膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多態(tài)性相關(guān)研究

1/1膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多態(tài)性相關(guān)研究1膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多態(tài)性相關(guān)研究膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多態(tài)性相關(guān)研究【摘要】目的探討細(xì)胞色素CYP1A1基因MSPI多態(tài)性與膀胱癌遺傳易感性的關(guān)系。

方法應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析技術(shù)，檢測(cè)44例膀胱癌患者(病例組)和85例同期住院非膀胱癌患者(對(duì)照組)，檢測(cè)CYP1A1基因MSPI多態(tài)性位點(diǎn)的3種基因型及等位基因的分布頻率。

結(jié)果在病例組CYP1A1基因MSPI位點(diǎn)基因型分布頻率為：

TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％），等位基因分布頻率為T（72．7％）、C（27．3％）；在對(duì)照組CYP1A1基因MSPI位點(diǎn)基因型的分布頻率為TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％），等位基因分布頻率為T（77．1％）、C（22．9％）。

各個(gè)基因型在兩組中所占的比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）;T、C等位基因頻率兩組比較差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。

結(jié)論CYP1A1基因MSPI位點(diǎn)多態(tài)性的單獨(dú)存在可能與本地區(qū)膀胱癌易感性無(wú)關(guān)。

【關(guān)鍵詞】膀胱腫瘤；CYP1A1；基因多態(tài)性；易感性AnalysisofthepolymorphismofCYP1A1-MSPIgeneinpatientswithbladdercancerYANGLi-xin，ZHANGHai-feng，CUIWen-peng,etal．DeptofUrology，theFirstHospital，JilinUniversity，Changchun130021,China2【Abstract】ObjectiveTodiscusstherelationshipbetweenthepolymorphismofcytochromeCYP1A1-MSPIgeneandgeneticpredispositionofbladdercancer．MethodsThedistributionfrequenceofallelicandthreegenotypeofCYP1A1-MSPIpolymorphismsiteof44patientswithbladdercancer(casegroup)and85patientswithoutbladdercancer(controlgroup)bypolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR-RFLP)weredetected．ResultsThedistributionfrequencesofgenotypeofCYP1A1-MSPIsiteofthecasegroupwereTT（54．5％）,TC（36．4％）,CC（9．1％）,andthefrequencesofallelicgenewereT（72．7％）,C（27．3％）．WhilethedistributionfrequencesofgenotypeofCYP1A1-MSPIsiteofthecontrolgroupwereTT（61．2％）,TC（31．2％）,CC（7．1％）,andtheofallelicgenewereT（77．1％）,C（22．9％）．Theratioofgenotypeineachgrouphasnosignificantdifference（P＞0．05）；thefrequenceofallelicgeneofTandCineachgroupalsohadnosignificantdifference（P＞0．05）．ConclusionTheremaybenorelationshipbetweentheindividualismofCYP1A1-MSPIsitepolymorphismandsusceptibilityofbladdercancerin3thisarea．【Keywords】Ovariantumor;CYP450;Genepolymorphism膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展與環(huán)境因素、遺傳因素及他們的相互關(guān)系等密切相關(guān)。

其中個(gè)體遺傳易感性是影響膀胱癌發(fā)病的一個(gè)重要因素[1]。

CYP1A1是細(xì)胞色素P450(CytochromeP450，CYP)家族的一名成員，是活化二惡英等環(huán)境毒素的主要酶類[2]，而酶代謝能力的差異是由基因多態(tài)性決定的。

CYP1A1基因3端非編碼區(qū)的T6235C置換產(chǎn)生一個(gè)MSPI酶切位點(diǎn)即MSPI多態(tài)性。

CYP1A1基因的單核苷酸多態(tài)性可以影響CYP1A1酶的表達(dá)量及酶的活性，Murray等[3]研究表明CYP1A1高表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生和惡性程度相關(guān)。

我們采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，分析CYP1A1基因MSPI多態(tài)性與膀胱癌遺傳易感性的關(guān)系。

1材料與方法1．1研究對(duì)象膀胱癌組44例，為吉林大學(xué)第一醫(yī)院2005年12月至2006年12月收治的患者，其中男30例，女14例。

年齡47～80歲，中位年齡66歲。

患者均為首次治療，未經(jīng)化療、放療，且無(wú)其他腫瘤病史，手術(shù)后病理診斷均為膀胱移行細(xì)胞癌。

其中I級(jí)4例,II級(jí)30例，III級(jí)10例。

85例同期住院非膀胱癌患者為對(duì)照組，對(duì)照組和膀胱癌組按4照對(duì)照設(shè)計(jì)，兩組間年齡、性別、腫瘤家族史、體質(zhì)量指數(shù)、生活環(huán)境等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1．2方法1．2．1DNA提取抽取各樣本術(shù)前清晨空腹靜脈血3ml，EDTA抗凝，將抗凝外周血取500l分裝，-80℃保存，分批按經(jīng)典酚-氯仿抽提方法提取基因組DNA。

采取紫外分光光度法將DNA稀釋至0．5g/l，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．2PCR反應(yīng)根據(jù)文獻(xiàn)[4]設(shè)計(jì)引物，其序列為:上游引物為5－TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT－3;下游引物為5－CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT－3，引物由賽百盛生物公司合成。

PCR的反應(yīng)條件:反應(yīng)總體積為25l，0．5g/lDNA模板2l，5端引物(10mol/L)0．5l，3端引物(10mol/L)0．5l，dNTPs1l，10Buffer2．5l，Taq酶0．5l，加去離子水至終體積25l。

聚合酶擴(kuò)增參數(shù):95℃預(yù)變性5min，然后95℃變性30s，58℃復(fù)性30s，72℃延伸30s，從第2步開(kāi)始35個(gè)循環(huán)后72℃延伸7min。

1．2．3CYP1A1基因MSPI多態(tài)分析擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)MSPI限制性內(nèi)切酶酶切鑒定，酶切體系為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物7l、10Buffer1l、三蒸水2l、MspI酶2U。

37℃水浴2～3h。

將酶切產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳，電腦成像系統(tǒng)成像分析。

51．2．4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS11．5軟件分析，用2檢驗(yàn)法比較膀胱癌組和正常對(duì)照組之間MSPI多態(tài)性等位基因頻率的差異。

2結(jié)果2．1CYP1A1基因擴(kuò)增產(chǎn)物MSPI酶切電泳結(jié)果PCR擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為343bp，經(jīng)過(guò)MspI酶切電泳得到3種基因型:基因型A（T/T）為343bp1條片段，基因型B（T/C）為343bp、205bp、138bp3條片段，基因型C(C/C)為205bp、138bp2條片段，不同基因型的電泳圖譜見(jiàn)圖1，其中7泳道為A基因型；1、6、9、10泳道為B基因型；2、3、4為C基因型。

2．2膀胱癌組與對(duì)照組CYP1A1基因MSPI多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率的比較CYP1A1基因MSPI多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率在膀胱癌組分別為TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％）；T（72．7％）、C（27．3％）；對(duì)照組分別為TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％）；T（77．1％）、C（22．9％）。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，6各個(gè)基因型及等位基因在兩組中所占的比例差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

兩組CYP1A1基因MSPI多態(tài)性位點(diǎn)基因型見(jiàn)表1。

3討論近年來(lái)CYP1A1酶與腫瘤的相關(guān)性日益受到重視，CYP1A1參與多環(huán)芳烴類(PAH)如苯并芘的代謝,將其氧化為酚類產(chǎn)物和環(huán)氧化物[4]。

在大鼠,PAH的致癌作用與CYP1A1的誘導(dǎo)能力高度相關(guān)[5]。

CYP1A1基因還編碼芳烴羥化酶,使雌激素代謝為兒茶酚雌激素,而后者具有致癌性[6]。

CYP1A1參與雌二醇C-2、C-6a、C-15a的羥化代謝[7]。

Murray[3]等研究表明CYP1A1高表達(dá)與膀胱癌的惡性程度相關(guān)。

但是Brookmoller[8]等對(duì)高加索人群的研究表明CYP1A1基因型與膀胱癌易感性的無(wú)關(guān)，本研究結(jié)果于Brookmoller等的結(jié)果相一致。

分析CYP1A1基因MSPI多態(tài)性與本地區(qū)膀胱癌易感性無(wú)關(guān)可能有以下幾方面原因：

①由于機(jī)體解毒系統(tǒng)本身復(fù)雜性的存在，單一解毒酶活性的改變并不能完全影響外源性物質(zhì)在體內(nèi)的全部代謝過(guò)程，另外酶的本底表達(dá)和誘導(dǎo)表達(dá)水平有顯著的個(gè)體差異[9];②酶的活性并不完全取決于基因結(jié)構(gòu)，基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和底物對(duì)酶的誘導(dǎo)活性都將對(duì)其產(chǎn)生一定的影響;③抽樣本身存在的偏差和樣本量的大小都會(huì)對(duì)研究的結(jié)果產(chǎn)生影響。

另外，疾病不是單一因素作用的結(jié)果，7因此對(duì)一種疾病應(yīng)該從各種因素綜合分析。

我們還需要加大樣本量觀察，并且進(jìn)一步研究該基因家族的其他成員的基因多態(tài)性與膀胱癌的關(guān)系，觀察基因間的協(xié)同作用，從分子水平研究疾病的原因，為臨床預(yù)防、診斷、治療提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)1MaQW，LinGF，ChenJG，etal．PolymorphismofN-acetyltransferase2(NAT2)genepolymorphisminShanghaipopulationoccupationalandnon-occupationalbladdercancerpatientgroups．BiomedEnvironSci，2004,17(3)：

281-291．2KiyoharaC，NakanishiY，InutsukeS，etal．TherelationshipbetweenCYP1A1arylhydrocarbonhydroxylaseactivityandlungcancerinaJapanesepopulation．Pharmacogenetics，1998，8：

315-323．3MurrayGI，TaylorVE，MckayJA，etal．Expressionofxenobioticmetabolizingenzymesintumorsoftheurinarybladder．IntJExpPathol，1995，76(4)：

271-276．4HadficldRM，ManckS，WccksDE，etal．LinkageandassociationstudiesoftherelationshipbetweenendometriosisandgenesencodingthedetoxificationenzymesGSTM1,GSTT1andCYP1A1．MolecularHumReport，2001，7：

1073-1078．85RannunA，AlexandrieAK，PerssonD，etal．GeneticpolymorphismofcytochromesP4501A1，2D6and2E1：

regulationandtoxicolonicalsignificance．JOEM，1995，37：

25-36．6HnherJC，SchnecbergerC，TempferCB．Geneticmodelingoftheestrogenmetabolismasariskfactorofhormonedependentdisorders．Ma-turates，2002，42(1)：

1-12．7BadlawiAF，CavalieriEL，RoganEG．RoleofhumancytochromeP45