p21p27基因多態(tài)性對食管癌的發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響　

1/1p21，p27基因多態(tài)性對食管癌的發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響p21，p27基因多態(tài)性對食管癌的發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響p21，p27基因多態(tài)性對食管癌的發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響作者：

馬玉泉楊曉光劉暉李保慶劉俊峰【摘要】目的：

探討p21基因外顯子3非翻譯區(qū)（UTR)第20堿基對的核苷酸多態(tài)性(SNPs)以及p27基因第109密碼子的SNP對食管鱗狀細胞癌(ESCC)發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響.方法：

采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）?片段長度分析和PCR?限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）方法檢測p21基因外顯子的3UTR第20堿基對址棵SNP以及p27基因址第棵109密碼子SNP址位點棵的基因型.結(jié)果：

址p21棵和p27的基因址型分布在棵ESCC組及址對照組中均棵符合Har址dy?Wei棵nber址g平衡（P）棵，在E址SCC組和對照組棵中，址ESCC患者p21棵基址因3UTR和p27棵址基因第109密碼子的多棵址態(tài)性基因型和等位基因型址棵分布與對照組無統(tǒng)計學(xué)漁差棵異.吸煙狀況分層分漁析發(fā)棵現(xiàn)，吸煙患者p2漁1的T棵T基因型頻率（漁%）顯著棵高于健康吸煙漁組（%）（棵2=，P漁=）.與CC棵基因型相漁比，攜帶TT基棵因型可漁顯著增加吸煙者的棵ES漁CC發(fā)病風(fēng)險.經(jīng)性棵別漁和年齡校正的比值比（棵漁OR）及其95%的可信棵漁區(qū)間（CI）分別為（9漁咀5%，CI=～），而漁在咀非吸煙的患者和健康漁個體咀中，p21基因型漁及等位咀基因型頻率差異漁均無統(tǒng)計咀學(xué)意義；p2漁7基因型及咀等位基因型漁頻率在吸煙及咀非吸煙患漁者和健康個體中咀差異均漁無統(tǒng)計學(xué)意義.有咀無淋唁巴結(jié)轉(zhuǎn)移分層分析結(jié)介果唁表明，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組介唁的p21的TT基因型頻介唁率（%）顯著高于無淋巴唁介結(jié)轉(zhuǎn)移組（%）（2唁=介，P=）.與常見單唁體型介C/C相比，攜帶唁TT基介因型與TT+T陣/C基因介型可明顯增加陣ESCC患介者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)陣移的風(fēng)險，其介性別、年陣齡校正的OR值介及其9陣5%的CI分別為介（9陣5%，CI=～）和介（陣95%，CI=～），介陣而p27基因多態(tài)性在有介嗅淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)嗅介轉(zhuǎn)移組之間差異無統(tǒng)計嗅學(xué)介意義，p27基因多嗅態(tài)性介與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)嗅險性無介關(guān).結(jié)論:p2嗅1基因3介UTR和p嗅27基因第介109密碼嗅子的多態(tài)性基頒因型和等嗅位基因型不單獨頒影響E嗅SCC的發(fā)生和發(fā)頒展；嗅p213UTR的頒T嗅T等位基因可能增加吸頒嗅煙人群ESCC易感性，頒嗅并可能增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的嗅頒風(fēng)險性.【關(guān)鍵嗅詞】頒食管鱗狀細胞癌；嗅p21頒基因；p27基嗅因；多態(tài)頒性；易感性；嗅淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移頒0引言嗅p21和p2頒7基因墟是近年來發(fā)現(xiàn)的細頒胞周漳期蛋白依賴性激酶抑頒制漳劑（cyclin?d頒漳ependentkin頒漳aseinhibito漳頒rs,CDKI）家族漳中頒的重要成員［1］，漳其多頒態(tài)性與一些惡性腫漳瘤如肺頒癌、乳腺癌、子漳宮內(nèi)膜癌頒、前列腺癌的漳易感性有關(guān)頒［2-4］漳，但其與食管頒癌易感性漳的相關(guān)研究在還頒鮮見報漳道.我們采用基于頒醫(yī)院漳病例?對照研究方法頒，漳觀察p21，p27基頒漳因型與食管癌發(fā)病及淋巴頒漳結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以探討p漳頒21基因外顯子3非漳翻頒譯區(qū)（untran漳sl頒atedregi漳on,頒UTR）第20音堿基對的頒核苷酸多態(tài)性音(sing頒lenuc音leolid匪epol音ymorphi匪sms音,SNPs)以及匪p2音7基因第109密碼匪子音的SNP對食管鱗狀細匪音胞癌(esophage匪音alsquamousc音匪ellcarcino音m匪a，ESCC)發(fā)生音及淋匪巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響.音1對象匪和方法音對象選擇20匪17/2音017河北醫(yī)科匪大學(xué)第音四醫(yī)院行胃鏡檢查匪或住音院手術(shù)治療的ESC匪C音患者202例作為病例匪音組，其中185例有相關(guān)匪音淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.選擇同期在憶匪河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院憶行匪健康查體人員及河北憶省血匪站的無腫瘤及遺傳憶病史健匪康獻血者265憶例，作為匪對照組.以上憶人員來自石匪家莊市或相憶鄰市、縣，均匪為漢族，憶無血緣關(guān)系.信匪息由2憶名專業(yè)人員詢問并匪記錄憶.病例組患者的年齡匪、憶性別、吸煙狀態(tài)、家族匪憶史、病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)匪憶移情況來自住院病歷.以憶匪往或目前日吸煙5支以憶上匪并持續(xù)2a以上者被憶定義匪為吸煙個體；家族憶中有1匪名以上一級親屬憶和/或2匪名以上二級親憶屬患者屬患二食管癌、賁憶門癌或胃癌者二被定義為憶上消化道腫瘤（二upp延ergastro二in延tes?tinal二c延ancers,UGI二延C）家族史陽性.方延二法抽取外周靜脈血5m延L二，經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝，延于4二℃冰箱保存，并于延采血后二1wk內(nèi)提取外延周血白細二胞DNA.p延21，p2二7基因型檢延測采用聚合酶二鏈反應(yīng)（延PCR）?片斷二長度分延析和PCR?限制二性片延段長度多態(tài)性（re二s延trictionfr二延agmentlengt二然hpolymorphi妹二smanalysis妹,二RFLP）PCR?妹RF二LP方法進行.p妹21S二NP擴增引物5妹?GA二ATTTGC妹CGTTG二GGTCA妹AG?3（二上游引物妹）和5?AG二GAG妹AACACGGG二AT妹GAGGAG?3二（妹下游引物）.3UT二妹R發(fā)生一個CT的替代二妹，從而產(chǎn)生一個PstⅠ妹鼓限制性酶切位點，T等妹位鼓基因存在該識別位點妹.p鼓27SNP擴增引妹物為5鼓?TGCAG妹ACCC鼓GGGAGA妹AAG?3鼓（上游引妹物）和5?鼓CCGC妹TAACCCC鼓GTC騙TGG?3（下鼓游引騙物），第109密碼膽子騙發(fā)生一個TG的替代膽騙，從而產(chǎn)生一個BlgⅠ膽騙限制性酶切位點，G等位騙膽基因存在該識別位點.騙P膽CR反應(yīng)體系均為2騙5膽L，其中模板DN騙A10膽0ng，10騙PCR緩膽沖液L，T騙aq?DN膽A聚合酶（騙北京博大泰克膽生物基因騙技術(shù)有限責(zé)任公膽司）U騙，MgCl2mm膽ol騙/L，dNTPsm膽m騙ol/L，上、下游引膽騙物各mol/L.p2膽騙1PCR反應(yīng)條件為：

9騙膽4℃預(yù)變性5min，騙9膽4℃30s，℃30騙s，膽72℃60s，共黎35個膽循環(huán)后，72℃黎延伸5m膽in.p27黎PCR反應(yīng)膽條件為：

9黎4℃預(yù)變性5膽min，黎94℃30s，膽58℃黎30s，72℃6膽0s黎，共35個循環(huán)后，膽7黎2℃延伸5min.取膽黎8LPCR產(chǎn)物進行限膽黎制性內(nèi)切酶消化，經(jīng)30黎膽g/L瓊脂糖凝膠電泳黎分膽析基因型.對p21黎，p膽27基因的PCR黎產(chǎn)物，膽分別經(jīng)限制性內(nèi)黎切酶Ps膽tI和Blg黎I37℃過膽夜消化.每黎一批PCR反膽應(yīng)均以蒸黎餾水替代DNA膽作為陰黎性對照.100g膽/L黎DNA標(biāo)本進行二次喘分黎型以證實分型方法的可喘楞靠性.統(tǒng)計學(xué)處理：

楞喘采用軟件包進行統(tǒng)計分楞析喘，基因型頻率觀察值楞和預(yù)喘期值采用Hard楞y?W喘einberg楞平衡檢驗喘，病例組與對楞照組的基因喘型和等位基升因型分布比較喘均采用升2檢驗.以非條喘件Lo升gistic回歸喘法計升算經(jīng)性別和年齡校正喘的升比值比（oddsra喘升tio，OR）及其95喘升%的可信區(qū)間（conf升喘idenceinte升r喘val，CI）.P升，表喘1）.吸煙狀況分升層分析喘結(jié)果發(fā)現(xiàn)，p2升1的T/喘T基因型頻率升ESCC吸喘煙組（%）升顯著高于健康喘吸煙組（期%）（2=，喘P=)期.經(jīng)性別和年齡校喘正的期OR值及其95%的喘C期I為（95%，CI=喘期～），而在非吸煙的患者喘期和健康個體中，p21基期喘因型及等位基因型頻率期差喘異均無統(tǒng)計學(xué)意義.期p2喘7等位基因型及基期因型S喘NPs分布在E期SCC組喘和對照組之間期均無統(tǒng)計學(xué)喘差異.吸煙期狀況分層分析喘p27等期位基因型及基因喘型SN期Ps分布在ESC喘C組期和對照組之間均無統(tǒng)喘計期學(xué)差異（表2）.繪期，p27基因SNPs分期繪布與ESCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)期移繪的關(guān)系有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移期組p繪21的T/T基因曉型頻率繪（%）顯著高于曉無淋巴結(jié)繪轉(zhuǎn)移組（%）曉（2=，繪P=）.經(jīng)曉性別、年齡校繪正的OR曉值及其95%的繪CI為曉（95%,CI=繪～）曉.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況分繪層曉分析結(jié)果顯示,p27繪曉等位基因型及基因型SN繪曉Ps分布在ESCC組與曉繪對照組之間差異均無統(tǒng)曉計繪學(xué)意義（表3）.表曉1p繪21，p27基因曉SNP繪s分布表2p2曉1，p2繪7基因SNP曉s分布與吸繪煙的分層分曉析表3p21繪，p27曉基因SNPs與繪淋巴結(jié)曉轉(zhuǎn)移的關(guān)系3討論繪曉p21和p27基因繪曉能誘導(dǎo)細胞周期阻滯，被繪順認為是腫瘤抑制基因，其順繪多態(tài)性及蛋白表達與多順種繪腫瘤的易感性及預(yù)后順有關(guān)繪［5-6］.本研順究結(jié)果繪顯示，病例總體順分析并未繪發(fā)現(xiàn)p21基順因3UT繪R第20堿順基對的多態(tài)性繪與ESC順C的易感性相關(guān)繪.然而順，對吸煙狀況的分繪層分順析發(fā)現(xiàn)，與CC基因繪型順相比，攜帶TT基因型繪順可使吸煙人群ESCC的繪順發(fā)病風(fēng)險增加3倍.而在順賭非吸煙的患者和健康個溜體賭中，p21的基因型溜及等賭位基因型頻率均無溜統(tǒng)計學(xué)賭差異，這說明T溜T基因型賭可增加吸煙者溜患ESCC賭的風(fēng)險，表溜明TT基因型睹的過量表溜達可能與吸煙所姑誘導(dǎo)的溜代謝改變相互作用姑，從溜而影響ESCC的易姑感停性.周圍浸潤和淋姑停巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響UGIC停姑患者預(yù)后和生存率的重停要姑因素.因此，找到分停子生姑物學(xué)指標(biāo)來預(yù)測腫停瘤浸潤姑和轉(zhuǎn)移，從而制停定個體化姑的治療方案具停有重要價值姑.通過對E停SCC患者淋姑巴結(jié)轉(zhuǎn)移停情況分層后發(fā)現(xiàn)姑與CC?；蛐拖啾龋瑪y帶姑TT?；蛐涂墒笶SCC姑患停者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險性姑停增高3倍，攜帶TT+T姑停/C基因型可使ESCC停姑患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險停性姑增高近2倍，這表明停攜帶姑TT或TT+T/停C基因姑型的ESCC患停者更容易姑發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)停移，提示攜姑帶該基因型維的ESCC患姑者在臨床維治療時應(yīng)盡可能姑進行淋維巴結(jié)清掃，并進行姑相應(yīng)維的術(shù)后綜合治療，以姑減維少淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶的殘姑維留.綜上所述，p2維姑7基因V109G多態(tài)維性姑與食管癌的易感性無維相關(guān)姑關(guān)系，經(jīng)吸煙狀況維、淋巴姑結(jié)轉(zhuǎn)移分層分析維也未顯示姑出差異具有統(tǒng)維計學(xué)意義.姑p27基因維在腫瘤細胞中姑很少有突維變和甲基化［7姑］，且維其功能的改變是轉(zhuǎn)表錄后維調(diào)節(jié)，因此對于其基表因維多態(tài)性與腫瘤易感性的表維相關(guān)性研究的價值可能會表維減少.【參考文獻】恃表［1］GomesC恃C,表Drummond恃SN,表Guimara恃esAL表,etal.恃p21/W表AF1an恃dcycli表nD1v恃ariants表and恃oralsqua表mo恃uscellcar表c恃inoma［J］.J表恃OralPatholM表恃ed，2017,37(恃表3):151-156恃.表［2］IzawaH恃,Y表amamotoH恃,Da表mdinsur恃enB,表etal.E恃ffect表sofp2恃1cip1/表waf1恃overexp表res恃sionongr表ow替th,apopto表s題isanddiffe表題rentiationi表題nhumancolon題表carcinomac題e表lls［J］.In題tJ表Oncol，20題17,表27(1):6題9-76表.［3題］LiG,S表turg題isEM,Wa表ngL題E,etal.A表ss題ociationb彼e題tweentheV1鎬題09Gpolymorp鎬題hismofthep2題鎬7geneandth題e鎬riskandpr題og鎬ressiono題for鎬alsquam亮ousc鎬ellcar亮cinom鎬a［J］.亮ClinCa鎬ncer亮Res，201鎬7,1亮0(12):39鎬96亮-4002.［鎬亮4］KibelAS,S鎬亮uarezBK,Bel亮鎬aniJ,etal.亮C鎬DKN1AandC