第十單元 生物技術(shù)與工程（測試卷）（解析版）

第十單元生物技術(shù)與工程一、單選題1．油炸臭豆腐，是我國一些地方的風味小吃，制作時需要將豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢桿菌等微生物的鹵汁中發(fā)酵。下列說法正確的是（

）A．鹵汁中的乳酸菌和芽孢桿菌不存在競爭關系B．乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生了乳酸和CO2C．微生物發(fā)酵產(chǎn)生了不同的代謝物使得臭豆腐具有特殊的風味D．腐乳制作原理是毛霉等多種微生物中的蛋白酶將蛋白質(zhì)和脂肪等物質(zhì)分解的結(jié)果【答案】C【分析】腐乳的制作原理：參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多種，其中起主要作用的是毛霉，其代謝類型為異養(yǎng)需氧型，適宜溫度為15℃～18℃；毛霉能夠產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，將蛋白質(zhì)和脂肪分別水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸?！驹斀狻緼、鹵汁中的乳酸菌和芽孢桿菌存在競爭關系，共同爭奪空間和營養(yǎng)，A錯誤；B、乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生了乳酸，沒有產(chǎn)生CO2，B錯誤；C、題中顯示，制作時需要將豆腐浸入含乳酸菌、芽孢桿菌等微生物的鹵汁中發(fā)酵形成的，可見，臭豆腐是在多種微生物的協(xié)同作用下制作成的，C正確；D、腐乳制作原理是毛霉等多種微生物中的蛋白酶和脂肪酶能將蛋白質(zhì)和脂肪等物質(zhì)分解成有機小分子的結(jié)果，D產(chǎn)物。故選C。2．酵母菌可通過細胞呼吸為其生長繁殖提供能量。下列敘述正確的是A．酵母菌細胞呼吸分解有機物所釋放的能量，大部分儲存在ATP中B．酵母菌的細胞呼吸可為其細胞內(nèi)某些有機物的合成提供原料和能量C．當其他培養(yǎng)條件適宜時，無氧條件比有氧條件更有利于酵母菌的繁殖D．在釀酒過程中，需嚴格密封以利于酵母菌充分利用有機物中的能量【答案】B【分析】1、酵母菌屬于兼性厭氧菌，既能進行有氧呼吸也能進行無氧呼吸。2、細胞呼吸的實質(zhì)是分解有機物，釋放能量，其釋放的能量中大部分以熱能的形式散失，少數(shù)儲存在ATP中?！驹斀狻緼、酵母菌細胞呼吸分解有機物所釋放的能量，大部分以熱能的形式散失，少部分儲存在ATP中，A錯誤；B、酵母菌的細胞呼吸過程可以釋放能量，同時細胞呼吸過程中產(chǎn)生了中間代謝產(chǎn)物，因此可為其細胞內(nèi)某些有機物的合成提供原料和能量，B正確；C、當其他培養(yǎng)條件適宜時，酵母菌在有氧呼吸條件下釋放的能量多，合成的ATP多，有利于酵母菌的大量繁殖，而無氧呼吸條件下釋放的能量較少，合成的ATP少，不利于酵母菌的繁殖，此時利于酵母菌的發(fā)酵產(chǎn)生酒精，C錯誤；D、在釀酒過程中，前期階段需要酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖，后期在無氧條件下發(fā)酵產(chǎn)生酒精，但是該無氧發(fā)酵階段需要定期放氣，因此不能嚴格密封，D錯誤。故選B。3．為制備圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌微生物菌劑，以降解廚余垃圾廢液中淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，研究人員探究了圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌處理某廚余垃圾廢液的最佳接種量比，將兩種菌液進行了不同配比的分組處理，如下表所示。下列敘述錯誤的是（

）編號R0R1R2R3R4圓褐固氮菌：巨大芽孢桿菌1:02:11:11:20:1A．微生物利用其合成分泌的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等分解廢液中的相關物質(zhì)B．實驗過程中需將上述菌液分別接種于相同體積的廚余垃圾廢液中進行培養(yǎng)C．可通過檢測實驗前后淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪的含量，確定適宜的配比D．表中編號R1、R2、R3組構(gòu)成相互對照，編號R0、R4組為空白對照【答案】D【分析】本實驗的目的為了探究圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌處理某廚余垃圾廢液的最佳接種量比，自變量是兩種菌的接種比，因變量是廚余垃圾廢液中淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)的剩余量。【詳解】A、酶具有專一性，可分解相應的物質(zhì)，微生物利用其合成分泌的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等分解廢液中的相關物質(zhì)，A正確；B、實驗過程中，廚余垃圾廢液的作用類似于培養(yǎng)基，其體積是無關變量，應該保持相同，B正確；C、可通過檢測實驗前后廢液中淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪的含量，以確定適宜的配比，含量最少的比例最適宜，C正確；D、表中實驗均為實驗組相互形成對比實驗，空白實驗為接種等量無菌水，D錯誤。故選D。4．為了處理污水中的有害的、難以降解的有機化合物A，研究團隊用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽和微量元素等配制了培養(yǎng)基，成功篩選出能高效降解化合物A的細菌。實驗的主要步驟如下圖所示，相關敘述錯誤的是（）

A．實驗涉及的培養(yǎng)基使用前必須經(jīng)過濕熱滅菌B．初選培養(yǎng)基應該以化合物A作為唯一碳源C．應選擇錐形瓶中化合物A含量低的菌種擴大培養(yǎng)D．實驗篩選獲得的化合物A高效降解菌就直接用于污水處理【答案】D【分析】分析題干信息，該實驗的目的是篩選出高效降解化合物A的細菌，在以化合物A的培養(yǎng)基中只有能降解化合物A的微生物才能生長繁殖，不能利用化合物A的微生物因缺乏碳源等,無法生長繁殖。【詳解】A、培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基需要進行高溫高壓滅菌，即使用前必須經(jīng)過濕熱滅菌，A正確；B、要篩選出能高效降解化合物A的細菌，因此培養(yǎng)基應以化合物A作為唯一碳源，則不能分解化合物A的微生物由于缺乏碳源不能在選擇培養(yǎng)基上生長，B正確；C、錐形瓶中化合物A含量越低，說明該菌種分解化合物A的能力越強，因此應選擇錐形瓶中化合物A含量低的菌種擴大培養(yǎng)，C正確；D、實篩選出來的菌株還需要在具體的環(huán)境中進一步測試，才能用于污水處理，D錯誤；故選D。5．花椰菜（）對黑腐病無抗性，黑芥（）對黑腐病具有一定的抗性。利用植物體細胞雜交技術(shù)培育抗黑腐病的雜種植株，如圖1。通過蛋白質(zhì)電泳技術(shù)分析了親本（Ⅰ、Ⅱ）及待測植株（1～5）中某些特異性蛋白，結(jié)果如圖2所示。下列有關敘述錯誤的是（

）A．過程①取花椰菜的頂芽細胞進行體細胞雜交有利于獲得脫毒苗B．過程②是誘導原生質(zhì)體融合，體現(xiàn)了細胞膜的流動性C．圖2中4和5是雜種植株，其體細胞的染色體數(shù)均為17條D．篩選抗病性強的雜種植株可用病菌懸浮液均勻噴施于植株葉片，觀測其發(fā)病情況【答案】C【分析】1、植物體細胞雜交技術(shù)：就是將不同種的植物體細胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成完整植物體的技術(shù)。植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結(jié)束；雜種植株的特征：具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質(zhì)；植物體細胞雜交克服了遠緣雜交不親和的障礙。2、根據(jù)圖譜分析，4號和5號個體含有黑芥和花椰菜兩種類型的蛋白質(zhì)，說明是雜種細胞，而1、2、3號個體只有某一親本的蛋白質(zhì)，說明不是雜種細胞。【詳解】A、植物頂端分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒。因此取花椰菜的頂芽細胞進行體細胞雜交有利于獲得脫毒苗，A正確；B、過程②為原生質(zhì)體融合過程，需用物理或者化學(PEG等)的方法處理，體現(xiàn)了細胞膜的流動性，B正確；C、根據(jù)圖2分析4號和5號個體含有兩種類型的蛋白質(zhì)，說明是雜種細胞，雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質(zhì)，故其體細胞的染色體數(shù)為34條，C錯誤；D、可將病菌懸浮液均勻噴施于植株葉片上，觀測其發(fā)病情況，篩選出抗病性強的雜種植株，D正確。故選C。6．科研人員利用野生型清水紫花苜蓿和里奧百脈根為材料培育抗鼓脹病的新型牧草，研究主要流程如下圖。下列說法錯誤的是（

）注：IOA可抑制植物細胞呼吸第一階段，R-6G可阻止線粒體的功能A．將兩種細胞分別置于較高滲透壓環(huán)境下，有利于去除細胞壁獲得兩種植物的原生質(zhì)體B．異源融合體因代謝互補可恢復生長并獲得再生能力C．③過程誘導生芽的培養(yǎng)基中BA（細胞分裂素類似物）與NAA的濃度比值低于②過程D．圖示技術(shù)可克服遠緣雜交不親和的障礙【答案】C【分析】題圖分析：圖示為植物體細胞雜交獲得雜種植株的過程，圖中①表示原生質(zhì)體融合形成雜種細胞以及雜種細胞的增殖，②表示脫分化過程，③表示再分化過程。【詳解】A、將兩種細胞分別置于較高滲透壓環(huán)境下，有利于去除細胞壁獲得兩種植物的原生質(zhì)體，避免原生質(zhì)體在酶解過程中受到損傷，同時也不至于導致原生質(zhì)體吸水漲破，A正確；B、結(jié)合圖示信息可推測，異源融合體因代謝互補可恢復生長并獲得再生能力，B正確；C、③過程為再分化過程，誘導生芽的培養(yǎng)基中BA（細胞分裂素類似物）與NAA的濃度比值高于②過程，這樣有利于誘導生芽，C錯誤；D、圖示技術(shù)為植物體細胞雜交技術(shù)，該技術(shù)的優(yōu)勢在于克服遠緣雜交不親和的障礙，D正確。故選C。7．在花椰菜種植過程中發(fā)現(xiàn)，花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，而野生的黑芥則具有抗黑腐病的特性?？蒲腥藛T利用植物體細胞雜交技術(shù)培育具有抗病性狀的花椰菜新品種如圖，培育過程中通過紫外線照射使黑芥部分染色體結(jié)構(gòu)被破壞。下列敘述正確的是（

）A．過程①將兩種細胞放入纖維素酶和果膠酶溶液中處理一段時間，制備出完整原生質(zhì)體B．過程②顯微鏡下觀察到兩個原生質(zhì)體細胞核融合為一個細胞核，證明已形成雜種細胞C．過程③獲得的愈傷組織細胞在顯微鏡下無法觀察到來自于黑芥苗葉肉細胞的葉綠體D．完成鑒定后，最終獲得的雜種抗病植株中具有完整的花椰菜和黑芥的遺傳信息【答案】C【分析】分析題圖：圖示為采用植物體細胞雜交技術(shù)獲得抗黑腐病雜種植株的流程圖，其中①表示采用酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細胞壁的過程；②表示誘導原生質(zhì)體融合的過程；③表示脫分化過程。【詳解】A、①過程將兩種細胞置于等滲溶液中，用纖維素酶和果膠酶處理以除去細胞壁，獲得有活力的原生質(zhì)體，A錯誤；B、過程②融合的原生質(zhì)體再生形成新的細胞壁，證明已形成雜種細胞，B錯誤；C、愈傷組織不含葉綠體，因此過程③獲得的愈傷組織細胞在顯微鏡下無法觀察到來自于黑芥苗葉肉細胞的葉綠體，C正確；D、由于紫外線照射使黑芥部分染色體結(jié)構(gòu)被破壞，因此完成鑒定后，最終獲得的雜種抗病植株中不具有完整的黑芥的遺傳信息，D錯誤。故選C。8．為解決雜交瘤細胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細胞的染色體丟失問題，研究者將抗原刺激后的B淋巴細胞，用EBV（一種病毒顆粒）感染，獲得“染色體核型穩(wěn)定”的EBV轉(zhuǎn)化細胞。EBV轉(zhuǎn)化細胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對Oua敏感。骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對Oua不敏感。下圖表示操作過程。下列分析錯誤的是（

）A．B淋巴細胞可從多次間歇注射某種抗原的動物脾臟中獲得B．HAT培養(yǎng)基和Oua篩選去除的是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細胞C．雜交瘤細胞染色體丟失可能會導致抗體的產(chǎn)生能力下降D．圖中獲得的雜交瘤細胞需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測篩選后才可用于生產(chǎn)【答案】B【分析】1、單克隆抗體的制備過程是：對小動物注射抗原，從該動物的脾臟中獲取效應B細胞，將效應B細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。2、兩次篩選：篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交的細胞以及自身融合的細胞）；篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細胞群?！驹斀狻緼、對動物進行間歇注射抗原處理，以刺激動物機體產(chǎn)生相應的B淋巴細胞；B淋巴細胞在骨髓中發(fā)育成熟，可分布于淋巴結(jié)和脾臟等處，故B淋巴細胞可從多次間歇注射某種抗原的動物脾臟中獲得，A正確；B、據(jù)題意“EBV轉(zhuǎn)化細胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對Oua敏感；骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對Oua不敏感”可知，HAT培養(yǎng)基去除的是未與EBV轉(zhuǎn)化細胞融合的骨髓瘤細胞和自身融合的骨髓瘤細胞，Oua篩選去除的是未與骨髓瘤細胞融合的EBV轉(zhuǎn)化細胞和自身融合的EBV轉(zhuǎn)化細胞，B錯誤；C、抗體是由漿細胞分泌的，雜交瘤細胞若丟失來自B淋巴細胞的染色體，可能會導致抗體產(chǎn)生能力下降，C正確；D、圖示獲得的雜交瘤細胞還需要經(jīng)過進一步的篩選，需經(jīng)克隆化培養(yǎng)化，并用專一抗體檢測呈現(xiàn)陽性的雜交瘤細胞才能直接用于生產(chǎn)單克隆抗體，D正確。故選B。9．近日，有關新冠“二陽”的話題頻上熱搜，很多市民再次陷入恐慌，并采用抗原試劑盒進行新冠病毒的自我檢測。試劑盒中的一種單克隆抗體能與新冠病毒表面的S蛋白特異性結(jié)合，發(fā)揮診斷作用，該單克隆抗體可通過向6～8周齡的Balb/c小鼠注射重組蛋白后經(jīng)培養(yǎng)、篩選而獲得。下列敘述錯誤的是（

）A．制備單克隆抗體使用的B淋巴細胞取自經(jīng)過多次抗原注射的Balb/c小鼠的脾臟B．用96孔板培養(yǎng)雜交瘤細胞時，接種的每一個雜交瘤細胞均能產(chǎn)生所需抗體C．雜交瘤細胞可放入CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中一般無接觸抑制現(xiàn)象D．將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，可獲取大量的抗S蛋白的單克隆抗體【答案】B【分析】將抗原注射入小鼠中，獲得免疫小鼠，從小鼠脾臟中獲得B淋巴細胞，將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞通過PEG融合成雜交瘤細胞，再用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選，最終獲得能在體外大量繁殖的同時能產(chǎn)生特異性抗體的細胞?！驹斀狻緼、注射過S蛋白的小鼠脾臟中有能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞，且多次注射抗原激活多次免疫效應，產(chǎn)生更多免疫細胞，A正確；B、由于雜交瘤細胞培養(yǎng)初期不穩(wěn)定，可能丟失部分染色體或出現(xiàn)變異的情況，導致不能產(chǎn)生抗體，或由于B細胞種類差異導致產(chǎn)生的抗體不同，B錯誤；C、雜交瘤細胞具有骨髓瘤細胞的特征，細胞表面缺少黏性蛋白，培養(yǎng)過程中一般無接觸抑制現(xiàn)象，C正確；D、將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，可以獲取大量的抗S蛋白的單克隆抗體，D正確。故選B。10．單克隆抗體在多種疾病的診斷和治療中發(fā)揮重要作用，下圖是利用小鼠制備單克隆抗體的過程，以下敘述錯誤的是（）

A．已免疫的小鼠脾臟中，每個脾B淋巴細胞可產(chǎn)生多種抗體，所以需要進行細胞篩選B．可在無菌條件下采用電融合法誘導細胞融合C．在特定培養(yǎng)基中篩選出的細胞M為雜交瘤細胞D．經(jīng)過上圖細胞篩選過程之后的細胞還需進行進一步篩選【答案】A【分析】單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞。利用動物細胞融合技術(shù)將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，在經(jīng)過兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交的細胞以及自身融合的細胞）②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。兩次抗體檢測：專一抗體檢驗陽性，獲得能產(chǎn)生特異性抗體、又能大量增殖雜交瘤細胞。最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體?！驹斀狻緼、一般而言，一種B淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體，A錯誤；B、誘導動物細胞融合的方法有：電融合法、聚乙二醇、滅活的病毒，因此可在無菌條件下采用電融合法誘導細胞融合，B正確；C、利用動物細胞融合技術(shù)將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，在特定培養(yǎng)基中篩選出的細胞M為雜交瘤細胞，C正確；D、經(jīng)過上圖細胞篩選過程之后的細胞還需進行進一步篩選，即進行專一抗體陽性檢測：根據(jù)抗原—抗體特異性結(jié)合原理，檢測時取培養(yǎng)液滴加相應抗原出現(xiàn)反應為目標細胞，D正確。故選A。11．一對姐弟被確認為全球第二對半同卵雙胞胎，該對半同卵雙胞胎的受精及胚胎發(fā)育過程如圖所示。一般情況下圖2受精卵無法發(fā)育，但該受精卵能有絲分裂如圖3，染色單體分離后分別移向細胞的三個不同方向，從而分裂成三個細胞如圖4，其中兩個細胞發(fā)育成姐弟二人。下列說法正確的是（

）A．圖1表示該異常胚胎的受精過程，此時的卵子為初級卵母細胞B．該卵子與2個精子受精，表明透明帶和卵細胞膜在阻止多精入卵的過程中不起作用C．這對姐弟來源于母親的染色體一般相同，來源于父親的染色體不同D．若圖4細胞A包含父系和母系染色體組各1個，則細胞C含2個母系染色體組【答案】C【分析】受精作用是卵細胞和精子相互識別、融合成為受精卵的過程。受精卵的染色體，有一半來自精子，另一半來自卵細胞，受精卵的細胞質(zhì)DNA全部來自于卵細胞?！驹斀狻緼、圖1表示該異常胚胎的受精過程，有2個精子的頭部進入了卵細胞，此時的卵子為減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細胞，A錯誤；B、該卵子與2個精子受精，是異常受精，不能說明透明帶和卵細胞膜在阻止多精入卵的過程中不起作用，B錯誤；C、圖4中A、C的染色體都是來自于精子的父系染色體組1個和卵細胞的母系染色體組1個，而B的染色體來自于兩個精子（兩個染色體組都是來自父系），這對姐弟來源于母親的染色體一般相同（來自雌原核），來源于父親的染色體不同（分別來自兩個不同的雄原核），C正確；D、圖4中A、C的染色體來自于精子和卵細胞，若圖4細胞A包含父系和母系染色體組各1個，則細胞C包含父系和母系染色體組各1個，D錯誤。故選C。12．EPO是人體腎臟分泌的一種肽類激素，能使骨髓生成紅細胞的量增加，提高血紅蛋白含量，增加血液攜氧、供氧能力，是臨床上一種治療腎性貧血的藥物。下圖是采用中國倉鼠卵巢細胞表達系統(tǒng)來生產(chǎn)EPO的過程。下列相關敘述錯誤的是（

）A．在③過程，精子需要依次穿越卵母細胞的透明帶和卵細胞膜B．在⑥之前，需要割取囊胚的部分滋養(yǎng)層細胞做DNA分析，鑒定性別C．胚胎移植時進行同期發(fā)情處理，目的是降低代孕倉鼠對移入胚胎的免疫排斥反應D．甲乙丙丁是同一物種，但只有丁獲得了人類的EPO基因【答案】C【分析】圖中①表示卵母細胞的采集和培養(yǎng)，②為精子的采集和獲能，③為體外受精，④為目的基因?qū)胧荏w細胞，⑤為胚胎的早期培養(yǎng)，⑥為胚胎移植，⑦為轉(zhuǎn)EPO基因倉鼠的生長發(fā)育過程，⑧為檢測目的基因EPO是否表達出EPO活性成分。【詳解】A、③為體外受精，受精時，精子需要依次穿越卵母細胞的透明帶和卵細胞膜，A正確；B、根據(jù)題意“采用中國倉鼠卵巢細胞表達系統(tǒng)來生產(chǎn)EPO的過程”，⑥為胚胎移植，在此之前需要割取囊胚的部分滋養(yǎng)層細胞做DNA分析，鑒定性別，B正確；C、胚胎移植時進行同期發(fā)情處理，是為胚胎移入受體提供相同的生理環(huán)境，此時代孕倉鼠對外來胚胎基本不存在免疫排斥，C錯誤；D、由圖示可知，甲乙丙丁仍是同一物種，但只有丁通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得了人類的EPO基因，D正確。故選C。13．CRISPR/Cas9是一種基因編輯技術(shù)，Cas9蛋白能與人工設計的sgRNA形成復合體（如圖）．利用該技術(shù)可以對DNA進行一系列的定向改造。下列相關敘述錯誤的是（

）

A．Cas9蛋白屬于限制酶，能切割目的基因B．sgRNA具有能與目的基因發(fā)生堿基互補配對的結(jié)構(gòu)C．基因編輯技術(shù)能夠定點插入、刪除或替換部分堿基對D．通過基因編輯技術(shù)引起的變異屬于基因重組【答案】D【分析】CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯技術(shù)是利用該基因表達系統(tǒng)中的引導RNA能識別并結(jié)合特定的DNA序列，從而引導Cas9蛋白結(jié)合到相應位置并剪切DNA，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。【詳解】AB、Cas9蛋白能與人工設計的sgRNA形成復合體，復合體中的sgRNA與目的基因按照堿基互補配對原則特異性結(jié)合，Cas9蛋白相當于限制酶，Cas9蛋白結(jié)合到相應位置并剪切DNA，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯，AB正確；C、復合體在sgRNA引導下結(jié)合目的基因，Cas9蛋白切割目的基因造成雙鏈斷裂，細胞在修復斷裂的DNA時會隨機插入、刪除或替換部分堿基對，C正確；D、通過基因編輯技術(shù)引起的變異屬于基因突變，D錯誤。故選D。14．《詩經(jīng)》中有“投我以木瓜，報之以瓊瑤”的詩句。番木瓜易感染番木瓜環(huán)斑病毒（英文縮寫為PRSV）而獲病。我國華南農(nóng)業(yè)大學的科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，成功培育出轉(zhuǎn)基因番木瓜“華農(nóng)一號”，大致流程如圖所示。下列分析錯誤的是（）

A．過程①稱為逆轉(zhuǎn)錄，此過程中用到的酶有逆轉(zhuǎn)錄酶等B．過程②用限制酶BamHⅠ在Ti質(zhì)粒切開一個切口暴露出兩個游離的磷酸基團C．過程③將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，需先用Ca2+載體處理農(nóng)桿菌D．過程⑤產(chǎn)生的木瓜植株即使有抗PRSV基因也不一定具有抗PRSV的性狀【答案】C【分析】分析題圖：圖中①為逆轉(zhuǎn)錄過程，②為基因表達載體的構(gòu)建過程，③④是采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細胞，⑤是再分化過程?！驹斀狻緼、過程①是以RNA為模板合成DNA的過程，為逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶，A正確；B、質(zhì)粒為環(huán)狀DNA分子，用限制酶BamHⅠ在Ti質(zhì)粒切開一個切口將暴露出兩個游離的磷酸基團，B正確；C、過程③將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，需先用Ca2+（不是Ca2+載體）處理農(nóng)桿菌，使其容易吸收周圍的DNA分子，C錯誤；D、由于導入的目的基因不一定表達，因此過程⑤產(chǎn)生的木瓜植株即使有抗PRSV基因也不一定具有抗PRSV的性狀，D正確。故選C。15．現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展迅猛，改變著人類的生產(chǎn)和生活方式，成為促進社會和經(jīng)濟發(fā)展的重要力量。生物技術(shù)在給人帶來福音和便利的同時，對人類社會的安全性也產(chǎn)生了一定的影響。下列有關說法正確的是（

）A．轉(zhuǎn)基因技術(shù)是提高生物多樣性的一種重要手段B．轉(zhuǎn)基因抗蟲植株可以減少農(nóng)藥的使用，因此對環(huán)境不會造成任何影響C．克隆技術(shù)如果被不當利用將給社會造成災難，應禁止任何克隆研究D．轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對于解決糧食、能源等問題具有積極作用，但也存在一定風險【答案】D【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。【詳解】A、生物多樣性包括基因多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣性，轉(zhuǎn)基因技術(shù)實現(xiàn)了不同物種間基因的轉(zhuǎn)移，但并未提高生物多樣性，A錯誤；B、種植轉(zhuǎn)基因抗蟲作物，可以減少農(nóng)藥的使用量，但可能會環(huán)境造成基因污染等，B錯誤；C、克隆技術(shù)如果被不當利用將給社會造成災難，應禁止生殖性克隆，但是不反對治療性克隆，如治療性克隆可用于治療白血病等，C錯誤；D、轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對于解決糧食、能源等問題起了積極作用，同時也存在著一定風險，如可能有滯后效應、出現(xiàn)過敏源、食物的營養(yǎng)成分改變等，D正確。故選D。二、多選題16．尿素是一種高濃度氮肥，被土壤中某些細菌分解為氨后，再轉(zhuǎn)化成銨鹽、硝酸鹽等可以被植物吸收利用。某同學要分離土壤中能分解尿素的細菌，并統(tǒng)計每克土壤樣品中的活菌數(shù)目，培養(yǎng)基配方如下表所示。下列有關敘述正確的是（

）成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂含量1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gA．有些細菌能分解尿素的根本原因是其能合成脲酶B．若培養(yǎng)基要調(diào)節(jié)pH，應該在滅菌之前進行C．KH2PO4和Na2HPO4可維持培養(yǎng)基pH的相對穩(wěn)定D．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目少【答案】BCD【分析】1、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基以尿素為唯一的氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。2、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻緼、某些細菌能分解尿素的原因是能合成并分泌脲酶，根本原因是具有脲酶基因，A錯誤；B、培養(yǎng)基制作完成后需要先調(diào)整pH，后進行滅菌，B正確；C、KH2PO4和Na2HPO4屬于緩沖液，可維持培養(yǎng)基pH的相對穩(wěn)定，C正確；D、由于兩個或多個細菌可能形成一個菌落，所以用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目少，D正確。故選BCD。17．如圖為腎臟上皮細胞培養(yǎng)過程示意圖，下列敘述正確的是（

）A．甲→乙過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理B．丙過程指細胞在添加血清的合成培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)C．丙和丁過程均會出現(xiàn)細胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象D．丁過程是傳代培養(yǎng)的細胞，細胞都能進行無限增殖【答案】ABC【分析】1、動物細胞培養(yǎng)過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中(原代培養(yǎng))→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液(傳代培養(yǎng))→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2、圖示為腎臟上皮細胞培養(yǎng)過程示意圖，圖中甲表示剪碎腎臟組織塊，乙表示制成細胞懸液，丙表示原代培養(yǎng)，丁表示傳代培養(yǎng)?！驹斀狻緼、甲剪碎腎臟組織塊→乙制成細胞懸液過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，分散成單個細胞，A正確；B、丙過程指細胞在添加血清的合成培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)，B正確；C、丙原代培養(yǎng)過程和丁傳代培養(yǎng)過程均會出現(xiàn)細胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象，C正確；D、丁過程是傳代培養(yǎng)過程，該過程少部分細胞遺傳物質(zhì)可能發(fā)生了變化，進而無限繁殖，D錯誤。故選ABC?！军c睛】本題考查動物細胞培養(yǎng)的相關知識，要求考生識記動物細胞培養(yǎng)的具體過程，掌握原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的區(qū)別；識記動物細胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合所學的知識準確判斷各選項，難度不大。18．哺乳動物卵原細胞減數(shù)分裂形成成熟卵子的過程，只有在促性腺激素和精子的誘導下才能完成。下面為某哺乳動物卵子及早期胚胎的形成過程示意圖（N表示染色體組）。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是（

）A．次級卵母細胞形成的過程需要激素調(diào)節(jié)B．細胞III只有在精子的作用下才能形成成熟卵子C．II、III和IV細胞分裂后期染色體數(shù)目相同D．培育轉(zhuǎn)基因動物應選擇細胞IV作為受體細胞【答案】ABD【分析】分析題圖：圖示為某哺乳動物卵子及早期胚胎的形成過程示意圖，其中Ⅰ為卵原細胞；Ⅱ為初級卵母細胞；Ⅲ次級卵母細胞；Ⅳ為受精卵?！驹斀狻緼、由題意可知刺激卵母細胞的形成需要促性腺激素的參與，A正確；B、細胞III次級卵母細胞在精子的作用下才能形成成熟的卵細胞，B正確；C、II初級卵母細胞減數(shù)第一次分裂后期染色體數(shù)是2n，IV受精卵細胞有絲分裂后期染色體數(shù)目是4n，III次級卵母細胞減數(shù)第二次分裂后期染色體數(shù)是2n，C錯誤；D、培育轉(zhuǎn)基因動物最好選擇受精卵作為受體細胞，D正確。故選ABD。19．OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四個基因分別編碼四種不同的酶，研究人員將這些基因分別與葉綠體轉(zhuǎn)運肽（引導合成的蛋白質(zhì)進入葉綠體）基因連接，構(gòu)建多基因表達載體（載體中部分序列如下圖所示），利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻，在水稻葉綠體內(nèi)構(gòu)建了一條新代謝途徑，提高了水稻的產(chǎn)量。下列敘述錯誤的是（

）A．四個基因轉(zhuǎn)錄時都以DNA的同一條單鏈為模板B．四個基因都在水稻葉綠體內(nèi)進行轉(zhuǎn)錄翻譯C．應選用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的水稻細胞D．可用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測四種酶在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達情況【答案】ABC【分析】線粒體和葉綠體的DNA，都能夠進行半自主自我復制，并通過轉(zhuǎn)錄和翻譯控制某些蛋白質(zhì)的合成，但同時受到細胞核基因的控制。標記基因：便于重組DNA分子的篩選。【詳解】A、四個基因轉(zhuǎn)錄時不一定都以DNA的同一條單鏈為模板，A錯誤；B、這些基因在葉綠體外合成，由葉綠體轉(zhuǎn)運肽引導合成的蛋白質(zhì)進入葉綠體，B錯誤；C、卡那霉素不在T-DNA上，應用潮霉素培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的水稻細胞，C錯誤；D、可用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測是否有相應的蛋白質(zhì)產(chǎn)生，從而檢測四種酶在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達情況，D正確。故選ABC。20．SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康復后的血清中有抗S蛋白的特異性抗體。研制預防SARS病毒的疫苗簡要的操作流程如下，有關敘述正確的是A．步驟①所代表的反應過程是逆轉(zhuǎn)錄B．將大量擴增的S基因直接導入大腸桿菌，也能得到表達的S蛋白C．步驟③和⑤常用的方法分別是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法D．可用抗原—抗體雜交法檢測細胞中是否真正成功表達了病毒S蛋白【答案】AD【分析】分析題圖：圖示表示研制預防SARS病毒的疫苗簡要的操作流程，其中①是以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程，②表示基因表達載體的構(gòu)建過程，③表示將目的基因?qū)氪竽c桿菌細胞，④表示目的基因在原核細胞中的表達；⑤表示將目的基因?qū)雱游锛毎?，⑥表示目的基因在真核細胞中的表達?！驹斀狻緼、步驟①所代表的反應過程是以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄，A正確；B、目的基因需要與運載體連接后才能導入受體細胞，不能直接導入受體細胞，B錯誤；C、將目的基因?qū)胛⑸锛毎Ｓ肅a2+處理法，將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法，即步驟③和⑤常用的方法分別是Ca2+處理法和顯微注射法，C錯誤；D、可用抗原-抗體雜交法檢測目的基因是否成功表達，即可用抗原—抗體雜交法檢測細胞中是否真正成功表達了病毒S蛋白，D正確。故選AD。【點睛】本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學的知識準確判斷各選項。三、綜合題21．人誤食被金黃色葡萄球菌污染的食物后，可能出現(xiàn)腹瀉、嘔吐等癥狀。研究者嘗試用蜻蜓腸道共生菌的代謝產(chǎn)物開發(fā)新型抑菌藥物，部分實驗步驟如圖所示，圖中數(shù)字編號代表實驗步驟。

(1)⑤步驟培養(yǎng)腸道共生菌的培養(yǎng)基配方如下表所示：藥品馬鈴薯葡萄糖X水用量200.0g20.0g20.0g1000mL①表格中的藥品X最可能是；②表格中的馬鈴薯可以提供的營養(yǎng)成分有。(2)⑤步驟中，稀釋涂布了5個培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)基上涂布0.1mL稀釋液，5個培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)分別為8、62、75、88、95，則在③步驟的蜻蜓腸道提取液中，腸道共生菌的密度為個/mL（假設所有共生菌都能在培養(yǎng)基上生長）。(3)為了保證實驗的順利進行，下列操作正確的有。①研磨蜻蜓腸道時加入蒸餾水，且在無菌操作臺進行②解剖蜻蜓用的鑷子等工具，事先用干熱滅菌法進行滅菌③進行稀釋涂布操作時，將需要用到的接種環(huán)先進行灼燒滅菌④實驗結(jié)束后，將實驗產(chǎn)生的廢棄物進行集中滅菌處理(4)接種培養(yǎng)一段時間，培養(yǎng)基上共出現(xiàn)42種蜻蜓腸道共生菌，通過提取其DNA并測序可從分子水平上將其進行區(qū)分，其原理是。

(5)研究者分離出蜻蜓腸道菌株A，提取其代謝產(chǎn)物并用丙酮定容制成“藥液A”。欲比較“藥液A”與慶大霉素液（用無菌水配制的抗生素溶液）對金黃色葡萄球菌的抑菌效果，請在表格中填寫簡要的實驗步驟，完成實驗方案（所有實驗均在無菌環(huán)境操作）。步驟與目的操作與要點接種微生物在培養(yǎng)基上均勻涂布①加入藥物用無菌鑷子將分別浸過A、B、C液和無菌水的圓紙片瀝干后均勻置于上述培養(yǎng)基表面。A、B、C液分別為“藥液A”、②、③培養(yǎng)微生物將培養(yǎng)基在④℃下培養(yǎng)24小時觀測并分析結(jié)果測量⑤，記錄、比較、得出結(jié)論【答案】(1)瓊脂碳源、氮源、無機鹽（、生長因子）(2)8×105(3)②④(4)DNA分子具有特異性(5)（稀釋的）金黃色葡萄球菌菌液丙酮慶大霉素液37圓紙片周圍無菌落生長區(qū)域（透明圈、清晰區(qū)）的大?。ㄖ睆剑痉治觥颗囵B(yǎng)基的概念及營養(yǎng)構(gòu)成（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；（2）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件?！驹斀狻浚?）①⑤步驟中的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此表格中的藥品X應該為瓊脂。②表格中的馬鈴薯含有豐富的有機物，因而可以提供培養(yǎng)基中的碳源、氮源、無機鹽和生長因子等成分。（2）⑤步驟中，稀釋涂布了5個培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)基上涂布0.1mL稀釋液，5個培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)分別為8、62、75、88、95，圖中共稀釋了3次，因此最后的稀釋倍數(shù)為103，在計數(shù)時通常計數(shù)菌落數(shù)在30~300之間的平板，因此，③步驟的蜻蜓腸道提取液中，腸道共生菌的密度為（62+75+88+95）÷4÷0.1×103=8×105個/mL（假設所有共生菌都能在培養(yǎng)基上生長）。（3）①為避免雜菌污染，研磨蜻蜓腸道時加入無菌水，且在無菌操作臺進行，①錯誤；②解剖蜻蜓用的鑷子等工具需要滅菌處理，通常用干熱滅菌法進行滅菌，②正確；③進行稀釋涂布操作時，將需要用到的涂布器進行灼燒滅菌，③錯誤；④實驗結(jié)束后，將實驗產(chǎn)生的廢棄物進行集中滅菌處理，避免污染環(huán)境和操作者，④正確。故選②④。（4）接種培養(yǎng)一段時間，培養(yǎng)基上共出現(xiàn)42種蜻蜓腸道共生菌，通過提取其DNA并測序可從分子水平上將其進行區(qū)分，這是根據(jù)DNA分子的特異性來鑒別的，即每種生物的DNA分子具有其特定的堿基序列。（5）本實驗的目的是比較“藥液A”與慶大霉素液（用無菌水配制的抗生素溶液）對金黃色葡萄球菌的抑菌效果，因而本實驗的自變量是培養(yǎng)基中加入的藥物種類，因變量是抑菌圈的大小。因此實驗步驟為：首先培養(yǎng)出金黃色葡萄球菌的菌落，因此步驟一種操作為在培養(yǎng)基上均勻涂布（稀釋的）金黃色葡萄球菌菌液，以便獲得均勻生長的金黃色葡萄球菌的菌落。而后用無菌鑷子將分別浸過A、B、C液和無菌水的圓紙片瀝干后均勻置于上述培養(yǎng)基表面。A、B、C液分別為“藥液A”、丙酮、慶大霉素液。將培養(yǎng)基在37℃下培養(yǎng)24小時，該溫度是細菌生長的適宜溫度，最后測量圓紙片周圍無菌落生長區(qū)域，記錄、比較、得出結(jié)論，該區(qū)域越大說明抑菌效果越好。22．將基因型為AaBb的水稻（具有24條染色體）的葉肉細胞通過無菌操作接入含有營養(yǎng)成分全面的培養(yǎng)基的試管中，在一定條件下培養(yǎng)形成試管幼苗，其過程如圖所示：(1)圖中水稻的葉肉細胞要經(jīng)過消毒處理后才能進行培養(yǎng)。其中［1］過程中，細胞的分化程度會填“升高”“降低”或“不變”）。愈傷組織經(jīng)過［2］過程重新分化成根和芽的過程叫。常用的培養(yǎng)基有脫分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基的主要差異是。(2)在形成愈傷組織的過程中，細胞必須不斷地從培養(yǎng)基中獲得和小分子有機物等營養(yǎng)物質(zhì)。(3)如果［4］是脫毒植株，則“水稻的某種細胞”應選用細胞，這種繁殖方式實際上是，培養(yǎng)成的植株的基因型為。(4)如果“某種細胞”選用的是花粉細胞，則［4］稱為植株，該植株的特點是，需用處理，使其恢復正常體細胞染色體數(shù)。【答案】(1)降低再分化生長素/細胞分裂素的比例不同(2)水分、無機鹽(3)根尖或莖尖無性繁殖AaBb(4)單倍體高度不育秋水仙素【分析】愈傷組織是指原植物體的局部受到創(chuàng)傷刺激后，在傷口表面新生的組織。它由活的薄壁細胞組成，可起源于植物體任何器官內(nèi)各種組織的活細胞?！驹斀狻浚?）［1］過程為脫分化處理，高度分化的植物細胞形成愈傷組織，細胞的分化程度降低；［2］過程為愈傷組織的再分化過程；植物在不同階段需要的營養(yǎng)不同，脫分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基目的不同，因此生長素/細胞分裂素的比例不同。（2）愈傷組織不能進行光合作用，在形成愈傷組織的過程中，細胞需要從外界獲得水分、無機鹽和小分子有機物如氨基酸、葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)。（3）根尖或莖尖處細胞分裂旺盛、感染病毒的概率小，常作為脫毒苗的首選；這種繁殖方式不經(jīng)過兩性細胞的結(jié)合，為無性繁殖；培養(yǎng)成的植株的基因型與原植株相同，為AaBb。（4）花粉為雄配子，配子發(fā)育來的為單倍體；水稻具有2個染色體組，該植株只有1個染色體組，無同源染色體，減數(shù)分裂異常，因此高度不育；秋水仙素抑制紡錘體的形成，會使染色體數(shù)目加倍，因此可使單倍體恢復為正常體細胞染色體數(shù)。23．Ⅰ型糖尿病的病因是胰島B細胞損傷，Ⅱ型糖尿病多表現(xiàn)為對胰島素不敏感，不同類型糖尿病臨床治療方案不同。抗胰島素抗體可快速檢測胰島素含量，為臨床診斷提供依據(jù)。下圖為某科研小組制備抗胰島素單克隆抗體的流程。請回答下列問題：(1)實驗開始時需給實驗小鼠多次注射，目的是。經(jīng)過免疫反應后提取出的B淋巴細胞無法通過直接進行動物細胞培養(yǎng)獲得大量抗體，其原因是。(2)雜交瘤細胞的特點是（答出兩點）。研究發(fā)現(xiàn)，細胞中DNA合成有，D和S兩條途徑，氨基嘌呤可以阻斷D途徑而不能阻斷S途徑。在HAT培養(yǎng)基（起選擇作用的一種培養(yǎng)基）中加入氨基嘌呤后，未融合的親本細胞和同種細胞融合形成的細胞均因DNA無法復制而死亡，只有雜交瘤細胞能連續(xù)增殖。據(jù)此判斷雜交瘤細胞DNA合成存在以上的途徑。(3)陽性克隆擴大培養(yǎng)常用有限稀釋法，即將專一抗體檢驗陽性的細胞稀釋到7～10個/mL，每孔加入細胞稀釋液的體積為mL（填“0．1”、“1”或“10”），使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)目的。(4)成人隱匿性糖尿?。↙ADA）的病理進程比較緩慢，早期表現(xiàn)酷似Ⅱ型糖尿病，后期逐漸呈現(xiàn)I型糖尿病病征，LADA的臨床診斷，除了做必要的抗體和生化指標檢驗外，還有一個標準是診斷后至少六個月不需要進行胰島素治療。據(jù)此推測該標準的設立依據(jù)是。【答案】(1)胰島素為了獲得更多能夠產(chǎn)生特定抗體（抗胰島素抗體）的B淋巴細胞淋巴細胞不能無限增殖而且壽命有限(2)既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體D和S(3)0．1(4)LADA早期胰島B細胞沒有受損（胰島素較充足），機體對胰島素不敏感且病理進程比較緩慢【分析】在制備單克隆抗體時，首先要給小鼠免疫，產(chǎn)生相應的漿細胞，然后將漿細胞與骨髓瘤細胞融合，經(jīng)過選擇培養(yǎng)基兩次篩選最后獲得能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。在單克隆抗體的制備過程中，使用了動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合等動物細胞工程技術(shù)。【詳解】（1）在制備單克隆抗體時，首先要給小鼠多次免疫注射胰島素為，目的是為了獲得更多能夠產(chǎn)生特定抗體（抗胰島素抗體）的B淋巴細胞。由于淋巴細胞不能無限增殖而且壽命有限，經(jīng)過免疫反應后提取出的B淋巴細胞無法通過直接進行動物細胞培養(yǎng)獲得大量抗體。（2）雜交瘤細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。在HAT培養(yǎng)基（起選擇作用的一種培養(yǎng)基）中加入氨基嘌呤后，未融合的親本細胞和同種細胞融合形成的細胞均因DNA無法復制而死亡，只有雜交瘤細胞能連續(xù)增殖，據(jù)此判斷雜交瘤細胞DNA合成存在以上的D和S途徑。（3）抗體檢驗陽性的細胞稀釋到7～10個/mL，每孔加入細胞稀釋液的體積為0．1mL，使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)目的。（4）由于LADA早期表現(xiàn)酷似Ⅱ型糖尿病，后期逐漸呈現(xiàn)I型糖尿病病征，說明LADA早期胰島B細胞沒有受損（胰島素較充足），機體對胰島素不敏感且病理進程比較緩慢，因此LADA的臨床診斷，除了做必要的抗體和生化指標檢驗外，還有一個標準是診斷后至少六個月不需要進行胰島素治療。24．phb2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物phb2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0．9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達該蛋白。下圖1是phb2基因編碼區(qū)序列以及兩端需添加的能被相關酶識別的序列，圖2為研究所用表達載體示意圖，表格為有關的限制酶種類及識別序列和切割位點?；卮鹣铝袉栴}。限制酶種類SpeIPvitⅡBamHIXbaI識別序列5'A↓CTAGT3'5'CAG↓CTG3'5'G↓GATCC3'5'T↓CTAGA3'

(1)用PCR擴增phb2基因時，為了使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，以便構(gòu)建基因表達載體，可以考慮在引物的（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶識別序列。據(jù)圖可推斷，擴增α鏈時需添加的限制酶識別序列以及所用引物的堿基序列是（寫出12個堿基并注明方向）。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用（填“E。coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。(2)構(gòu)建的基因表達載體中需要使用大腸桿菌蛋白基因的啟動子tac，其原因是。(3)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（1）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖3，號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

注：M為指示分子大小的標準參照物；小于0．2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中(4)在篩選出成功導入phb2基因的大腸桿菌后，經(jīng)多代培養(yǎng)仍能提取出phb2基因，你認為phb2基因是否已成功轉(zhuǎn)化？你的觀點及理由是?！敬鸢浮?1)5'端5'CAGCTGTCATTT3'T4DNA連接酶(2)tac有利于目的基因在大腸桿菌細胞內(nèi)表達(3)氨芐青霉素3(4)不一定，轉(zhuǎn)化是指目的基因成功導入受體細胞并穩(wěn)定存在和表達，僅提取到phb2目的基因不能說明它能否正常表達【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的篩選和獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）進行PCR擴增目的基因時，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此為起始點，沿模板5′→3′方向延伸，故需在引物的5'端添加限制酶識別序列。擴增α鏈時其右邊需要添加PvitⅡ識別序列5'CAGCTG3'，且引物需要與α鏈堿基序列5'AAATGA3'互補配對，故擴增α鏈時所用引物的堿基序列是5'CAGCTGTCATTT3'；根據(jù)圖1的限制酶識別序列、圖2中限制酶的位置，需要用限制酶PvitⅡ、SpeI，由于PvitⅡ切出的是平末端，因此需要用T4DNA連接酶進行連接。（2）啟動子tac有利于目的基因在大腸桿菌細胞內(nèi)表達，因此，構(gòu)建的基因表達載體中需要使用大腸桿菌蛋白基因的啟動子tac。（3）該基因表達載體上含有氨芐青霉素抗性基因，因此可將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)進行篩選。由于這些菌落都可以生長在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中，因此都含有質(zhì)粒，重組質(zhì)粒包含了目的基因和質(zhì)粒，如果用PvitⅡ和SpeI兩種酶切割重組質(zhì)粒電泳后將獲得含有質(zhì)粒和目的基因兩條條帶，2、3含有兩條條帶，2中其中一條條帶為1.5kb，3中其中一條條帶為1kb，由于牛凝乳酶的基因大小為0．9kb，所以對應電泳圖是菌落3。（4）轉(zhuǎn)化是指目的基因成功導入受體細胞并穩(wěn)定存在和表達，僅提取到phb2目的基因不能說明它能否正常表達。25．高等植物中的乙烯生物合成受到發(fā)育階段和環(huán)境的共同調(diào)節(jié)，其中乙烯合成酶在這一過程中起到至關重要的作用。擬南芥乙烯合成酶相關基因主