沉降菌測試方法

沉降菌測試方法1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿包在報紙里，放入恒溫烤箱中加熱至180℃后，干烤2小時。2、取X克培養(yǎng)基放入X克蒸餾水，放入高壓消毒鍋中加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。3、待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于33℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可采樣用。制備好培養(yǎng)皿宜在2—8℃環(huán)境中保存。4、采樣時，一般在100級層流罩中放置3個培養(yǎng)皿，在100000級，10000級按面積大小一般放2個培養(yǎng)皿。打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時，再將培養(yǎng)皿蓋上后倒置于恒溫培養(yǎng)箱33℃培養(yǎng)，時間不小于48小時，采樣點位置離地0.8m—1.5m左右。5、將培養(yǎng)皿舉起用肉眼直接計數(shù)，用記號筆點記然后用5—10倍放大鏡檢查是否遺漏，若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長菌落，并注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物區(qū)別。6、沉降菌測試前，被測潔凈室已消毒。被測潔凈室溫濕度須達到規(guī)定要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)，測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)選擇須符合生產(chǎn)要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。7、測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別工作服，靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。測試時間對單向流100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始，對非單向流，100000級以上凈化房間，測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。8、平均菌落數(shù)計算：M1+M2+M3平均菌落數(shù)=n—培養(yǎng)皿總數(shù)M1—1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)M2—2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)Mn—n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)用平均菌落數(shù)判斷潔凈空氣中微生物。潔凈室內(nèi)平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準，（100級≤1個；10000級≤3個；100000級≤10個）。若某潔凈室內(nèi)平均菌落數(shù)超過標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。人員進出潔凈生產(chǎn)區(qū)的一般程序：換鞋脫外套穿工潔作凈服氣或吹閘空淋室氣室潔凈生產(chǎn)區(qū)手消毒洗手進換鞋脫外套穿工潔作凈服氣或吹閘空淋室氣室潔凈生產(chǎn)區(qū)手消毒洗手單旁門向通單旁門向通出人員進出無菌操作潔凈生產(chǎn)區(qū)程序：洗臉手腕手消毒手消毒穿無菌外衣?lián)Q無菌鞋無潔菌凈操生作產(chǎn)區(qū)洗臉手腕手消毒手消毒穿無菌外衣?lián)Q無菌鞋無潔菌凈操生作產(chǎn)區(qū)氣氣閘吹室淋或室空穿無菌內(nèi)衣脫內(nèi)衣脫外套換鞋出細菌內(nèi)毒素試驗步驟：1、準備工作：移液管：0.1ml1支，1ml10支試管：10ml×4支，試管架2個（大小）燒杯40ml2個，錐形瓶2個試驗所用器皿需經(jīng)處理除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，玻璃器皿置電熱干燥箱內(nèi)180℃干烤至少2小時。細菌內(nèi)毒素檢查水10ml×4支細菌內(nèi)毒素工作標準品1支，每安瓿含內(nèi)毒素10EU鱟試劑0.1ml×8支同一批號3支瓣膜浸提介質(zhì)：細菌內(nèi)毒素檢查水浸提介質(zhì)體積計算公式：V==8.6（ml）8.6×3=25.8（ml）把細菌內(nèi)毒素檢查水4支外表擦凈打開，倒入燒杯中，用移液管取25.8ml倒入裝3只瓣膜燒杯中，用錫紙封口，放進提前打開升溫至37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1.5小時。供試液貯存應不超過2小時。注：V-浸提介質(zhì)體積，單位為毫升（ml）L-產(chǎn)品細菌內(nèi)毒素限值，單位為細菌內(nèi)毒素單位每毫升（EV/ml）λ-所用鱟試劑靈敏度標示值，單位為細菌內(nèi)毒素單位每毫升（EV/ml）2、細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查水1ml溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘。=1\*GB3①用移液管取0.1ml工作標準品和0.9ml檢查水在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。=2\*GB3②用移液管從第1管中取0.5ml混合液和0.5ml檢查水在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。（陽性對照溶液）=3\*GB3③用移液管取0.1ml工作標準品和0.9ml供試液在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。=4\*GB3④用移液管從第3管中取0.5ml混合液和0.5ml供試液在旋渦混勻器上混勻30秒鐘。（供試品陽性對照溶液）3、把8支鱟試劑外表擦凈全部打開放進試管架中，每支各加入0.1ml細菌內(nèi)毒素檢查水，在旋渦器上混勻，其中2支作供試品管，2支作陰性對照管，2支作陽性對照管，2支作供試品陽性對照管。每支供試品管加入0.1ml供試液；陰性對照管加入0.1ml檢查用水；陰性對照管加入0.1ml陽性對照溶液；供試品陽性對照管加入0.1ml供試品陽性對照溶液。封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入37±1℃恒溫器中孵育60±2分鐘，然后取出觀察結(jié)果，試管在孵育期間應避免任何振動。4、結(jié)果判斷：將試管從水浴箱中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性（＋），未形成凝膠或形成凝膠不堅實，變形并從管壁滑脫者為陰性（－）。陰性對照管均為陰性，陽性對照管，供試品陽性對照管均為陽性，試驗有效，否則無效。若陰性對照管為陽性，表明鱟試劑或檢查水或?qū)嶒炂骶呤芪廴?；若陽性對照管為陰性，表明鱟試劑或標準內(nèi)毒素已失效，或鱟試劑靈敏度及標準內(nèi)毒素效價標示不準確或標準內(nèi)毒素稀釋有誤。供試品陽性對照管為陰性，表明反應體系內(nèi)有抑制反應干擾因素存在。一、氯化物1、配制標準溶液：0.1mol/L硝酸銀溶液。稱取1.6987g分析純硝酸銀，定溶至100ml容量瓶中，轉(zhuǎn)入棕色試劑瓶中，避光保存，貼標簽。2、取樣，量取50ml樣品水平行樣（2份）倒入試管中，加5滴硝酸，再加入1ml硝酸銀。均不得發(fā)生渾濁。二、硫酸鹽1、配制標準溶液：稱取5±0.5g氯化鋇（分析純），定溶至100ml容量瓶，倒入試劑瓶，貼標簽。（如果渾濁，把蒸餾水燒開，放涼再用）2、分析：取樣50ml平行樣（2份）倒入試管中，加2ml氯化鋇溶液，不得發(fā)生渾濁。三、鈣鹽1、配制標準溶液：稱取分析純草酸銨3.5g，定溶至100ml容量瓶，貼標簽。2、分析：取樣50ml平等樣2份，倒入試管中，加2ml草酸銨溶液，均不得發(fā)生渾濁。四、二氧化碳1、配制標準溶液：稱取分析純氫氧化鈣0.3g，定溶至100ml容量瓶，用橡皮塞塞緊，用力振搖，放置1小時，用時取清液。2、分析：取樣25ml平等樣（2份）倒入帶蓋的試管中，加25ml氫氧化鈣溶液，放置1小時，振搖，1小時內(nèi)不得發(fā)生渾濁。五、易氧化物1、配制標準溶液：=1\*GB3①高錳酸鉀溶液：取3.3克高錳酸鉀，加水1050ml，煮沸15分鐘，加水到1000ml，密塞后靜置2天以上，用微孔玻璃漏斗過濾，搖勻，標定其濃度。=2\*GB3②稀硫酸：取分析純硫酸（98%）57ml，（注意燒杯里放蒸餾水，沿杯壁緩慢倒入硫酸57ml，定溶至1000ml，放涼再用）2、標定：取在105℃干燥至恒重的基準草酸鈉約0.2克，精密稱定，加新沸過冷水250ml與硫酸10ml攪拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液約25ml，待褪色后，加熱到65℃，繼續(xù)滴定至溶液顯微紅色并保持30秒鐘不褪；當?shù)味ńK了時，溶液溫度應不低于55℃，每1ml高錳酸鉀滴定液（0.02mol/L）相當于6.70mg草酸鈉，根據(jù)本液消耗量與草酸鈉取用量，算出本液濃度，即得。貯藏：置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密閉保存。3、分析：取樣100ml平行樣（2份）加稀硫酸10ml，煮沸后，加高錳酸鉀滴定液（0.02M）0.10ml，再煮沸10分鐘，粉紅色不得完全消失。六、氨1、配制標準溶液=1\*GB3①納氏試劑：稱取60g氫氧化鉀，溶于約250ml無氨水，冷卻至室溫。另外稱取20g碘化鉀溶于100ml無氨水，邊攪拌邊逐步加入二氯化汞結(jié)晶粉末（約10克），至出現(xiàn)朱紅色沉淀不易溶解時，改為滴加飽和二氯化汞溶液，保持攪拌，到出現(xiàn)少量朱紅色沉淀不易溶解時，停止滴加飽和二氯化汞溶液，然后把該溶液緩慢注入上述已冷卻的氫氧化鉀溶液中，邊注入邊攪拌，并用無氨水稀釋至400ml，然后靜置過夜。最后將該溶液上清液至聚乙烯塑料瓶中，常溫避光保存。=2\*GB3②氯化銨溶液：稱取分析純氯化銨0.0315g，定溶至1000ml（0.0032g100ml）容量瓶中，轉(zhuǎn)入試劑瓶中保存，貼標簽。2、分析：取樣50ml，加納氏試劑2ml，放置15分鐘。如果顯色，加氯化銨溶液1.5ml，加無氨水48ml，加納氏試劑2ml，對照顏色不得更深。（氨含量0.00003%）七、重金屬1、配制標準溶液=1\*GB3①醋酸鹽緩沖溶液：（PH=3.5）稱取分析純醋酸銨25g，加蒸餾水25ml溶解后，加鹽酸液[7mol/L(稱取0.0255g至100ml定溶至100ml)]38ml，再用鹽酸液[2mol/L(稱取0.0073g至100ml定溶)]準確調(diào)節(jié)PN值3.5（電位計指示）用水稀釋至100ml，倒入試劑瓶待用。=2\*GB3②硫代乙酰胺溶液：稱取硫代乙酰胺4g，加水溶解成100ml，置冰箱中保存。臨用前取混合液[由1mol/L氫氧化鈉（氫氧化鈉4克＋100ml蒸餾水）15ml，水5.0ml及甘油20ml組成]5.0ml加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。=3\*GB3③鉛標準貯備液：稱取110℃干燥恒重的硝酸鉛0.1598g，置1000ml容量瓶中加硝酸5ml與水50ml溶解后用水稀釋至刻度，搖勻，作標準貯備液，鉛的濃度為100ug/ml。臨用前，精確量取鉛標準貯備液稀釋至所需濃度。2、分析：取樣40ml，加醋酸鹽緩沖液2ml，加硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘。取38ml樣品水加2ml鉛標液加醋酸鹽緩沖液2ml加硫代乙酰胺2ml，對比顏色；40ml樣品水的顏色不得比鉛標液的對照管深。（鉛的含量0.00005%）八、不揮發(fā)物：1、取干凈蒸發(fā)皿200ml2個，分別標號放入105℃干燥箱中。第一次：烘烤3小時后，放進干燥皿中冷卻40分鐘，天平稱重，記錄。第二次：烘烤3小時后，放進干燥皿中冷卻40分鐘，天平稱重，記錄。注：第一次和第二次重量差0.3毫克以內(nèi)，如超過再恒重一次。2、用移液管量取100ml樣品水，放入恒重的蒸發(fā)皿中，水分在水浴鍋上蒸干，同時做蒸餾水平行樣。3、第一次：把蒸發(fā)皿放進干燥箱中烘烤3小時，放進干燥皿中冷卻40分鐘，天平稱重，記錄。第二次：把蒸發(fā)皿放進干燥箱2小時，放進干燥皿中冷卻40分鐘，天平稱重，記錄。4、殘渣計算公式：W=[(W12－W11)－(W02－W01)]×1000W-蒸發(fā)殘渣質(zhì)量mgW11-未加入檢驗液蒸發(fā)皿質(zhì)量gW12-加入檢驗液蒸發(fā)皿質(zhì)量gW01-未加入空白液的蒸發(fā)皿質(zhì)量gW02-加入空白液的蒸發(fā)皿質(zhì)量g九、酸堿度1、配制標準試劑:0.05mol/L氫氧化鈉溶液：0.05mol/L40=2g=0.2g/100ml稱取0.2g氫氧化鈉定溶至100ml。=1\*GB3①甲基紅指示液：取甲基紅0.1g，加7.4ml氫氧化鈉，在超聲波完全溶解，再加水稀釋至200ml裝入試劑瓶。變色范圍：PH4.2-6.3（紅-黃）試錯4-6溴百里香藍：稱取溴百里香酚藍0.1g，加3.2ml氫氧化鈉使溶解，再加水稀釋至200ml裝入試劑瓶。變色范圍：PH6.0-7.6（黃-藍）2、分析：取樣10ml，加甲基紅指示液2滴，不得顯紅色，取樣10ml，加溴百里香酚藍指示液5滴，不得顯藍色。PH測定法：除另有規(guī)定外，水溶液的PH值應以玻璃電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極的酸度計進行測定。酸度計應定期進行計量檢定，并符合國家有關(guān)規(guī)定。測定前，應采用下列標準緩沖液校正儀器，也可用國家標準物質(zhì)管理部門發(fā)放標示PH值準確至0.01PH各種標準緩沖液校正儀器。1、儀器校正用的標準緩沖液=1\*GB2⑴鄰苯二甲酸鹽標準緩沖液：精密稱取在115℃±5℃干燥2-3小時鄰苯二甲酸氫鉀10.21g，加水使溶解并稀釋至1000ml（25℃PH=4.00）。=2\*GB2⑵磷酸鹽標準緩沖液：精密稱取在115℃±5℃干燥2-3小時的無水磷酸氫二鈉3.55g與磷酸二氫鉀3.40g，加水使溶解并稀釋至1000ml(25℃PH=6.86）。=3\*GB2⑶硼砂標準緩沖液：精密稱取硼砂3.81g(注意，避免風化)加水使溶解并稀釋至1000ml置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空氣中二氧化碳進入（25℃PH=9.18）。2、注意事項：=1\*GB2⑴測定前，按各品種項下的規(guī)定，選擇二種PH值約相差3個PH單位標準緩沖液，并使供試液的PH值處于二者之間。=2\*GB2⑵取與供試液PH值較接近的第一種標準緩沖液對儀器進行校正（定位）使儀器示值與表列數(shù)值一致。=3\*GB2⑶儀器定位后，再用第二種標準緩沖液核對儀器示值，誤差應不大于±0.02PH單位。若大于此偏差，則應小心調(diào)節(jié)斜率，使示值與第二種標準緩沖液的表列數(shù)值相符。重復上述定位與斜率調(diào)節(jié)操作，至儀器示值與標準緩沖液規(guī)定數(shù)值相差不大于0.02PH單位，否則，需檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。=4\*GB2⑷每次更換標準緩沖液或供試液前，應用純化水充分洗滌電極，然后將水吸盡，也可用所換的標準緩沖液或供試液洗滌。=5\*GB2⑸配制標準緩沖液與溶解供試品的水，應是新沸過并放冷的純化水，其PH值應為5.5-7.0。=6\*GB2⑹新購置的玻璃電極需在蒸餾水燒杯中浸泡24小時活化后才可使用。3、操作：=1\*GB2⑴打開電源預熱15分鐘，探頭用蒸餾水洗凈，把探頭帽里倒上飽和氯化鉀溶液。=2\*GB2⑵測定前，分別用鄰苯二甲酸鹽標準緩沖液4.0校正后，用蒸餾水清洗探頭，用濾紙毛邊輕輕沾一沾。用磷酸鹽標準緩沖液6.86校正，用硼砂標準緩沖液9.18校正后，使儀器示值與表列數(shù)值一致。=3\*GB2⑶把新沸過冷卻蒸餾水裝入小燒杯中，放在探頭下，PH值在5.5-7.0之間合格。之后用蒸餾水清洗探頭，把裝滿飽和溶液的探頭帽蓋上，拔掉電源，將電極放回盒中。環(huán)氧乙烷殘留量分析-比色分析法1、原理：環(huán)氧乙烷在酸性條件下水解成乙二醇，乙二醇經(jīng)高碘酸氧化生成甲醛，甲醛與品紅-亞硫酸試液反應產(chǎn)生紫紅色化合物，通過比色分析可求得環(huán)氧乙烷含量。2、溶液配制：0.1mol/L鹽酸：取0.9ml鹽酸稀釋至100ml高碘酸溶液（5g/L）：稱取高碘酸0.5g，溶于水，稀釋至100ml硫代硫酸鈉溶液（10g/L）：稱取硫代硫酸鈉1.0g，溶于水，稀釋至100ml亞硫酸鈉溶液（100g/L）：稱取10.0g無水亞硫酸鈉溶于水，稀釋至100ml品紅-亞硫酸試液：稱取0.1g堿性品紅，加入120ml熱水溶解，冷卻后加入10%亞硫酸鈉溶液20ml，鹽酸2ml置于暗處。乙二醇標準貯備液：取一個外部干燥、清潔50ml容量瓶，加水約30ml，精確稱重，精確量取0.5ml乙二醇，迅速加入瓶中，搖勻，精確稱重。兩次稱重之差即為溶液中所含乙二醇的含量。加水至刻度，混勻計算其濃度：C=×1000C-乙二醇標準貯備液濃度，克/升m-溶液中乙二醇質(zhì)量，克乙二醇標準溶液：精確量取標準貯備液1.0ml，用水稀釋至1000ml3、模擬使用浸提法：=1\*GB2⑴浸提介質(zhì)：用水作為浸提介質(zhì)。=2\*GB2⑵浸提溫度：整個或部分與人體接觸的器械在37℃浸提。=3\*GB2⑶浸提時間：不短于1小時。=4\*GB2⑷浸提表面：器械與藥液或血液接觸表面。4、試驗步驟：=1\*GB2⑴取5支納氏比色管，分別精確加入0.1mol/L鹽酸2ml，再精確加入0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇標準溶液，另取1支納氏比色管，精確加入0.1mol/L鹽酸2ml作空白對照。=2\*GB2⑵于上述各管中分別加入高碘酸溶液（5g/L）0.4ml，搖勻，放置1小時，然后分別滴加硫代硫酸鈉溶液至出現(xiàn)黃色恰好消失，再分別加入品紅-亞硫酸試液0.2ml，用蒸餾水稀釋至10ml，搖勻，35℃-37℃條件下放置1小時，于560nm波長處以空白液作參比，測定吸光度。繪制吸光度-體積標準曲線。=3\*GB2⑶精確量取供試液2.0ml于納氏比色管中，以測得吸光度從標準曲線上查得試液相應的體積。5、結(jié)果計算：環(huán)氧乙烷殘留量用絕對含量或相對含量表示環(huán)氧乙烷絕對含量：WEO=1.775VC1MWEO-單位產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷絕對含量M-單位產(chǎn)品質(zhì)量C1-乙二醇標準溶液深度V-標準曲線上找出供試液相應體積環(huán)氧乙烷相對含量：CEO=1.775VC1×103CEO-單位產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷相對含量C1-乙二醇溶液濃度V-標準曲線上找出供試液相應體積化學實驗室安全制度：1、實驗室人員要熟悉實驗室及周圍環(huán)境，清楚水電開關(guān)位置，懂得消防器具使用方法，一旦發(fā)生事故，應采取相應措施。2、實驗室各類化學試劑要根據(jù)其性質(zhì)分類，定置存放，標記清楚，擺放整齊，用量嚴格按照規(guī)定量。3、各種試劑、容器要帶有書寫清楚標簽，避免拿錯、用錯，吸取各溶液時要用橡皮吸球，嚴禁用嘴吸，易燃、易爆試劑要遠離火源，使用腐蝕性藥品應小心，避免沾在衣服或皮膚上。4、實驗室排風設(shè)備應保持通暢。5、實驗完畢后，應及時洗滌所用器皿，整理好實驗用品。6、實驗后認真整理實驗記錄，處理實驗所得數(shù)據(jù)。7、離開實驗室前，務(wù)必進行水電門窗安全檢查，鎖好門方可離開。生物檢測室安全制度：1、實驗用過培養(yǎng)基、試管、吸管用品須經(jīng)有效消毒處理后方可丟棄或清洗。2、操作儀器時不得超負荷、超量使用。凡有過熱、冒煙、異常氣味和異常聲音等現(xiàn)象應立即切斷電源，停止運行，查找原因。3、實驗儀器設(shè)備啟動后，工作人員要堅守崗位，凡連續(xù)工作儀器設(shè)備須專人看管。4、每日上班后檢查冰箱、恒溫箱工作情況，下班檢查水、電、門、窗，確保安全。5、實驗室應備小型滅火器，每人應會使用。生物室藥典一部高壓消毒鍋恒溫培養(yǎng)箱2臺旋渦混合儀恒溫水浴箱電熱鼓風干燥箱冰箱酒精燈營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基改