異常血紅蛋白病診斷

第第頁異常血紅蛋白病診斷……

（一）病史及癥狀:

⑴病史提問：注意：①父母及家族中有無同樣病人。②發(fā)病的年齡。③生長(zhǎng)發(fā)育狀況。

⑵臨床癥狀：一般貧血癥狀、納差、發(fā)育遲緩、可有腹瀉及易感染表現(xiàn)。

（二）體檢發(fā)現(xiàn)

除貧血外貌外，可有輕度黃疸，顴骨隆起、鼻梁塌陷及眼距增寬，心律不齊、心濁音界擴(kuò)大，肝臟、脾臟腫大。

（三）輔助檢查

1.血象：血紅蛋白多60g/l，呈小細(xì)胞低色素性貧血，紅細(xì)胞大小形態(tài)不一，靶形紅細(xì)胞多10％，可見紅細(xì)胞碎片。網(wǎng)織紅細(xì)胞增多。紅細(xì)胞內(nèi)有包涵體。白細(xì)胞及血小板正?；驕p少。

2.骨髓象：增生活躍，紅細(xì)胞系增生明顯。細(xì)胞外鐵及鐵粒幼細(xì)胞增多。

3.血紅蛋白電泳：血紅蛋白f30％（重型β－珠蛋白生成障礙）。血紅蛋白bart80％（血紅蛋白bart胎兒水腫綜合征）；電泳出現(xiàn)血紅蛋白h區(qū)帶（血紅蛋白h病）。

4.有條件做α、β珠蛋白肽鏈合成比率和基因分析。

（四）鑒別診斷

應(yīng)于缺鐵性貧血及其它血紅蛋白病鑒別。

（五）異常血紅蛋白病的基因診斷

異常血紅蛋白病是由于珠蛋白基因的突變異致珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生異常的一類血紅蛋白分子病，其中珠蛋白基因的突變包括：?jiǎn)蝹€(gè)堿基替代，密碼子的缺失與插入，移碼突變，終止密碼突變，融合突變(編碼兩條不同肽鏈的基因發(fā)生重排而形成融合基因)?？赏ㄟ^DNA檢測(cè)分析和RNA檢測(cè)分析進(jìn)行診斷。

1．DNA檢測(cè)與分析如HbDPunjab是我國(guó)常見的一種異常血紅蛋白??；它是由血紅蛋白b鏈第121位密碼子由GAA(谷氨酸)突變?yōu)镃AA(谷氨酰胺)所致。該突變同時(shí)使限制酶EcoRI位點(diǎn)消失(GAATTC?CAATTC)，應(yīng)用PCR技術(shù)結(jié)合限制酶酶譜分析即可快速、簡(jiǎn)便地鑒定該疾病。具體方法是擴(kuò)增b珠蛋白基因第3個(gè)外顯子的大部分和基因3￠端的DNA序列，共長(zhǎng)144bp，用EcoRI消化后，在電泳凝膠上可以觀察到40bp和104bp兩個(gè)片段，然而在HbDPunjab雜合子，擴(kuò)增DNA經(jīng)EcoRI消化后就同時(shí)具有144bp和104+40bp兩種類型。

又如鐮刀形紅細(xì)胞性貧血癥是由于b珠蛋白基因的第6位密碼于由GAA突變?yōu)镚UA，導(dǎo)致HbS的b鏈第6位的谷氨酸被纈氨酸替代。鐮刀形紅細(xì)胞性貧血癥的基因診斷可采用：①PCR/限制酶譜分析法，擴(kuò)增的294bpb珠蛋白基因片段不能被OxaNI酶切，電泳圖僅見294bp片段。正常人的擴(kuò)增片段，可被該酶切成191bp和103bp兩個(gè)片段。②合成特異的寡核苷酸探針進(jìn)行Southern印跡雜交分析。

2．RNA檢測(cè)與分析直接測(cè)定異常血紅蛋白病人珠蛋白mRNA的RT-PCR產(chǎn)物序列，可準(zhǔn)確鑒定出基因編碼區(qū)的堿基變化，進(jìn)而推導(dǎo)出胎鏈中相應(yīng)氨基