《小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定技術規(guī)程（征求意見稿）》

ICS65.020.20DB32江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB32/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇省農(nóng)業(yè)科學院提出。本文件由江蘇省農(nóng)作物標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學院。本文件主要起草人：李偉、陳懷谷、楊學明、鄧淵鈺、孫海燕、曹淑琳、張昕、林玲。2DB32/TXXXX—XXXX小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定技術規(guī)程本文件規(guī)定了小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定的病原物接種體制備、抗性鑒定圃設置、接種方法、病情分級和抗性評價的技術要求。本文件適用于小麥品種（系）對莖基腐病抗性的鑒定和評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4404.1-2008糧食作物種子第1部分：禾谷類3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1接種體通過人工制備能夠侵染寄主并引起相應病害的病原體。3.2抗性評價根據(jù)采用的技術標準判別寄主植物對特定病害反應程度和抵抗水平的定性描述。4病原物接種體制備4.1接種菌株的分離從發(fā)病小麥莖基部典型病斑上以常規(guī)組織分離法分離莖基腐病原物。分離物經(jīng)單孢分離純化、形態(tài)學和分子生物學鑒定確認為假禾谷鐮孢（Fusariumpseudograminearum）后，經(jīng)致病性測定，篩選強致病力菌株轉至PDA培養(yǎng)基斜面，保存于4℃冰箱。4.2孢子液制備將假禾谷鐮孢強致病力菌株從冰箱取出活化，轉接于裝有6%綠豆湯培養(yǎng)液的三角瓶中，在25℃3DB32/TXXXX—XXXX和200rpm下震蕩培養(yǎng)3d后進行鏡檢，確認大量產(chǎn)生分生孢子后，配制孢子液。在顯微鏡下用血球計數(shù)板測定培養(yǎng)液中分生孢子的濃度，用無菌水將其稀釋至1.0×105個·mL-1。若暫時不用，可將孢子液置于4℃冰箱中臨時保存5d~6d。4.3接種體制備將小米粒按50g/瓶分裝至250mL三角瓶中滅菌，滅菌后每瓶加10mL上述孢子液，用無菌棒攪拌均勻后，于25℃下靜置培養(yǎng)7d~10d，直至菌絲充分生長并將小米粒粘結成塊。用玻璃棒將粘結成塊的小米粒搗散，倒于托盤上并進一步捏碎，用紗布覆蓋，置于陰涼通風處1d，期間數(shù)次翻動以使小米粒干燥程度一致。將接種病原菌的小米粒過篩以去除粘結的菌絲塊，然后將小米粒與蛭石按1∶3的重量比混勻，制成接種體。接種體可裝入保鮮袋中置于4℃冰箱中短期保存（不超過7d）。5抗性鑒定圃設置5.1鑒定圃選址鑒定圃設置在小麥莖基腐病適發(fā)區(qū)，選擇具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和灌溉條件、地勢平坦、土壤肥力中等偏上、地力均勻的地塊。5.2鑒定對照品種選擇感病對照品種矮抗58。5.3種植管理播種時間、土壤肥力水平和耕作管理與當?shù)卮筇锷a(chǎn)一致。同一重復內(nèi)鑒定材料播種、施肥、灌溉等農(nóng)事操作必須在同一天完成。鑒定圃內(nèi)不施用任何殺菌劑。鑒定小麥種子符合GB4404.1-2008標準，每份鑒定材料種植2次重復，每重復每份材料（50粒種子）種植1行，每50份鑒定材料設1組感病對照品種材料。5.4接種方法4DB32/TXXXX—XXXX接種前按以下要求整地：鑒定圃內(nèi)開播種行，行長100cm，深10cm，行距25cm。將每品種（系）待鑒定的50粒小麥種子均勻撒入行內(nèi)，用經(jīng)10目過篩的細土顆粒覆蓋種子，覆蓋厚度約為0.5cm。再將10g接種體均勻撒入每個行內(nèi)，用每行同側的土壤將接種體覆蓋。6病情調(diào)查6.1調(diào)查方法于小麥灌漿后期進行1次調(diào)查，每行調(diào)查50個單莖。6.2病情分級田間病情調(diào)查重點部位為小麥基部莖稈，其嚴重度分級及對應的癥狀如表1：表1人工病圃鑒定小麥莖基腐病嚴重度級別劃分及癥狀描述嚴重度分級癥狀描述0無可見發(fā)病癥狀1莖基部輕微變褐，但第一莖節(jié)無癥狀2地上部第一莖節(jié)變褐色3地上部第二莖節(jié)變褐色4地上部超過第二莖節(jié)變褐色，但未出現(xiàn)白穗5地上部超過第二莖節(jié)變褐色，產(chǎn)生白穗，或因發(fā)病未抽穗或整株死亡6.3病情指數(shù)計算病情指數(shù)計算公式：其中，DI為病情指數(shù)，i為病級數(shù)（0~nXi為i級的單元數(shù)，Si為i級嚴重度的代表值，Smax為嚴重度最高級值，∑為累加符號，從0級（無病單位）開始累加。7抗性評價7.1抗性評價當鑒定圃內(nèi)的感病對照材料（矮抗58）達到中感或感病時，則該批次抗莖基腐病鑒定視為有效，見表2：表2人工病圃鑒定小麥對莖基腐病抗性評價5DB32/TXXXX—XXXX抗性評價病情指數(shù)免疫（I）0抗?。≧）0<DI≤20中抗（MR）20<DI≤40中感（MS）40<DI≤60感?。⊿）DI>607.2重復鑒定同一品種重復鑒定兩年，每年設計2次重復。當年的抗性鑒定結果以該鑒定材料2次重復鑒定中病情指數(shù)較高的為準。根據(jù)兩年抗性鑒定結果對鑒定材料進行抗病性評價，抗性評價以最高病情指數(shù)對應的抗性程度為準。8鑒定記載表格小麥抗莖基腐病鑒定結果記載表格見附錄B6DB32/TXXXX—XXXX小麥莖基腐病菌的基本信息A.1病原菌小麥莖基腐?。‵usariumCrownRot）是一種由多種鐮孢菌引起的土傳病害，在江蘇省采集的表現(xiàn)莖基腐病癥狀的小麥病株上能分離到假禾谷鐮孢（Fusariumpseudograminearum）、禾谷鐮孢（F.graminearum）和亞洲鐮孢（F.asiaticum）三種鐮孢菌，但其中的優(yōu)勢菌為假禾谷鐮孢。假禾谷鐮孢（F.pseudograminearum）是1999年從禾谷鐮孢（F.graminearum）中獨立出來的一個新種。在不同的培養(yǎng)條件下，假禾谷鐮孢形成的菌落邊緣整齊或波浪狀，顏色通常為紅色、深紅色、紅褐色或白色，無氣味或微甜味。該菌在SNA上的菌絲寬度為1.5μm~9μm，分生孢子類型單一，通常呈鐮刀形至棒狀，有時略呈圓柱形，中間最寬，兩端均勻收縮和彎曲，具有明顯的弧形頂端和明顯的基部足細胞。2012年，河南省首次報道假禾谷鐮孢引起小麥莖基腐病，此后該病害在黃淮海麥區(qū)迅速擴展、暴發(fā)成災。小麥莖基腐病在江蘇省連云港、徐州、宿遷等旱茬麥