PD-L1在非肌層浸潤性膀胱癌的表達(dá)及其對術(shù)后膀胱灌注治療的影響分析

1/1PD-L1在非肌層浸潤性膀胱癌的表達(dá)及其對術(shù)后膀胱灌注治療的影響分析PD-L1在非肌層浸潤性膀胱癌的表達(dá)及其對術(shù)后膀胱灌注治療的影響分析四川省郫縣人民醫(yī)院外四科611730摘要：

目的探討程序性死亡配體1（Programmeddeathligand1，PD-L1）在非肌層浸潤性膀胱癌組織中的表達(dá)情況及對術(shù)后采用膀胱灌注治療效果的影響作用。

方法選取本院泌尿外科收治的60例術(shù)后病理檢查確診為非肌層浸潤性膀胱癌患者的病理組織標(biāo)本（膀胱癌組），病理科既往病理檢查收集的20例正常膀胱組織標(biāo)本（正常組），分析PD-L1表達(dá)與患者的病理臨床特征的關(guān)系及對患者灌注治療預(yù)后效果的影響作用。

結(jié)果PD-L1在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率（60.00%）顯著高于正常組（0%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。

PD-L1在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率患者腫瘤病理分期關(guān)系密切（Plt;0.05）。

PD-L1陽性表達(dá)的膀胱癌患者的3年無瘤生存率（75%）顯著低于PD-L1陰性表達(dá)的膀胱癌患者的3年無瘤生存率（95.83%）（Plt;0.05）。

PD-L1陽性表達(dá)的膀胱癌患者的3年生存率（86.11%）低于PD-L1陰性表達(dá)的膀胱癌患者的3年生存率（95.83%），但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。

結(jié)論P(yáng)D-L1在非肌層浸潤性膀胱癌組織中呈高表達(dá)，并且與患者的腫瘤病理分期具有一定的關(guān)系，PD-L1陰性表達(dá)患者3年無瘤生存率高于陽性患者。

關(guān)鍵詞：

程序性死亡配體-1；非肌層浸潤膀胱癌；膀胱；灌注治療；預(yù)后TheexpressionofPD-L1innonmuscleinvasivebladdercanceranditseffectonpostoperativebladderperfusionChenLiangWuBoChenGuo（ThefourfamiliesofthePixianpeople’sHospitalofSichuanProvince，611730）【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionof-1（PD-L1）innonmuscleinvasivebladdercancertissuesanditseffectonbladderperfusion.MethodsSelectedthehospitalof60casesofpostoperativepathologicalexaminationconfirmedthediagnosisofnonmuscleinvasivebladdercancertissue（bladdercancergroup），DepartmentofPathology；previouspathologicalexaminationcollected20casesofnormalbladdertissuespecimens（normalgroup），ToanalyzetherelationshipbetweenPD-L1expressionandpatientage，sexandthepathologicclinicalfeaturesandinfluenceofperfusioninpatientswiththeeffectofthetreatmentofprognosis.ResultsPD-L1expressionrate（60.00%）inbladdercancertissueswassignificantlyhigherthannormalgroup（0%）andthedifferencewasstatisticallysignificant（Plt;0.05）.PD-L1expressioninpatientswithbladdercarcinomatumorstagingcloselyrelated（Plt;0.05）.3-yeardisease-freesurvivalofpatientswithbladdercancer，thepositiveexpressionofPD-L1（75%）wassignificantlylowerthanthenegativeexpressionofPD-L1bladdercancer3-yearsurvivalrate（95.83%）（Plt;0.05）.PD-L13-yearsurvivalrate（86.11%）patientswithbladdercancerthanthosewithnegativeexpressionofPD-L1expressioninpatientswithbladdercancer3-yearsurvivalrate（95.83%），butthedifferencewasnotstatisticallysignificant（Pgt;0.05）.ConclusionPD-L1innonmuscleinvasivebladdercancertissuesshowedhighexpression，andwithpatients’tumorpathologystagingwithacertainrelationship，PD-L1negativeexpressioninpatientswith3yearsdisease-freesurvivalrateishigherthanthepositivepatients.【Keywords】Programmeddeathligand-1；nonmuscleinvasivebladdercancer；bladderperfusiontherapy在臨床中，非肌層浸潤性膀胱癌（non-muscleinvasivebladdercancer，NMIBC）約占到整個初發(fā)膀胱腫瘤的3/4～4/5[1]。

目前治療該腫瘤的常規(guī)方式為經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)（transurethralresectionofbladdertumor，TURBT），但其對于中危及高危NMIBC患者治療效果欠佳，且約70％中、高?；颊咝蠺URBT術(shù)后約半年到一年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)率較高[2]，部分患者甚至復(fù)發(fā)后進(jìn)階到更高分期，故應(yīng)對中危以上NMIBC患者采取術(shù)后輔助性膀胱灌注治療，但研究顯示選擇合適的灌注藥物能夠顯著影響腫瘤復(fù)發(fā)和進(jìn)展，并和腫瘤免疫逃逸機(jī)制具有一定相關(guān)性。

程序性死亡配體-1（PD-L1）作為共刺激分子B7家族成員之一，其主要在T及B淋巴細(xì)胞內(nèi)，并和受體PD-1相互結(jié)合加快細(xì)胞凋亡速度[3]，同時可抑制腫瘤細(xì)胞宿主的免疫功能，能夠顯著影響腫瘤免疫逃逸機(jī)制。

但目前關(guān)于其和NMIBC復(fù)發(fā)、進(jìn)展和對灌注藥物選擇間關(guān)系的研究仍處于起步階段[4]。

本文研究性分析我院泌尿外科收治的60例術(shù)后病理檢查確診為NMIBC患者的病理組織標(biāo)本，旨在探討PD-L1在膀胱癌組織中的表達(dá)情況及對術(shù)后采用膀胱灌注治療效果的影響，結(jié)果報告如下。

1資料與方法1.1一般資料選取本院泌尿外科收治的60例術(shù)后病理檢查確診為非肌層浸潤性膀胱癌患者的病理組織標(biāo)本（膀胱癌組），和病理科既往病理檢查收集的20例正常膀胱組織標(biāo)本（正常組）。

膀胱癌組60例患者，年齡39～72歲，平均年齡（56.94plusmn;8.12）歲，其中男性39例、女性21例，腫瘤病理分期：

pTa33例，pT127例。

pTis為膀胱原位癌，分化差，屬于高度惡性腫瘤，不納入本研究。

病理學(xué)分級：

G1級14例、G2級33例、G3級13例。

正常組20例。

研究對象，年齡33～70歲，平均年齡（53.94plusmn;9.18）歲，其中男性13例、女性7例。

兩組研究對象的年齡、性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：

①膀胱癌組患者均為本院首診患者，均實(shí)施經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)治療[5]；②術(shù)后采集患者標(biāo)本進(jìn)行病理檢查明確診斷為非肌層浸潤性膀胱癌[5]；③在本院實(shí)施手術(shù)治療前未接受放化療等治療措施；④術(shù)后接受膀胱灌注治療及隨訪觀察。

排除標(biāo)準(zhǔn)：

①合并其他部位惡性腫瘤的患者；②術(shù)前接受放療或化療等其他治療措施的患者；③病歷資料不完整、術(shù)后未接受灌注治療及隨訪的患者。

1.2免疫組織化學(xué)染色法（PV-6000）全部標(biāo)本用40g/L多聚甲醛溶液進(jìn)行固定，用石蠟包埋并連續(xù)切片，切片厚度約4mu;m。

后采取PV－6000兩步免疫組化法染色，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，通用型二步法檢測試劑盒（PV-6000）購自北京欣興唐生物科技有限公司，后加入不同一抗孵育30min后，后加入PV－6000工作液，并用辣根過氧化物酶（DAB）染色、蘇木精復(fù)染、脫水、透明，最后用中性樹膠封片。

1.3免疫組化結(jié)果判定PD-L1免疫組織化學(xué)法的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，PD-L1免疫組化染色陽性表達(dá)為黃色、棕黃色，主要著色部位為細(xì)胞膜或者細(xì)胞質(zhì)；選擇染色良好的病理切片在400倍光鏡下觀察，每個高倍鏡視野計數(shù)100個細(xì)胞，按照著色強(qiáng)度進(jìn)行分級，無色：

0分；淡黃色：

1分；棕黃色：

2分，褐色：

3分；顯微鏡下染色陽性細(xì)胞計數(shù)：

1%～25%：

1分；26%～75%：

2分；gt;75%：

3分；兩個得分項(xiàng)目相乘為最終評分，為總分≦3分，陰性表達(dá)（-）；gt;3分，陽性表達(dá)（+）。

1.4灌注治療方法全部患者術(shù)后即可采取表柔比星灌注化療，灌注方案為1+18；即術(shù)后即刻灌注一次，之后每一周灌注一次共四周，此后每個月灌注一次共14次，若患者手術(shù)創(chuàng)面較大或合并嚴(yán)重血尿，可推后至四天以后。

灌注液選擇50mg艾達(dá)生（國藥準(zhǔn)字H19990280，海正輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)），加50mL注射用水，灌注方案見上述灌注方法。

1.5隨訪觀察記錄每次灌注后患者全身及局部情況，每三個月復(fù)查膀胱鏡，明確有無腫瘤復(fù)發(fā)。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計在專業(yè)軟件SPSS19.0軟件包中處理，計量指標(biāo)采用均數(shù)plusmn;標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用檢驗(yàn)。

Plt;0.05表示兩組指標(biāo)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1PD-L1的表達(dá)情況分析PD-L1在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率（60.00%）顯著高于正常組（0%）且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（plt;0.05），見表1。

圖1為正常膀胱組織免疫組化染色圖，未見PD-L1陽性著色顆粒；圖2為膀胱癌組織免疫組化染色圖，可見PD-L1陽性表達(dá)，細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)可見棕黃色著色。

表1PD-L1在膀胱癌組織中的表達(dá)情況分析[n（%）]圖1正常膀胱組織中未見PD-L1表達(dá)（times;400）圖2膀胱癌組織中PD-L1表達(dá)陽性（times;400）2.2PD-L1的表達(dá)與膀胱癌患者的臨床病理特征的關(guān)系PD-L1在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率與患者的年齡、性別、腫瘤分級、腫瘤大小關(guān)系不具有統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），PD-L1在膀胱癌組織中的表達(dá)與患者腫瘤病理分期關(guān)系密切（Plt;0.05）。

見表2。

表2PD-L1的表達(dá)與膀胱癌患者的臨床病理特征的關(guān)系3.討論目前，在泌尿系統(tǒng)腫瘤中，膀胱癌的發(fā)病率逐年升高，已逐漸成為一種高發(fā)性惡性腫瘤。

在初診膀胱癌中，非肌層浸潤性膀胱癌所占比例最高，可達(dá)到70%以上，其常規(guī)的首選治療方式為經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)（transurethralresectionofbladdertumor，TURBT）。

但約70%的中、高危NMIBC患者在行TURBT后1~2年內(nèi)，仍出現(xiàn)較高的復(fù)發(fā)率，且約1/4的復(fù)發(fā)患者可進(jìn)一步惡化為更嚴(yán)重的膀胱腫瘤。

研究顯示，行TURBT術(shù)治療后，若中、高危NMIBC患者接受輔助性膀胱灌注治療，其術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率可降低50%[6-7]，輔助性膀胱灌注治療主要分膀胱灌注化療和免疫治療，其中膀胱灌注化療常用藥物有絲裂霉素、表柔比星等，膀胱灌注免疫治療常用藥物有卡介苗（BCG）。

理想的膀胱灌注藥物應(yīng)具有能達(dá)到膀胱上皮內(nèi)高藥物濃度，腫瘤細(xì)胞敏感性高，全身吸收量少、不良毒副作用小等特點(diǎn)。

本文患者術(shù)后灌注表柔比星，可抑制DNA和RNA的合成，具有抗腫瘤的作用，作為膀胱灌注藥物可有效預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和進(jìn)展。

PD-L1作為一種從cDNA中發(fā)現(xiàn)的跨膜蛋白因子，其位于染色體基因片段9P24.2上，其結(jié)構(gòu)包含290個氨基，屬于PD-1配體之一[8]。

研究顯示，PD-L1可在諸如心肌內(nèi)皮細(xì)胞、肝肺組織細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞及胎盤滋養(yǎng)層等組織或器官內(nèi)表達(dá)，且在激活B細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)也有廣泛分布[9]。

文獻(xiàn)報道，PD-L1能夠和不同受體進(jìn)行結(jié)合、作用，增強(qiáng)T細(xì)胞活性，加快其增殖速度[10]，使T細(xì)胞充分發(fā)揮正向和負(fù)向調(diào)控作用，且實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明約2/3調(diào)控作用為負(fù)性調(diào)節(jié)。

諸多研究顯示，PD-L1在許多人類腫瘤組織中均可檢測到，如乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌及胸腺組織腫瘤等腫瘤細(xì)胞漿內(nèi)及細(xì)胞膜內(nèi)濃度水平均明顯高于正常機(jī)體細(xì)胞[11]，且相比之下，癌旁組織內(nèi)的PD-L1濃度水平較低。

研究者通過對癌組織進(jìn)行人工誘導(dǎo)后，腫瘤細(xì)胞內(nèi)的PD-L1表達(dá)水平呈現(xiàn)上升趨勢[12]，并刺激腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗原特異性CTL含量減少，研究者推斷出現(xiàn)此類情況的原因可能和腫瘤組織對免疫答應(yīng)的保護(hù)性逃逸機(jī)制有關(guān)。

但目前關(guān)于NMIBC腫瘤組織內(nèi)PD-L1表達(dá)水平的研究較為少見。

在本研究中，我們經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NMIBC腫瘤組織中的PD-L1陽性表達(dá)率顯著高于正常組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。

結(jié)果顯示NMIBC和其他腫瘤一樣，其腫瘤細(xì)胞內(nèi)的PD-L1表達(dá)也明顯高于正常組織水平。

同時在研究中，我們還發(fā)現(xiàn)PD-L1在膀胱癌組織中的表達(dá)與患者腫瘤病理分期關(guān)系密切（Plt;0.05）。

同時，我們通過對出院后NMIBC患者進(jìn)行隨訪發(fā)現(xiàn)，PD-L1在膀胱癌組織中陽性表達(dá)患者的3年無瘤及有瘤生存率均低于PD-L1陰性表達(dá)的膀胱癌患者，從而進(jìn)一步證實(shí)PD-L1和NMIBC發(fā)生及發(fā)展具有密切的相關(guān)性。

綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)PD-L1在NMIBC腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，PD-L1有可能會成為一個判斷腫瘤患者預(yù)后的新指標(biāo)，臨床上通過對PD-L1的檢測，對于具有高風(fēng)險、疾病預(yù)后較差的病人，可以盡早采取有效的預(yù)防、治療措施。

故我們需對PD-L1陽性表達(dá)患者出院后的病情進(jìn)行更為細(xì)致的追蹤隨訪，有效預(yù)防其疾病復(fù)發(fā)。

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