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α-氨基酸含量的測(cè)定（非水滴定法）064黃磊α-氨基酸的α位碳原子上連有氨基和羧基，為兩性物質(zhì)，在水溶液中的Ka和Kb很小，溶液的酸堿性均不明顯（羧基Ka＝2.5×10－10，氨基Kb＝2.2×10－12），而且會(huì)互相干擾，在水溶液中無(wú)法被準(zhǔn)確滴定，設(shè)計(jì)一個(gè)滴定α-氨基酸含量的方法。α-氨基酸在水中的形式為：

方法一：

在無(wú)水冰醋酸中用HClO4滴定α-氨基酸中的氨基:冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都強(qiáng)，給出質(zhì)子的能力強(qiáng)，相當(dāng)于α-氨基酸中的氨基堿性增強(qiáng)：在水中：在HAc中：醋酸的酸性比水強(qiáng)，易給出質(zhì)子使弱堿質(zhì)子化，滴定終點(diǎn)突躍較大。測(cè)定過(guò)程：（1）HClO4－HAc滴定劑的配制：冷至25°C的冰醋酸中緩慢加入72％的HClO4溶液，搖勻，再滴加一定量的醋酸酐，搖勻，冷至室溫，可用冰醋酸稀釋。（2）HClO4－HAc滴定劑的標(biāo)定：準(zhǔn)確稱(chēng)取定量的基準(zhǔn)物KHC8H4O4，溶于冰醋酸中，以0.2%結(jié)晶紫的冰醋酸溶液為指示劑，從紫色滴定至藍(lán)色。取同樣量的同一溶劑作空白滴定。（3）α-氨基酸的滴定：將試樣溶于冰醋酸、醋酸酐中，以結(jié)晶紫為指示劑，用上述標(biāo)定好的滴定劑滴定至出現(xiàn)穩(wěn)定的藍(lán)色。取同樣量的同一溶劑作空白滴定。氨基酸的含量＝方法二：在苯－甲醇混合液中用甲醇鈉滴定α-氨基酸中的羧基：在水中：

在苯－甲醇中：

CH3O－堿性比OH－強(qiáng)，和－NH3＋反應(yīng)比OH－完全，平衡常數(shù)大，滴定較完全，滴定突躍明顯。

測(cè)定過(guò)程：（1）CH3ONa的苯－甲醇標(biāo)準(zhǔn)液的配制：稱(chēng)取定量的純金屬鈉，切片用無(wú)水甲醇洗凈，分別多次加入冷卻的無(wú)水甲醇中，溶解后，加入苯稀釋。（2）CH3ONa的苯－甲醇標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)定：準(zhǔn)確稱(chēng)取苯甲酸基準(zhǔn)物，溶于二甲基甲酰銨中，用百里酚藍(lán)為指示劑從黃色滴定至藍(lán)色。（3）α-氨基酸的滴定：試樣溶于苯－甲醇中，用百里酚藍(lán)為指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)液滴定至黃色變?yōu)樗{(lán)色。氨基酸含量＝參考書(shū)目：杭州大學(xué)化學(xué)系分析化學(xué)教研室，分析化學(xué)手冊(cè)（第二版）:第二分冊(cè)：分

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