肺癌基因檢測【共79張課件】

肺癌分子靶向標志基因檢測2010ASCO:肺癌生物標志BestofASCOChina

吳一龍：關鍵是生物標志篩選患者

二線晚期NSCLC

：

BR.21研究：厄羅替尼有效率僅8.9%,篩選mEGFR

后，OS,疾病控制率高達89.8%（Rosell）

INTEREST研究：吉非替尼有效率僅9.7%，PFS僅

2個月，OS僅7個月。

IPASS研究：生物標志篩選mEGFR，吉非替尼治療

RR，PFS,OS均顯著改善NSCLCEGFR-TKI:

未選治療：RR30%左右臨床指標選擇(皮疹，優(yōu)勢人群)：RR50%左右生物指標選擇（EGFR）：RR70-80%左右（K-RAS,T790M）：89-95%左右吳一龍中國醫(yī)學論壇報B疊NSCLCEGFR-TKI研究方案選擇mEGFR治療，遠優(yōu)于化療

IPASSSLCGNEJGSGgefit:pacli+carbo(PFSHR0.357,P<0.001)WJTOG

————————

不選mEGFR治療，療效劣于安慰劑

BR.19SWOGS0023EGFR-TKI療效雙刃劍IPASS研究:mEGFR吉非替尼治療，優(yōu)于化療

wEGFR吉非替尼治療，劣于化療

“我們不能對患者不加選擇用TKI實驗治療無效再換”---吳一龍，中國醫(yī)學論壇報B疊2010722

TKI抑制劑和EGFR近年相關研究

EGFR突變（2010.3上海會議）EGFR基因-1906點突變,18缺失30外顯子,TKI區(qū)(17-32)66點突變,13種缺失,新突變---直接測序,重復性好,敏感性10%,特異性99%18-21顯子,已知29種突變和缺失---ARMS,多重PCR?18-21外顯子,已知11種突變和缺失--PYSEQN,23bp?18-21外顯子,已知多種突變,缺失---DHLPC,內(nèi)參對照?其他,敏感性好,特異性差,重復性差SATURN研究1.特羅凱顯著延長總人群和亞裔人群

PFS（HRO0.71,0.57),TTP,RS降低：MEGFR90%，WEGFR22%，

PFS改善：SD(HR0.68),RR(HR0.74)OS20.8mRS降低：全組19%，亞裔33%2.除EGFR突變外，IHC,FISH,(CA)n，K-ras

預測意義（-）2009ESMO,ECCO易瑞沙

mEGFR改善PFS優(yōu)于化療，無種族，無病理差異

wEGFRPT化療，加大死亡風險（HR=2.8）

wEGFRPFS低于化療，中位OS6.4mIPASS,INTEREST2009mEGFRRR易瑞沙37.5%，特羅凱30.0%wEGFRRR易瑞沙2.6%，特羅凱7.5%總體：OS特羅凱6.7mo，安慰劑4.7moISEL（NSCLCIIIB/IV）

OS：易瑞沙5.6mo，安慰劑5.1moBR.21研究2005Paz～Ares匯總分析mEGFRPFS：特羅凱（365）13.2mo，易瑞沙（1065）9.8mo

化療（375）5.9momEGFR基因突變是NSCLC預測唯一獨立因素注：50%患者在4-6m出現(xiàn)M617耐藥突變，易瑞沙試驗用藥時間明顯長于特羅凱和化療Paz～Ares匯總分析NSCLCII/III線聯(lián)合治療：

EGFR-TKI無論w/m型均有一定獲益I線治療EGFR-TKI金標準：mEGFR外周血mEGFR檢測率較低：RADIANT↑

注：本院2005年測序血液20例突變均（-）

2005-2010測序腫瘤379例突變率32%mEGFR挑戰(zhàn)：腫瘤標本獲取，富集，部位，方法，途徑，質(zhì)量。Shepherd研究NSCLC復治，無突變研究死亡風險比：厄羅替尼與培美曲塞2010NCCNv.2(MS6)：EGFR方法：突變，拷貝量，表達水平mEGFR10-15%，Caucasian，30-40%Asian預后：Tsao:隨機對照，二線易瑞沙和安慰劑40/177(%),20(50%)E19del或L858R

化療+易瑞沙：OS突變組>20月野生組10月預測：初期，突變者對易瑞沙的反應近90%

細支氣管肺癌ORR:80%,中位PFS13月北美NSCLCORR:55%,中位PFS9.2月化療+特羅凱：最近，突變者對特羅凱的反應EGFR共識—吳一龍mEGFR是吉非替尼和厄羅替尼療效預測因子，推薦對初治晚期患者檢測后決定治療策略早期和局部晚期患者不確定mEGFR作為療效預測因子推薦以直接測序法作為mEGFR常規(guī)方法直接測序法檢測mEGFR效能優(yōu)于EGFR基因拷貝數(shù)，EGFR基因表（免疫組化）不能作為療效預測因子中國醫(yī)學論壇報B疊2010.7.22

EGFR分子分期循證醫(yī)學的個體化分期時代

EGFR突變類型與治療分期

TKI治療敏感期（初治期）腫瘤細胞主要突變：

19exon各種突變（66種）

21exonL858L突變

TKI治療耐藥期（IV期）

CTC細胞主要突變：20exonT790M

JCO2007：對III-IV期PS3-4，吉非替尼治療

EGFR19,21突變，無T790M者中位OS16月未篩選含T790M者中位OS9.8月K-ras基因-NSCLC：預后與預測K-ras突變，生存預后差K-ras突變，CIS+長春瑞濱輔助化療不獲益預測因子K-ras突變，TKI類靶向治療不敏感預測因子（META:mK-ras，RR3%wK-ras，26%）尚存爭議2010NCCNV.2個體性化療標志物ERCC1:1.IALT隨機對照研究：高表達鉑類耐藥預測因子NEJM2006

低表達鉑類化療獲益預測因子RR53%2.早期NSCLC復發(fā)低風險預后因子

ERCC1+RRM1

同時高表達復發(fā)低風險預后因子NEJM2007

共識：qPCRmRNA高表達鉑類耐藥認可，不足以在治療方案中推薦2010NCCNV.2個體性化療標志物RRM1:qPCRmRNA表達是吉西他濱耐藥預測因子局部晚期NSCLC吉西他濱+順鉑化療腫瘤緩解與RRM1表達水平呈負相關認可，尚不足以推薦臨床常規(guī)應用2010NCCNV.2個體性化療標志物TS:肺腺癌TSqPCRmRNA表達水平較低，培美曲塞/伊羅澤療效預測好肺鱗癌，肺小細胞癌的TSqPCRmRNA表達水平較高培美曲塞/伊羅澤療效預測差TSqPCRmRNA表達對抗微管類藥物預測高表達是敏感性預測因子。但不足以臨床推薦EGFR(w)+FISH(+):TKI+雙藥EGFR測序+FISHPaz～Ares匯總分析EGFR突變類型與治療分期medianOS17monthsS0023I線治療EGFR-TKI金標準：mEGFR19exon各種突變（66種）0variant2(E20;A20)選擇mEGFR治療，遠優(yōu)于化療高表達Gem/doc47%(RR)---BonkovinaaL.選擇mEGFR治療，遠優(yōu)于化療同時高表達復發(fā)低風險預后因子NEJM2007肺癌EGFR基因拷貝量擴增類型5monthsvs.NSCLC:新的預測預后標志EML4-AKL融合基因-NSCLCEML4-ALKpositive:medianTTP9monthsmedianOS17monthsEML4-ALKnegative：medianTTP6.2monthsmedianOS11months

G.Altavillaetal.EML4-ALKfusiongeneinlungadenocarcinoma:Aretrospectiveanalysisoftheoutcomeofcisplatinpluspemetrexedtreatedpatients.2010ASCOAnnualMeeting.AbstractNo:7610

EML4-ALK分子標志作用-NSCLC

Shawetal.alsoconcludedthatpatientswithEML4-ALK-positiveNSCLChaveasuperioroutcomecomparedwithWT/WTpatientsbyusingthemethodsofFISHtodetect.G.Altavillaetal.EML4-ALKfusiongeneinlungadenocarcinoma:Aretrospectiveanalysisoftheoutcomeofcisplatinpluspemetrexedtreatedpatients.

2010ASCOAnnualMeeting.AbstractNo:7610MariaPaolaMartellietal.TheAmericanJournalofPathology,2009,174(2):661-670.

RT-PCR:5.８%

variant1(E13;A20)１.７%

variant3(E6;A20)0variant2(E20;A20)

PCRsequencing:comformRT-PCRresultsFISH:onlyaminorityofcellsharboredtheEML4-ALKgeneWesternblot

：failedtodetectImmunoprecipitation：failedtodetect我科EML4-ALK實例Results:

RT-PCR:5.８%

variant1(E13;A20)１.７%

variant3(E6;A20)0variant2(E20;A20)

PCRsequencing:comformRT-PCRresultsFISH:onlyaminorityofcellsharboredtheEML4-ALKgeneWesternblot

：failedtodetectImmunoprecipitation：failedtodetect我科EML4-ALK實例-variant1我科EML4-ALK實例-variant2我科EML4-ALK實例-variant3我科EML4-ALK實例BRCA1/b-TUBULIN微管類抑制劑療效相關：

BRCA1mRNA高表達

b-TUBULINmRNA低表達我院約300例NSCLC石蠟標本檢測SCLC-肺小細胞癌生物標志：2010ASCO,小細胞癌不是遺忘的角落旨在新藥，靶療和治療模式的轉化研究和探索SPEAR研究：新型化療藥物Picoplating，ERCC1

聯(lián)合BSC:單用BSCMTS21周：20周

OS18周：14周

PFS,TTP無差異ABT-263:bcl-2小分子抑制劑bcl-2重排，bcl-2融合基因qPCR表達ASCO：氨柔比星+托泊替康毒性增大，TOPOII擴增

SCLC-肺小細胞癌生物標志：EGFR突變

ASCO報道：受外科手術標本的限制有一定的EGFR突變率本院病例：G06-196SCLC,肺穿刺活檢直接測序:EGFRdel(2235-2246)19exonIRESSA口服，緩解

AbstractNo:7514R.Rosell,Outcometoerlotinibinnon-smallcelllungcancer(NSCLC)patients(p)accordingtothepresenceoftheEGFRT790MmutationandBRCA1mRNAexpressionlevelsinpretreatmentbiopsies.Conclusions:Thehighfrequencyofpretreatmentdoublemutationsconcurswithapreviousreport(Maheswaranetal.NEJM2008).ThestronginfluenceofT790MandBRCA1levelsonerlotiniboutcomecanleadtonovelpersonalizedtreatmentstrategies.AbstractNo:7615131patientswithstageIIIB(wet)andIVNSCLC.qRT-PCRwasusedtoanalyzethetumoralexpressionResults:ThemRNAlevelsofTXR1-TSP1wereinverselycorrelated(Spearman'stest:-0.37;p=0.001).LowTXR1mRNAlevelswereassociatedwithhigherresponserate(RR;p=0.018),longermedianprogressionfreesurvival(PFS;p=0.029)andmedianoverallsurvival(mOSp=0.003),whilehighTSP1expressionwasalso,correlatedwithhigherRR(p=0.035),longerPFS(p<0.0001)andmOS(p<0.0001).Inaddition,patientswhoseprimarytumorspresentedhigherBRCA1mRNAexpressionexperiencedhigherRR(p=0.028)andincreasedPFS(p=0.021),butnotmOS(p=0.4)incomparisonwiththosewithlowBRCA1tumoralexpression.chemotherapyresistanceinpatientswithadvanced/metastaticnon-smallcelllungcancer---C.Papadaki.AbstractNo:e18051

C.Zhou;TherelationshipofEGFRintron1(CA)andmicrosatellitepolymorphismandtheefficacyofEGFR-TKIinadvancedNSCLCpatients70patientssequencedinanABI3100Conclusions:EGFR(CA)nrepeatsmaybeanotherbiomarkertopredicttheeffectofEGFR-TKI,patientswithalownumberofEGFreceptorCArepeats(anyallele≤17CA)aremorelikelytohaveabetterclinicaloutcomethanpatientswithahighnumberofCArepeats(bothalleles>17CA)duringtargetedtherapywithEGFR-TKI.benefited

morefromanti-tubulincontainingregimenplatinum-containingregimengemcitabine-containingregimen85patients:OS-13months(range10.8-15.2);

TTP-6.1months(range5.5-6.7).lowRRM1expressionhighBRCA1expressionlowERCC1expressionOS

(Medianoverallsurvival)ERCC1-LvsERCC1-H16.5monthsvs.10.0months

p=0.045ERCC1-L/ERCC1-H:6.5vs.5.1months,p=0.001BRCA1-L/BRCA1-H:5.2vs.6.5months,p=0.019TTP:(Timetoprogression)AbstractNo:e18045

ERCC1,RRM1andBRCA1arepromisingpredictiveandprognosticbiomarkersinadvancednon-smallcelllungcancer.ERCC1,RRM1,andBRCA1mRNA

expressionlevelsandclinicaloutcomeofadvancednon-smallcelllungcancer.18-21外顯子,已知11種突變和缺失--PYSEQN,23bp?標準化療：RRM1,ERCC1,BRCA1,TSASCO：氨柔比星+托泊替康毒性增大，TOPOII擴增BRCA1-L/BRCA1-H:5.S0023SWOG檢測基因表達：VEGFR/VEGF,RRm1,ERCC1。預測：初期，突變者對易瑞沙的反應近90%OS提高了40%，TTP>18.TumorBRCA1,RRm1andRRm2mRNAExpressionlevelsandClinicalResponsetoFirst-LineGemplusDocetaxelinNSCLC.C225對肺癌OS存在陽性意義：C225+CTNSCLC:MADeIT2007JCOPFS：特羅凱（365）13.70%中國人(CA)n>16，60%歐美人(CA)n<15.化療（375）5.Project Test腺癌（無腦轉移)：Avasting+雙藥

VEGFRmRNA腺癌（腦轉移）

：力必泰+卡鉑

TS/ERCC1mRNA

C225+雙藥

EGFR(copy)EGFR(w)+FISH(+):

TKI+雙藥

EGFR測序+FISH

EGFR(w)+FISH(-):

雙藥

EGFR測序+FISH

肺癌：FrombestofASCO2009鱗癌以外的NSCLC

力必泰+鉑類：TS，ERCC1mRNA鱗癌

標準化療：

RRM1,ERCC1,BRCA1,TS亞洲人用Avastin+GP方案更好

OS：17.4m（亞洲）；10.9m（歐美）亞洲人低劑量Avastin比歐美人低劑量更好

OS：28.2m（亞洲）；13.6m（歐美）說明：人種基因在個體性化療中存在差異。檢測基因表達：VEGFR/VEGF,RRm1,ERCC1。肺癌Ⅲ期：C225對OS未發(fā)現(xiàn)基因和免疫組化標志

OS(－):K-ras，EGFRm，EGFRFISH和免疫組化C225對肺癌OS存在陽性意義：C225+CT

皮疹（三周后）OS:8.8(m)→15.6(m)特羅凱顯著延長總人群和亞裔人群ThestronginfluenceofT790MandBRCA1levelsonerlotiniboutcomecanleadtonovelpersonalizedtreatmentstrategies.Immunoprecipitation：failedtodetectmEGFR10-15%，Caucasian，30-40%Asian死亡風險比：厄羅替尼與培美曲塞EGFR突變抗體：單中心報告，需要驗證后，OS,疾病控制率高達89.早期和局部晚期患者不確定mEGFR作為療效預測因子后，OS,疾病控制率高達89.肺腺癌TSqPCRmRNA表達水平較低，培美曲塞/伊羅澤療效預測好100%PFS：特羅凱（365）13.mEGFRRR易瑞沙37.50%特羅凱、易瑞沙、力比泰未見特別差異。TKI一線選擇女性不抽煙腺癌:安慰劑PFS12:16(m)TKI首要選擇

EGFR突變:化療(CP)PFS20:8(m) RR47.3%:1%EGFR突變是影響TKI療效的獨立因素，性別、人種病理類型無關。特羅凱、易瑞沙、力比泰未見特別差異。免疫組化（EGFR）,EGFRFISH表達與療效無明顯差異。EGFR突變抗體：單中心報告，需要驗證中國肺癌500例（09-10結束）EGFR突變：特羅凱單藥(n=143)150mg/day

標準一線(GC)有陽性結果我院單中心報告：附件70%中國人(CA)n>16，60%歐美人(CA)n<15.江蘇省中醫(yī)院病理科（單中心）五年EGFR突變TKI序貫治療數(shù)據(jù)(附件）116例肺癌石蠟組織，20例肺癌血液對照，45例TKI治療隨訪JRW,RSLai,ASCO2009:116例肺癌EGFR/(CA)n測序和TKI療效（2005-2008）分組NO突變率(%）

有效率（CR﹢PR%）

控制率（CR﹢PR﹢SD%）觀察組11620（27%）62.5%100%對照組200（0%）14.3%57.1%觀察組(CA)n≤16(CA)n≥17

3820/3818/38575%0%100%33%對照組(CA)n≤16(CA)n≥17

103/107/100%33%50%33%

我院6年來EGFR直接測序統(tǒng)計：各種腫瘤檢材：479例，總突變率19.7%肺癌石蠟腫瘤：277例，總突變率25.6%檢材類型：石蠟切片，穿刺石蠟切片，穿刺涂片，痰涂片，胸水涂片，快速冰凍片，HE染色突變類型：31種：點突變15種，插入/缺失16種(CA)n類型：≥16次重復184例；＜16次重復，39例肺癌共338例，突變82例，總突變率24.26%石蠟277例突變71例突變率25.632%痰1例突變0突變率0涂片2例突變1例突變率50%血22例突變1例突變率4.545%新鮮組織5例突變3例突變率60%胸水31例突變6例突變率19.355%EGFR突變情況EGFR外顯子突變例數(shù)（例）比例（%）1811.220194757.317213137.805EGFR突變亞型

EGFR第19外顯子缺失/插入突變：

2235-2250，2235-2249，2236-2250，2236-2257，2236-2253，2238-2255，2239-2252，2239-2256，2239-2253，2239-2247，2240-2254，2240-2253，2240-2252，2240-2257，2241-2249；2235插入（CTC）；

EGFR第19外顯子點突變：

2237A/T，P741P，E746V，L747PEGFR突變亞型

EGFR第21外顯子

L833V，H835L，G857G，L858R，L859R，

L861Q，870位A/G

其他位置突變：第18外顯子上游第104位T/G

第21外顯子上游第39位G/A

第21外顯子下游第94位A/GEGFR無突變晚期肺癌(NSCLC一線治療)

OS:31.3:23.7

一線標準化療Gem/Cis RRM1,ERCC1

三代化療Gem/S/Tarciva序貫 FAST

中國人OS31.3(m)，有EGFR(CA)n種族敏感性因素70%中國人(CA)n>16次，致RR達70%以上－－依據(jù)分子標志物選擇化－－全部分子標志來自PCR實時定量擴增ASCO>80%文獻：ABI7900型、7500型BRCA1mRNA低表達(cutoff?)RRm1mRNA低表達健擇/泰素ORR更獲益RRm2mRNA低表達

---BonkovinaaL.TumorBRCA1,RRm1andRRm2mRNAExpressionlevelsandClinicalResponsetoFirst-LineGemplusDocetaxelinNSCLC.ASCO2009

p＝0.001低風險組(10.13m)：中BRCA1+低RRm1，高BRCA1+中或低RRm1中風險組(4.17m)：低BRCA1+低RRm1，中BRCA1+中RRm1，高BRCA1+高RRm1高風險組(2.30m)：低BRCA1+中RRm1，中BRCA1+RRm1，低BRCA1+高RRm1NSCLC:R.Rose(單組ERCC1與RR)ERCC1mRNA:

低表達Cis/doc53%(RR)但OSPFS無差異高表達Gem/doc47%(RR)

未檢測Cis/doc39%(RR)---CoboM,etal.JCO,2007.NSCLC:MADeIT2007JCO聯(lián)合基因檢測OS40%upAlgorthm按兩種基因表達水平選擇四種一線化療雙藥組合OS提高了40%，TTP>18.5(m)，各雙藥療效相似PatientRRm1<16.5RRm1>16.5ERCC1<8.7ERCC1>8.7