DB61T1521.8-2021奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范 第8部分：奶山羊胚胎移植

ICS65.020.30

CCSB43

DB61

陜西省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB61/T1521.8—2021

奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范第8部分：胚胎移植

TechnicalSpecificationsforDairyGoatFarming—

Part8:Embryotransferofdairygoat

2021-12-17發(fā)布2022-01-17實(shí)施

陜西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB61/T1521.8—2021

目??次

前言.....................................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語和定義.....................................................................................................................................................1

4供體羊選擇與飼養(yǎng)管理.................................................................................................................................1

5供體羊超數(shù)排卵和人工授精.........................................................................................................................2

6胚胎的采集.....................................................................................................................................................2

7胚胎冷凍保存及解凍.....................................................................................................................................3

8受體羊選擇與飼養(yǎng)管理.................................................................................................................................4

9奶山羊胚胎移植.............................................................................................................................................4

10妊娠羊飼養(yǎng)管理...........................................................................................................................................4

附錄A（規(guī)范性）胚胎冷凍保存和解凍.......................................................................................................5

附錄B（規(guī)范性）奶山羊胚胎移植程序.......................................................................................................7

I

DB61/T1521.8—2021

前??言

DB61/T1521《奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范》分為如下部分：

——第1部分：關(guān)中奶山羊良種鑒定；

——第2部分：引進(jìn)奶山羊良種鑒定；

——第3部分：雙基因良種選育；

——第4部分：種公羊飼養(yǎng)管理；

——第5部分：后備羊培育；

——第6部分：泌乳奶山羊健康養(yǎng)殖；

——第7部分：人工授精；

——第8部分：胚胎移植；

——第9部分：苜蓿半干青貯；

——第10部分：疫病防控；

——第11部分：機(jī)器擠奶。

本部分為DB61/T1521的第8部分。

本文件根據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則

起草。

本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)提出。

本部分由陜西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。

本部分起草單位：西北農(nóng)林科技大學(xué)、楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院、陜西關(guān)中奶山羊產(chǎn)業(yè)研究院、陜西省奶

山羊養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心、陜西省羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新與產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略聯(lián)盟、隴縣畜產(chǎn)局、三原縣動物疫

病預(yù)防控制中心。

本部分主要起草人：付明哲、侯金星、安小鵬、李廣、雷安民、趙曉娥、田秀娥、陳小強(qiáng)、曹斌云、

閆柏平、張磊、楊少華、吳雙虎。

本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)負(fù)責(zé)解釋。

本部分首次發(fā)布。

聯(lián)系信息如下：

單位：西北農(nóng)林科技大學(xué)

電話/p>

地址：陜西楊凌示范區(qū)西農(nóng)路22號

郵編：712100

II

DB61/T1521.8—2021

奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范第8部分：胚胎移植

1范圍

本部分規(guī)定了奶山羊胚胎移植供體羊選擇與飼養(yǎng)管理，供體羊超數(shù)排卵和人工授精，胚胎的采集、

冷凍保存及解凍，受體羊選擇與飼養(yǎng)管理，奶山羊胚胎移植，妊辰羊飼養(yǎng)與管理的要求和方法。

本部分適應(yīng)于奶山羊胚胎移植、胚胎冷凍保存等。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB20557山羊冷凍精液

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本部分。

3.1

奶山羊胚胎移植embryotransferofdairygoat

將通過體內(nèi)或體外受精及其他方式得到的奶山羊早期胚胎，移植到處于相似生理狀態(tài)的母羊體內(nèi)，

使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的方法。

3.2

供體donor

提供胚胎的母羊。

3.3

受體receptor

接受胚胎的母羊。

A

4供體羊選擇與飼養(yǎng)管理

4.1供體羊的選擇

品種優(yōu)良，系譜清楚，遺傳性能穩(wěn)定，生產(chǎn)性能突出；體質(zhì)健康，無傳染性疾病，繁殖機(jī)能正常；

體重60kg，泌乳期產(chǎn)奶量超過800kg，經(jīng)產(chǎn)1胎～3胎，產(chǎn)后90d以上的母羊作為供體。

4.2供體羊飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，舍內(nèi)溫度控制在10℃～26℃，圈舍衛(wèi)生、干燥。根據(jù)膘情調(diào)整飼料配方，保持中

等以上膘情。

1

DB61/T1521.8—2021

5供體羊超數(shù)排卵和人工授精

5.1超數(shù)排卵

5.1.1超數(shù)排卵所用激素

在奶山羊繁殖最佳季節(jié)進(jìn)行超數(shù)排卵，一般為9月～11月。選用進(jìn)口或國產(chǎn)的垂體促卵泡激素(FSH)，

氯前列烯醇(pGF2α類似物)，促黃體素釋放激素A3（LHRH-A3），用于超數(shù)排卵。

5.1.2激素劑量

按照產(chǎn)品說明使用。

5.1.3超排程序

第0天供體母羊陰道內(nèi)放置羊用硅膠陰道栓，同時(shí)肌肉注射氯前列烯醇，第16天肌肉注射FSH，每

天早晚間隔12h注射1次FSH，連續(xù)3d～4d，劑量依次遞減。在最后1次注射FSH的同時(shí)，肌肉注射氯前

列烯醇，撤除陰道栓觀察發(fā)情，同時(shí)注射促黃體素釋放激素A3；未按時(shí)發(fā)情羊注射FSH，PGF2α，促使

發(fā)情。

5.1.4供體羊發(fā)情鑒定

在撤除陰道栓后的12h～72h，對超排供體羊進(jìn)行發(fā)情觀察，以接受公羊爬跨作為配種起始時(shí)間。

5.2配種

5.2.1供體羊選擇

在公羊充足的情況下，供體羊宜選擇本交進(jìn)行配種。公羊不足時(shí)，供體羊可采用常規(guī)人工授精輸精。

5.2.2本交

供體羊每8h交配一次，直至發(fā)情結(jié)束。

5.2.3常規(guī)人工授精

輸精器械保持清潔無菌，并對母羊外陰清洗消毒。利用鮮精人工授精時(shí)，每次輸入的有效精子數(shù)不

低于1.0×108個(gè)，注入精液0.5mL。每間隔8h輸精一次，直到停止發(fā)情為止，適宜輸精次數(shù)為3次～5次。

5.2.4腹腔鏡子宮輸精

5.2.4.1利用鮮精輸精時(shí)，可在供體羊撤栓后的36h～48h進(jìn)行，借助腹腔鏡觀察母羊子宮、卵巢、

卵泡發(fā)育情況，用腹腔輸精槍在兩側(cè)子宮角大彎處各輸精1次，注入精液0.1mL～0.2mL，有效精子數(shù)

不低0.5×108個(gè)。

5.2.4.2利用凍精輸精時(shí)，可在供體羊撤栓后的30h～36h進(jìn)行，用腹腔輸精槍分別輸精2次，注入

精液0.2mL，有效精子數(shù)不低3.5×107個(gè)，間隔8h～12h再輸精一次。

2

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6胚胎的采集

6.1藥品、試劑器械

6.1.1器材

手術(shù)臺、剃毛刀、創(chuàng)布、止血紗布、剪毛剪、手術(shù)刀柄、手術(shù)剪、止血鉗、巾帕鉗、持針器、腸鉗

(帶乳膠管）、手術(shù)刀片、縫合針、鑷子、表面皿（120mm）、頭皮針（尖端磨鈍）、硅膠管雙路通管

（8mm）、螺旋回收針、注射器（10mL，20mL）、玻璃管（8mm）和培養(yǎng)皿（5mm）等。

6.1.2沖胚所需藥品

杜氏磷酸鹽緩沖液(PBS)、胚胎培養(yǎng)液、75%酒精、碘伏、新潔爾滅、0.9%生理鹽水、獸用麻醉藥

和解麻藥等。

6.2供體羊胚胎采集

6.2.1麻醉與保定

供體羊首次配種后的第5天空腹24h進(jìn)行麻醉，仰臥保定。選擇鼠蹊部作為手術(shù)部位并剃毛（20

cm×20cm）。

6.2.2胚胎采集

6.2.2.1術(shù)部清洗消毒后，固定創(chuàng)巾。避開乳房和大血管，縱向切開皮膚3cm～5cm長的創(chuàng)口，分離

結(jié)締組織、肌肉層和腹膜，輕輕拉出子宮和卵巢，觀察和記錄兩側(cè)卵巢黃體和卵泡數(shù)。

6.2.2.2從雙側(cè)子宮角回收胚胎。胚胎回收時(shí)可用長柄腸鉗（齒槽外套乳膠管）夾于子宮角基部，將

子宮角胚胎回收專用管頭端植入子宮腔內(nèi)，尾端貼于集胚杯的內(nèi)壁，拉直宮管結(jié)合部，用連有12號針

頭的注射器吸取30mL專用沖胚液，刺入宮管結(jié)合部進(jìn)行沖胚，將含有胚胎的沖胚液回收到專用集胚

杯內(nèi)。

6.2.3胚胎收集

6.2.3.1胚胎檢測無菌室的室溫20℃～25℃，采用體式顯微鏡在集胚杯中仔細(xì)查找并收集胚胎。

6.2.3.2將檢出的胚胎收集到盛有保存液的培養(yǎng)皿中。

6.2.3.3檢出后的胚胎用保存液沖洗3次～4次后再進(jìn)行質(zhì)量鑒定。

6.2.4胚胎質(zhì)量鑒定

6.2.4.1根據(jù)卵裂球的發(fā)育質(zhì)量和整個(gè)胚胎的形態(tài)結(jié)構(gòu)，可將胚胎分為A、B、C、D四個(gè)等級：

a)A級：胚胎發(fā)育階段與胚齡相吻合，透明帶完整，卵裂球均勻緊湊，輪廓清楚，透明度好，飽

和充盈于透明帶內(nèi)，整個(gè)胚胎呈球形；

b)B級：胚胎發(fā)育階段與胚齡相符，卵裂球均勻緊湊，透明度好，無畸形；

c)C級：胚胎發(fā)育階段與胚齡相符，透明帶畸形或部分缺失，卵裂球輪廓不清楚，細(xì)胞分散，色

澤過暗或過淡；

d)D級：胚胎發(fā)育階段與胚齡相符，卵裂球已分散開或細(xì)胞已破裂，失去了繼續(xù)發(fā)育的潛力。

6.2.4.2A、B級胚胎可用于冷凍保存；A、B、C級胚胎可用于鮮胚移植；D級為不可用于胚胎移植。

3

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6.2.5創(chuàng)口處理

用37℃的生理鹽水將子宮及卵巢沖洗干凈以后送入腹腔，給腹腔注入適量抗菌素預(yù)防感染。創(chuàng)口

采用兩層縫合法縫合，其中腹膜連同肌肉進(jìn)行縫合,皮膚進(jìn)行節(jié)結(jié)縫合，針孔間距1cm。

7胚胎冷凍保存及解凍

胚胎冷凍保存及解凍按附錄A進(jìn)行。

8受體羊選擇與飼養(yǎng)管理

8.1受體羊的選擇

選擇健康、體況中等偏上，年齡在2胎～4胎的中低產(chǎn)經(jīng)產(chǎn)奶山羊（產(chǎn)后90d以上）作為受體羊。

嚴(yán)禁用患有子宮、卵巢、乳房疾病及發(fā)情周期不正常個(gè)體作為受體羊。

8.2受體羊的飼養(yǎng)管理

受體羊統(tǒng)一打號、建檔，保持飼養(yǎng)管理穩(wěn)定，避免各種應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)做好預(yù)防注射和驅(qū)蟲工作。

常規(guī)飼養(yǎng)管理，保持中等以上體況，嚴(yán)禁與公羊混群飼養(yǎng)。

9奶山羊胚胎移植

9.1受體羊同期發(fā)情處理

見附錄B表B.1。

9.2受體羊發(fā)情鑒定

從撤除陰道栓后的12h～36h開始，觀察受體羊發(fā)情情況，每6h記錄發(fā)情1次。

9.3胚胎移植

9.3.1移植時(shí)間

受體羊在發(fā)情后5d～6d之間進(jìn)行胚胎移植。

9.3.2移植方法

9.3.2.1術(shù)前禁食24h、禁水12h后麻醉。

9.3.2.2術(shù)前母羊仰臥保定在專用手術(shù)架。

9.3.2.3在乳房基部前方沿腹中線向前及兩側(cè)區(qū)域處進(jìn)行剃毛（12cm×12cm），術(shù)部清洗消毒后，固

定手術(shù)創(chuàng)巾。

9.3.2.4用套管針在腹中線兩側(cè)分別刺入腹腔開孔，將腹腔鏡經(jīng)套管插入腹腔右孔，通過腹腔鏡觀察

受體羊的卵巢、黃體發(fā)育情況，將黃體發(fā)育好的一側(cè)子宮角輕輕拉出腹腔，在子宮角前端的1/3處避開

血管扎孔，將裝有胚胎的移植針從此針眼進(jìn)入子宮腔注入胚胎，子宮送入腹腔，縫合創(chuàng)口。

9.3.2.5術(shù)后護(hù)理，無感染羊一周后拆線，感染羊進(jìn)行外科消毒處理。

9.3.2.6妊娠診斷，術(shù)后受體羊45d～60d采用B超進(jìn)行懷孕診斷。

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10妊娠羊飼養(yǎng)管理

嚴(yán)禁飼喂發(fā)霉變質(zhì)飼料和冰凍飼料，注意防寒保暖，減少應(yīng)激，同時(shí)做好布病和衣原體病的檢測及

凈化工作，防止流產(chǎn)。

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BA

附錄A

（規(guī)范性）

胚胎冷凍保存和解凍

A.1胚胎的冷凍保存

A.1.1儀器、器械

實(shí)體顯微鏡、胚胎冷凍儀、吸胚管、0.25ml麥管、麥管塞、裝管器、細(xì)菌濾器(0.22μm針頭式)、培

養(yǎng)皿等。

A.1.2溶液

保存液：含有0.4%牛血清蛋白的PBS。10%甘油冷凍液：用保存液配制成10%甘油冷凍液。1.5mol/L

乙二醇冷凍液：用保存液配制含1.5mol/L乙二醇和0.1mol/L蔗糖的冷凍保護(hù)液。

A.1.3甘油胚胎冷凍法

A.1.3.1冷凍方法

第一步，胚胎在保存液中清洗5次～10次后移入1/310%甘油冷凍液再加入2/3保存液平衡5min～

7min；

第二步，胚胎移入2/310%甘油冷凍液再加入1/3保存液平衡5min～7min；

第三步，胚胎移入10%甘油冷凍液平衡5min～7min。

A.1.3.2冷凍程序

胚胎經(jīng)三步預(yù)處理后裝入細(xì)管(在10min～20min內(nèi)完成)，然后放入胚胎冷凍儀中冷凍。

冷凍程序：以1℃/min速率降溫，在-6℃～-7℃下平衡5min，在-7℃～-7.5℃下平衡10min，以

0.3℃/min速率降溫，在-36℃～-38℃下平衡10min；最后浸入液氮中保存。

A.1.4乙二醇胚胎冷凍法

A.1.4.1冷凍方法

胚胎在保存液沖洗5次～10次，然后將胚胎轉(zhuǎn)移到含有0.5mol/L、1.0mol/L乙二醇冷凍液中各平

衡5min，轉(zhuǎn)入1.5moL/L乙二醇冷凍液常溫條件下平衡15min?20min，并將胚胎裝入細(xì)管(在10min～

20min內(nèi)完成)，然后放入胚胎冷凍儀中進(jìn)行冷凍。

A.1.4.2冷凍程序

按照A.1.3.2甘油胚胎冷凍法進(jìn)行胚胎冷凍。

A.2胚胎的解凍

A.2.1器械

實(shí)體顯微鏡、溫度計(jì)、解凍用水杯、0.25mL麥管、吸卵管、細(xì)管推桿、裝管器、細(xì)菌濾器(0.22m

針頭式)、4個(gè)100mm塑料培養(yǎng)皿。

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DB61/T1521.8—2021

A.2.2溶液

A.2.2.1冷凍液：含10%甘油的保存液、1.5mol/L乙二醇的保存液。

A.2.2.2解凍液：用保存液配制的含1mol/L蔗糖溶液。

A.2.2.3保存液：含有0.4%牛血清蛋白的PBS液。

A.2.3胚胎解凍方法

A.2.3.1胚胎從液氮中取出在空氣中停留10s，在30℃水浴中解凍1min，擦干細(xì)管、剪去管塞，推出

胚胎，然后進(jìn)行三步脫甘油或乙二醇操作。

A.2.3.2冷凍胚胎在1/3解凍液,2/3冷凍液中平衡5min～7min；

A.2.3.3冷凍胚胎在1/3解凍液,1/3冷凍液,1/3保存液中平衡5～7min；

A.2.3.4冷凍胚胎在1/3解凍液,2/3保存液中平衡5min～7min，最后保存液洗2次～3次，轉(zhuǎn)移到顯

微鏡下進(jìn)行鑒定。

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CB

附錄B

（規(guī)范性）

奶山羊胚胎移植程序

B.1奶山羊胚胎移植移程序

奶山羊胚胎移植程序見表B.1。

表B.1奶山羊胚胎移植移程序

處理時(shí)間供體處理方法處理時(shí)間受體處理方法

第0d8:00肌注PGF2α，放置硅膠栓第0d肌注PGF2α，放硅膠栓

第12d8:00肌注FSH；換栓。

第12d20:00肌注FSH。

第13d8:00肌注FSH。

第13d20:00肌注FSH。第13d7:00肌注PMSG

第14d8:00肌注FSH。撤栓，肌注PGF2α,

第14d20:00

第14d20:00肌注FSH。

肌注FSH，

第15d8:00第15d

肌注PGF2α，供體撤栓。

首次發(fā)情后肌注LHRH-3；配種；不發(fā)情羊肌注受體早晚試情，

第15d20:00第15d

PGF2α、FSH。標(biāo)記，分圈。

16d16d

17d17d受體早上、晚上試情

供體分別在早上,中午，晚上進(jìn)行配種。

18d18d標(biāo)記，分圈。

19d19d

術(shù)前24h停食乳房基部正前方，腹中

20d手術(shù)前24h停食鼠蹊部剃毛20d

線兩側(cè)剃毛。

21d手術(shù)沖胚21d移植，放栓。

28d7d后拆線。28d7d后拆線。

_______________________________

8

DB61/T1521.8—2021

目??次

前言.....................................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語和定義.....................................................................................................................................................1

4供體羊選擇與飼養(yǎng)管理.................................................................................................................................1

5供體羊超數(shù)排卵和人工授精.........................................................................................................................2

6胚胎的采集.....................................................................................................................................................2

7胚胎冷凍保存及解凍.....................................................................................................................................3

8受體羊選擇與飼養(yǎng)管理.................................................................................................................................4

9奶山羊胚胎移植.............................................................................................................................................4

10妊娠羊飼養(yǎng)管理...........................................................................................................................................4

附錄A（規(guī)范性）胚胎冷凍保存和解凍.......................................................................................................5

附錄B（規(guī)范性）奶山羊胚胎移植程序.......................................................................................................7

I

DB61/T1521.8—2021

前??言

DB61/T1521《奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范》分為如下部分：

——第1部分：關(guān)中奶山羊良種鑒定；

——第2部分：引進(jìn)