TCMWA 002-2024 生長分化因子15 檢測試劑（盒）熒光免疫分析法

ICS11.020CCSC05中國女醫(yī)師協(xié)會發(fā)布2 3 4 52規(guī)范性引用文件 3技術(shù)要求 54試驗方法 65標識、標簽和使用說明書 96包裝、運輸和貯存 參考文獻 113本標準按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本標準由中國人民解放軍總醫(yī)院提出。本標準由中國女醫(yī)師學會歸口。本標準起草單位：中國人民解放軍總醫(yī)院。本標準主要起草人：朱海燕、馬唯一。4生長分化因子15（growthdifferentiationfactor15，GDF15）屬生長分化因子（GDFs）家族，是轉(zhuǎn)化生長因子?β（transforminggrowthfactorβ,TGF-β)超家族成員之一。研究顯示，人GDF15基因序列位于19p13.1-13.2，包含924個堿基對，由2個外顯子和1個內(nèi)含子構(gòu)成，并被其內(nèi)含子分隔開來[1]。GDF15其前原蛋白為一個約40kD前肽單體，GDF15的基因首先轉(zhuǎn)錄翻譯成308個氨基酸殘基的多肽，N端含有由112個氨基酸組成的疏水性信號肽，中間為保守的蛋白酶水解位點，C端含有保守的胱氨酸結(jié)構(gòu)域，最終形成包含224個氨基酸殘基的GDF15成熟蛋白，屬于分泌型蛋白，與其他的TGF-β超家族成員相比，成熟GDF15的分泌不需要前肽[2]，且在血漿和血清中的含量不受包括白蛋白、膽紅素或者是血紅蛋白的影響且更加穩(wěn)定，使其方便用于臨床檢測。2002年，Brown等的研究結(jié)果提示GDF15的血漿水平與女性的冠狀動脈粥樣硬化有關(guān)，由此開始出現(xiàn)一系列GDF15與心血管疾病之間的聯(lián)系的研究[3]。GDF15是一種能夠反映心血管功能和疾病的獨立炎癥生化標志物，也是新型應激生物學指標，與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。一般情況下GDF15僅在胎盤和前列腺中高表達，而在心臟、其他器官、組織中表達量很少，但在妊娠、神經(jīng)元損傷及骨骼肌發(fā)育異常等多種疾病狀態(tài)下增高，并且還參與心血管疾病的演變過程。有研究指出它是心血管系統(tǒng)的一種保護因子，有抗凋亡作用。GDF15在心肌中表現(xiàn)為“應激表達”，當心臟出現(xiàn)負荷過大和缺氧等情況發(fā)生時，其在心肌細胞中的表達增加；正常狀態(tài)下，在正常心肌細胞中不表達[4]。近些年，由于其獨特的應激表達和作用機制，GDF15已在多種心血管疾病的病理中得到廣泛研究[5]，并在急性冠脈綜合征的預測、診斷、預后等多方面得到應用。5生長分化因子15檢測試劑（盒熒光免疫分析法）本標準規(guī)范了生長分化因子15檢測試劑（盒熒光免疫分析法）的檢測要求，試驗方法，標識、標簽和使用說明書，包裝、運輸和貯存。本標準適用于對生長分化因子15進行定量檢測的試劑（盒熒光免疫分析法）。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T21415體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性YY/T0466.1醫(yī)療器械用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號第1部分：通用要求3技術(shù)要求3.1物理性狀試劑盒各組分應齊全、完整，包括檢測試劑、IC卡、干燥劑、說明書。3.1.2膜條寬度不小于3mm。3.1.3液體移行速度不低于10mm/min。3.2溯源性根據(jù)GB/T21415及有關(guān)規(guī)定，提供所用生長分化因子15校準品的來源、賦值過程以及測量不確定度等內(nèi)容。3.3準確度6準確度符合如下要求之一：a）相對偏差：用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認的參考物質(zhì)作為樣本進行檢測，其測量結(jié)果的相對偏差不超過±15%。b）企業(yè)參考品測試：對具有溯源性的企業(yè)參考品進行檢測，其測量結(jié)果的相對偏差不超過±15%。3.4檢出限生產(chǎn)企業(yè)應提供GDF15檢測試劑（盒）的檢出限，檢出限不高于100pg/mL。3.5線性相關(guān)性生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定試劑盒的線性區(qū)間，并符合如下要求：a）試劑盒線性區(qū)間不窄于[100，5000]pg/mL；b）線性相關(guān)系數(shù)（r）不小于0.9900。3.6重復性在試劑盒的線性區(qū)間內(nèi)，合理設置2～3個不同濃度的樣品，各重復檢測10次，其變異系數(shù)（CV）不大于15%。3.7批間差在試劑盒的線性區(qū)間內(nèi)，合理設置2～3個不同濃度的樣品，用3個批號試劑盒分別檢測，3個批號試劑盒檢測結(jié)果的批間變異系數(shù)（CV）不大于15%。3.8穩(wěn)定性3.8.1可驗證可對效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進行驗證。3.8.2效期穩(wěn)定性3.8.2.1生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定試劑（盒）的有效期。3.8.2.2取效期末的試劑盒檢測其準確度、檢出限、線性和重復性，符合本標準3.3～3.6的要求。3.8.3熱穩(wěn)定性試驗取有效期內(nèi)的試劑盒在37℃條件下放置一定時間，檢測其準確度、檢出限、線性和重復性，符合本標準3.3～3.6的要求。注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究注3：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇本標準3.8.2、3.84試驗方法74.1物理性狀隨機抽取1條試紙，在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查，外觀符合本標準4.1.1的要求。4.1.2膜條寬度隨機抽取1條試紙，用游標卡尺測量試紙條的寬度，膜條寬度符合本標準3.1.2要求。4.1.3液體移行速度按說明書進行操作，在加樣區(qū)加入稀釋液開始用秒表計時，直至液體到達圖1所示C區(qū)與D區(qū)的交界線時停止計時，所用的時間記為T;用游標卡尺測量(A區(qū)+B區(qū)+C區(qū))的長度，記為L,則計算L/T即為移行速度。液體一行速度符合本標準3.1.3的要求。熒光耦聯(lián)物熒光耦聯(lián)物圖1熒光免疫層析試劑卡的結(jié)構(gòu)圖4.2溯源性溯源性試驗方法符合3.2的要求。4.3準確度4.3.1測試方法可采用相對偏差和比對試驗之一測試試劑(盒)的準確度。試劑盒的準確性符合本標準3.3的要求；如適用，優(yōu)先采用相對偏差的方法。4.3.2相對偏差4.3.2.1根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的試劑盒線性區(qū)間，將能用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)作為樣本，合理設置2～3個濃度，將其作為樣本按照待測試劑盒說明書的步驟進行檢測，每個樣品重復測定3次，測定結(jié)果記為(Xi),按式(1)分別計算相對偏差(Bi)。4.3.2.2如果3次結(jié)果都符合本標準3.3a)要求，即判為合格。4.3.2.3如果大于或等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。4.3.2.4如果有1次結(jié)果不符合要求，則應重新連續(xù)測試20次，并分別按照式(1)計算相對偏差，如果大于或等于19次測試的結(jié)果符合3.3a)的要求，即判為合格。Bi——相對偏差；8Xi——測量濃度；4.3.3企業(yè)參考品測試由生產(chǎn)企業(yè)提供企業(yè)參考品，按照常規(guī)樣本進行檢測，每份樣本測定3次，測試結(jié)果記為（Xi按式（1）分別計算相對偏差（Bi），結(jié)果符合本標準3.3b）的要求。4.4檢出限用零濃度校準品或樣本稀釋液作為樣本進行檢測，重復測定20次，得出20次測量結(jié)果的T/C值（相對熒光值），計算其平均值（M）和標準差（SD），得出M+2SD，根據(jù)試劑盒配套校準品的定標曲線方程，或者根據(jù)零濃度校準品和相鄰校準品之間的濃度一熒光值結(jié)果進行兩點回歸擬合得出一次方程，將M+2SD所對應的T/C值帶入方程式中，求出對應的濃度值，即為檢出限，其結(jié)果符合本標準3.4的要求。4.5線性相關(guān)性用超出或接近線性范圍上限濃度的樣本和超出或接近線性范圍下限濃度的樣本，混合成至少5個稀釋濃度。對每一濃度的樣本至少重復測定3次，計算其平均值，將測定濃度的平均值與理論濃度用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果符合本標準3.5的要求。4.6重復性用同一批號試劑盒，對不同濃度的質(zhì)控樣品分別重復測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)式（2）得出變異系數(shù)（CV），結(jié)果符合本標準3.6的要求。CV10000........................................................（2）式中：CV——變異系數(shù)；SD——10次測量結(jié)果的標準差；M——10次測量結(jié)果的平均值；4.7批間差用3個不同批號試劑盒，對不同濃度的質(zhì)控樣品分別重復測定10次，計算每個濃度樣本30次測量結(jié)果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)式（3）得出變異系數(shù)（CV），結(jié)果符合本標準3.7的要求。CV10000........................................................（3）9式中：CV——變異系數(shù)；SD——30次測量結(jié)果的標準差；M——30次測量結(jié)果的平均值；4.8穩(wěn)定性4.8.1效期穩(wěn)定性取效期末的試劑盒按照本標準4.3～4.6方法進行檢測，檢測結(jié)果符合3.8.2的要求。4.8.2熱穩(wěn)定性試驗取有效期內(nèi)試劑盒在37℃放置7天，按照本標準4.3～4.6方法進行檢測，結(jié)果符合本標準3.8.3的要求。5標識、標簽和使用說明書5.1試劑（盒）外包裝標識、標簽所使用的符號滿足YY/T0466.1的要求，至少包含如下內(nèi)容:a）產(chǎn)品名稱及包裝規(guī)格；b）生產(chǎn)企業(yè)或售后服務單位的名稱、地址、聯(lián)系方式；c）醫(yī)療器械注冊證書編號；d）產(chǎn)品標準編號；e）產(chǎn)品批號；f）失效期或有效期；g）貯存條件。5.2試劑（盒〉肉包裝標識、標簽所使用的符號滿足YY/T0466.1的要求，至少包含如下內(nèi)容：a）產(chǎn)品名稱及包裝規(guī)格；b）生產(chǎn)企業(yè)名稱或標志；c）產(chǎn)品批號；d）失效期；e）貯存條件。5.3試劑（盒〉使用說明書所使用的符號滿足YY/T0466.1的要求，至少包含如下內(nèi)容：a）產(chǎn)品名稱；b）包裝規(guī)格；c）預期用途；d）檢驗原理；e）主要組成成分；f）貯存條件及失效期；g）適用儀器；h）樣本要求；i）檢驗方法；j）參考值（參考區(qū)間k）檢驗結(jié)果的解釋；l）檢驗方法的局限性；m）產(chǎn)品性能指標；n）注意事項；o）參考文獻；p）生產(chǎn)企業(yè)或售后服務單位的名稱，地址，聯(lián)系方式；q）醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號（僅限于國有企業(yè)r）醫(yī)療器械注冊證書編號；s）產(chǎn)品標準編號；t）說明書批準及修改日期。6包裝、運輸和貯存6.1包裝包裝儲運圖示標志符合GB/T191的規(guī)定。包裝容器密封性良好、完整、無泄露、無破損。6.2運輸6.2.1按生產(chǎn)企業(yè)的要求運輸試劑盒。6.2.2運輸外包上，裝醒目標識防潮、防壓、防曬、防酸堿和輕拿輕放標志；6.2.3運輸過程中，注意防潮、防止重物堆壓，避免陽光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質(zhì)接觸，防止內(nèi)外包裝破損。6.3貯存試劑盒于4～30明確“儲存具體條件或要求”，否則不具有可操作性℃條件下保存。明確“儲存具體條件或要求”，否則不具有可操作性參考文獻[l]BootcovMR,BauskinAR,ValenzuelaSM,etal.MIC-1,anovelmacrophageinhibitorycytokine,isadivergentmemberoftheTGFbetasuperfamily[J].ProcNatlAcadSciUSA,1997,94(21):11514-11519.DOI:10.1073/pnas.94.21.11514.[2]BreitSN,JohnenH,CookAD,etal.TheTGF-βsuperfamilycytokine,MIC-1/GDF15:apleotrophiccytokinewithrolesininflam