川芎嗪對大鼠實驗性急性胰腺炎的作用

1/1川芎嗪對大鼠實驗性急性胰腺炎的作用川芎嗪對大鼠實驗性急性胰腺炎的作用作者：

王成果,馬慶久,魯建國,何顯力,王青,杜錫林【關(guān)鍵詞】胰腺炎；,血小板活化因子；,川芎嗪；,腫瘤壞死因子；,白細(xì)胞介素Therapeuticeffectoftetramethylpyrazineforexperimentalacutepancreatitisinrats【Abstract】AIM:Tostudytheeffectoftetramethylpyrazine(TMP)oninflammatorymediatorsduringacutepancreatitis(AP)inrats.METHODS:Atotalof96SDmaleratsweighing280-320gwererandomizedinto3groups:controlgroup(n=24),APgroup(n=36)andTMPgroup(n=36).ThemodelsofAPinthelatter2groupswereestablishedbytheinjectionof35g/Lsodiumtaurocholateipintotherats.Theanimalsinthe3groupswerekilled3,6,12and24hafteroperationtotesttheserumlevelsofplateletactivatingfactor(PAF),TNFandIL6indifferentphases.RESULTS:TheserumlevelsofPAF,TNFandIL6ofAPgroupsignificantlyincreased(Plt;0.01),andtheserumlevelofTNFgottoapeakat6handtheserumIL6reachedthehighestlevelat12hafteroperation(Plt;0.01vscontrolgroup).AfterTMPwasusedinAPrats,theserumlevelsofPAF,TNFandIL6weresignificantlydecreased(Plt;0.05).CONCLUSION:TMPcaninhibitinflammatorymediatorsandrelievethedamagesofthepancreasorlunginAPrats.【Keywords】pancreatitis;plateletactivatingfactor;tetramethylpyrazine;tumornecrosisfactor;IL6【摘要】目的：

研究川芎嗪(TMP)對急性胰腺炎（AP）炎癥介質(zhì)的影響及其治療作用.方法:雄性SD大鼠96只，體質(zhì)量280～320g，隨機(jī)分為對照組(n=24)，AP組(n=36)和TMP治療組(n=36).其中，AP組和TMP治療組均利用大鼠AP模型，該模型采用ip35g/L?；悄懰徕c方法建立，每組造模后又按3，6，12和24h分為4個時間點(diǎn).分別在3個組的不同時間點(diǎn)抽血，檢測血清中血小板活化因子(PAF),TNF,IL6等水平的變化并進(jìn)行分析.結(jié)果:AP組各時段血清PAF，TNF，IL6升高，其中PAF在各時段持續(xù)升高，TNF在6h時達(dá)高峰，而IL6在12h達(dá)高峰，與對照組各個時段比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)；用藥后TMP治療組在3，6，12和24h4個時間點(diǎn)血清PAF，TNF，IL6的水平都可降低(Plt;0.05).結(jié)論:TMP可抑制炎癥介質(zhì)，明顯減輕胰腺/肺組織病理損害.【關(guān)鍵詞】胰腺炎；血小板活化因子；川芎嗪；腫瘤壞死因子；白細(xì)胞介素60引言川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)化學(xué)名為四甲基吡嗪，系從傘科蒿本植物川芎中分離提純的一種生物堿單體，具有行氣活血、散風(fēng)止痛之功效，藥理研究證實，TMP可抑制巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生TNF,IL6,IL8等炎性細(xì)胞因子和炎性遞質(zhì)等，阻止免疫復(fù)合物形成［1］.而急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)是一種并發(fā)癥多、病死率高的嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，有多種因素和炎性因子參與，一些細(xì)胞因子及炎性遞質(zhì)在AP的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［2-4］.我們研究TMP對急性胰腺炎合并肺損傷大鼠炎癥介質(zhì)血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF),TNF,IL6的影響,為該藥在臨床上治療AP提供理論和實驗依據(jù).1材料和方法1.1材料雄性SD大鼠96只,體質(zhì)量180～320g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供；動物實驗前禁食12h,自由進(jìn)水.注射用TMP購自北京第五制藥廠；?；悄懰徕c，PAF標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma公司；過氧化物酶檢測試劑盒購自南京建成生物公司；大鼠IL6ELISA試劑盒，TNFELISA試劑盒購自武漢博士德公司.1.2方法隨機(jī)96只大鼠分為3組，對照組(n=24),AP組(n=36)和TMP治療組(n=36).對照組大鼠術(shù)前12h禁飲食,采用氯胺酮1.5mL/kgip麻醉,仰臥固定,剪毛后常規(guī)消毒、鋪巾，腹正中開腹，輕微刺激胰膽管后,關(guān)腹;AP組大鼠采用文獻(xiàn)［5］的方法制備AP模型;TMP組大鼠造模后立即腹腔內(nèi)注射TMP,注射量為80mg/g，用生理鹽水稀釋成25mL/L的TMP溶液.對照組及AP組均于術(shù)后腹腔內(nèi)注射等量的生理鹽水.每組建模后又按3，6，12和24h分為4個時間點(diǎn).3組大鼠分別在術(shù)后3，6，12和24h麻醉后開腹，經(jīng)下腔靜脈抽血4～8mL,不加抗凝劑,凝血后離心3000r/min，18℃，10min，取血清1.5～3mL,-8℃保存,留待進(jìn)行生物法檢測PAF.ELISA檢測TNF和IL6,全自動生化儀檢測血清淀粉酶.同步取胰腺組織和肺組織,部分制成組織勻漿,測定過氧化物酶的活性，部分用Bouin液固定，石蠟包埋、切片,HE染色，光鏡下觀察胰腺及肺的炎癥病理變化.統(tǒng)計學(xué)處理：

采用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以xs表示；組間比較用非參數(shù)秩和檢驗,Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2.1血清淀粉酶活性AP組血清淀粉酶顯著升高,到12h達(dá)高峰，與對照組相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)；TMP治療組與AP組各時相段比較血清淀粉酶降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但仍高于對照組各時相段(Plt;0.05,表1).表1AP大鼠血清淀粉酶濃度的變化(略)2.2胰肺組織過氧化物酶活性對照組各時段胰腺及肺組織過氧化物酶活性相比較無統(tǒng)計學(xué)差異(Pgt;0.05);注射35g/L?；悄懰岷螅珹P組，TMP治療組胰腺肺組織過氧化物酶活性升高，到12h時達(dá)高峰，與對照組相比較有差異統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)；給藥后3,6,12和24h時，TMP治療組與AP組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05，表2).表2AP大鼠胰腺及肺組織過氧化物酶活性的變化(略)2.3血清PAF,TNF,IL6變化AP組各時段血清PAF，TNF,IL6升高，其中PAF持續(xù)升高，TNF在6h時達(dá)高峰，而IL6在12h達(dá)高峰，與對照組各時段比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)；TMP治療組與AP組給藥后各時段比較，血清PAF，TNF，IL6水平的降低程度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05,表3).表3血清中PAF,TNF,IL6水平變化(略)2.4胰肺病理組織學(xué)結(jié)果顯示對照組大鼠胰腺/肺組織未見明顯病理改變.AP組3h后胰腺水腫加重，于12h達(dá)高峰，腺泡呈孤島樣分布，片狀出血壞死，大量多核粒細(xì)胞浸潤；6，12h肺以多核粒細(xì)胞增多為主，肺泡間隔增厚，可見少量紅色蛋白滲出物，并可見肺泡壁破裂，肺間質(zhì)充血、水腫、明顯增寬，肺泡和肺間質(zhì)中有大量的中性粒細(xì)胞浸潤.使用TMP治療后，可顯著減輕胰腺/肺組織的病理損害，紅細(xì)胞浸出和炎性細(xì)胞浸潤減少，水腫、出血、壞死減輕，表現(xiàn)為點(diǎn)狀壞死.3討論AP的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，早期胰腺細(xì)胞損傷可導(dǎo)致局部的炎癥反應(yīng)，隨著疾病進(jìn)展，全身炎癥反應(yīng)綜合征嚴(yán)重時可出現(xiàn)多臟器功能不全甚至多臟器功能的衰竭，病死率很高［6-7］.胰腺損傷后,除傳統(tǒng)的胰酶在胰腺內(nèi)被激活，引起自身消化外，多項研究發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡釋放多種受激活的胰酶及炎癥細(xì)胞因子，有多種細(xì)胞的過度激活和相互作用，產(chǎn)生氧自由基和炎癥介質(zhì)引起胰腺的血管通透性增加，最后導(dǎo)致胰腺炎的發(fā)生.藥理研究證實，TMP能有效地抑制組織缺血時血小板聚集和活性，故能擴(kuò)張外周血管,改善微循環(huán),降低血液粘稠度，改善血流變，增加臟器微循環(huán)的血流［4］.最新的研究還發(fā)現(xiàn)［4］，TMP可抑制巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生TNF，IL6，IL8等炎性細(xì)胞因子和炎性遞質(zhì)等，阻止免疫復(fù)合物形成,抑制病菌生長.本研究結(jié)果顯示,注射?；悄懰徕c后，AP組各時段血清PAF，TNF，IL6升高，其中PAF持續(xù)升高TNF在6h時達(dá)高峰，而IL6在12h達(dá)高峰與對照組各時段比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)，說明胰腺損傷后胰腺腺泡產(chǎn)生氧自由基和炎癥介質(zhì)引起胰腺的血管通透性增加，最后導(dǎo)致了胰腺炎的發(fā)生和進(jìn)展；用藥后TMP治療組與AP組相應(yīng)時段比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)，說明TMP能夠抑制血清PAF，TNF，IL6等多種氧自由基和炎癥介質(zhì)的水平，減輕胰腺的病理損害.我們的研究結(jié)果提示，TMP可以通過減輕炎性因子變化阻止病變的繼續(xù)發(fā)展，為該藥在臨床上治療AP提供了理論和實驗依據(jù)，對TMP在AP臨床治療具有一定的積極意義.但是,TMP減輕AP時炎性因子變化的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究探討.【參考文獻(xiàn)】［1］都本敏,荊進(jìn)紅.川芎嗪的臨床應(yīng)用［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,15(10):1398-1399.［2］KomatsuK,ShimosegawaT,UchiM,etal.Erythropoieticprotoporphyriawithsevereliverdysfunctionandacutepancreatitis［J］.JGastroenterol,2000,35（5）:391-395.［3］史學(xué)深,方馳華,朱明德,等.重癥急性胰腺炎大鼠DDFA對肺損傷細(xì)胞凋亡及Bax,Bcl2表表達(dá)的影響［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2006,27(12):1093-1096.［4］AbuZidanFM,BonhamMJ,WindsorJA.Severityofacutepancreatitis:Amultivariate