DB12∕T 866-2019 水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

天津市天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法Determinationofmalachitegreenanditsmetabolite20190114發(fā)布20190215實(shí)施DB12II本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由天津市漁業(yè)發(fā)展服務(wù)中心提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（天津)本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳永平、李春青、時(shí)文博、高麗娜、李寶華。水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水質(zhì)及沉積物中孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠殘留量測(cè)定的試劑、儀器設(shè)備、測(cè)定步驟、計(jì)算、方法靈敏度、方法回收率、方法精密度。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水和沉積物中孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠殘留量檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法沉積物中孔雀石綠(MalachiteGreenMG)及其代謝物無(wú)色孔雀石綠（LeucomalachiteGreenLMG)殘留提取，利用N，N，N’，N’-四甲基對(duì)苯二胺(2,3,5,6-tetramethyl-1，4-phenylenediamineTMPD)解吸附后，二氯甲烷萃取。水中孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠二氯甲烷提取，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。41孔雀石綠及無(wú)色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品：孔雀石綠純度>98%，無(wú)色孔雀石綠純度>98%。4.2乙腈：色譜純。4.3甲醇：色譜純。4.4二氯甲烷。4.5實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682—級(jí)水指標(biāo)4.62.0mmoL.L-1乙酸銨緩沖溶液：稱取0.077g無(wú)水乙酸銨溶解于適量水中，再加入0.5mL甲酸，再加水定容至500mL。中。色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈溶解并定容，于-18°C避光保存，可使用1年。取適量的氘代孔雀石綠和氘代無(wú)色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈溶解并定容，于-18C避光保存，可使用1年。4.10混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0網(wǎng)+mL-1)：分別準(zhǔn)確吸取1.0mL孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.7)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用6個(gè)月。1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18°C避光保存，可使用6個(gè)月。容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用1個(gè)月。mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18C避光保存，可使用1個(gè)月。4.14混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用時(shí)準(zhǔn)確吸取相應(yīng)體積的混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液（4.11)，再加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液（4.12)20‘用乙腈和2.0mmoL.L-1乙酸銨緩沖溶液（1:1，K/P0稀釋定容至1mL曲線系列濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10、20ngmL-1，現(xiàn)用現(xiàn)配。5儀器和設(shè)備5.4超聲波震蕩儀。5.5渦旋振蕩器。5.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.8純水器。5.9冰箱：具有4C冷藏箱和達(dá)到-18C以下冷凍箱。6測(cè)定步驟mL的二氯甲烷，振搖5min，靜置30min，取下層二氯甲烷于錐形瓶中，再加入30mL二氯甲烷重復(fù)一次，若分層不明顯，取其下層液于50mL離心管中，冷凍離心機(jī)6000r/min離心3min，再取下層液，合并于錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL的乙腈-2膜后，上機(jī)測(cè)定。6.2.2沉積物：稱取粉末狀沉積物樣品（5.0±波震蕩25min，6000r/min離心5min，取上層液于錐形瓶中，再向離心管中加入20mL二氯甲烷，重復(fù)上述操作，合并上清液錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL2有機(jī)相濾膜后，上機(jī)測(cè)定。6.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。表1流動(dòng)相梯度洗脫程序A/%22279B/%707098987070色譜柱：C8柱，2.2叫，75mmx2.1mm(內(nèi)徑或相當(dāng)。流動(dòng)相A:含0.1%甲酸的2.0mmoL.L-1的乙酸銨水溶液；流動(dòng)相B:0.1%甲酸-乙腈溶液；進(jìn)樣體積：流速：0.25mL-min\離子化模式：電噴霧離子源（ESI)，正離子模式。掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)M（RM，反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞能量見(jiàn)表2表2目標(biāo)化合物質(zhì)譜條件3目標(biāo)化合物MGLMGD5目標(biāo)化合物MGLMGD5-MGD6-LMG注：*為定量碎片離子329208313*239.1204022式中：式中：C—試樣溶液中目標(biāo)物含量，單位為納克每毫升（ng+L-1);V1----試樣定容體積，單位為毫升L)。7.3沉積物樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式（2)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。在同樣測(cè)試條件下，陽(yáng)性樣品保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間相對(duì)偏差在±5%以內(nèi)，且檢測(cè)到的離子的相對(duì)豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)男Ｕ龢?biāo)準(zhǔn)品相對(duì)豐度一致。次強(qiáng)碎片離子豐度與定量離子豐度比應(yīng)符合表3要求。空白樣品、標(biāo)準(zhǔn)溶液及添加樣品的離子流圖參見(jiàn)附錄A?附錄E。表3基峰與次強(qiáng)碎片離子豐度比要求次強(qiáng)碎片離子相對(duì)豐度)7.1用儀器自帶工作站按內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行自動(dòng)計(jì)算，以化合物上機(jī)響應(yīng)的峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱坐標(biāo)、化合物濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣品的峰面積響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品制備液的實(shí)際測(cè)定濃度。7.2水樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式（1)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。⑵4式中：X—試樣中目標(biāo)物含量，單位為微克每千克（昭+kg-1);C—試樣溶液中目標(biāo)物含量，單位為納克每毫升（ng+mL-1);m----試樣質(zhì)量，單位為克（g);v----試樣定容體積，單位為毫升L)。除不加試祥外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。定量離子采用豐度最大的二級(jí)特征離子碎片符合表2的要求。8.8.1水質(zhì)中孔雀石綠及其代謝物(無(wú)色孔雀石綠)的定量限均為4ngL1。8.2沉積物中孔雀石綠及其代謝物(無(wú)色孔雀石綠)的定量限均為04網(wǎng)+kg-1本方法的批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。s6附錄A(6附錄A(資料性附錄）空白沉積物特征離子色譜圖7(資料性附錄）孔雀石綠及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)特征離子色譜圖（10ng+mL-1)(資料性附錄）(資料性附錄）........................t_A89(資料性附錄）空白水質(zhì)特征離子色譜圖(資料性附錄）空白水質(zhì)加標(biāo)特征離子色譜圖（20ng+L-1)(資料性附錄）空白水質(zhì)加標(biāo)特征離子色譜圖（2