DB12∕T 866-2019 水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

天津市天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質譜法Determinationofmalachitegreenanditsmetabolite20190114發(fā)布20190215實施DB12II本標準按照GB/T1.12009給出的規(guī)則起草。本標準由天津市漁業(yè)發(fā)展服務中心提出并歸口。本標準起草單位：農業(yè)農村部漁業(yè)環(huán)境及水產品質量監(jiān)督檢驗測試中心（天津)本標準主要起草人：陳永平、李春青、時文博、高麗娜、李寶華。水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法本標準規(guī)定了水質及沉積物中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量測定的試劑、儀器設備、測定步驟、計算、方法靈敏度、方法回收率、方法精密度。本標準適用于水和沉積物中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法沉積物中孔雀石綠(MalachiteGreenMG)及其代謝物無色孔雀石綠（LeucomalachiteGreenLMG)殘留提取，利用N，N，N’，N’-四甲基對苯二胺(2,3,5,6-tetramethyl-1，4-phenylenediamineTMPD)解吸附后，二氯甲烷萃取。水中孔雀石綠和無色孔雀石綠二氯甲烷提取，質譜檢測器檢測，內標法定量。41孔雀石綠及無色孔雀石綠標準品：孔雀石綠純度>98%，無色孔雀石綠純度>98%。4.2乙腈：色譜純。4.3甲醇：色譜純。4.4二氯甲烷。4.5實驗用水符合GB/T6682—級水指標4.62.0mmoL.L-1乙酸銨緩沖溶液：稱取0.077g無水乙酸銨溶解于適量水中，再加入0.5mL甲酸，再加水定容至500mL。中。色孔雀石綠標準品，分別用乙腈溶解并定容，于-18°C避光保存，可使用1年。取適量的氘代孔雀石綠和氘代無色孔雀石綠標準品，分別用乙腈溶解并定容，于-18C避光保存，可使用1年。4.10混合外標標準中間液（1.0網+mL-1)：分別準確吸取1.0mL孔雀石綠和無色孔雀石綠的標準儲備液（4.7)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用6個月。1標準儲備液（4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18°C避光保存，可使用6個月。容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用1個月。mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用1個月。4.14混合標準工作液：臨用時準確吸取相應體積的混合外標標準使用液（4.11)，再加入混合內標標準使用液（4.12)20‘用乙腈和2.0mmoL.L-1乙酸銨緩沖溶液（1:1，K/P0稀釋定容至1mL曲線系列濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10、20ngmL-1，現(xiàn)用現(xiàn)配。5儀器和設備5.4超聲波震蕩儀。5.5渦旋振蕩器。5.7旋轉蒸發(fā)儀。5.8純水器。5.9冰箱：具有4C冷藏箱和達到-18C以下冷凍箱。6測定步驟mL的二氯甲烷，振搖5min，靜置30min，取下層二氯甲烷于錐形瓶中，再加入30mL二氯甲烷重復一次，若分層不明顯，取其下層液于50mL離心管中，冷凍離心機6000r/min離心3min，再取下層液，合并于錐形瓶中，旋轉蒸發(fā)溫度30C，旋轉蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL的乙腈-2膜后，上機測定。6.2.2沉積物：稱取粉末狀沉積物樣品（5.0±波震蕩25min，6000r/min離心5min，取上層液于錐形瓶中，再向離心管中加入20mL二氯甲烷，重復上述操作，合并上清液錐形瓶中，旋轉蒸發(fā)溫度30C，旋轉蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL2有機相濾膜后，上機測定。6.3標準工作曲線制作液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。表1流動相梯度洗脫程序A/%22279B/%707098987070色譜柱：C8柱，2.2叫，75mmx2.1mm(內徑或相當。流動相A:含0.1%甲酸的2.0mmoL.L-1的乙酸銨水溶液；流動相B:0.1%甲酸-乙腈溶液；進樣體積：流速：0.25mL-min\離子化模式：電噴霧離子源（ESI)，正離子模式。掃描模式：多反應監(jiān)測M（RM，反應監(jiān)測母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞能量見表2表2目標化合物質譜條件3目標化合物MGLMGD5目標化合物MGLMGD5-MGD6-LMG注：*為定量碎片離子329208313*239.1204022式中：式中：C—試樣溶液中目標物含量，單位為納克每毫升（ng+L-1);V1----試樣定容體積，單位為毫升L)。7.3沉積物樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式（2)計算。計算結果須扣除空白值。在同樣測試條件下，陽性樣品保留時間與標準物質保留時間相對偏差在±5%以內，且檢測到的離子的相對豐度，應當與濃度相當?shù)男Ｕ龢藴势废鄬ωS度一致。次強碎片離子豐度與定量離子豐度比應符合表3要求?？瞻讟悠?、標準溶液及添加樣品的離子流圖參見附錄A?附錄E。表3基峰與次強碎片離子豐度比要求次強碎片離子相對豐度)7.1用儀器自帶工作站按內標法進行自動計算，以化合物上機響應的峰面積與內標物峰面積比值為縱坐標、化合物濃度與內標物濃度比值為橫坐標，繪制標準曲線，再根據(jù)樣品的峰面積響應值與內標物峰面積比值，利用標準曲線，得到樣品制備液的實際測定濃度。7.2水樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式（1)計算。計算結果須扣除空白值。⑵4式中：X—試樣中目標物含量，單位為微克每千克（昭+kg-1);C—試樣溶液中目標物含量，單位為納克每毫升（ng+mL-1);m----試樣質量，單位為克（g);v----試樣定容體積，單位為毫升L)。除不加試祥外，均按上述測定條件和步驟進行。定量離子采用豐度最大的二級特征離子碎片符合表2的要求。8.8.1水質中孔雀石綠及其代謝物(無色孔雀石綠)的定量限均為4ngL1。8.2沉積物中孔雀石綠及其代謝物(無色孔雀石綠)的定量限均為04網+kg-1本方法的批內相對標準偏差小于10%，批間相對標準偏差小于15%。s6附錄A(6附錄A(資料性附錄）空白沉積物特征離子色譜圖7(資料性附錄）孔雀石綠及其代謝物混合標準特征離子色譜圖（10ng+mL-1)(資料性附錄）(資料性附錄）........................t_A89(資料性附錄）空白水質特征離子色譜圖(資料性附錄）空白水質加標特征離子色譜圖（20ng+L-1)(資料性附錄）空白水質加標特征離子色譜圖（2