DB53-T+1229-2024暗褐脈柄牛肝菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.0153CCSB0553云 南 省 地 方 標 準DB53/T1229—2024暗褐脈柄牛肝菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程20242024030120240601云南省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB53/T1229DB53/T1229—2024前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由景洪宏臻農(nóng)業(yè)科技有限公司提出。本文件由云南省農(nóng)業(yè)標準化技術(shù)委員會（YNTC07）歸口。本文件起草單位：景洪宏臻農(nóng)業(yè)科技有限公司。本文件主要起草人：紀開萍、曹旸、紀光燕、王秋蘭、羅順珍、高麗霞、紀光玉、晏汐蓓、陶玲。IIDB53/T1229DB53/T1229—2024DB53/T1229—DB53/T1229—20243.6栽培種cultivatedspawn暗褐脈柄牛肝菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了暗褐脈柄牛肝菌（Berk.&Broome）Boedijn）菌種的生產(chǎn)條件、工藝流程、母種制備、藥瓶液體菌種制備、發(fā)酵罐液體菌種制備、栽培種制備、記錄與檔案、標志、包裝、運輸。本文件適用于暗褐脈柄牛肝菌菌種生產(chǎn)。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB4806.7食品安全國家標準食品接觸用塑料材料及制品GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB14881食品安全國家標準食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范GB50073潔凈廠房設計規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB53/T491暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌種術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1暗褐脈柄牛肝菌phlebopusportentosus(Berk&BroomeBoedijn，商品名黑牛肝菌，隸屬于牛肝菌目Boletales、小牛肝菌科Boletinellaceae。3.2暗褐脈柄牛肝菌菌種phlebopusportentosusspawn（或3.3母種stockculture3.4搖瓶液體菌種conicalflaskliquidspawn由母種擴繁而得的，以搖瓶為培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基質(zhì)為營養(yǎng)液，具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物。3.5發(fā)酵罐液體菌種fermenterliquidspawn1生產(chǎn)條件人員人員應符合GB14881生產(chǎn)環(huán)境生產(chǎn)環(huán)境應符合NY/T528中的相關(guān)要求。設施主要設施化驗室等。設施要求設施應符合以下要求：地面應能防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，有適當?shù)呐潘露龋?.0%～1.5%）化驗室等。設施要求設施應符合以下要求：地面應能防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，有適當?shù)呐潘露龋?.0%～1.5%）和良好的排水系統(tǒng)，排水溝應是圓弧式的明溝；墻壁和天花板應能防潮、防霉、防水、易清洗；門窗應設置防蚊蠅紗網(wǎng)；入口處應設置洗手、消毒和干手、風淋等潔凈設施，并設置二次更衣；設置有排氣管道；設置與職工人數(shù)相適應的更衣室、浴室、廁所和工作休息室；GB50073搖瓶接種室、搖瓶培養(yǎng)室、發(fā)酵罐配料室、發(fā)酵罐冷卻室、發(fā)酵罐接種室、發(fā)酵罐培養(yǎng)室、栽培種冷卻室、栽培種接種室、栽培種培養(yǎng)室為萬級無菌凈化操作區(qū)域；開蓋接種重點區(qū)域局部達到無菌級百級。設備生產(chǎn)設備檢驗設備2恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡、磁力攪拌機、電子天平、pH計等。器具玻璃三角瓶容量500mL～1000mL，耐126聚丙烯塑料瓶符合GB4806.7的規(guī)定，容量1400mL～1600mL，可耐受1266cm～9cm，瓶蓋應預留通氣孔，并可夾墊海綿片或無紡布以防止培養(yǎng)期的污染。其他培養(yǎng)皿、接種鏟/針、打孔器、試管、量杯、容量瓶、玻璃漏斗、定量定性濾紙等。工藝流程母種制備NY/T528DB53/T491A。7搖瓶液體菌種制備培養(yǎng)基配制與分裝培養(yǎng)基配參見附錄A。用水符合GB5749要求，以4.5.1中的玻璃三角瓶分裝培養(yǎng)基，裝液量不超過三角瓶容量的60%。滅菌滅菌溫度121℃，滅菌時間30min。滅菌完畢后，應自然降壓，不允許強制降壓。冷卻將滅菌后的液體培養(yǎng)基放入搖瓶接種室內(nèi)超凈工作臺中進行冷卻，冷卻至20℃～25℃。接種/2～36mm～8mm瓊脂培養(yǎng)基的母種菌塊。培養(yǎng)培養(yǎng)室準備3DB53/T1229DB53/T1229—2024DB53/T1229DB53/T1229—2024表2搖瓶液體菌種理化指標8發(fā)酵罐液體菌種制備表2搖瓶液體菌種理化指標8發(fā)酵罐液體菌種制備投料前準備培養(yǎng)基制備參照附錄A中的培養(yǎng)基配方進行配制。用水應符合GB5749要求。投料定容將原材料分別用水溶解，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中。70%。清理加料口，不應有殘留的物料，擰緊上料口蓋。41.8g/L～2.2g/L新潔爾滅或75%酒精進行擦拭消毒。7.5.2培養(yǎng)方法接種后，置于恒溫回旋式振蕩器培養(yǎng)6d～7d，振蕩頻率150r/min～180r/min，培養(yǎng)溫度26～29檢查培養(yǎng)期間每天檢查，及時去除污染或異常的菌種，并應留樣用于檢驗。質(zhì)量要求培養(yǎng)結(jié)束時，搖瓶液體菌種應達到表1中的技術(shù)指標及表2中的理化指標。表1搖瓶液體菌種技術(shù)指標特征指標菌絲形態(tài)菌絲體球狀，呈淡黃色，菌球大小均勻，形狀規(guī)則，均勻懸浮分布于菌液中。菌液形態(tài)菌液黃至黃褐色，黏度大，澄清，靜置不分層。菌液氣味有類似于暗褐脈柄牛肝菌菇體的的芳香氣味，無異味，如酸、臭味等。菌絲顯微形態(tài)有大量分枝，分枝角度小于45°，菌絲纖細，有鎖狀聯(lián)合，無霉菌菌絲、酵母和細菌菌體。性質(zhì)指標終止pH值3.9～4.5菌絲干重（g/L）2～3.5發(fā)酵罐實消對投料后的發(fā)酵罐進行高壓蒸汽滅菌，蒸汽壓力0.105MPa～0.125MPa，溫度121～124min～40min。冷卻、調(diào)壓滅菌結(jié)束，將發(fā)酵罐移至冷卻室，通入無菌空氣，開啟冷水閥門采用水淋降溫，冷卻水通過下水道排出。待溫度降至260.03MP。接種按下列步驟完成接種：953min；0.01MPa；1600（v/v）；0.03MPa。培養(yǎng)接種完畢，立即進入培養(yǎng)階段，應滿足下列條件：b0.02b0.02MPa～0.05MPa；c)培養(yǎng)溫度26℃～29℃；20Hz；4d～6d34表3發(fā)酵罐液體菌種技術(shù)指標表4發(fā)酵罐液體菌種理化指標5特征指標菌球形態(tài)液中菌液形態(tài)菌液淡黃至黃褐色，透明澄清，靜置不分層。菌液氣味有類似于暗褐脈柄牛肝菌菇體的的芳香氣味，無異味，如酸、臭味等。菌絲顯微形態(tài)45°，菌絲纖細，有鎖狀聯(lián)合，菌絲內(nèi)原生質(zhì)分布均勻，無霉菌菌絲、酵母和細菌菌體。特征指標終止pH值4.2～4.6菌絲干重（g/L）1.5～3.0栽培種制備培養(yǎng)基制備參照附錄A中的培養(yǎng)基配方進行配制，用水應符合GB5749要求。裝瓶以4.5.21000g～10802cm～3cm，中間打4個孔。滅菌滅菌溫度123100min。滅菌完畢后，應自然降壓。冷卻滅菌后的菌種瓶放入冷卻室冷卻至16℃～20℃。接種在無菌級百級區(qū)域內(nèi)，使用無菌管道在0.15MPa壓力下，將發(fā)酵罐液體菌種注射接種到菌種瓶中，每瓶接入液體菌種25ml～30ml。接種完成后，應寫明接種日期、批次，送入培養(yǎng)室。培養(yǎng)26℃29℃，C1500pp～2000pp60%7028d～30d，菌絲長滿。檢查質(zhì)量要求應符合DB53/T491的規(guī)定。10記錄與檔案生產(chǎn)各個環(huán)節(jié)應填寫生產(chǎn)記錄，生產(chǎn)記錄表參見附錄B。由具體操作人員現(xiàn)場記錄填寫，由技術(shù)負責人審核，簽字后歸檔，檔案保存至少2年。11標簽、標志、包裝、運輸、貯存標簽、標志、包裝、運輸、貯存應符合DB53/T491的規(guī)定。6附錄 A（資料性）暗褐脈柄牛肝菌菌種生產(chǎn)培養(yǎng)基配方母種培養(yǎng)基配方蔗糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂1g、馬鈴薯200g（切片煮汁）、瓊脂粉10g～15g、定容至1L，pH值自然。搖瓶液體菌種培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g（切片煮汁、酵母膏2g、葡萄糖20g，定容至1L，pH值自然。蔗糖20g0.5g1g200切片煮汁（過100mm）2g、定容至1L，pH值自然。馬鈴薯200g（切片煮汁、麥麩2g、蔗糖20g、硫酸亞鐵1g、定容至1L，pH值自然。發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)基配方馬鈴薯淀粉1.5g/L2g/L0.5g/L2g/L1g/L0.25g/L，pH值4～6。馬鈴薯100g/L（切片煮汁1.5g/L2g/LC為50mg/L1g/Lg/L、消泡劑0.25g/L，pH值4～6。栽培種培養(yǎng)基配方栽培種培養(yǎng)基配方按質(zhì)量占比木屑204880.040.040.