臨床微生物標本采集和運送規(guī)范

臨床微生物標本采集和運送規(guī)范劉云洪1主要內(nèi)容一、微生物檢查的標本采集、運送原則二、臨床各類標本的采集、運送及保存規(guī)范三、微生物室對微生物標本拒收的標準與處理方法2一、微生物檢查的標本采集、

運送原則3標本采集、運送規(guī)范化的意義正確的標本采集、運送、保存和處理對于提高培養(yǎng)結(jié)果的陽性率以及保證微生物室的工作質(zhì)量至關重要。正確的標本采集和運送是準確的病原學診斷的前提！不規(guī)范的標本采集、保存和運送是導致細菌培養(yǎng)陽性率低、臨床符合率差的重要原因。規(guī)范的標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的關鍵！4微生物檢查的標本采集、運送原則

1.及時采集微生物標本作病原學檢查。2.盡量在抗菌藥物使用前或停藥一周后采集標本，如不能停用抗菌藥物，應于下次抗菌藥物應用前采集。應在感染的急性期或傷口局部治療前采集標本。3.選擇正確的解剖部位，并以適當?shù)募夹g、方法與容器收集足量的標本。4.采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作，將污染情形降至最低。5.收集真正感染病灶處的標本，且避免鄰近區(qū)域微生物的污染。6.采用無菌衛(wèi)材收集標本，并裝于堅固且密合性佳的無菌容器中。容器須滅菌處理，防止?jié)B漏，但不得使用消毒劑。標本中不可添加防腐劑。7.采樣后立即送檢，最好在2h內(nèi)。如不能及時送檢，應將標本置于適當?shù)膬Υ姝h(huán)境待送，但存放一般不能超過24h。5微生物檢查的標本采集、運送原則8.盡量不要以棉花拭子收集標本。以棉拭子采集的標本如咽拭子、傷口拭子等宜插入恰當?shù)倪\送培養(yǎng)基送檢。淋球菌培養(yǎng)等標本應使用專用的纖維拭子，不得使用一般棉拭子。9.混有正常菌群的標本如痰、尿液等，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。10.每份標本都應貼上標簽并標明必要信息，在檢驗申請單上填寫足夠的有關臨床資料。包括病人情況（病區(qū)、病人姓名、住院號）和標本情況（標本類型、檢驗目的、采集部位、采集方法、采集時間等）11.同一天同一檢測目的的標本（血液標本除外）一般只需檢測一次（份）。涂片檢查最好和細菌培養(yǎng)同時做！6二、臨床各類標本的采集、運送及保存規(guī)范7血培養(yǎng)的采集、運送規(guī)范采集程序:皮膚消毒程序：推薦三步法（酒精→碘伏→酒精）培養(yǎng)瓶消毒程序：75%酒精消毒靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序采血量：成人8-10ml，兒童1-3ml。骨髓采集量1-2ml采血時間和數(shù)量:采血時間:在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5-1h，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后1h內(nèi)采血。采血數(shù)量：盡量在使用抗菌藥之前（感染性心內(nèi)膜炎除外），在24h內(nèi)采集2-3份血培養(yǎng)。采血間隔：在采集血培養(yǎng)后的2-5天內(nèi)不需要再重復采血（除外心內(nèi)膜炎和導管相關性敗血癥）標本運送：立即送檢，室溫保存，切勿冷藏。8血培養(yǎng)的采集規(guī)范皮膚消毒程序（三步法）:①70％酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上②用一根蘸有碘酊或碘伏的棉簽消毒皮膚（1％-2％碘酊作用30s或10％碘伏60s），從穿刺點向外以1.5cm-2cm直徑畫圈消毒。③70％酒精脫碘：用70％酒精涂去碘液，待酒精干燥后采血。培養(yǎng)瓶消毒程序：打開塑料瓶蓋用70%酒精（不能用碘酒）消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s，注入血液之前用無菌紗布或棉簽擦干表面殘余酒精。靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序：可戴乳膠手套固定靜脈（不可接觸穿刺點），用注射器無菌穿刺取血后，直接注入血培養(yǎng)瓶中（勿換針頭），并輕輕顛倒混勻數(shù)次以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏！

注意：從靜脈取血；不要與血氣和血沉標本一起采血；不推薦血入瓶前換針頭；不推薦靜脈血直接入瓶；不宜在靜脈導管或靜脈留置口采血（除非懷疑導管相關性血流感染）。9血培養(yǎng)的采血量成人采血量5-10ml（最好8-10ml），兒童采血量1-3ml（不超過總血量的1％）。血液和肉湯之比為1：5~1：10。骨髓采集量1-2ml。成人菌血癥血液含菌量很低（通常＜1CFU/ml）,因此增加送檢血液量可以提升檢出率;而兒童菌血癥血液含菌量常超過100CFU/ml，是成人10-100倍，因此采集血量少于成人不會影響培養(yǎng)陽性率。1CFU=1百萬個細菌。10血培養(yǎng)的采集時間、數(shù)量和間隔采集時間：據(jù)研究表明：細菌通常在病人寒戰(zhàn)和發(fā)燒前1小時進入血流，因此規(guī)范規(guī)定在病人發(fā)熱高峰前1小時抽血?？紤]到方便操作，建議常規(guī)血培養(yǎng)應盡量在使用抗菌藥物前，于病人寒戰(zhàn)或發(fā)熱開始時30-60分鐘內(nèi)，同時于不同部位采集2-3份血培養(yǎng)，除非懷疑有感染性心內(nèi)膜炎或其他靜脈內(nèi)感染，才可分開時段采集。采集數(shù)量：在24h內(nèi)采集2～3份血培養(yǎng)(一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應視為單份血培養(yǎng))。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者,連續(xù)3d,每天采集2份。采血間隔：采血培養(yǎng)后的2至5天內(nèi)，不需要重復采血培養(yǎng)（因為治療后的2至5天內(nèi)血液中的感染細菌不會馬上消失）。11特殊的全身和局部感染患者采血建議可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關節(jié)炎或肺炎,應在不同部位采集2～3份血標本。不明原因發(fā)熱,如隱性膿腫,傷寒熱和波浪熱,先采集2～3份血標本,24～36h后估計體溫升高之前(通常在下午)再采集2份以上。可疑菌血癥或真菌菌血癥,但血培養(yǎng)持續(xù)陰性,應改變血培養(yǎng)方法,以獲得罕見的或苛養(yǎng)的微生物?？梢杉毦孕膬?nèi)膜炎,在1～2h內(nèi)采集3份血標本,如果24h后陰性,再采集3份以上的血標本。12腦脊液標本采集送檢規(guī)范采集時間：最好在抗菌藥物使用前采集。采集方法：通常用腰穿的方法采集腦脊液，整個過程需以最嚴格的無菌操作技術進行。采集量應≥2ml。標本運送：抽取出的腦脊髓液分置于無菌試管內(nèi)，迅速送至細微生物室。如不能立即送檢，將標本保存于35℃溫箱或室溫，不可放置于冰箱。13其他無菌體液的采集運送規(guī)范無菌采集是培養(yǎng)成功的首要因素。標本采集后應立即送檢（腦膜炎球菌有自溶酶，離體后回迅速自溶。肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌離體后極易死亡。）。延遲送檢時一定不能放冰箱，肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等對溫度敏感的細菌在冰箱會很快死亡。各種無菌體液標本，如胸腹水、漿膜腔積液及各種穿刺液等亦可注入血培養(yǎng)瓶以提高培養(yǎng)的陽性率。14尿液標本采集運送規(guī)范采集時間：盡量在抗菌藥物使用前（多數(shù)藥物從尿道排泄）。采集方法：清潔中段尿法。采集中段尿時要先用肥皂清洗女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內(nèi)，然后用清水沖洗。把開始的尿液棄掉，然后取中段的尿液。標本運送：留取尿液后2h內(nèi)送達實驗室，不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱（不超過6h）。注意事項：長期留置導尿管的患者應在更換新管時留取尿標本。導尿留取尿液時，集尿袋內(nèi)的尿液和導尿管末端的尿液不能用于培養(yǎng)。15

痰標本采集運送規(guī)范采集時間：盡量在使用抗菌藥物之前采集方法：自然咳痰：以晨痰為佳?？忍登皯鍧嵖谇蝗缢⒀篮褪?，然后用力咳出呼吸道深部痰，直接吐入于無菌容器中。痰少或無痰者可用3-5%NaCl水溶液5ml霧化吸入5min導痰（氣道高反應如哮喘病人不宜采用此法）。對于難于自然咳痰者可用微生物室提供的一次性無菌吸痰杯抽取氣管深部分泌物。小兒取痰法最好用微生物實驗室提供的一次性無菌吸痰杯抽取氣管深部分泌物。采集數(shù)量：對于細菌性肺炎，痰標本送檢每天1次，連續(xù)2～3天。不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)改變。標本運送：標本應盡快送檢（1-2h內(nèi)），如不能及時送檢，室溫保存≤2h，4℃冰箱保存≤24h。16生殖道標本采集送檢規(guī)范應由臨床醫(yī)師采集，用無菌棉拭子采集。淋球菌檢查時，不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深取樣送檢，要避免受陰道分泌物污染。若懷疑年幼女童有淋病性陰道炎時，則標本由陰道外圍部位取得。男性懷疑有急性淋病時，則由尿道取分泌物標本作涂片及培養(yǎng)，若懷疑有慢性淋病、前列腺炎、精囊炎，標本可由醫(yī)師采集前列腺或精囊液。標本采集后立即送檢，禁止冷藏！17糞便標本采集運送規(guī)范

采集時間：腹瀉患者應在用藥前、急性期采集；沙門菌感染、腸熱癥應在第2周或第3周采集。采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有膿血和黏液的部位的糞便2-3克，（如液狀糞便取絮狀物1-3ml）盛于無菌的、密封的、不吸水的容器內(nèi)送檢；對不易獲得糞便患者及幼兒，可用直腸拭子采集。標本應盡快送檢，不能及時送檢的標本，室溫保存≤2h懷疑沙門菌、志賀菌以外的細菌引起腹瀉時如大腸埃希菌0157:H7的病例，送檢前臨床醫(yī)生須通知實驗室，并于檢驗單上特別注明，以便提高此菌的分離率。18眼、耳、鼻、喉標本

采集運送規(guī)范眼、耳、鼻、喉標本采集后應立即送檢，防止干燥，禁止冷藏。應注明具體標本來源如眼標本注明是眼瞼、結(jié)膜還是角膜，并注明左眼還是右眼。19膿液或傷口分泌物標本

采集運送規(guī)范采集方法：閉鎖膿腫：一般用穿刺或手術引流的方法采集，不能用拭子。消毒覆于膿腫表面的皮膚，用注射器將膿腫內(nèi)容物吸出。然后切開膿腫、引流，取部分膿腫壁送檢。開放病灶和膿腫：用無菌鹽水擦去表面滲出物，用蘸有無菌生理鹽水的拭子采集潰瘍基底部或邊緣部的標本，置于無菌管中送檢。燒傷傷口：清創(chuàng)，出現(xiàn)滲出物后用拭子用力采集病灶基底部或邊緣的標本。也可送組織標本。膿皰或水皰：酒精消毒使之干燥，對于患兒用23號針頭挑破膿皰，拭子采集膿皰液和基底部標本。20膿液或傷口分泌物標本

采集運送規(guī)范注意事項迅速送往實驗室，1小時內(nèi)不能培養(yǎng)應將標本冷藏。皮膚消毒對培養(yǎng)結(jié)果至關重要。不要僅送檢膿液。膿液不能代表傷口特點，應在病灶活動區(qū)域或基底部采集標本。除非有滲出物，干燥、結(jié)痂傷口一般不做培養(yǎng)標記：不要只寫“傷口”標記標本，應有專門的描述和解剖來源。注明滲出液來自開放傷口還是閉合傷口。小兒要求：小兒感染常出現(xiàn)皮疹如水泡等，應在這些地方仔細采集標本培養(yǎng)以發(fā)現(xiàn)病原體。創(chuàng)傷標本如沒有炎性細胞說明可能只是采集了表皮正常菌群，與疾病過程無關，應重新采集。21標本的儲存

標本在尚未進行檢驗或未能立即送檢時，必須儲存在適當?shù)沫h(huán)境下，以防止病原菌死亡，或因共生菌滋生過多，使得病原菌分離不出來，下表簡介各類標本儲存的環(huán)境：

儲存環(huán)境標本來源4℃冰箱痰、尿液、糞便、氣管沖洗物、導尿管、靜脈導管、膿液和傷口分泌物細菌或真菌培養(yǎng)；無菌體液（胸腹水、心包液、關節(jié)液、鞘膜積液、膽汁）真菌培養(yǎng)；支原體培養(yǎng)；衣原體檢查；血清學檢查（包括ASO、RF、肥達反應）室溫（25℃）腦脊液、生殖道、眼、耳、鼻、喉、血培養(yǎng)、血管導管尖、活檢組織細菌或真菌培養(yǎng)；無菌體液（胸腹水、心包液、關節(jié)液、鞘膜積液、膽汁）細菌培養(yǎng)；厭氧菌培養(yǎng)；淋球菌培養(yǎng)標本22三、細菌室對微生物標本拒收的

標準與處理方法總的拒收標準申請錯誤：如糞便、咳出痰液、尿液、下生殖道標本要求做厭氧培養(yǎng)，陰道分泌物要求做淋球菌涂片標識錯誤：無標簽或標簽不完整，或標本標識與申請單標識不一致；沒有標出標本采集時間及部位；沒有在申請單上注明標本來源和送檢目的等送檢錯誤：送檢延誤。容器錯誤：沒有用無菌容器，容器破裂或滲漏標本不符合要求雙份標本（同一天兩份相同檢測的標本，血液標本除外）23三、細菌室對微生物標本拒收的標準與處理方法拒收標準

處理方式

申請單注明的標本種類與送檢標本不符

與原送檢部門聯(lián)系，退回申請單，要求審核并重送符合要求的標本。申請單上填寫項目不全或與標本的標簽不符或容器上未貼標簽與原送檢部門聯(lián)系，要求補充完整申請單或重貼標簽或重送標本。檢驗單上未注明樣本來源和培養(yǎng)項目或僅注明身體部位者（如胸、腿）

查詢申請醫(yī)師，補足標本信息。僅有申請單無標本或無菌容器內(nèi)無標本與原送檢部門聯(lián)系，退回申請單，要求重送標本標本外漏及明顯受污染（如開塞）與原送檢部門聯(lián)系，退回申請單，建議重送標本。標本收集不符合采集要求

退回申請單，及時通知臨床，告知正確收集方法，要求重送標本樣本混入消毒液或防腐劑退回申請單，及時通知臨床，建議重送標本。送檢延誤，超過要求送檢時限聯(lián)系送檢部門，退回申請單，要求重送標本。24三、細菌室對微生物標本拒收的標準與處理方法拒絕標準處理方式標本量過少或已明顯干燥與原送檢部門聯(lián)系，退回申請單，要求重送標本。申請項目不適合如血液培養(yǎng)同時要求涂片革蘭氏染色，肛門或直腸標本請求做革蘭染色，以檢查淋球菌。

聯(lián)系申請醫(yī)師，建議刪去請求革蘭染色項目送檢容器不當或破損滲漏與原送檢部門聯(lián)系，退回申請單，要求重送標本。穿刺液標本嚴重凝固，無菌部位標本（如腦脊液、膿、穿刺液、尿液等）為非無菌管采集。退回申請單，并注明標本不當，要求重送標本。一支拭子同時做細菌、支原體、衣原體及真菌培養(yǎng)詢問醫(yī)師并補送標本，如不能補送，則按醫(yī)師要求優(yōu)先次序處理同一天同一病人重復送多次同一檢測目的的相同樣本（血液標本除外）一般只檢查一次即可，可與臨床醫(yī)生進行協(xié)商。25微生物室項目檢驗周期表

序號檢驗項目標本送達時限標本接收至進行檢驗時間檢驗的周期（標本接收至報告發(fā)出時間）1肥達氏反應無無上午送檢下午出下午送檢第二天下午出2普通細菌培養(yǎng)+藥敏（包括尿、膿液、分泌物、生殖道、等）2小時1小時陰性結(jié)果2天陽性結(jié)果隨時與醫(yī)生聯(lián)系，3天后出正式報告3普通細菌培養(yǎng)+藥敏（包括痰、糞便、鼻咽喉拭子等）2小時1小時陰性結(jié)果1天陽性結(jié)果隨時與醫(yī)生聯(lián)系，2天后出正式報告4血培養(yǎng)立即1小時陽性結(jié)果隨時電話與臨床醫(yī)生聯(lián)系，正式報告3天以上，陰性結(jié)果7天5漿膜腔積液、膽汁、眼部標本、腦脊液細菌培養(yǎng)15分鐘30分鐘陰性結(jié)果2天陽性結(jié)果隨時與醫(yī)生聯(lián)系，3天后出正式報告6真菌培養(yǎng)1小時2小時陽性結(jié)果隨時報告陰性結(jié)果7天7涂片找真菌、淋球菌等1小時2小時當天下午8涂片找抗酸桿菌1小時2小時當天下午26細菌培養(yǎng)報告單的解釋

1.我院對病原菌的藥物敏感試驗，是用紙片瓊脂擴散法（又稱Kirby-Bauer試驗）測定抑菌圈的大小，再根據(jù)CLSI標準得出“敏感”“耐藥”“中介”的判斷，在化驗單上，分別標注“S”“R”“I”。272.為什么細菌藥敏的抗生素和別的醫(yī)院不一樣，而且還有很多其它抗生素沒有做藥敏試驗？答：(1)細菌藥敏的抗生素如何選擇：主要是根據(jù)本醫(yī)院擁有的抗生素情況、臨床使用抗生素的特點（比如兒童和成