第十單元 生物技術(shù)與工程（測(cè)試卷）（原卷版）

第十單元生物技術(shù)與工程一、單選題1．油炸臭豆腐，是我國(guó)一些地方的風(fēng)味小吃，制作時(shí)需要將豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢桿菌等微生物的鹵汁中發(fā)酵。下列說法正確的是（

）A．鹵汁中的乳酸菌和芽孢桿菌不存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系B．乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生了乳酸和CO2C．微生物發(fā)酵產(chǎn)生了不同的代謝物使得臭豆腐具有特殊的風(fēng)味D．腐乳制作原理是毛霉等多種微生物中的蛋白酶將蛋白質(zhì)和脂肪等物質(zhì)分解的結(jié)果2．酵母菌可通過細(xì)胞呼吸為其生長(zhǎng)繁殖提供能量。下列敘述正確的是A．酵母菌細(xì)胞呼吸分解有機(jī)物所釋放的能量，大部分儲(chǔ)存在ATP中B．酵母菌的細(xì)胞呼吸可為其細(xì)胞內(nèi)某些有機(jī)物的合成提供原料和能量C．當(dāng)其他培養(yǎng)條件適宜時(shí)，無(wú)氧條件比有氧條件更有利于酵母菌的繁殖D．在釀酒過程中，需嚴(yán)格密封以利于酵母菌充分利用有機(jī)物中的能量3．為制備圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌微生物菌劑，以降解廚余垃圾廢液中淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，研究人員探究了圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌處理某廚余垃圾廢液的最佳接種量比，將兩種菌液進(jìn)行了不同配比的分組處理，如下表所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）編號(hào)R0R1R2R3R4圓褐固氮菌：巨大芽孢桿菌1:02:11:11:20:1A．微生物利用其合成分泌的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等分解廢液中的相關(guān)物質(zhì)B．實(shí)驗(yàn)過程中需將上述菌液分別接種于相同體積的廚余垃圾廢液中進(jìn)行培養(yǎng)C．可通過檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前后淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪的含量，確定適宜的配比D．表中編號(hào)R1、R2、R3組構(gòu)成相互對(duì)照，編號(hào)R0、R4組為空白對(duì)照4．為了處理污水中的有害的、難以降解的有機(jī)化合物A，研究團(tuán)隊(duì)用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽和微量元素等配制了培養(yǎng)基，成功篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如下圖所示，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．實(shí)驗(yàn)涉及的培養(yǎng)基使用前必須經(jīng)過濕熱滅菌B．初選培養(yǎng)基應(yīng)該以化合物A作為唯一碳源C．應(yīng)選擇錐形瓶中化合物A含量低的菌種擴(kuò)大培養(yǎng)D．實(shí)驗(yàn)篩選獲得的化合物A高效降解菌就直接用于污水處理5．花椰菜（）對(duì)黑腐病無(wú)抗性，黑芥（）對(duì)黑腐病具有一定的抗性。利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)培育抗黑腐病的雜種植株，如圖1。通過蛋白質(zhì)電泳技術(shù)分析了親本（Ⅰ、Ⅱ）及待測(cè)植株（1～5）中某些特異性蛋白，結(jié)果如圖2所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．過程①取花椰菜的頂芽細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交有利于獲得脫毒苗B．過程②是誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性C．圖2中4和5是雜種植株，其體細(xì)胞的染色體數(shù)均為17條D．篩選抗病性強(qiáng)的雜種植株可用病菌懸浮液均勻噴施于植株葉片，觀測(cè)其發(fā)病情況6．科研人員利用野生型清水紫花苜蓿和里奧百脈根為材料培育抗鼓脹病的新型牧草，研究主要流程如下圖。下列說法錯(cuò)誤的是（

）注：IOA可抑制植物細(xì)胞呼吸第一階段，R-6G可阻止線粒體的功能A．將兩種細(xì)胞分別置于較高滲透壓環(huán)境下，有利于去除細(xì)胞壁獲得兩種植物的原生質(zhì)體B．異源融合體因代謝互補(bǔ)可恢復(fù)生長(zhǎng)并獲得再生能力C．③過程誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基中BA（細(xì)胞分裂素類似物）與NAA的濃度比值低于②過程D．圖示技術(shù)可克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙7．在花椰菜種植過程中發(fā)現(xiàn)，花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，而野生的黑芥則具有抗黑腐病的特性?？蒲腥藛T利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)培育具有抗病性狀的花椰菜新品種如圖，培育過程中通過紫外線照射使黑芥部分染色體結(jié)構(gòu)被破壞。下列敘述正確的是（

）A．過程①將兩種細(xì)胞放入纖維素酶和果膠酶溶液中處理一段時(shí)間，制備出完整原生質(zhì)體B．過程②顯微鏡下觀察到兩個(gè)原生質(zhì)體細(xì)胞核融合為一個(gè)細(xì)胞核，證明已形成雜種細(xì)胞C．過程③獲得的愈傷組織細(xì)胞在顯微鏡下無(wú)法觀察到來自于黑芥苗葉肉細(xì)胞的葉綠體D．完成鑒定后，最終獲得的雜種抗病植株中具有完整的花椰菜和黑芥的遺傳信息8．為解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞的染色體丟失問題，研究者將抗原刺激后的B淋巴細(xì)胞，用EBV（一種病毒顆粒）感染，獲得“染色體核型穩(wěn)定”的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞。EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對(duì)Oua敏感。骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對(duì)Oua不敏感。下圖表示操作過程。下列分析錯(cuò)誤的是（

）A．B淋巴細(xì)胞可從多次間歇注射某種抗原的動(dòng)物脾臟中獲得B．HAT培養(yǎng)基和Oua篩選去除的是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞C．雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能會(huì)導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生能力下降D．圖中獲得的雜交瘤細(xì)胞需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)篩選后才可用于生產(chǎn)9．近日，有關(guān)新冠“二陽(yáng)”的話題頻上熱搜，很多市民再次陷入恐慌，并采用抗原試劑盒進(jìn)行新冠病毒的自我檢測(cè)。試劑盒中的一種單克隆抗體能與新冠病毒表面的S蛋白特異性結(jié)合，發(fā)揮診斷作用，該單克隆抗體可通過向6～8周齡的Balb/c小鼠注射重組蛋白后經(jīng)培養(yǎng)、篩選而獲得。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．制備單克隆抗體使用的B淋巴細(xì)胞取自經(jīng)過多次抗原注射的Balb/c小鼠的脾臟B．用96孔板培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)，接種的每一個(gè)雜交瘤細(xì)胞均能產(chǎn)生所需抗體C．雜交瘤細(xì)胞可放入CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中一般無(wú)接觸抑制現(xiàn)象D．將抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，可獲取大量的抗S蛋白的單克隆抗體10．單克隆抗體在多種疾病的診斷和治療中發(fā)揮重要作用，下圖是利用小鼠制備單克隆抗體的過程，以下敘述錯(cuò)誤的是（）

A．已免疫的小鼠脾臟中，每個(gè)脾B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多種抗體，所以需要進(jìn)行細(xì)胞篩選B．可在無(wú)菌條件下采用電融合法誘導(dǎo)細(xì)胞融合C．在特定培養(yǎng)基中篩選出的細(xì)胞M為雜交瘤細(xì)胞D．經(jīng)過上圖細(xì)胞篩選過程之后的細(xì)胞還需進(jìn)行進(jìn)一步篩選11．一對(duì)姐弟被確認(rèn)為全球第二對(duì)半同卵雙胞胎，該對(duì)半同卵雙胞胎的受精及胚胎發(fā)育過程如圖所示。一般情況下圖2受精卵無(wú)法發(fā)育，但該受精卵能有絲分裂如圖3，染色單體分離后分別移向細(xì)胞的三個(gè)不同方向，從而分裂成三個(gè)細(xì)胞如圖4，其中兩個(gè)細(xì)胞發(fā)育成姐弟二人。下列說法正確的是（

）A．圖1表示該異常胚胎的受精過程，此時(shí)的卵子為初級(jí)卵母細(xì)胞B．該卵子與2個(gè)精子受精，表明透明帶和卵細(xì)胞膜在阻止多精入卵的過程中不起作用C．這對(duì)姐弟來源于母親的染色體一般相同，來源于父親的染色體不同D．若圖4細(xì)胞A包含父系和母系染色體組各1個(gè)，則細(xì)胞C含2個(gè)母系染色體組12．EPO是人體腎臟分泌的一種肽類激素，能使骨髓生成紅細(xì)胞的量增加，提高血紅蛋白含量，增加血液攜氧、供氧能力，是臨床上一種治療腎性貧血的藥物。下圖是采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來生產(chǎn)EPO的過程。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．在③過程，精子需要依次穿越卵母細(xì)胞的透明帶和卵細(xì)胞膜B．在⑥之前，需要割取囊胚的部分滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析，鑒定性別C．胚胎移植時(shí)進(jìn)行同期發(fā)情處理，目的是降低代孕倉(cāng)鼠對(duì)移入胚胎的免疫排斥反應(yīng)D．甲乙丙丁是同一物種，但只有丁獲得了人類的EPO基因13．CRISPR/Cas9是一種基因編輯技術(shù)，Cas9蛋白能與人工設(shè)計(jì)的sgRNA形成復(fù)合體（如圖）．利用該技術(shù)可以對(duì)DNA進(jìn)行一系列的定向改造。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．Cas9蛋白屬于限制酶，能切割目的基因B．sgRNA具有能與目的基因發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)的結(jié)構(gòu)C．基因編輯技術(shù)能夠定點(diǎn)插入、刪除或替換部分堿基對(duì)D．通過基因編輯技術(shù)引起的變異屬于基因重組14．《詩(shī)經(jīng)》中有“投我以木瓜，報(bào)之以瓊瑤”的詩(shī)句。番木瓜易感染番木瓜環(huán)斑病毒（英文縮寫為PRSV）而獲病。我國(guó)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，成功培育出轉(zhuǎn)基因番木瓜“華農(nóng)一號(hào)”，大致流程如圖所示。下列分析錯(cuò)誤的是（）

A．過程①稱為逆轉(zhuǎn)錄，此過程中用到的酶有逆轉(zhuǎn)錄酶等B．過程②用限制酶BamHⅠ在Ti質(zhì)粒切開一個(gè)切口暴露出兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)C．過程③將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，需先用Ca2+載體處理農(nóng)桿菌D．過程⑤產(chǎn)生的木瓜植株即使有抗PRSV基因也不一定具有抗PRSV的性狀15．現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展迅猛，改變著人類的生產(chǎn)和生活方式，成為促進(jìn)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要力量。生物技術(shù)在給人帶來福音和便利的同時(shí)，對(duì)人類社會(huì)的安全性也產(chǎn)生了一定的影響。下列有關(guān)說法正確的是（

）A．轉(zhuǎn)基因技術(shù)是提高生物多樣性的一種重要手段B．轉(zhuǎn)基因抗蟲植株可以減少農(nóng)藥的使用，因此對(duì)環(huán)境不會(huì)造成任何影響C．克隆技術(shù)如果被不當(dāng)利用將給社會(huì)造成災(zāi)難，應(yīng)禁止任何克隆研究D．轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物對(duì)于解決糧食、能源等問題具有積極作用，但也存在一定風(fēng)險(xiǎn)二、多選題16．尿素是一種高濃度氮肥，被土壤中某些細(xì)菌分解為氨后，再轉(zhuǎn)化成銨鹽、硝酸鹽等可以被植物吸收利用。某同學(xué)要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，并統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中的活菌數(shù)目，培養(yǎng)基配方如下表所示。下列有關(guān)敘述正確的是（

）成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂含量1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gA．有些細(xì)菌能分解尿素的根本原因是其能合成脲酶B．若培養(yǎng)基要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌之前進(jìn)行C．KH2PO4和Na2HPO4可維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)穩(wěn)定D．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際的活菌數(shù)目少17．如圖為腎臟上皮細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖，下列敘述正確的是（

）A．甲→乙過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理B．丙過程指細(xì)胞在添加血清的合成培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)C．丙和丁過程均會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象D．丁過程是傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，細(xì)胞都能進(jìn)行無(wú)限增殖18．哺乳動(dòng)物卵原細(xì)胞減數(shù)分裂形成成熟卵子的過程，只有在促性腺激素和精子的誘導(dǎo)下才能完成。下面為某哺乳動(dòng)物卵子及早期胚胎的形成過程示意圖（N表示染色體組）。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是（

）A．次級(jí)卵母細(xì)胞形成的過程需要激素調(diào)節(jié)B．細(xì)胞III只有在精子的作用下才能形成成熟卵子C．II、III和IV細(xì)胞分裂后期染色體數(shù)目相同D．培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物應(yīng)選擇細(xì)胞IV作為受體細(xì)胞19．OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四個(gè)基因分別編碼四種不同的酶，研究人員將這些基因分別與葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽（引導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入葉綠體）基因連接，構(gòu)建多基因表達(dá)載體（載體中部分序列如下圖所示），利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻，在水稻葉綠體內(nèi)構(gòu)建了一條新代謝途徑，提高了水稻的產(chǎn)量。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．四個(gè)基因轉(zhuǎn)錄時(shí)都以DNA的同一條單鏈為模板B．四個(gè)基因都在水稻葉綠體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄翻譯C．應(yīng)選用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的水稻細(xì)胞D．可用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測(cè)四種酶在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達(dá)情況20．SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康復(fù)后的血清中有抗S蛋白的特異性抗體。研制預(yù)防SARS病毒的疫苗簡(jiǎn)要的操作流程如下，有關(guān)敘述正確的是A．步驟①所代表的反應(yīng)過程是逆轉(zhuǎn)錄B．將大量擴(kuò)增的S基因直接導(dǎo)入大腸桿菌，也能得到表達(dá)的S蛋白C．步驟③和⑤常用的方法分別是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法D．可用抗原—抗體雜交法檢測(cè)細(xì)胞中是否真正成功表達(dá)了病毒S蛋白三、綜合題21．人誤食被金黃色葡萄球菌污染的食物后，可能出現(xiàn)腹瀉、嘔吐等癥狀。研究者嘗試用蜻蜓腸道共生菌的代謝產(chǎn)物開發(fā)新型抑菌藥物，部分實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示，圖中數(shù)字編號(hào)代表實(shí)驗(yàn)步驟。

(1)⑤步驟培養(yǎng)腸道共生菌的培養(yǎng)基配方如下表所示：藥品馬鈴薯葡萄糖X水用量200.0g20.0g20.0g1000mL①表格中的藥品X最可能是；②表格中的馬鈴薯可以提供的營(yíng)養(yǎng)成分有。(2)⑤步驟中，稀釋涂布了5個(gè)培養(yǎng)基，每個(gè)培養(yǎng)基上涂布0.1mL稀釋液，5個(gè)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)分別為8、62、75、88、95，則在③步驟的蜻蜓腸道提取液中，腸道共生菌的密度為個(gè)/mL（假設(shè)所有共生菌都能在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）。(3)為了保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，下列操作正確的有。①研磨蜻蜓腸道時(shí)加入蒸餾水，且在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行②解剖蜻蜓用的鑷子等工具，事先用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌③進(jìn)行稀釋涂布操作時(shí)，將需要用到的接種環(huán)先進(jìn)行灼燒滅菌④實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物進(jìn)行集中滅菌處理(4)接種培養(yǎng)一段時(shí)間，培養(yǎng)基上共出現(xiàn)42種蜻蜓腸道共生菌，通過提取其DNA并測(cè)序可從分子水平上將其進(jìn)行區(qū)分，其原理是。

(5)研究者分離出蜻蜓腸道菌株A，提取其代謝產(chǎn)物并用丙酮定容制成“藥液A”。欲比較“藥液A”與慶大霉素液（用無(wú)菌水配制的抗生素溶液）對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果，請(qǐng)?jiān)诒砀裰刑顚懞?jiǎn)要的實(shí)驗(yàn)步驟，完成實(shí)驗(yàn)方案（所有實(shí)驗(yàn)均在無(wú)菌環(huán)境操作）。步驟與目的操作與要點(diǎn)接種微生物在培養(yǎng)基上均勻涂布①加入藥物用無(wú)菌鑷子將分別浸過A、B、C液和無(wú)菌水的圓紙片瀝干后均勻置于上述培養(yǎng)基表面。A、B、C液分別為“藥液A”、②、③培養(yǎng)微生物將培養(yǎng)基在④℃下培養(yǎng)24小時(shí)觀測(cè)并分析結(jié)果測(cè)量⑤，記錄、比較、得出結(jié)論22．將基因型為AaBb的水稻（具有24條染色體）的葉肉細(xì)胞通過無(wú)菌操作接入含有營(yíng)養(yǎng)成分全面的培養(yǎng)基的試管中，在一定條件下培養(yǎng)形成試管幼苗，其過程如圖所示：(1)圖中水稻的葉肉細(xì)胞要經(jīng)過消毒處理后才能進(jìn)行培養(yǎng)。其中［1］過程中，細(xì)胞的分化程度會(huì)填“升高”“降低”或“不變”）。愈傷組織經(jīng)過［2］過程重新分化成根和芽的過程叫。常用的培養(yǎng)基有脫分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基的主要差異是。(2)在形成愈傷組織的過程中，細(xì)胞必須不斷地從培養(yǎng)基中獲得和小分子有機(jī)物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)如果［4］是脫毒植株，則“水稻的某種細(xì)胞”應(yīng)選用細(xì)胞，這種繁殖方式實(shí)際上是，培養(yǎng)成的植株的基因型為。(4)如果“某種細(xì)胞”選用的是花粉細(xì)胞，則［4］稱為植株，該植株的特點(diǎn)是，需用處理，使其恢復(fù)正常體細(xì)胞染色體數(shù)。23．Ⅰ型糖尿病的病因是胰島B細(xì)胞損傷，Ⅱ型糖尿病多表現(xiàn)為對(duì)胰島素不敏感，不同類型糖尿病臨床治療方案不同。抗胰島素抗體可快速檢測(cè)胰島素含量，為臨床診斷提供依據(jù)。下圖為某科研小組制備抗胰島素單克隆抗體的流程。請(qǐng)回答下列問題：(1)實(shí)驗(yàn)開始時(shí)需給實(shí)驗(yàn)小鼠多次注射，目的是。經(jīng)過免疫反應(yīng)后提取出的B淋巴細(xì)胞無(wú)法通過直接進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得大量抗體，其原因是。(2)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是（答出兩點(diǎn)）。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞中DNA合成有，D和S兩條途徑，氨基嘌呤可以阻斷D途徑而不能阻斷S途徑。在HAT培養(yǎng)基（起選擇作用的一種培養(yǎng)基）中加入氨基嘌呤后，未融合的親本細(xì)胞和同種細(xì)胞融合形成的細(xì)胞均因DNA無(wú)法復(fù)制而死亡，只有雜交瘤細(xì)胞能連續(xù)增殖。據(jù)此判斷雜交瘤細(xì)胞DNA合成存在以上的途徑。(3)陽(yáng)性克隆擴(kuò)大培養(yǎng)常用有限稀釋法，即將專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)/mL，每孔加入細(xì)胞稀釋液的體積為mL（填“0．1”、“1”或“10”），使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)目的。(4)成人隱匿性糖尿?。↙ADA）的病理進(jìn)程比較緩慢，早期表現(xiàn)酷似Ⅱ型糖尿病，后期逐漸呈現(xiàn)I型糖尿病病征，LADA的臨床診斷，除了做必要的抗體和生化指標(biāo)檢驗(yàn)外，還有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是診斷后至少六個(gè)月不需要進(jìn)行胰島素治療。據(jù)此推測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)立依據(jù)是。24．phb2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物phb2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡(jiǎn)稱phb2基因），大小為0．9kb（1kb=1000堿基對(duì)），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白。下圖1是phb2基因編碼區(qū)序列以及兩端需添加的能被相關(guān)酶識(shí)別的序列，圖2為研究所用表達(dá)載體示意圖，表格為有關(guān)的限制酶種類及識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。回答下列問題。限制酶種類SpeIPvitⅡBamHIXbaI識(shí)別序列5'A↓CTAGT3'5'CAG↓CTG3'5'G↓GATCC3'5'T↓CTAGA3'

(1)用PCR擴(kuò)增phb2基因時(shí)，為了使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，以便構(gòu)建基因表達(dá)載體，可以考慮在引物的（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可推斷，擴(kuò)增α鏈時(shí)需添加的限制酶識(shí)別序列以及所用引物的堿基序列是（寫出12個(gè)堿基并注明方向）。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時(shí)，可選用（填“E。coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。(2)構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要使用大腸桿菌蛋白基因的啟動(dòng)子tac，其原因是。(3)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編號(hào)為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（1）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖3，號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0．2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中(4)在篩選出成功導(dǎo)入phb2基因的大腸桿菌后，經(jīng)多代培養(yǎng)仍能提取出ph