SYB509注射液制造和檢定規(guī)程

申請(qǐng)分類：新藥申請(qǐng)

注冊(cè)分類：治療用生物制品2類

SYB509注射液(lOOmg(lOml)/

瓶)制造和檢定規(guī)程

SYB509注射液資料13

目錄

第一部分制造和檢定規(guī)程.................................................1

1.基本要求..........................................................1

2.制造.............................................................1

2.1工程細(xì)胞....................................................1

2.2原液制備...................................................4

2.3半成品.....................................................12

2.4成品......................................................13

3.檢定............................................................14

3.1原液檢定...................................................14

3.2半成品檢定.................................................19

3.3待包裝品、成品檢定........................................21

4.保存、運(yùn)輸及有效期..............................................26

5.使用說(shuō)明........................................................26

6.生產(chǎn)單位........................................................26

7.相關(guān)文件........................................................27

第二部分制造和檢定規(guī)程起草說(shuō)明.......................................28

1.蛋白含量........................................................28

1.1凱氏定氮蛋白濃度測(cè)定.......................................28

1.2同類產(chǎn)品消光系數(shù)測(cè)定......................................29

1.3SYB509注射液樣品消光系數(shù)測(cè)定............................29

2.SYB509注射液抗體溶液（制劑緩沖液）密度的標(biāo)定..................30

3.動(dòng)物來(lái)源原料相關(guān)的檢測(cè)..........................................31

第二部分檢定方法驗(yàn)證資料.............................................32

1.無(wú)菌檢查法分析方法驗(yàn)證資料......................................32

2.細(xì)菌內(nèi)毒素分析方法驗(yàn)證資料......................................38

3.體積排阻液相色譜法聚合體雜質(zhì)含量及單體純度測(cè)定驗(yàn)證資料..........51

SYB509注射液資料13

4.還原毛細(xì)管電泳IgG純度分析方法驗(yàn)證資料.........................68

5.UV法蛋白含量測(cè)定方法驗(yàn)證資料..................................92

6.離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)驗(yàn)證資料...................105

7.毛細(xì)管等電聚焦分析方法驗(yàn)證資料.................................118

8.非還原毛細(xì)管電泳IgG片段分析方法驗(yàn)證資料......................133

9.生物活性檢測(cè)方法驗(yàn)證資料.......................................157

10.結(jié)合活性分析方法驗(yàn)證資料......................................166

SYB509注射液資料13

表目錄

表1SYB509注射液制劑處方......................................12

表2二批同類產(chǎn)品消光系數(shù)測(cè)定....................................29

表3SYB509注射液樣品消光系數(shù)測(cè)定..............................29

SYB509注射液資料13

第一部分制造和檢定規(guī)程

本品（SYB509注射液）系由穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并可表達(dá)程序性死亡受體1（Programmed

Death1,PD-1）全人源單克隆抗體重組質(zhì)粒的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)、分

離和高度純化后獲得的重組抗PD-1全人源單克隆抗體RecombinantantiPD-1human

monoclonalantibody）制成，不含防腐劑和抗生素。

1.基本要求

SYB509注射液屬于人用重組單克隆抗體制品，具有復(fù)雜的質(zhì)量屬性，在充分了

解制品質(zhì)量屬性的基礎(chǔ)上確定制品關(guān)鍵質(zhì)量屬性，以“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)"‘風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”的原

則和理念，制定相應(yīng)的質(zhì)量控制策略，并通過(guò)建立有效的”質(zhì)量管理體系"，保證制品

質(zhì)量可控。人用重組單克隆抗體制品的制造主要包括基因克隆、表達(dá)載體的制備、

工程細(xì)胞的篩選及細(xì)胞庫(kù)的建立、細(xì)胞培養(yǎng)及收獲、目的蛋白的提取、純化和制劑

等過(guò)程。

生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料和輔料應(yīng)符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞株的來(lái)源、管理及

檢定應(yīng)符合"生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程"的相關(guān)要求。生

產(chǎn)質(zhì)量管理應(yīng)符合中國(guó)現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。

2.制造

2.1工程細(xì)胞

2.1.1工程細(xì)胞名稱及來(lái)源

重組抗PD-1全人源單克隆抗體工程細(xì)胞，系帶有該單抗輕、重鏈基因的重組質(zhì)

粒轉(zhuǎn)染的CHO-K1細(xì)胞，細(xì)胞株名稱為重組抗PD-1全人源單克隆抗體工程細(xì)胞，細(xì)

胞克隆號(hào)509/A1-F7。

2.1.2細(xì)胞庫(kù)建立、傳代及保存

經(jīng)篩選鑒定可高表達(dá)目的蛋白的CHO-K1細(xì)胞，在含有篩選劑的無(wú)血清培養(yǎng)基

資料13SYB509注射液

擴(kuò)增后，凍存于液氮中，建立主細(xì)胞庫(kù):建立的主細(xì)胞庫(kù)每支細(xì)胞數(shù)不少于IO7個(gè)，

每批不少于50支。從主細(xì)胞庫(kù)復(fù)蘇細(xì)胞，傳代、擴(kuò)增后凍存于液氮中，作為工作細(xì)

胞庫(kù)。工作細(xì)胞庫(kù)每支細(xì)胞數(shù)不少于IO,個(gè)，每批不少于100支。從主細(xì)胞庫(kù)至建立

工作細(xì)胞庫(kù)的過(guò)程中每次傳代不超過(guò)12代或培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)30天（每個(gè)倍增為1

代，下同〉工作細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞復(fù)蘇后用于生產(chǎn)的最高限定代次為45代。細(xì)胞庫(kù)凍存

于液氮中，凍存液為含約8%二甲基亞楓的無(wú)血清培養(yǎng)液，不含有動(dòng)物來(lái)源成分及篩

選劑。主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)經(jīng)檢定合格后均可用于生產(chǎn)。

主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)應(yīng)分別存放。

2.1.3主細(xì)胞庫(kù)及工作細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞的檢定應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品

通則”生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞

基質(zhì)制備及檢定規(guī)程"的規(guī)定。

2.1.3.1細(xì)胞鑒別試驗(yàn)應(yīng)用生物化學(xué)方法（同工酶分析法）進(jìn)行鑒別，應(yīng)為典型

倉(cāng)鼠來(lái)源細(xì)胞。

2.1.3.2細(xì)菌、真菌檢查

參考《中華人民共和國(guó)藥典》微生物檢查法1101"無(wú)菌檢查法"中薄膜過(guò)濾法

進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

2.1.3.3分枝桿菌檢查

參考《中華人民共和國(guó)藥典》微生物檢查法1101"無(wú)菌檢查法”對(duì)主細(xì)胞庫(kù)進(jìn)

行分枝桿菌檢查，應(yīng)符合規(guī)定。

2.1.3.4支原體檢查

參考《中華人民共和國(guó)藥典》微生物檢查法3301”支原體檢查法"或"熒光

定量PCR法"檢驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。

2

SYB509注射液資料13

2.1.3.5病毒檢查

細(xì)胞內(nèi)、外源病毒檢查參考《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品通則中“生物制

品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程"對(duì)主細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行檢驗(yàn)，細(xì)胞外源病毒

檢查參考《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品通則中“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞

基質(zhì)制備及檢定規(guī)程"對(duì)工作細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行檢驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。

2.1.4工程細(xì)胞庫(kù)的傳代穩(wěn)定性研究

2.1.4.1基因水平穩(wěn)定性

2.1.4.1.1基因組目的序列

對(duì)主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行基因組PCR擴(kuò)增目的序列并測(cè)序，輕鏈和重鏈的

目的基因組序列應(yīng)與理論序列一致。

2.1.4.1.2插入基因拷貝數(shù)

對(duì)主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行基因組熒光定量PCR,插入基因拷貝數(shù)應(yīng)維持穩(wěn)

定水平。

2.1.4.2轉(zhuǎn)錄水平穩(wěn)定性

2.1.4.2.1cDNA序歹U測(cè)定

對(duì)主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)總RNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的序列并測(cè)序，輕鏈和重鏈

的目的cDNA序列應(yīng)與理論序列一致。

2.1.4.2.2mRNA相對(duì)水平

對(duì)主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行總RNA熒光定量PCR,輕、重鏈mRNA應(yīng)維持

穩(wěn)定水平。

2.1.4.3表達(dá)水平穩(wěn)定性

對(duì)主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)不同階段在搖瓶中進(jìn)行Fed-Batch培養(yǎng)，培養(yǎng)上清進(jìn)行

蛋白表達(dá)量測(cè)定，15P應(yīng)不小于1.0g/L:45P應(yīng)不小于0.7g/Lo取主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)

胞庫(kù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的培養(yǎng)上清進(jìn)行PCD檢測(cè)，比較工程細(xì)胞庫(kù)不同階段表達(dá)量的穩(wěn)定

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資料13SYB509注射液

性，應(yīng)不小于10pg/(cell*d)o

2.2原液制備

細(xì)胞培養(yǎng)依次為搖瓶多級(jí)擴(kuò)增一種子反應(yīng)器單/多級(jí)擴(kuò)增一生產(chǎn)反應(yīng)器培養(yǎng)，生

產(chǎn)反應(yīng)器培養(yǎng)模式采用Fed-Batch培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作，從

工作細(xì)胞復(fù)蘇至上清收獲，細(xì)胞倍增不得超過(guò)45代。

2.2.1培養(yǎng)基

用于SYB509注射液生產(chǎn)的培養(yǎng)基為無(wú)血清培養(yǎng)基，不含有動(dòng)物來(lái)源的蛋白或

其它動(dòng)物源性大分子成分。培養(yǎng)基主要成分為無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、維生素

類、微量元素、脂肪酸、植物蛋白水解物、重組人膜島素等。

2.2.2細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)依次為搖瓶多級(jí)擴(kuò)增一種子反應(yīng)器單/多級(jí)擴(kuò)增一生產(chǎn)反應(yīng)器培養(yǎng)，生

產(chǎn)反應(yīng)器培養(yǎng)模式采用Fed-Batch培養(yǎng)。

2.2.2.1種子細(xì)胞復(fù)蘇

自主細(xì)胞庫(kù)或工作細(xì)胞庫(kù)取出1支凍存細(xì)胞，置37c水浴，并不斷振搖，至

完全融化。取1支離心管，加入培養(yǎng)基適量，將融化后的細(xì)胞懸液移入離心管中，

室溫低速離心5分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用少許培養(yǎng)基重懸。取搖瓶加入培養(yǎng)基適

量，將細(xì)胞懸液移入。搖瓶置于二氧化碳搖床中振蕩培養(yǎng)，二氧化碳搖床參數(shù)設(shè)定：

37C,120±50rpm,C02濃度2~10%。

細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞復(fù)蘇后，于搖瓶中用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行傳代和擴(kuò)增，供下級(jí)生物反

應(yīng)器接種用。

2.2.2.2一級(jí)種子擴(kuò)增復(fù)蘇的細(xì)胞利用搖瓶逐級(jí)進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，并依據(jù)后一級(jí)生物

反應(yīng)器接種的要求

調(diào)整細(xì)胞密度和種子液體積，搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增過(guò)程中細(xì)胞密度應(yīng)控制在0.3~6.0xl()6

個(gè)/ml。搖瓶置于二氧化碳搖床中振蕩培養(yǎng)，二氧化碳搖床參數(shù)設(shè)定:37C,120±50

rpm,CO2濃度2~10%。

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SYB509注射液資料13

2.2.2.3后續(xù)種子擴(kuò)增可以為單級(jí)反應(yīng)器種子培養(yǎng)，也可以多級(jí)反應(yīng)器種子培養(yǎng)，

取決于生產(chǎn)用反應(yīng)器的規(guī)模，一般放大比例為1:37:6。

2.2.2.3.1二級(jí)種子擴(kuò)增

種子要求:采用搖瓶種子時(shí)，要求細(xì)胞密度為L(zhǎng)5~6.0xl()6個(gè)局1,細(xì)胞活率大于

90%,接種后活細(xì)胞密度0.3~L5xl()6個(gè)/mi：若采用正在培養(yǎng)的另一個(gè)一級(jí)種子反應(yīng)

器接種，則要求細(xì)胞活率大于85%,接種后活細(xì)胞密度0.5~2.0xl()6個(gè)/mi：

培養(yǎng)方式:補(bǔ)料批次或連續(xù)灌注培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度和活率達(dá)到供種要求：設(shè)定

溫度:37C:pH:6.6~7.2,通過(guò)CO2和2mol/L的碳酸納或8%碳酸氫納對(duì)pH進(jìn)行調(diào)控:

通氣方式:表層、無(wú)泡和(或)微泡通氣，控制溶氧，保持細(xì)胞培養(yǎng)懸液中溶

解氧飽和度不低于10%:

當(dāng)二級(jí)種子細(xì)胞密度不小于1.5x106個(gè)的1,細(xì)胞活率不低于85%時(shí)，經(jīng)顯微鏡

鏡檢無(wú)異常，可用于供種下級(jí)種子擴(kuò)增。

2.2.2.3.2二級(jí)種子擴(kuò)增根據(jù)需要，可以存在多級(jí)后續(xù)反應(yīng)器種子擴(kuò)增培養(yǎng)，種子

應(yīng)來(lái)源于前級(jí)或同級(jí)種子反應(yīng)器，其他相應(yīng)要求與一級(jí)反應(yīng)器種子相同。

2.2.2.4生產(chǎn)反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)

2.2.2.4.1細(xì)胞培養(yǎng)工藝條件

接種要求:種子細(xì)胞活率不低于85%,接種后活細(xì)胞密度應(yīng)為0.3-1.5X106個(gè)/ml。

允許使用1個(gè)或2個(gè)反應(yīng)器種子向一個(gè)生產(chǎn)用反應(yīng)器接種，但2個(gè)種子反應(yīng)器的細(xì)

胞必須來(lái)源于同1支凍存細(xì)胞:設(shè)定溫度:33~37℃:

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資料13SYB509注射液

pH:值6.6~7.2,通過(guò)CO2和2moi/L的碳酸納或8%碳酸氫納對(duì)pH進(jìn)行調(diào)控：

攪拌轉(zhuǎn)速:根據(jù)設(shè)備情況，應(yīng)滿足細(xì)胞懸浮及氣體有效傳質(zhì)：通氣方式:微泡通

氣、表層通氣，控制溶氧，保持細(xì)胞培養(yǎng)懸液中溶解氧飽和度大于10%o

2.2.2A.2生產(chǎn)反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)終點(diǎn)判定

生產(chǎn)反應(yīng)器自接種至收獲正常培養(yǎng)周期為10~16天。若發(fā)生下列任何一種情況，

則細(xì)胞培養(yǎng)終止：

鏡下可見(jiàn)明顯微生物生長(zhǎng)：

細(xì)菌內(nèi)毒素大于50EU/ml:

設(shè)備故障：細(xì)胞活率小于30%:

培養(yǎng)第10天活細(xì)胞密度小于1.0x106個(gè)/ml：

在工藝規(guī)程規(guī)定時(shí)間內(nèi)細(xì)胞密度或蛋白表達(dá)量無(wú)法達(dá)到收獲的要求。由前兩種原

因（污染）號(hào)起的異常終止，培養(yǎng)液經(jīng)滅活后排放:由其它原因引起的異常終止，應(yīng)分析

原因，按偏差處理并通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確認(rèn)是否影響最終產(chǎn)品質(zhì)量，如確定不影響最終的

產(chǎn)品質(zhì)量，細(xì)胞培養(yǎng)液可進(jìn)入下一工序。

2.2.2.5收獲及后處理

正常的培養(yǎng)周期為10~16天，在正常的培養(yǎng)周期中，根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)終點(diǎn)判定要

求，確定收獲。

收獲的細(xì)胞培養(yǎng)懸液通過(guò)高速離心串聯(lián)深層過(guò)濾或單獨(dú)深層過(guò)濾進(jìn)行澄清，收

集濾出液，濾出液濁度應(yīng)不大于30NTU。

深層過(guò)濾濾出液儲(chǔ)存于清潔容器中，用于粗純。

6

SYB509注射液資料13

2.2.2.6細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的監(jiān)控項(xiàng)目、方法及檢測(cè)頻度

活細(xì)胞密度及細(xì)胞活率:顯微鏡檢。檢測(cè)頻度，細(xì)胞培養(yǎng)全程至少每3天取樣

檢測(cè)，種子擴(kuò)增進(jìn)入下一級(jí)前取樣檢測(cè)，生產(chǎn)反應(yīng)器在培養(yǎng)至第10天需取樣檢測(cè)。

葡萄糖含量:葡萄糖氧化酶法。檢測(cè)頻度，細(xì)胞培養(yǎng)全程至少每3天取樣檢測(cè)，

種子擴(kuò)增進(jìn)入下一級(jí)前取樣檢測(cè)，生產(chǎn)反應(yīng)器在培養(yǎng)至第10天需取樣檢測(cè)。

微生物污染:顯微鏡檢。檢測(cè)頻度，細(xì)胞培養(yǎng)全程至少每3天取樣檢測(cè)，種子

擴(kuò)增進(jìn)入下一級(jí)前取樣檢測(cè)，生產(chǎn)反應(yīng)器在培養(yǎng)至第10天需取樣檢測(cè)。細(xì)菌內(nèi)毒素:

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。檢測(cè)頻度，種子擴(kuò)增過(guò)程每一級(jí)種子至少取樣檢測(cè)一次，生產(chǎn)反

應(yīng)器培養(yǎng)過(guò)程至少取樣檢測(cè)2次。

目的蛋白表達(dá)量:生產(chǎn)反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中采用“rProteinA法上清表達(dá)量測(cè)定

法”檢測(cè)培養(yǎng)上清中目的蛋白表達(dá)量，從第7天開(kāi)始，至少每3~5天檢測(cè)一次。

2.2.2.7細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng)

2.2.2.7.1種子

復(fù)蘇以后，接種于生產(chǎn)用生物反應(yīng)器培養(yǎng)之前的所有在搖瓶或生物反應(yīng)器中培

養(yǎng)的細(xì)胞，均可稱為種子。各級(jí)種子在培養(yǎng)過(guò)程中都應(yīng)保持在合適的活細(xì)胞密度

和活率范圍內(nèi)。

2.2.2.7.2培養(yǎng)時(shí)間在細(xì)胞擴(kuò)增過(guò)程中，可以選擇前級(jí)或同級(jí)培養(yǎng)細(xì)胞作為種子來(lái)

源，在選擇的過(guò)程中必須保證整個(gè)培養(yǎng)時(shí)間在要求的范圍內(nèi)。

2.2.2.7.3種子轉(zhuǎn)移細(xì)胞培養(yǎng)的級(jí)別劃分為多個(gè)級(jí)別:種子復(fù)蘇、搖瓶種子液制備，

一級(jí)或多級(jí)反應(yīng)器種子培養(yǎng)，生產(chǎn)用生物反應(yīng)器培養(yǎng)。當(dāng)上一級(jí)或同級(jí)細(xì)胞

的活細(xì)胞密度、活率滿足接種要求時(shí)，即可作為種子進(jìn)行接種。種子不限于

僅接種下一級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)，也可以為同級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)供種。

7

資料13SYB509注射液

2.2.2.7.4無(wú)菌

細(xì)胞培養(yǎng)的全過(guò)程均需嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止外源性細(xì)菌、病毒等污染，避免

增加微生物負(fù)荷。

2.2.3分離純化

深層過(guò)濾濾出液經(jīng)重組蛋白A親和層析，低pH孵育滅活病毒，澄清過(guò)濾，再

經(jīng)離子交換層析、疏水層析、除病毒過(guò)濾、超濾濃縮、緩沖液置換及降低生物負(fù)

荷過(guò)濾等純化步驟，制得的SYB509原液，使其達(dá)到本規(guī)程3.1項(xiàng)要求。

2.2.3.1重組蛋白A親和層析

填料為重組蛋白A親和層析介質(zhì)，上樣載量不超過(guò)每升介質(zhì)28克蛋白。

2.2.3.1.1柱平衡

平衡液（20mmol/L磷酸緩沖液+150mmol/L氯化納，pH:6.60~7.40）平衡層析

柱至流出液紫外基線走平，流速為60~160cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.1.2上樣

濾出液過(guò)柱上樣，流速為60-160cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.1.3上樣后平衡

平衡液（20mmol/L磷酸緩沖液+150mmol/L氯化納，pH:6.60~7.40＞沖洗層析

柱至流出液紫外回基線，流速為60-160cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.1.4洗脫

洗脫液（25mmol/L拘橡酸，pH:3.30~3.70）過(guò)柱洗脫。流速為60-160cm/h,壓

力不高于2bar?收集入280處有紫外吸收的流出峰，即為“親和層析洗脫峰"。洗脫峰

收集后立即取樣、密封、貼簽，2~8c暫存。

2.2.3.1.5再生

再生液（0.1mol/L磷酸）再生不少于3個(gè)柱體積，流速為60-160cm/h,壓力不高

于2bare

8

SYB509注射液資料13

2.2.3.1.6柱清洗消毒

消毒液(O.lmol/L氫氧化納+l.Omol/L氯化納)消毒不少于1.5個(gè)柱體積，流速

為60-160cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.1.7柱保存

柱清洗消毒后用平衡液(20mmol/L磷酸緩沖液+150mmol/L氯化納，pH:

6.60~7.40)平衡至層析柱pH為中性，保存于2%苯甲醇+0.1mol/L醋酸納中。

2.2.3.2低pH孵育

檢測(cè)”親和層析主峰"，pH應(yīng)為3.5~3.8,否則用調(diào)節(jié)液(500mmol/L拘橡酸，

pH:3.3O~3.7O或lmol/LTris)調(diào)節(jié)?？刂茰囟葹槭覝?18~25C),孵育不少于1小

時(shí)，不超過(guò)12小時(shí)。

2.2.3.3陽(yáng)離子交換層析

填料為磺酸基(S-)陽(yáng)離子交換層析，上樣載量不超過(guò)每升介質(zhì)65克蛋白。

2.2.3.3.1樣品處理一澄清過(guò)濾

向孵育后的親和層析主峰"中緩緩加入1mol/LTris,至最終pH值為4.90-5.10,

昆勻后放置30分鐘，進(jìn)行澄清過(guò)濾，待用。

2.233.2柱平衡

以注射用水沖洗層析柱，然后按順序以再生液(20mmol/LNaAc-HAc+lmol/L

NaCl,pH:4.80~5.20)和平衡液(20mmol/LNaAc-HAc,pH:4.90~5.10)平衡層析柱至柱

前后電導(dǎo)pH值一致且各溶液不少于2個(gè)柱體積。流速為100~250cm/h,壓力不高

于2bar。

2.2.3.3.3上樣

處理后樣品上樣。流速為100~250cm/h,壓力不高于2bar。

9

資料13SYB509注射液

2.2.3.3.4上樣后平衡、洗滌

以平衡液(20mmol/LNaAc-HAc,pH:4.90~5.10)過(guò)柱至流出液紫外回歸基線走

平且不少于2個(gè)柱體積。流速為100~250cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.3.5洗脫

洗脫液(20mmol/LNaAc-HAc+250mmol/LNaCl,pH:4.90~5.10),過(guò)柱洗脫，

流速為100~250cm/h,壓力不高于2bar。洗脫開(kāi)始立即收集九280處有紫外吸收的流出

峰。收集后立即取樣、密封、貼簽，即為‘陽(yáng)離子交換層析主峰”。于2~8℃暫存。

2.2.3.3.6再生

用再生液(20mmol/LNaAc-HAc+lmol/LNaCbpH:4.80~5.20)再生層析柱不少

于2個(gè)柱體積，流速為100~250cm/h,壓力不高于2bar。紫外吸收峰為雜峰，只監(jiān)

測(cè)紫外吸收峰高度。

2.2.3.3.7消毒

消毒湎).5mol/L氫氧化納消毒層析柱不少于3個(gè)柱體積,流速為100~250cnVh,

壓力不高于2bar。

2.2.3.3.8柱保存

層析柱清洗消毒后室溫保存于0.lmol/L氫氧化納溶液中，大于4周以上保存時(shí)

使用20%乙醇溶液或更換新的0.lmol/L氫氧化納溶液。

2.2.3A疏水層析

填料為苯基疏水層析介質(zhì)，上樣載量不超過(guò)每升介質(zhì)25克蛋白。

2.2.3.4.1樣品處理

向"陽(yáng)離子交換層析主峰"中緩緩加入0.30倍體積的電導(dǎo)調(diào)節(jié)液(3

mol/L(NH4)2SO4>至最終(NH^SCU濃度為0.7mol/L,昆勻，待用。

10

SYB509注射液資料13

2.2.3A.2柱平衡

用注射用水沖洗層析柱后以平衡液(10mmol/LPB+1.0mol/L(NHQ2SO4,pH:

6.80~7.20)平衡層析柱，平衡不少于2個(gè)柱體積至柱前后電導(dǎo)一致。流速為

80~250cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.4.3上樣

處理后樣品上樣。流速為80~250cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.4A上樣后平衡

以平衡液(10mmol/LPB+1.0mol/L(NH4)2SO4,pH:6.80~7.20)過(guò)柱平衡不少

于3個(gè)柱體積至流出液紫外回歸基線并走平。流速為80~250cm/h,壓力不高于2bar。

2.2.3.4.5洗脫1

洗月兌液1(10mmol/LPB+0.2moi/L(NH4)2SO4,pH:6.80~7.20),過(guò)柱洗脫，流

速為80~250cm/h,壓力不高于2bar。收集九280處有紫外吸收的流出峰。收集后立即

取樣、密封、貼簽，即為"疏水層析主峰"。于2~8c暫存。

2.23.4.6洗脫2

洗脫液2(10mmol/LPB,pH:6.80~7.20)過(guò)柱洗脫不少于2個(gè)柱體積，洗脫流

速80~250cm/h,壓力不高于2bar。洗脫峰為雜峰，只監(jiān)測(cè)紫外吸收峰高度。

2.23.4.7柱消毒

消毒液0.5mol/L氫氧化納艄毒層析柱不少于3個(gè)柱體積，流速為80~250cm/h,

壓力不高于2bar。

2.2.3.4.8柱保存

層析柱清洗消毒后室溫保存于O.lmol/L氫氧化納溶液中，大于4周以上保存時(shí)

使用20%乙醇溶液或更換新的O.lmol/L氫氧化納溶液。

2.2.3.5除病毒過(guò)濾、超濾疏水層析洗脫峰用經(jīng)過(guò)緩沖液潤(rùn)濕的除病毒濾膜過(guò)濾，再用

截留分子量30KD、50KD超濾膜包的超濾膜對(duì)目的蛋白溶液進(jìn)行超濾濃縮和緩沖液置

換，加入甘露醇至30.00g/L＞聚山梨醋80跳注射用)至0.20g/L,依地酸二納二水合物)

至0.0074g/L,再經(jīng)降低生物負(fù)荷過(guò)濾，即得原液。

11

資料13SYB509注射液

2.2.3.6保存條件

原液應(yīng)存放于-18C以下，有效期暫定為24個(gè)月。

2.2.3.7原液檢定

按3.1項(xiàng)進(jìn)行。

2.3半成品

231配制與除菌采用符合《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)的輔料，根據(jù)下表的制劑

配方，計(jì)算所需的制劑輔料用量，配制稀釋液。

表1SYB509注射液制劑處方

組份*含hl濃度

SYB509100mgWg/L

聚山梨醋80（供注射用）2mg0.2g/L

拘橡酸納（二水合物）51.6mg5.16g/L

無(wú)水拘橡酸*4.7mg0.47g/L

氯化納（供注射用）29.2mg2.92g/L

甘露醇300mg30g/L

依地酸二納（二水合物）0.074mg0.0074g/L

*若選用不同結(jié)晶水合物或無(wú)水合物，需要折算為與上表中等物質(zhì)的量濃度。

SYB509注射液采用中性棚硅玻璃管制注射劑瓶包裝，每瓶10ml,pH:5.7~6.3。

半成品配制后立即進(jìn)行除菌過(guò)濾。

12

SYB509注射液資料13

2.3.2半成品檢定

按3.2項(xiàng)進(jìn)行。

2.4成品

2.4.1分批

應(yīng)按照《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品通則"生物制品分批規(guī)程"分批，規(guī)

定產(chǎn)品批號(hào)。

2.4.2分裝

應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品通則“生物制品分裝和凍干規(guī)程”及制劑

通則0102注射劑有關(guān)規(guī)定。除菌過(guò)濾后的半成品應(yīng)及時(shí)分裝。

2.4.3規(guī)格

1OOmg(10ml)/瓶o

2.4.4包裝

應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》生物制品通則”生物制品包裝規(guī)程"及制劑通

則0102注射劑有關(guān)規(guī)定。

2.4.5成品檢定

按3.3項(xiàng)進(jìn)行。

13

資料13SYB509注射液

3.檢定

3.1原液檢定

3.1.1鑒別與一致性分析

3.1.1.1等電點(diǎn)

方法:毛細(xì)管等電聚焦電泳測(cè)定法（毛細(xì)管等電聚焦電泳分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-050）

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"毛細(xì)管等電聚焦電泳法I通則0542）測(cè)定標(biāo)

準(zhǔn)報(bào)告主峰pl值:與參比品比較，主峰pl差異應(yīng)在土0.1以內(nèi)。

3.1.1.2膚圖

方法:膚圖譜測(cè)定法（509還原民基化法UPLC膚圖分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-509-012）

采用還原、竣甲基化、膜蛋白酶水解及反相UPLC法測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與參比品一致

3.1.1.3電荷異質(zhì)體分布

方法:電荷異質(zhì)體分布測(cè)定法509離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

操作規(guī)程SOP-QC-509-010）

陽(yáng)離子交換UPLC分析標(biāo)準(zhǔn)

主峰相對(duì)參比品保留時(shí)間應(yīng)為0.90~1.10:樣品圖譜應(yīng)與參比品一致

14

SYB509注射液資料13

3.1.1.4糖基化修飾分析

方法:糖基化修飾分析測(cè)定法（509親水作用液相色譜法寡糖分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程SOP-QC-509-013）

PNGaseF酶切，2-AB標(biāo)記，UPLC分析標(biāo)準(zhǔn)高甘露糖糖型比例應(yīng)不大于10.0%。

3.1.2純度和雜質(zhì)

3.1.2.1毛細(xì)管電泳純度

方法:毛細(xì)管電泳純度測(cè)定法509毛細(xì)管電泳IgG純度異質(zhì)體分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程SOP-QC-509-011）

毛細(xì)管電泳法標(biāo)準(zhǔn)

非還原:應(yīng)與參比品一致還原:按峰面積歸一化法計(jì)算，輕重鏈峰面積之和應(yīng)

不小于95.0%

3.1.2.2體積排阻液相色譜純度方法:體積排阻液相色譜測(cè)定法（體積排阻液相色譜法

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-005）

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"高效液相色譜法'【通則0514）測(cè)定。采用分子篩

液相色譜分析，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm

標(biāo)準(zhǔn)：按峰面積歸一化法計(jì)算，聚合體峰面積之和應(yīng)不大于3.0%,單體峰面積

應(yīng)不小于97.0%o

15

資料13SYB509注射液

3.1.2.3電荷異質(zhì)體分布

方法:電荷異質(zhì)體分布測(cè)定法509離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

操作規(guī)程SOP-QC-509-010）

陽(yáng)離子交換UPLC分析

標(biāo)準(zhǔn)：按峰面積歸一化法計(jì)算，酸性變異體峰面積之和應(yīng)不大于40.0%,報(bào)告主峰

峰面積，報(bào)告堿性變異體峰面積之和。

3.1.2.4宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)

方法:宿主細(xì)胞蛋白殘留量測(cè)定法（CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-018）；

酶聯(lián)免疫法測(cè)定；

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)不大于總蛋白的100ppm；

3.1.2.5宿主細(xì)胞DNA

方法:宿主細(xì)胞DNA殘留量測(cè)定法（RT-PCR法CHODNA殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操

作規(guī)程SOP-QC-OPE-061）；

熒光定量PCR法測(cè)定；

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)不大于10pg/mg蛋白。

3.1.2.6蛋白A

方法:重組蛋白A殘留量測(cè)定法（蛋白A殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-

OPE-019）

16

SYB509注射液資料13

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)不大于總蛋白的100Ppm。

3.1.3效價(jià)

3.1.3.1生物活性

方法:生物活性測(cè)定法（509生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-001）

報(bào)告基因法

標(biāo)準(zhǔn)：與參比品比較，相對(duì)生物活性應(yīng)為70%~130%

3.1.3.2結(jié)合活性

方法:結(jié)合活性測(cè)定法（509結(jié)合活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-002）

固相化PD-1結(jié)合活性

標(biāo)準(zhǔn)：與參比品比較，相對(duì)結(jié)合活性應(yīng)為70%~130%

3.1.4蛋白含量

方法:紫外法蛋白質(zhì)含量測(cè)定法（UV法蛋白含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-OOl）

用紫外法測(cè)定，消光系數(shù)e=1.68L/（g-cm）

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)不小于10.0g/L

17

資料13SYB509注射液

3.1.5其他檢定

3.1.5.1pH值

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》”pH值測(cè)定法丫通則0631）測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為5.7~6.3

3.1.5.2滲透壓摩爾濃度

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"滲透壓摩爾濃度測(cè)定法'【通則0632）測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為290~350mosmol/kg

3.1.5.3細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法’（通

則1143方法1）進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)小于0.50EU/mg蛋白。

3.1.5.4聚山梨醋80含量

方法:聚山梨醋80含量測(cè)定法（UV-VIS法聚山梨醋80含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-028）

標(biāo)準(zhǔn):應(yīng)為0.14~0.26g/L。

18

SYB509注射液資料13

3.1.5.5微生物限度

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查:微生物計(jì)

數(shù)法'（通則1105薄膜過(guò)濾法）進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)：需氧菌總數(shù)應(yīng)不大于ICFU/ml

霉菌、酵母菌總數(shù)應(yīng)不大于ICFU/mlo

3.2半成品檢定

3.2.1蛋白含量

方法:紫外法蛋白質(zhì)含量測(cè)定法（UV法蛋白含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-OOl）用紫外法測(cè)定，消光系數(shù)￡=1.68L/（g-cm）

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為9.00~11.00g/L

3.2.2體積排阻液相色譜純度方法:體積排阻液相色譜測(cè)定法（體積排阻液相色譜法標(biāo)

準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-005）

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"高效液相色譜法'【通則0514）測(cè)定。采用分子篩

液相色譜分析，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm

標(biāo)準(zhǔn)

按峰面積歸一化法計(jì)算，聚合體峰面積之和應(yīng)不大于3.0%,單體峰面積應(yīng)不小

于97.0%

19

資料13SYB509注射液

3.2.3pH值

方法參考《中華人民共和國(guó)藥典》”pH值測(cè)定法Y通則0631）測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為5.8~6.2。

3.2.4細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

方法參考《中華人民共和國(guó)藥典》"細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法'【通則1143方法1）進(jìn)行;

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)小于0.50EU/mgo

3.2.5無(wú)菌檢查

方法參考《中華人民共和國(guó)藥典》"無(wú)菌檢查法’【通則1101薄膜過(guò)濾法）進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

20

SYB509注射液資料13

3.3待包裝品、成品檢定

3.3.1鑒別與一致性分析

3.3.1.1等電點(diǎn)

方法:毛細(xì)管等電聚焦電泳法（毛細(xì)管等電聚焦電泳分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-050）

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"毛細(xì)管等電聚焦電泳法1通則0542）測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)

報(bào)告主峰pl值:與參比品比較，主峰pl差異應(yīng)在土0.1以內(nèi)。

3.3.1.2電荷異質(zhì)體分布

方法:電荷異質(zhì)體分布測(cè)定法（509離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

操作規(guī)程SOP-QC-509-010）

陽(yáng)離子交換UPLC分析

標(biāo)準(zhǔn)：主峰相對(duì)參比品保留時(shí)間應(yīng)為0.90~1.10:樣品圖譜應(yīng)與參比品一致

3.3.2純度和雜質(zhì)

3.3.2.1毛細(xì)管電泳純度

方法:毛細(xì)管電泳純度測(cè)定法509毛細(xì)管電泳IgG純度異質(zhì)體分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程SOP-QC-509-011）毛細(xì)管電泳法；

標(biāo)準(zhǔn)：

非還原:應(yīng)與參比品一致；

還原:按峰面積歸一化法計(jì)算，輕重鏈峰面積之和應(yīng)不小于95.0%o

21

資料13SYB509注射液

3.3.2.2體積排阻液相色譜純度方法:體積排阻液相色譜測(cè)定法（體積排阻液相色譜法

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-005）

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"高效液相色譜法'【通則0514）測(cè)定。采用分子篩

液相色譜分析，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm

標(biāo)準(zhǔn)

按峰面積歸一化法計(jì)算，聚合體峰面積之和應(yīng)不大于3.0%,單體峰面積應(yīng)不

小于97.0%

3.3.2.3電荷異質(zhì)體分布

方法:電荷異質(zhì)體分布測(cè)定流509離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)標(biāo)

準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-509-010）陽(yáng)離子交換UPLC分析

標(biāo)準(zhǔn)

按峰面積歸一化法計(jì)算，酸性變異體峰面積之和應(yīng)不大于40.0%,報(bào)告主峰峰面

積，報(bào)告堿性變異體峰面積之和。

3.3.3效價(jià)

3.3.3.1生物活性

方法:生物活性測(cè)定法（509生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-001）

報(bào)告基因法；

標(biāo)準(zhǔn)：與參比品比較，相對(duì)生物活性應(yīng)為70%~130%。

22

SYB509注射液資料13

3.3.3.2結(jié)合活性

方法:結(jié)合活性測(cè)定法（509結(jié)合活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-002）

固相化PD-1結(jié)合活性；

標(biāo)準(zhǔn)：與參比品比較，相對(duì)結(jié)合活性應(yīng)為70%~130%。

3.3.4含量

方法:紫外法蛋白質(zhì)含量測(cè)定法（UV法蛋白含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-OOl）用紫外法測(cè)定，消光系數(shù)￡=1.68L/（gtm）;

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為9.00~11.00g/L。

3.3.5其他檢定

3.3.5.1外觀及性狀

方法

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"溶液顏色檢查法'【通則0901第一法）及"澄

清度檢查法'【通則0902第二法）進(jìn)行

標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)為無(wú)色至微黃色液體，顏色應(yīng)不深于黃色2號(hào)（Y-2）標(biāo)準(zhǔn)液:濁度應(yīng)不濃于3號(hào)

濁度標(biāo)準(zhǔn)液。

33.5.2pH值

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"pH值測(cè)定法I通則0631）測(cè)定；

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為5.7~6.3。

23

資料13SYB509注射液

3.3.5.3滲透壓摩爾濃度方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"滲透壓摩爾濃度測(cè)定

法'【通則0632）測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為290~350mOsmol/kgo

3.3.5.4裝量

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》”裝量'【通則0102）檢查進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)：每瓶均應(yīng)不小于10.0ml。

3.3.5.5不溶性微粒

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"不溶性微粒檢查法'【通則0903第

一法"光阻法’）進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)：每瓶中三lOpim的微粒數(shù)應(yīng)不大于6000粒：每瓶中三25叩1的微粒數(shù)應(yīng)不大

于600粒。

3.3.5.6可見(jiàn)異物

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》'可見(jiàn)異物檢查法通則0904第一法，燈

檢法》進(jìn)行；

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)無(wú)明顯可見(jiàn)異物:微細(xì)可見(jiàn)異物初試檢出數(shù)應(yīng)不大于1瓶，如復(fù)試，

初、復(fù)試檢出數(shù)應(yīng)不大于2瓶。

24

SYB509注射液資料13

3.3.5.7無(wú)菌檢查

方法：參考《中華人民共和國(guó)藥典》"無(wú)菌檢查法’【通則1101薄膜過(guò)濾法）進(jìn)行

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

33.5.8細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

方法

參考《中華人民共和國(guó)藥典》“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，［通則1143方法1）進(jìn)行

標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)小于0.50EU/mg

33.5.9異常毒性檢查

方法

參考《中華人民共和國(guó)藥典》"異常毒性檢查法’【通則1141小鼠實(shí)驗(yàn)法）進(jìn)

行

標(biāo)準(zhǔn)

連續(xù)觀察7天，小鼠應(yīng)全部健存，且無(wú)異常反應(yīng)，到期時(shí)每只小鼠體重應(yīng)增加

25

資料13SYB509注射液

3.3.5.10聚山梨醋80含量

方法:聚山梨醋80含量測(cè)定法（UV-VIS法聚山梨醋80含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP-QC-OPE-028）

標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)為0.14~0.26g/L

4.保存、運(yùn)輸及有效期

2~8c避光保存和運(yùn)輸。

有效期暫定為24個(gè)月。

5.使用說(shuō)明

應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典〉2015年版）生物制品通則，生物制品包裝規(guī)程"

規(guī)定和批準(zhǔn)的內(nèi)容。

應(yīng)符合《藥品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽管理規(guī)定》的相關(guān)內(nèi)容。

6.生產(chǎn)單位

XX生物技術(shù)有限公司

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SYB509注射液資料13

7.相關(guān)文件

毛細(xì)管等電聚焦電泳分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-050509

還原民基化法UPLC膚圖分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-509-012

509離子交換液相色譜法電荷異質(zhì)體分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-509-010

509親水作用液相色譜法寡糖分布檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-509-013

509毛細(xì)管電泳IgG純度異質(zhì)體分析標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-509-011

體積排阻液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-005

CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-018RT-

PCR法CHODNA殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-061蛋白A

殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-019

509生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-001

509結(jié)合活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-GE-509-002

UV法蛋白含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-OOlUV-VIS

法聚山梨醋80含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-OPE-028

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資料13SYB509注射液

第二部分制造和檢定規(guī)程起草說(shuō)明

依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》和國(guó)家藥品監(jiān)督管理局的《藥品注冊(cè)管理辦法》、

《人用重組DNA制品質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、《人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)

原則》，以及本申報(bào)產(chǎn)品的具體特性，我司起草了《SYB509注射液制造及檢定規(guī)程

草案》?，F(xiàn)對(duì)個(gè)別特殊性的條款說(shuō)明如下。

1.蛋白含量

SYB509注射液項(xiàng)目擬采用的消光系數(shù)是通過(guò)紫外法分別測(cè)定同類產(chǎn)品和

SYB509注射液樣品的消光系數(shù)，確定了A280nm的消光系數(shù)為1.68L/g*cm］（部分軟

件中采用1%蛋白濃度的消光系數(shù)為16.8）,并用紫外法對(duì)ProteinA親和層析之后工

藝過(guò)程的中間產(chǎn)品、原液、半成品、成品進(jìn)行蛋白含量測(cè)定。

原研產(chǎn)品分裝批號(hào)A180值￡計(jì)算值￡均值RSD(%)

16.8051.6805

OPDIVO2015110116.80316.8031.680.02

16.79916.799

1.1凱氏定氮蛋白濃度測(cè)定

采用5.99的蛋白氮換算系數(shù)委托國(guó)際權(quán)威第二方檢測(cè)機(jī)構(gòu)SGS進(jìn)行蛋白濃度測(cè)

定，采用凱氏定氮法測(cè)定值為13.9g/Lo

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SYB509注射液資料13

1.2同類產(chǎn)品消光系數(shù)測(cè)定

使用超純水作為樣品空白對(duì)照液，直接點(diǎn)樣測(cè)定二批OPDIVO產(chǎn)品的A28O吸收

值，同時(shí)按照標(biāo)示濃度10g/L計(jì)算消光系數(shù)￡。

表2二批同類產(chǎn)品消光系數(shù)測(cè)定

分裝批號(hào)A180值￡計(jì)算值。均值RSD(%)￡總均值總RSD(%)

17.3571.7357

2017070117.4721.74721.73940.39

17.3531.7353

18.7291.8729

2017070218.9311.89311.88290.541.774.86

18.8281.8828

17.0311.7031

2017070316.9131.69131.69280.57

16.8401.6840

如上表所示，二批同類產(chǎn)品的測(cè)量偏差RSD均小于2%,控制較好，檢測(cè)獲得

的OPDIVO消光系數(shù)為1.77,SYB509注射液項(xiàng)目擬采用的同類產(chǎn)品消光系數(shù)為1.68,

相比為105.4%,兩者基本一致。

1.3SYB509注射液樣品消光系數(shù)測(cè)定

509-FFT-DS20170619批樣品:用200mmol/LpH值6.8~7.2的磷酸鹽緩沖液PB)

稀釋36倍后采用紫外吸收法測(cè)定A283A340值，同時(shí)使用凱氏定氮法測(cè)定的蛋白含量

13.9g/L計(jì)算消光系數(shù)以

表3SYB509注射液樣品消光系數(shù)測(cè)定

批號(hào)A280-A340值￡計(jì)算值￡均值RSD(%)

0.63051.6329

201706190.63071.63351.630.05

0.63011.6319

如上表所示，數(shù)據(jù)測(cè)量偏差RSD小于2%,控制較好，檢測(cè)獲得的消光系數(shù)為

1.63,SYB509注射液項(xiàng)目擬采用的同類產(chǎn)品消光系數(shù)為1.68,相比為97.0%,兩者

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資料13SYB509注射液

一致。

2.SYB509注射液抗體溶液(制劑緩沖液)密度的標(biāo)定

SYB509注射液采用中棚硅玻璃管制注射劑瓶包裝，單瓶裝量為10ml/瓶，在其

配制，灌裝及待包裝品、成品裝量檢查時(shí)采用稱重法，因此對(duì)SYB509注射液抗體

溶液(含制劑緩沖液)的密度進(jìn)行了標(biāo)定，建立密度曲線，為原液質(zhì)量與體積的換算

以及制劑的配制和灌裝提供數(shù)據(jù)支持。

首先使用制劑緩沖液將原