(duì)應(yīng)的臨界值顯示P,表明測量數(shù)據(jù)的精密度不符合作線性判斷的要求。4.結(jié)果報(bào)告線性范圍報(bào)告的具體格式不要求，但至少應(yīng)包括以下幾方面：進(jìn)行線性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)廠家名稱。被評(píng)價(jià)的方法或試劑名稱，批號(hào)。測定項(xiàng)目。線性范圍（如為二階線性應(yīng)包括臨床允許誤差）。如可能應(yīng)標(biāo)出測定項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平及在此水平處的臨床允許誤差。附錄：表A不精密度和ADL的臨界值（PctBnd=5%，d=1或2階）σ/%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=2015.55.55.45.45.45.426.16.05.95.85.85.736.66.46.36.36.26.147.16.96.86.76.66.556.67.47.27.17．06.968.27.97.77.57.47.278.7(P)8.4(P)8.17.97.87.68PP8.6(P)8.3(P)8.18．09PPPP8.5(P)8.3(P)>9PPPPPPL*R:樣本數(shù)*重復(fù)測量的次數(shù)表B不精密度和ADL的臨界值（PctBnd=5%，d=3階）σ/%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=2015.55.55.45.45.45.426.16.05.95.95.85.836.76.56.46.36.26.247.27.06.96.86.76.657.87.67.47.27.17.068.48.17.97.77.57.479.0(P)8.7(P)8.48.28.07.88PP8.9(P)8.6(P)8.48.29PPPP8.9(P)8.7(P)>9PPPPPPL*R:樣本數(shù)*重復(fù)測量的次數(shù)表C不精密度界值的常數(shù)最優(yōu)擬合方程的階數(shù)精密度界值的常數(shù)（C）一階或二階6.3三階6.5附件4體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——可報(bào)告范圍（征求意見稿）一、概述定量分析方法的可報(bào)告范圍（reportablerange）是臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告的依據(jù)之一，可報(bào)告范圍包括可報(bào)告低限與可報(bào)告高限?？蓤?bào)告范圍評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)定量檢測方法中可報(bào)告范圍的評(píng)估方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行可報(bào)告范圍評(píng)估及準(zhǔn)備可報(bào)告范圍評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)定量分析方法的可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、可報(bào)告范圍評(píng)估的基本原則1.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟悉測定方法與儀器操作。2.采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。3.用于評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的試劑應(yīng)為同一批號(hào)，并在有效期內(nèi)。三、可報(bào)告范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法1.實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求和制備方法1.1樣本要求最好選擇與測定樣本具有相同基質(zhì)的樣本。1.2制備方法（1）低值樣本：將待測樣本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物濃度水平較低）或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進(jìn)行稀釋，產(chǎn)生接近于方法線性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個(gè)濃度水平，濃度水平間隔應(yīng)小于線性范圍低限的10%。（2）高值樣本：選取含被測物的高值樣本，必要時(shí)可添加被分析物的純品，并計(jì)算出理論值。使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對(duì)高值待測樣本進(jìn)行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用三個(gè)高濃度樣本，稀釋倍數(shù)應(yīng)為方法性能標(biāo)明的最大稀釋倍數(shù)、并適當(dāng)增加或減小稀釋比例。2.實(shí)驗(yàn)過程在一次運(yùn)行中將低值樣本重復(fù)測定10次，高值稀釋樣本重復(fù)測定3次。3.數(shù)據(jù)處理3.1數(shù)據(jù)記錄：可根據(jù)附表進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。3.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：分別計(jì)算AVE(X)、SD、CV值。對(duì)于可報(bào)告范圍高限還應(yīng)計(jì)算乘以稀釋倍數(shù)后的還原濃度和相對(duì)偏差。4.結(jié)果報(bào)告4.1可報(bào)告范圍低限：以方法性能標(biāo)示的CV值為可接受界值，由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平做為可報(bào)告范圍低限。4.2可報(bào)告范圍高限：選取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法標(biāo)示CV值時(shí)的最大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍數(shù)，方法線性范圍的上限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報(bào)告范圍的高限。附表：可報(bào)告范圍（低限）數(shù)據(jù)記錄表濃度1濃度2濃度3濃度4濃度512345678910AVESDCV%可報(bào)告范圍（高限）數(shù)據(jù)記錄濃度1濃度2濃度3123AVE稀釋倍數(shù)還原濃度理論濃度相對(duì)偏差（%）附件5體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——準(zhǔn)確度（回收實(shí)驗(yàn)）（征求意見稿）一、概述準(zhǔn)確度評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。定量檢測方法的回收實(shí)驗(yàn)是評(píng)估準(zhǔn)確度的方法之一，用于評(píng)估定量檢測方法準(zhǔn)確測定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)采用回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)采用回收實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)估并準(zhǔn)備準(zhǔn)確度評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室采用回收實(shí)驗(yàn)方法對(duì)準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、回收實(shí)驗(yàn)評(píng)估的基本原則1.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟悉測定方法與儀器操作。2.采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。三、回收實(shí)驗(yàn)的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法1.實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求和制備方法1.1選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3-4份。1.2在其中2-3份樣本中加入不同量的待測物標(biāo)準(zhǔn)，制成2-3個(gè)不同加入濃度的回收樣本，計(jì)算加入的待測物的濃度。1.3在另一份樣本中加入同樣量的無被測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。2.實(shí)驗(yàn)過程用待評(píng)價(jià)方法對(duì)回收樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定，通常對(duì)樣本進(jìn)行2-3次重復(fù)分析，取其均值進(jìn)行計(jì)算。3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告3.1計(jì)算回收率：回收率1=回收樣本濃度3.2計(jì)算平均回收率：平均回收率=3.3計(jì)算比例系統(tǒng)誤差：比例系統(tǒng)誤差=100%-平均回收率3.4可接受判斷：比例系統(tǒng)誤差不大于CLIA88允許總誤差的1/2。4．注意事項(xiàng)：4.1加入體積：加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)；并且保證在加樣過程中的取樣準(zhǔn)確度。4.2加入待測物的濃度：在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平。4.3標(biāo)準(zhǔn)物濃度：因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)物溶液加入體積不到10%，為保證得到不同濃度的回收樣本，標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高。5．范例——某法測定血清葡萄糖回收率5.1樣本制備：（1）基礎(chǔ)血清：血清1ml（濃度5.5mmol/L）+蒸餾水0.1ml;（2）回收樣本1：血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液（濃度22mmol/L）;（3）回收樣本2：血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液（濃度55mmol/L）；5.2采用待評(píng)價(jià)方法，按照從低到高的濃度順序，每個(gè)樣本測定3次，取平均值。填入下表：測定濃度mmol/L加入濃度mmol/L回收濃度mmol/L回收率%基礎(chǔ)樣本5.00分析樣本17.062.002.06103分析樣本29.955.004.95995.3計(jì)算平均回收率：平均回收率=103+992x100%5.4計(jì)算比例系統(tǒng)誤差：比例系統(tǒng)誤差=|100%-101%|=1%5.5可接受判斷：12

附件6：體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對(duì)）（征求意見稿）一、概述很多臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，通常會(huì)有兩個(gè)以上的檢測系統(tǒng)，多個(gè)檢測系統(tǒng)之間應(yīng)該定期進(jìn)行比對(duì)。對(duì)于開放檢測系統(tǒng)，也應(yīng)該對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證，其中最重要的一項(xiàng)便是準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)，準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)可以通過方法學(xué)比對(duì)來實(shí)現(xiàn)，利用兩種方法的比對(duì)對(duì)非配套系統(tǒng)的準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)估是評(píng)估準(zhǔn)確度的方法之一。準(zhǔn)確度評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)采用方法學(xué)比對(duì)進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)采用方法學(xué)比對(duì)進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)估并準(zhǔn)備準(zhǔn)確度評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室采用方法學(xué)比對(duì)進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、方法學(xué)比對(duì)的基本原則1.熟悉待評(píng)價(jià)系統(tǒng)。2.編寫儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，其中包括校準(zhǔn)程序和室內(nèi)質(zhì)控程序。3.比對(duì)方法的選擇：對(duì)于比較、對(duì)方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行方法，或采用公認(rèn)的參考方法。比對(duì)方法應(yīng)具有以下條件：（1）具有比實(shí)驗(yàn)樣品方法更好的精密度。（2）沒有已知的干擾物。（3）同實(shí)驗(yàn)樣品方法具有相同單位。比較方法應(yīng)該選擇正確性經(jīng)過驗(yàn)證的方法，根據(jù)實(shí)際條件，選擇的順序如下：參考方法、原裝系統(tǒng)、配套系統(tǒng)、經(jīng)過驗(yàn)證的非配套系統(tǒng)。4.待評(píng)價(jià)方法的處理：進(jìn)行方法學(xué)對(duì)比實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)該對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行初步評(píng)價(jià)（可參考NCCLSEP-10），并且對(duì)待評(píng)價(jià)方法進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)（參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)），只有在以上評(píng)價(jià)完成并且達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)后，才可進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。三、方法學(xué)比對(duì)的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法1.實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求1.1按照實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的要求收集處理病人樣品，樣本貯存時(shí)間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品。1.2樣品應(yīng)來自于許多病人，并且此病人的疾病對(duì)于被測組成的影響應(yīng)該是知道的，不要使用含有干擾此方法的組分或條件(如溶血)樣品。1.3在具有臨床意義范圍內(nèi)即醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)樣品方法，通?；緩牡陀趨⒖挤秶牡拖薜礁哂趨⒖挤秶母呦?。分析濃度盡可能在報(bào)告的濃度范圍內(nèi)均勻分布。商品質(zhì)控物或者校準(zhǔn)物可能存在基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)避免使用。2.實(shí)驗(yàn)過程2.1每天選擇8個(gè)臨床病人樣本，按1到8的順序編號(hào)。用兩種方法同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按照1，2，3，4，5，6，7，8，8，7，6，5，4，3，2，1的樣本順序進(jìn)行測定。2.2以上實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)5天，即至少分析40個(gè)不同的臨床病人樣本。每天實(shí)驗(yàn)必須進(jìn)行校準(zhǔn)和室內(nèi)質(zhì)控。只有在室內(nèi)質(zhì)控合格的情況下，當(dāng)天的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)才有效。3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告3.1記錄測定結(jié)果（Xii和Yjj）。3.2計(jì)算每個(gè)樣本測定的均值（和），樣本重復(fù)測定間差值的絕對(duì)值（DXi和DYi）及兩種方法測定結(jié)果間的差值（-）。3.3以對(duì)作散點(diǎn)圖。3.4以（-）對(duì)做偏倚圖。3.5以（Yjj-Xij）對(duì)做偏倚圖。3.7檢查批內(nèi)離群點(diǎn)：計(jì)算樣本重復(fù)測定間差值（DXi和DYi）的平均數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果差值超出平均數(shù)4倍時(shí)，則判斷為離群點(diǎn)。3.8檢查批間離群點(diǎn)：計(jì)算兩種方法測定結(jié)果間均值差值(-)的平均數(shù)，超出該平均數(shù)4倍時(shí)，則判斷該樣本為離群點(diǎn)。3.9相關(guān)系數(shù)計(jì)算：利用所有樣本雙份測定值進(jìn)行相關(guān)系數(shù)計(jì)算，如果≥0.975(或2≥0.95)，則認(rèn)為X范圍適合，數(shù)據(jù)滿足要求。X的誤差可以由數(shù)據(jù)范圍給以適當(dāng)補(bǔ)償，并且簡單的線性回歸可以用來評(píng)價(jià)斜率和截距。如果r20.95，那么必須通過分析另外一些樣品以擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍，然后再檢查全部數(shù)據(jù)系列。如果沒有超出范圍，采用分步偏差程序代替線性回歸，評(píng)價(jià)平均偏差。3.10回歸計(jì)算：利所有樣本雙份測定的有效數(shù)據(jù)，計(jì)算兩個(gè)方法間的線性回歸方程：Y=a+bX.3.11偏差估計(jì)：在醫(yī)學(xué)決定水平，利用回歸方程計(jì)算預(yù)期偏差,預(yù)期偏差Bx=a+(b-1)X,相對(duì)偏差=Bx/X3.12根據(jù)相關(guān)規(guī)定，判定預(yù)期偏差、相對(duì)偏差是否在規(guī)定范圍內(nèi)。附件7：體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——精密度（征求意見稿）一、概述精密度是衡量體外診斷試劑批內(nèi)和批間變異的重要指標(biāo)，通常包括批內(nèi)和批間不精密度。精密度評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)定量檢測方法中精密度的評(píng)估和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行定量檢測方法中精密度的評(píng)估提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定量檢測方法的精密度評(píng)估。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、定義1.批內(nèi)精密度是眾多種類精密度中最基本的一個(gè)，它是在嚴(yán)格的相似條件下，所得到的最佳的精密度。2.批間精密度指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號(hào)試劑，在一段時(shí)間內(nèi)(一般為一個(gè)月或20個(gè)工作日)對(duì)同一測試樣品（常用質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。三、精密度評(píng)估的基本原則1.操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項(xiàng)注意事項(xiàng)，能在評(píng)估階段維持儀器的可靠和穩(wěn)定。2.用于評(píng)估試驗(yàn)的樣品一般常采用臨床實(shí)驗(yàn)室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清(漿)庫；當(dāng)實(shí)驗(yàn)室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時(shí)，也可考慮使用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品物質(zhì)，如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品。3.評(píng)估精密度時(shí)，應(yīng)至少評(píng)估二個(gè)濃度水平樣本的精密度。當(dāng)二個(gè)濃度的精密度有顯著差異時(shí)，建議增加為三個(gè)濃度。所選樣本濃度應(yīng)在測量范圍內(nèi)有醫(yī)學(xué)意義，即至少有一個(gè)濃度在醫(yī)學(xué)決定水平(medicaldecisionlevels)左右。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應(yīng)選用靠近最低檢出限的樣品，此時(shí)所得的精密度往往偏大。相當(dāng)多的檢驗(yàn)項(xiàng)目低值常無實(shí)際臨床意義，但有少數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目，其低值也有臨床價(jià)值，此時(shí)就需要評(píng)估有判斷價(jià)值的低值精密度，適用時(shí)，可進(jìn)行功能靈敏度的評(píng)估。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個(gè)濃度。此外，再根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇另一個(gè)值。如與廠商或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的精密度進(jìn)行比較，所選濃度應(yīng)與被比較精密度的濃度相接近。否則，有可能得出不恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。四、精密度評(píng)估的方法和數(shù)據(jù)處理1.只評(píng)估批內(nèi)不精密度1.1試劑和校準(zhǔn)品：應(yīng)使用同一種類、同一批號(hào)的試劑和校準(zhǔn)物,如可能,只進(jìn)行一次校準(zhǔn)。使用不同批號(hào)試劑和多次校準(zhǔn)都會(huì)增加檢驗(yàn)結(jié)果的變異程度。1.2評(píng)估方法：在以上條件滿足的情況下，在一批內(nèi)對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)測定，至少進(jìn)行20次重復(fù)測定。1.3質(zhì)量控制：檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)至少測一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)以取得20個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。1.4數(shù)據(jù)收集：在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；從已收集的20數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為是離群值。為了能收集到至少20個(gè)有效數(shù)據(jù)。除補(bǔ)充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，還應(yīng)再增加由于離群值不用于精密度的計(jì)算所需增加的檢驗(yàn)次數(shù)。在進(jìn)行這種批內(nèi)精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)離群值超過1個(gè)時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)，應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。1.5數(shù)據(jù)的記錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表1：表1批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄序號(hào)測量值（均值-測量值）2121920均值1.6批內(nèi)精密度估計(jì)值的計(jì)算求出均值：=∑Xi/n使用下列公式計(jì)算出批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差估計(jì)值的標(biāo)準(zhǔn)差1.7批內(nèi)精密度估計(jì)值的95%可信限查統(tǒng)計(jì)表得出自由度20的上限公差因數(shù)為1.25，相應(yīng)下限公差因數(shù)為0.75，得出批內(nèi)精密度的95%可信區(qū)間為：（批內(nèi)精密度×0.75）-（批內(nèi)精密度×1.25）2.同時(shí)評(píng)價(jià)批內(nèi)和批間不精密度2.1評(píng)估方法：每天做2個(gè)批次的測試，每批測試時(shí)，對(duì)同一樣品作雙份測量，共做20天。評(píng)估結(jié)束時(shí)共有40對(duì)，即80個(gè)測試結(jié)果。從40批次測量中雙份結(jié)果的差值求出批內(nèi)精密度。從所有80個(gè)數(shù)據(jù)計(jì)算出批間精密度。在實(shí)施此項(xiàng)評(píng)估工作時(shí)，必須由同一個(gè)或一組操作者在同一臺(tái)儀器上進(jìn)行，應(yīng)該使用相同的校準(zhǔn)品、相同種類和批號(hào)的試劑。所用時(shí)間不得少于20個(gè)工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出該臨床實(shí)驗(yàn)室定量測量方法在一段時(shí)間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。在每一批次測量中，必須同時(shí)測量質(zhì)控品，以保證結(jié)果是可靠的，數(shù)據(jù)能夠采用。注：①也可以一日進(jìn)行一個(gè)批次測量，一個(gè)批次中對(duì)同一樣品重復(fù)測量4次，共測20個(gè)工作日，由80個(gè)數(shù)據(jù)求出批內(nèi)和批間精密度；②如果取得穩(wěn)定樣品有困難，也可改為測5日，每日2個(gè)批次，每個(gè)批次測一個(gè)樣本8次。仍有80個(gè)數(shù)據(jù)。從10個(gè)批次中每一樣品8次差異算出批內(nèi)精密度。從所有80個(gè)結(jié)果計(jì)算出批間精密度。2.2數(shù)據(jù)的收集要收集到足夠有效數(shù)據(jù)(至少為80個(gè)數(shù)據(jù))。除補(bǔ)充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，應(yīng)在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outlier)，可用下述剔除值的標(biāo)準(zhǔn)；從實(shí)施段已收集的40對(duì)均值的數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，出現(xiàn)下列任何一種情況都可認(rèn)為是離群值：（1）任何一對(duì)均值和總均值的差超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差（2）任何一對(duì)中二個(gè)結(jié)果的絕對(duì)差值超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差離群值不用于精密度的計(jì)算。在剔除后應(yīng)再增加檢驗(yàn)次數(shù)，以保證至少有40批次，80個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。注：任何一次實(shí)驗(yàn)的剔除值不能超過總測量數(shù)的2.5%。當(dāng)超過時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗(yàn)。2.3數(shù)據(jù)的記錄將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表2表2精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄序號(hào)日期批次1批次2結(jié)果1結(jié)果2均值結(jié)果1結(jié)果2均值12…………19202.4批內(nèi)精密度的計(jì)算按表3要求對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步計(jì)算，將結(jié)果填入表3表3精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)計(jì)算日批次1批次2（結(jié)果1-結(jié)果2）2（結(jié)果1-結(jié)果2）212…………1920利用表4中的結(jié)果(3)、(4)可計(jì)算出批內(nèi)精密度Sr：，其中I=檢驗(yàn)日數(shù)2.5批間精密度估計(jì)值的計(jì)算將上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在表4中表4：批間精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄序號(hào)日期第一批第二批結(jié)果1（均值-結(jié)果1）2結(jié)果2（均值-結(jié)果2）2結(jié)果1（均值-結(jié)果1）2結(jié)果2（均值-結(jié)果2）212……1920合計(jì)(1)(5)(2)(6)（3）（7）（4）（8）求出均值，公式為：從上表得出：求出批間精密度，公式為：從上表得出式中n=檢驗(yàn)總數(shù)2.6批間精密度估計(jì)值的置信區(qū)間由于檢驗(yàn)次數(shù)不可能無限增加，當(dāng)按規(guī)定方案，多次重復(fù)測量，就是在很好控制條件下，也很難得到相同的值，換言之，通過這樣實(shí)驗(yàn)的數(shù)值只是精密度的估計(jì)值，圍繞“真值”而變動(dòng)。變動(dòng)的范圍大小和檢驗(yàn)次數(shù)密切相關(guān)。人們往往在給出精密度值外，還給出其95%的置信區(qū)間。置信區(qū)間與所測次數(shù)相關(guān)，次數(shù)愈多，可信限愈小?？梢圆槌雠c檢次數(shù)相關(guān)自由度的0.95因數(shù)，乘以標(biāo)準(zhǔn)差值就可得出95%可信限的上、下值。實(shí)際工作中，可查出95%可信限的上值的公差因數(shù)（tolerancefactor），由此計(jì)算出95%可信限。實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告精密度同時(shí)，可給出95%置信區(qū)間。3.與其它來源的精密度的比較臨床實(shí)驗(yàn)室在測定方法的精密度后，應(yīng)評(píng)價(jià)得到的精密度是否滿意，最簡單辦法就是與生產(chǎn)企業(yè)（文獻(xiàn)）所提供的精密度進(jìn)行比較，判斷是否存在差異。如果臨床實(shí)驗(yàn)室所測的精密度小于生產(chǎn)企業(yè)（文獻(xiàn)）的精密度，說明臨床實(shí)驗(yàn)室所得到的精密度是合適的。如果臨床實(shí)驗(yàn)室測得的精密度大于生產(chǎn)企業(yè)（文獻(xiàn)）的值，可利用F-檢驗(yàn)法（F-test），即方差比值檢驗(yàn)（varianceratiotest）對(duì)實(shí)驗(yàn)室測得的結(jié)果和生產(chǎn)企業(yè)提供的結(jié)果進(jìn)行比較計(jì)算。表5是為此工作設(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)記錄和計(jì)算表格：表5與生產(chǎn)企業(yè)（文獻(xiàn)）聲明批間標(biāo)準(zhǔn)差的比較表實(shí)驗(yàn)濃度=聲明濃度=實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差=sr或srr聲明標(biāo)準(zhǔn)差=σr或σrr方差=sr2或srr2方差=σr2或σrr2測量次數(shù)自由度=n-1聲明測量次數(shù)自由度=n-1注：標(biāo)準(zhǔn)差大小常與濃度有關(guān)，比較時(shí)，必須檢查二者濃度是否接近一致，如差異較大不應(yīng)進(jìn)行比較。如接近一致，按下列公式計(jì)算出F值，以批間精密度為例：F=Srr2/σrr2將計(jì)算出的F值和根據(jù)二組自由度從表6中查到的F值(p=0.05)進(jìn)行比較，如計(jì)算F值小于查表得出F值，雖然實(shí)驗(yàn)室得到的標(biāo)準(zhǔn)差大于聲稱值，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異。反之，說明實(shí)驗(yàn)室得到的標(biāo)準(zhǔn)差沒有達(dá)到方法應(yīng)達(dá)到的水平。此時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該進(jìn)一步改善條件，例如培訓(xùn)操作人員，修改操作程序或者維修儀器等再次進(jìn)行測定。仍然達(dá)不到時(shí)，應(yīng)與生產(chǎn)企業(yè)討論和取得協(xié)助。表6F分布臨界值表(p=0.05)分母自由度分子自由度51014204050100200∞05101520304060100120∞5.054.744.644.564.464.444.414.394.363.332.982.862.772.662.642.592.562.542.902.542.422.332.202.182.122.102.072.712.352.222.121.991.971.911.881.842.532.162.041.931.791.761.701.661.622.452.081.951.841.691.661.591.551.512.371.991.861.751.591.561.481.441.392.311.931.791.681.521.481.391.341.282.291.911.781.661.501.461.371.321.252.211.831.691.571.391.351.241.171.00五、精密度的報(bào)告形式精密度的結(jié)果受眾多因素影響，在報(bào)告測量精密度時(shí)，應(yīng)同時(shí)說明下列各點(diǎn)：批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差及其95%置信區(qū)間；批內(nèi)變異系數(shù);批間標(biāo)準(zhǔn)差及其95%置信區(qū)間;批間變異系數(shù);實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的工作日數(shù);檢驗(yàn)批次數(shù);每個(gè)批次重復(fù)檢驗(yàn)數(shù)和總檢驗(yàn)數(shù);試劑的種類和批號(hào);校準(zhǔn)品種類、批號(hào)和校準(zhǔn)次數(shù);如適用，使用儀器的種類和型號(hào)。附件8：體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——干擾實(shí)驗(yàn)（征求意見稿）一、概述干擾物質(zhì)是體外診斷試劑使用過程中造成測量誤差的一個(gè)主要原因，針對(duì)體外診斷試劑進(jìn)行的干擾實(shí)驗(yàn)是指通過實(shí)驗(yàn)查找出對(duì)體外診斷試劑測量結(jié)果產(chǎn)生影響的物質(zhì)的過程。干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)干擾實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)方法、實(shí)驗(yàn)所需材料、實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)估及準(zhǔn)備干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評(píng)估資料提供技術(shù)參考。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)估的基本原則（一）干擾物質(zhì)來源：干擾物質(zhì)可能來自內(nèi)源或外源物質(zhì)?？梢筛蓴_物質(zhì)的來源通常有：1.常見的異常標(biāo)本，例如溶血、黃疸及脂血；2.普通的處方藥及非處方藥；3.患者群體中異常的生化代謝物；4.患者群體中常見的治療藥物；5.干擾測量程序的藥物（包括代謝物）；6.已報(bào)道干擾相似測量程序的物質(zhì)；7.標(biāo)本處理過程中的添加物，例如抗凝劑、防腐劑；8.采集及處理過程中接觸標(biāo)本的物質(zhì)，例如血清分離設(shè)備、導(dǎo)管、標(biāo)本收集容器及塞子；9.影響某些實(shí)驗(yàn)的膳食物質(zhì)，例如咖啡因，β-胡蘿卜素，罌粟籽。（二）在實(shí)施評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)前，必須決定臨床可接受的標(biāo)準(zhǔn)。（三）在實(shí)施評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)前，操作者必須熟悉儀器設(shè)備及測量程序并對(duì)精密度及準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)要避免遺留效應(yīng)影響分析結(jié)果，確保分析系統(tǒng)保持穩(wěn)定。三、干擾實(shí)驗(yàn)的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法干擾物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，一般是通過測定對(duì)照或基礎(chǔ)樣本池中待測物的濃度計(jì)算得出的。在某些情況下，對(duì)照樣本池中可能含有一定量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，如膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類。在一些測量程序中，采用標(biāo)本前處理、樣本空白、血清基質(zhì)校正物和因子校正等手段以減少這些干擾物質(zhì)在平均濃度下的影響，只有當(dāng)患者樣本中干擾物質(zhì)濃度高于或低于平均水平時(shí)，由于干擾物質(zhì)引起的誤差才會(huì)顯現(xiàn)出來?；诖?，有兩種評(píng)估干擾物質(zhì)的基本方法，每一種方法都有它的優(yōu)點(diǎn)及內(nèi)在局限性，當(dāng)兩種方法同時(shí)使用時(shí)，可提供相互補(bǔ)充的信息。一種方法是將可疑干擾物質(zhì)加入樣本以評(píng)價(jià)干擾效果，另一種方法是測量個(gè)別有代表性病人標(biāo)本，相對(duì)于高特異性可比較的測量程序評(píng)價(jià)被分析測量程序產(chǎn)生的偏倚。（一）干擾篩查評(píng)價(jià)很多可疑干擾物質(zhì)在相對(duì)較高濃度下所產(chǎn)生的干擾，稱此為“干擾篩查”。將可疑干擾物質(zhì)加入基礎(chǔ)樣本池，計(jì)算實(shí)驗(yàn)樣本相對(duì)于對(duì)照樣本測量結(jié)果所產(chǎn)生偏倚，稱此為“配對(duì)差檢驗(yàn)”。如果可以觀察到臨床顯著性影響，可以認(rèn)為此種物質(zhì)為干擾物質(zhì)，需要進(jìn)一步評(píng)估干擾物質(zhì)濃度與干擾程度的關(guān)系。1.實(shí)驗(yàn)材料和基本要求（1）基礎(chǔ)樣本池：從一些未服用藥物的健康個(gè)體獲得新鮮標(biāo)本，以此反應(yīng)標(biāo)本基質(zhì)。若不能獲得新鮮標(biāo)本，可使用冷凍或凍干的標(biāo)本代替，但應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)材料充分接近新鮮臨床標(biāo)本。使用適當(dāng)純度的分析物將樣本池中分析物的濃度調(diào)整到醫(yī)學(xué)決定水平，但要避免引入其它的干擾物質(zhì)。（2）儲(chǔ)存溶液：準(zhǔn)備一種適當(dāng)純度或者最接近循環(huán)形式的可疑干擾物質(zhì)。選擇一種實(shí)驗(yàn)物質(zhì)能充分被溶解的溶劑，例如試劑純水、稀釋的HCl或NaOH、甲醇或乙醇、丙酮、二甲亞砜（DMSO）及其他有機(jī)溶劑。制備至少20倍干擾物實(shí)驗(yàn)濃度的儲(chǔ)存溶液。（3）每個(gè)標(biāo)本所需要的重復(fù)測量次數(shù)：雙側(cè)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)為：，單側(cè)檢驗(yàn)用Z1-α代替Z1-α/2。其中，Z1-α/2是雙側(cè)檢驗(yàn)的可信度為100(1-α)%時(shí)標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對(duì)應(yīng)的百分位數(shù)；Z1-α是單側(cè)檢驗(yàn)的可信度為100(1-α)%時(shí)標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對(duì)應(yīng)的百分位數(shù)；Z1-β是把握度為100(1-β)%時(shí)標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布相對(duì)應(yīng)的的百分位數(shù)；dmax是檢測分析物濃度時(shí)最大允許的干擾（interference）；s是測量程序的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。由于實(shí)驗(yàn)次數(shù)必須為整數(shù)，所以將計(jì)算結(jié)果四舍五入為整數(shù)。（4）干擾物實(shí)驗(yàn)濃度：干擾物質(zhì)濃度應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本的最高濃度值。（5）分析物實(shí)驗(yàn)濃度：分析物實(shí)驗(yàn)濃度應(yīng)選擇兩個(gè)濃度水平。在大多數(shù)情況下，可選擇醫(yī)學(xué)決定水平、參考范圍的上、下限或病理濃度。2.實(shí)驗(yàn)過程（1）選擇適當(dāng)?shù)姆治鑫餄舛?；?）建立一個(gè)臨床上顯著性差別（dmax）的標(biāo)準(zhǔn)；（3）決定每個(gè)樣本的重復(fù)次數(shù)；（4）制備一個(gè)基礎(chǔ)樣本池；（5）制備一個(gè)儲(chǔ)存溶液；（6）制備實(shí)驗(yàn)樣本，將儲(chǔ)存溶液加至容量瓶體積的1/20，再用基礎(chǔ)樣本加至刻度，混勻；（7）制備對(duì)照樣本，將溶劑加至另一容量瓶體積的1/20，再用基礎(chǔ)樣本加至刻度，混勻；（8）在同一批測定中，交替分析實(shí)驗(yàn)（T）及對(duì)照樣品（C），例如C1T1C2T2C3T（9）記錄分析結(jié)果。3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告計(jì)算dobs、dc及95%可信區(qū)間。是實(shí)驗(yàn)、對(duì)照樣本分析物平均值的差值，公式為，在雙側(cè)檢驗(yàn)中，，在單側(cè)檢驗(yàn)用Z1-α代替Z1-α/2；95%可信區(qū)間的計(jì)算公式為：，n為每份標(biāo)本重復(fù)測量數(shù)，dnull經(jīng)常取值為0。當(dāng)dobs小于或等于dc時(shí)，不拒絕無效假設(shè)，認(rèn)為檢測物質(zhì)不是干擾物質(zhì)；當(dāng)dobs大于dc時(shí)，拒絕無效假設(shè)，接受備擇假設(shè)，認(rèn)為檢測物質(zhì)是干擾物質(zhì)。當(dāng)95%可信區(qū)間的下限小于或等于dmax，認(rèn)為檢測物質(zhì)不是干擾物質(zhì)；當(dāng)95%可信區(qū)間的下限大于dmax，可認(rèn)為檢測物質(zhì)是干擾物質(zhì)。（二）干擾效果評(píng)價(jià)如果在一個(gè)或多個(gè)分析物質(zhì)濃度發(fā)現(xiàn)干擾，進(jìn)行劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)以確定干擾物質(zhì)濃度與干擾程度的關(guān)系。1.實(shí)驗(yàn)材料和基本要求（1）基礎(chǔ)樣本池；（2）儲(chǔ)存溶液；（3）高值樣本池：基礎(chǔ)樣本池稀釋儲(chǔ)存溶液以達(dá)到所需濃度；（4）低值樣本池：準(zhǔn)備一個(gè)干擾物質(zhì)濃度接近臨床標(biāo)本平均濃度的樣本池。2.實(shí)驗(yàn)過程（1）決定可疑干擾物質(zhì)的最高和最低濃度；（2）建立一個(gè)臨床上顯著性差別的標(biāo)準(zhǔn)；（3）決定每個(gè)濃度水平的重復(fù)次數(shù)（一般為3次）；（4）制備高、低值樣本池；（5）制備一個(gè)中值樣本池，將等量的高值及低值樣本加入一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萘科恐校旌暇鶆?；?）制備一個(gè)75%樣本池，將等量的高值及中值樣本加入一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萘科恐?，混合均勻；?）制備一個(gè)25%樣本池，將等量的低值及中值樣本加入一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萘科恐?，混合均勻；?）在同一批測定中分析所有標(biāo)本，先按濃度升高順序排列標(biāo)本，再按降低順序排列標(biāo)本，以平衡系統(tǒng)誤差；（9）計(jì)算低值樣本池分析物的平均濃度，把其他的測量結(jié)果減去此值，將所有的分析結(jié)果列表。五個(gè)濃度水平樣本池制備圖3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告以干擾物質(zhì)濃度為X軸，觀察效果為Y軸，繪制劑量反應(yīng)圖，檢查圖的形狀。當(dāng)數(shù)據(jù)呈線性分布時(shí)，可應(yīng)用線性最小二乘法回歸分析，計(jì)算斜率、截距及剩余標(biāo)準(zhǔn)差（Sy,x）。在圖上畫出回歸線，可證實(shí)它適合此數(shù)據(jù)并且此效應(yīng)為線性。當(dāng)數(shù)據(jù)呈非線性分布時(shí)，任一干擾物質(zhì)濃度下的干擾程度可通過圖直接得到，還可利用非線性回歸分析的二次多項(xiàng)式模型計(jì)算得出。當(dāng)數(shù)據(jù)呈線性分布時(shí)，回歸線的斜率代表每單位干擾物產(chǎn)生的偏倚，Y軸的截距代表內(nèi)源性干擾物質(zhì)的濃度?？赏ㄟ^回歸方程式或劑量反應(yīng)圖，估計(jì)任一干擾物質(zhì)濃度下的干擾程度，而不管線性或是非線性關(guān)系。（三）以病人標(biāo)本評(píng)價(jià)干擾效果被評(píng)價(jià)的測量程序與參考程序或其他有比較資格的測量程序共同分析兩組病人標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組）。相對(duì)于對(duì)照標(biāo)本，存在偏倚的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本結(jié)果提示有干擾存在。由于干擾篩查存在著明顯的局限性，不管篩查實(shí)驗(yàn)如何廣泛，在病人標(biāo)本中都可能遇到未考慮到的干擾，所以分析相關(guān)病人群體的標(biāo)本，評(píng)價(jià)標(biāo)本間內(nèi)在的變異性，可以減少這種情況發(fā)生。病人標(biāo)本的測量結(jié)果也可用于證實(shí)干擾現(xiàn)象。如果已知病人標(biāo)本包含一種物質(zhì)，其測量結(jié)果本應(yīng)產(chǎn)生偏倚而實(shí)際未觀察到，那么應(yīng)該進(jìn)行調(diào)查以解釋相互矛盾的結(jié)果。1.實(shí)驗(yàn)材料和基本要求（1）實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的選擇原則：來自具有相關(guān)疾病的病人標(biāo)本；服用相關(guān)藥物的病人標(biāo)本；尿毒癥患者的標(biāo)本；具有其他成分的標(biāo)本等。（2）對(duì)照標(biāo)本的選擇原則：未服用相關(guān)藥物的病人標(biāo)本；具有可疑干擾物質(zhì)正常濃度的標(biāo)本；具有相同或相似診斷的病人標(biāo)本；分析物濃度分布與實(shí)驗(yàn)標(biāo)本相似的標(biāo)本等。2.實(shí)驗(yàn)過程（1）選擇實(shí)驗(yàn)標(biāo)本及對(duì)照標(biāo)本；（2）選擇一個(gè)合適的參考測量程序或有比較資格的測量程序；（3）在盡可能短的時(shí)間里（通常2小時(shí)），使用兩種測量程序分析每一個(gè)標(biāo)本兩次，實(shí)驗(yàn)及對(duì)照組的標(biāo)本數(shù)一般都是10至20個(gè)，測量數(shù)日，每日分兩批測定標(biāo)本，分析順序應(yīng)為隨機(jī)順序或是實(shí)驗(yàn)與對(duì)照標(biāo)本交替排列；（4）若觀察到偏倚，則測量藥物或其他可疑的干擾物質(zhì)的濃度，盡可能建立偏倚與干擾物質(zhì)濃度的關(guān)系。3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告繪制偏倚相對(duì)于參考方法的分析物濃度圖。將分析結(jié)果列表，計(jì)算每個(gè)標(biāo)本兩次測量結(jié)果的平均值及平均偏倚（被評(píng)價(jià)方法的結(jié)果減去參考方法的結(jié)果），以參考方法所測得分析物濃度為X軸，以偏倚為Y軸，作圖。應(yīng)用線性回歸分析計(jì)算每組數(shù)據(jù)的Sy,x值。評(píng)價(jià)偏倚，結(jié)果可能為正偏倚、負(fù)偏倚或無偏倚。將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本與對(duì)照標(biāo)本的結(jié)果比較，評(píng)價(jià)它們之間是否存在系統(tǒng)偏倚，如果存在系統(tǒng)偏倚，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組偏倚的上限與對(duì)照組的平均偏倚的差值，此值與干擾標(biāo)準(zhǔn)相比較，以評(píng)價(jià)是否存在有臨床意義的干擾。 如果可以測量干擾物質(zhì)的濃度，繪制偏倚相對(duì)于可疑干擾物質(zhì)濃度圖，以觀察可疑干擾物質(zhì)的濃度是否與偏倚相關(guān)。附件9體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——穩(wěn)定性（征求意見稿）一、概述穩(wěn)定性評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）的有關(guān)要求，參考《中華人民共和國衛(wèi)生部新藥審評(píng)辦公室編——新藥審批辦法及有關(guān)法規(guī)匯編》、《中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)——能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》及CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)穩(wěn)定性的評(píng)估方法、實(shí)驗(yàn)所需材料、實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)估及準(zhǔn)備穩(wěn)定性研究資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核穩(wěn)定性研究資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試劑穩(wěn)定性評(píng)定，以期確定試劑穩(wěn)定性范圍或?qū)υ噭┱f明書標(biāo)稱穩(wěn)定性范圍的驗(yàn)證由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、穩(wěn)定性評(píng)估的基本原則1.實(shí)驗(yàn)操作人員能熟練應(yīng)用操作系統(tǒng)。能定期（包括：每日、每周、每月、每季度……）對(duì)所用儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，按儀器說明書所要求定期更換易損零配件，每年請(qǐng)國家計(jì)量院對(duì)儀器濾光片進(jìn)行校驗(yàn)，使儀器處在正常的工作狀態(tài)，確保儀器有較好的測定精密度及減少樣本、試劑攜帶污染等。2.要采用與評(píng)價(jià)試劑配套的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品的使用（儲(chǔ)存、復(fù)溶）應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明，校準(zhǔn)步驟與間隔應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行。3.要做好室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控物應(yīng)有可靠的來源，穩(wěn)定性應(yīng)在一年以上，應(yīng)盡可能采用人血清基質(zhì)，可選用定值或非定值質(zhì)控品，質(zhì)控物的使用（儲(chǔ)存、復(fù)溶）應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明，質(zhì)控物的定值與靶值的確定應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行。4.進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)注意試劑有效期及批號(hào)，不可采用過期試劑或不同批號(hào)的試劑，最好用同批混合試劑，這樣可避免瓶間差。試劑應(yīng)存放在說明書規(guī)定的條件下。工作液配制應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行，試劑瓶上要標(biāo)注打開的日期及開瓶后的失效日期并簽上名或縮寫，要注意配制好的工作液是否需要避光保存。5.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)用來保存試劑的冰箱有溫度監(jiān)控記錄，如果發(fā)現(xiàn)冰箱溫度可能存在問題，應(yīng)該及時(shí)調(diào)整冰箱溫度，以符合試劑保存的要求，如果不能調(diào)整，應(yīng)該及時(shí)轉(zhuǎn)移冰箱內(nèi)的試劑。還應(yīng)做好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度記錄，對(duì)實(shí)驗(yàn)用水進(jìn)行電阻率的測定（不能低于1兆歐姆.厘米）。三、穩(wěn)定性的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法1.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：1.1測定新配制的試劑工作液和穩(wěn)定期末試劑工作液兩組平均值之間的一致性。1.2測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白吸光度值。1.3測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白值2.實(shí)驗(yàn)樣本：2.1兩組平均值之間的一致性實(shí)驗(yàn)的樣本要求（1）臨床樣本（人血清）：可避免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響，力求新鮮，但不可選用含有對(duì)測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。最理想的濃度為醫(yī)學(xué)決定水平（一般有兩個(gè)水平）。（2）質(zhì)控品：選擇易得到的、有可靠來源，穩(wěn)定性好的定值或非定值質(zhì)控物、此質(zhì)控物至少要有兩個(gè)濃度水平。2.2試劑空白吸光度值、試劑空白值實(shí)驗(yàn)的樣本要求生理鹽水（開瓶時(shí)間在三個(gè)月內(nèi)）應(yīng)該透明清澈如出現(xiàn)沉淀或者混濁應(yīng)及時(shí)更換。3.實(shí)驗(yàn)方法每個(gè)濃度水平樣本重復(fù)測定至少6次，計(jì)算平均值。新配制及穩(wěn)定期末工作液應(yīng)在同次運(yùn)行中測定，可將儀器帶來的不精密度減到最小。4.數(shù)據(jù)處理4.1數(shù)據(jù)記錄可參考表1進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。但應(yīng)保留原始數(shù)據(jù)（包含當(dāng)日質(zhì)控），在原始數(shù)據(jù)要有有操作者的簽名或縮寫。表1：穩(wěn)定性評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)記錄表評(píng)價(jià)試劑盒名稱/批號(hào)：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：樣本名稱/批號(hào)/采集的日期：儀器：試劑廠家：試劑保存溫度：校準(zhǔn)品/批號(hào)：操作者：審核者：測定日期：樣本號(hào)新配制的工作液穩(wěn)定期末的工作液測定1測定2……均值測定1測定2……均值12空白吸光度空白測定值4.2結(jié)果判斷：（1）兩組平均值之間的一致性（t檢驗(yàn)法）按下式計(jì)算t值：式中：新配制試劑工作液測量數(shù)據(jù)的平均值穩(wěn)定期末試劑工作液測量數(shù)據(jù)的平均值新配制試劑工作液測量數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差穩(wěn)定期末試劑工作液測量數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差新配制試劑工作液測量次數(shù)穩(wěn)定期末試劑工作液測量次數(shù)注：為了保證平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的準(zhǔn)確度，和均≥6若t<顯著性水平(通常)，自由度為+-2的臨界值，則兩個(gè)平均值之間無顯著性差異。（2）試劑空白吸光度和空白測定值：在試劑工作液穩(wěn)定期末達(dá)到說明書的指標(biāo)。5.穩(wěn)定性評(píng)價(jià)報(bào)告具體格式不要求，但應(yīng)包含以下內(nèi)容，可參考下表：穩(wěn)定性試劑評(píng)價(jià)報(bào)告試劑名稱：委托單位：通訊地址：聯(lián)系人：聯(lián)系方式：電話：傳真：評(píng)價(jià)內(nèi)容評(píng)價(jià)依據(jù)所用儀器評(píng)價(jià)系統(tǒng)質(zhì)控物質(zhì)臨床標(biāo)本評(píng)價(jià)結(jié)果：結(jié)論：評(píng)價(jià)人：技術(shù)負(fù)責(zé)人：評(píng)價(jià)負(fù)責(zé)人：報(bào)告日期：實(shí)驗(yàn)室（蓋章）備注：以上檢測結(jié)果僅對(duì)所檢測的樣品有效實(shí)驗(yàn)室地址：附件10：體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則——參考值（參考區(qū)間）（征求意見稿）一、概述參考值（參考區(qū)間）是體外診斷試劑的重要指標(biāo)之一，也是臨床使用中判斷被檢測樣本是否正常的重要依據(jù)。參考值（參考區(qū)間）評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。本指南基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)參考值（參考區(qū)間）的有關(guān)定義、實(shí)驗(yàn)所需材料、實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理進(jìn)行了原則性要求，包括建立參考區(qū)間的方法學(xué)和程序。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)對(duì)定量檢測和確定健康相關(guān)的參考值（參考區(qū)間）進(jìn)行評(píng)估及準(zhǔn)備參考值（參考區(qū)間）評(píng)估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核參考值（參考區(qū)間）評(píng)估資料提供技術(shù)參考。同時(shí)，本指南亦可指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行參考值（參考區(qū)間）的確定或轉(zhuǎn)移。由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對(duì)本指南進(jìn)行修訂。二、定義1.參考個(gè)體：根據(jù)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)篩選出進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的個(gè)體（確定一個(gè)人的健康狀況通常是非常重要的）。2.參考人群：由參考個(gè)體組成的群體。（參考人群的數(shù)量通常是未知的，因此它是一個(gè)假定的實(shí)體。參考人群也可以由一個(gè)人組成，例如為自身或其他人做參考。主題特異性參考個(gè)體在本指導(dǎo)文件中不包含在內(nèi)。）3.參考樣品組：選出適當(dāng)數(shù)量的個(gè)體以代表參考人群。4.參考值：經(jīng)過對(duì)一定數(shù)量參考個(gè)體的測量和觀查，所獲得的檢測結(jié)果。（對(duì)參考個(gè)體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，參考值源于參考樣品組）5.參考值分布：一組參考值的分布。6.參考樣本組的參考值分布：通過測定，并用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行處理。7.參考人群的參考值分布：評(píng)估參考樣本組的參考值分布，并用統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行處理。8.參考限：源自參考值的分布，用于描述部分參考值的位置（小于或等于、大于或等于、下限/上限。9.參考區(qū)間：參考值低限和高限之間。如：GLU：3.6～6.1mmol/L。有時(shí)只有參考值高限（X）有意義，其參考區(qū)間為：0～X)。10.觀測值：病人樣本的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果，與參考值、參考值分布、參考限、參考區(qū)間作比較。三、參考值（參考區(qū)間）評(píng)估的基本原則1.選擇參考個(gè)體1.1概要健康是一個(gè)缺乏統(tǒng)一定義的概念，因此，確定排除非健康的標(biāo)準(zhǔn)是選擇參考個(gè)體的第一步。每一項(xiàng)研究均有不同的健康標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)準(zhǔn)參考個(gè)體的健康狀態(tài)需經(jīng)過一系列檢查才能確定，這些檢查包括病歷檢查或現(xiàn)狀態(tài)生理指標(biāo)的臨床實(shí)驗(yàn)檢查。用于參考值研究的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)具有詳細(xì)的描述和證明，實(shí)驗(yàn)操作者根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)來判定參考樣品組的健康狀態(tài)，調(diào)查問卷可用于評(píng)價(jià)每個(gè)參考個(gè)體的健康狀態(tài)。1.2排除和分組排除標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了準(zhǔn)參考個(gè)體的非健康狀態(tài)，用于排除非健康參考樣本。表-1列出了基本的排除標(biāo)準(zhǔn)，此表并沒有囊括所有的排除標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)項(xiàng)目應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況細(xì)化排除標(biāo)準(zhǔn)。分組標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了組別特征。最常用的分組標(biāo)準(zhǔn)是年齡和性別。表-2還列出了其它的分組標(biāo)準(zhǔn)。各個(gè)項(xiàng)目可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。排除和分組的最佳方法是調(diào)查問卷的方式。調(diào)查問卷常只需要回答“是”或“否”即可確定，也可與體檢同時(shí)進(jìn)行。表-1排除標(biāo)準(zhǔn)飲酒疾?。ㄗ罱┇I(xiàn)血哺乳期血壓（異常）肥胖藥物濫用職業(yè)處方藥口服避孕藥自服藥懷孕環(huán)境因素手術(shù)（最近）空腹或不空腹吸煙遺傳因素輸血（最近）住院（最近或正在）維生素濫用表-2分組標(biāo)準(zhǔn)年齡采樣時(shí)的體位血型種族生理變異性別食物月經(jīng)周期種族背景孕期運(yùn)動(dòng)采樣時(shí)間禁食與非禁食吸煙地理位置1.3選擇參考個(gè)體：健康參考值的參考個(gè)體不要求是健康年青人，他們應(yīng)與疾病人群相似。許多情況下，年齡相關(guān)的參考區(qū)間更適用于臨床診斷。但有些情況下，與年齡相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)改變可能不代表健康狀況的變化，如老年人的總膽固醇或生長激素水平改變。除非特別需要（嬰兒、老年人），參考個(gè)體通常不應(yīng)是臨床病人。1.4抽樣調(diào)查問卷：為了保護(hù)參考個(gè)體的權(quán)益，應(yīng)確保問卷信息和檢測結(jié)果的保密性。調(diào)查問卷的內(nèi)容詳見圖-1。所有信息將嚴(yán)格保密，僅用于患者疾病診斷。項(xiàng)目ID#樣本ID#姓名：電話：地址：年齡：性別：民族：身高：體重：職業(yè)：醫(yī)師姓名：您認(rèn)為自己健康嗎？是否您進(jìn)行規(guī)律性的鍛煉嗎？如果是，練習(xí)時(shí)間（小時(shí)/星期）：練習(xí)強(qiáng)度：（輕）12345678910（重）最近曾經(jīng)生??？是否如果是，生病時(shí)間：疾病名稱：您正在服藥嗎？是否如果是，服用哪些藥品：您是否高血壓？是否您是否服用維他命營養(yǎng)品？是否如果是，服用哪些營養(yǎng)品：您在工作是否接觸危險(xiǎn)化學(xué)品？是否如果是，接觸哪些化學(xué)品：您是否吸煙？是否如果是，香煙種類：吸煙頻度：您是否有特殊飲食習(xí)慣？是否如果是，請(qǐng)描述：您是否飲酒？是否如果是，酒品種類：飲酒頻度：您是否正在接受醫(yī)生治療？是否如果是，原因：您近期是否曾經(jīng)住院治療？是否如果是，原因：地點(diǎn)：您是否有家族遺傳??？是否如果是，遺傳病描述：您近期是否服用阿司匹林或其他止痛藥？是否如果是，原因：時(shí)間：您近期是否服用抗酸藥或其他胃病藥？是否如果是，原因：時(shí)間：您近期是否服用減肥藥？是否女性調(diào)查者：是否月經(jīng)？是否如果是，上次月經(jīng)期的時(shí)間：如果否，是否接受荷爾蒙調(diào)節(jié)治療？是否是否在哺乳期？是否是否懷孕期？是否如果是，預(yù)產(chǎn)期時(shí)間：您近期是否使用口服或植入的避孕藥物？是否圖-1采樣調(diào)查問卷（接上表）2.分析前和分析中需考慮的因素2.1項(xiàng)目準(zhǔn)備：對(duì)所有的分析前條件，包括項(xiàng)目準(zhǔn)備、樣品收集和處理、分析方法、儀器，應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格限定，限定條件應(yīng)可同時(shí)應(yīng)用于參考個(gè)體和患者人群。一般情況下，分析前應(yīng)考慮兩個(gè)因素，即生物學(xué)因素和方法學(xué)因素。生物學(xué)因素包括代謝和血液動(dòng)力學(xué)，方法學(xué)因素包括樣品收集和處置等。見表-3和表-4表-3關(guān)鍵因素總結(jié)生物學(xué)因素方法學(xué)因素可變性和標(biāo)準(zhǔn)化來源代謝樣本收集特殊因素（采樣時(shí)的體位等）血液動(dòng)力學(xué)樣本轉(zhuǎn)移多重因素（見表-2）酶感應(yīng)樣本處置細(xì)胞破裂表-4需考慮的預(yù)分析因素項(xiàng)目準(zhǔn)備樣本收集樣本處置前期食物采樣時(shí)環(huán)境條件運(yùn)輸禁食與非禁食時(shí)間血液凝結(jié)停止用藥體位血清或血漿的分離攝取藥物樣本種類貯存按照生物節(jié)奏取樣采樣部位分析準(zhǔn)備物質(zhì)活性部位準(zhǔn)備采樣前休息的時(shí)間血流量緊張度設(shè)備/技術(shù)2.2樣本的種類、收集、處置和貯存實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有樣品收集、處置和貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作手冊。選擇適宜的采血管，采血管不能引入外源性干擾。確定樣本是否可在厭氧條件下貯存。不應(yīng)使用溶血、脂血、黃疸的血清或血漿樣本。2.2.1血樣如果選擇的樣本為血樣，應(yīng)確定需要的是動(dòng)脈血、靜脈血還是毛細(xì)血管血。樣本需要抗凝時(shí)，應(yīng)選擇抗凝劑，應(yīng)明確樣本的采集方法。2.2.2其它體液樣本其它的體液樣本包括尿液、腦脊液、胸膜積液、腹腔積液、心包積液、關(guān)節(jié)內(nèi)滑液、羊水和唾液等。應(yīng)注意體液收集的時(shí)間段。2.2.3溫度應(yīng)明確樣本收集和貯存的溫度。通常情況下，樣本在采集后，應(yīng)盡快進(jìn)行處置和檢測，盡量減少放置時(shí)間。2.3分析方法特征實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所用檢測方法進(jìn)行細(xì)致的描述和規(guī)定，應(yīng)建立不精密度、不準(zhǔn)確性、最小檢測限、線性、回收率、干擾特征的評(píng)價(jià)準(zhǔn)則。四、參考值（參考區(qū)間）評(píng)估的方法和結(jié)果報(bào)告1.新的分析物質(zhì)或分析方法1.1方法描述此方法適用于新分析物、新分析方法及以前的分析物參考值的建立。健康人群某分析物質(zhì)參考值的產(chǎn)生和參考區(qū)間的估計(jì)，應(yīng)根據(jù)一個(gè)詳細(xì)限定條件的方法進(jìn)行，這些條件限定包括以下幾點(diǎn)。（1）根據(jù)醫(yī)學(xué)科技文獻(xiàn)，建立適宜的生物變異和分析干擾的項(xiàng)目列表。（2）建立選擇、排除及分組標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)適宜的調(diào)查問卷，以揭示潛在參考個(gè)體的標(biāo)準(zhǔn)。（3）參加參考區(qū)間實(shí)驗(yàn)的參考個(gè)體應(yīng)簽署書面同意協(xié)議，并完成調(diào)查問卷。（4）按照問卷結(jié)果及其它適宜的健康分析結(jié)