醬菜中亞硝酸鹽含量的測定分析研究 化學(xué)工程與工藝專業(yè)

醬菜中亞硝酸鹽含量的測定摘要蔬菜容易富集硝酸鹽，用蔬菜腌制醬菜時，會將蔬菜中的硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，并隨醬菜一起進(jìn)入人體內(nèi)，對人體造成傷害。本文主要采用鹽酸萘乙二胺分光光度法和高效液相色譜法測定醬菜中亞硝酸鹽的含量。詳細(xì)描述兩種方法的實驗過程，并通過實驗得出實驗數(shù)據(jù)和實驗結(jié)果。并將兩種方法作比較，高效液相色譜法測定醬菜中亞硝酸鹽時快速簡便，應(yīng)用范圍廣，但是儀器設(shè)備昂貴。同時本法測定醬菜中亞硝酸鹽的含量，根據(jù)其回收率試驗結(jié)果，液相色譜圖和它的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍大，擁有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度等優(yōu)點。樣品中的其他組分如脂肪，蛋白質(zhì)等對其檢驗不會造成干擾，與國家標(biāo)準(zhǔn)法相比較，測定的結(jié)果也沒有顯著的差異。鹽酸萘乙二胺分光光度法具有應(yīng)用廣泛、靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、分析成本低、操作簡便、快速的特點，但只能測定亞硝酸鹽，不能同時測其它物質(zhì)。醬菜中的亞硝酸鹽含量在不超過20mg／kg時，符合我國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。經(jīng)實驗結(jié)果表明，醬菜中的亞硝酸鹽含量符合國家標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)鍵詞：醬菜,亞硝酸鹽,高效液相色譜法,鹽酸萘乙二胺分光光度法DeterminationofnitriteinpicklesABSTRACTVegetablesareeasytoaccumulatenitrate,pickledvegetableswithvegetables,vegetableswillbenitrateintonitrite,andalongwithpicklesintothehumanbody,causingharmtothehumanbody.Inthispaper,thecontentofnitriteinpickleswasdeterminedbyspectrophotometryandhplc.Theexperimentalprocessofthetwomethodsisdescribedindetail,andtheexperimentaldataandexperimentalresultsareobtained.Comparedwiththetwomethods,theHPLCmethodissimpleandconvenientforthedeterminationofnitriteinpickles.Atthesametime,thecontentofnitriteinpickledvegetableswasdeterminedbythismethod.Accordingtotheresultsoftherecoverytest,theliquidchromatographyanditsstandardcurvehadalargelinearrangeandhighsensitivityandaccuracy.Theothercomponentsinthesample,suchasfat,proteinandsoon,donotinterferewiththetest.Comparedwiththenationalstandardmethod,theresultsarenotsignificantlydifferent.Withwideapplication,highsensitivity,goodselectivity,highaccuracy,analysisofthecharacteristicsoflowcost,simpleoperation,fast-naphthylethylenediaminedihydrochloridespectrophotometricmethod,butonlyforthedeterminationofnitrite,othersubstancescannotbemeasuredatthesametime.China'shealthstandards,nitriteresiduesinpicklesshouldnotexceed20mg/kg.Theexperimentalresultsshowthatthecontentofnitriteinpicklesisqualified.KEYWORDS:PicklesNitriteHighperformanceliquidchromatographyHydrochloricacidnaphthylethylenediaminespectrophotometricmethod目錄第一章前言....................................................................................................................11.1研究背景.........................................................................................................11.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀.............................................................................................11.2.1光譜法.................................................................................................11.2.2色譜法.................................................................................................11.2.3研究內(nèi)容.............................................................................................2第二章實驗部分............................................................................................................32.1鹽酸萘乙二胺分光光度法法.........................................................................32.1.1實驗原理.............................................................................................32.1.2儀器與試劑.........................................................................................42.1.3實驗步驟.............................................................................................42.1.4紫外-可見分光光度計的使用方法...................................................42.1.5數(shù)據(jù)處理.............................................................................................42.2高效液相色譜法.............................................................................................82.2.1實驗原理.............................................................................................82.2.2儀器與試劑.........................................................................................82.2.3實驗條件............................................................................................82.2.4實驗步驟.............................................................................................92.2.5液相色譜儀的使用.............................................................................92.2.6數(shù)據(jù)處理...........................................................................................102.3結(jié)果與討論...................................................................................................122.3.1實驗結(jié)果..........................................................................................122.3.2實驗方法比較..................................................................................12第三章總結(jié)與展望......................................................................................................13參考文獻(xiàn)......................................................................................................................15致謝..............................................................................................................................16第一章前言1.1研究背景隨著社會的發(fā)展，生活水平的提高，食品的安全問題越來越受到人們的廣泛關(guān)注。硝酸鹽和亞硝酸鹽廣泛存在于土壤、水域及植物中，在綠色蔬菜中亞硝酸鹽含量較高，大多數(shù)蔬菜都可測出一定量的亞硝酸鹽?？梢妬喯跛猁}并不神秘，它廣泛存在于我們的生活中。其中，人體攝入的硝酸鹽和亞硝酸鹽70%-80%來自蔬菜。亞硝酸鹽通常會作為發(fā)色劑、抗氧化劑、防腐劑等食品添加劑加入到食品中。因為亞硝酸鹽即可使食品具有較鮮亮的顏色和獨特的味道，又可抑制毒梭菌的生長和其他毒素的產(chǎn)生。亞硝酸鹽跟隨食物一起被攝入人體內(nèi)，過多的攝入亞硝酸鹽會導(dǎo)致血紅蛋白發(fā)生病變從而失去攜氧功能，導(dǎo)致組織細(xì)胞缺氧，患高鐵血紅蛋白癥的幾率增加，嚴(yán)重者可致死，此外當(dāng)攝入的其他仲胺等物質(zhì)時，可與亞硝酸鹽相互結(jié)合轉(zhuǎn)化成強致癌物，從而誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變[1]。因此，尋找即能夠降低亞硝酸鹽在食品中的使用量；又能夠增加食品營養(yǎng)的食品添加劑。這將成為食品研究的重要領(lǐng)域和制作的發(fā)展趨勢。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀由亞硝酸鹽引起的各類食品中毒事件，在我國食品中毒事件中位居前列。亞硝酸鹽在各國常被作為食品添加劑加入至各類食品中，并具有增色，抑菌和增加口感等作用。當(dāng)人體攝入0.3-0.5g亞硝酸鹽會導(dǎo)致中毒，攝入3g亞硝酸鹽會導(dǎo)致死亡，從而可以看出亞硝酸鹽具有較強的毒性。由于亞硝酸鹽被大量作為添加劑使用，不良的操作行為等原因?qū)е率称分衼喯跛猁}殘留過高，從而導(dǎo)致亞硝酸鹽食品中毒事件時有發(fā)生[2]。國內(nèi)外檢測亞硝酸鹽含量的方法多種多樣，主要包含光譜法和色譜法兩大類，還包含快速檢測法等多種方法。在光譜發(fā)中常用來檢測亞硝酸鹽含量的方法為分光光度法，該方法操作簡便，連續(xù)性強，精密度高，適用范圍廣。在色譜法中常用的檢測方法為高效液相色譜法，該方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度和精密度高的優(yōu)點，能滿足同步測定食品中亞硝酸鹽含量的要求[3]。缺點是所用試劑有毒，對實驗人員與環(huán)境有危害。1.2.1光譜法分光光度法是光譜發(fā)中常見的測定亞硝酸鹽的方法，分光光度法是利用測量有色物質(zhì)在某一單色光出的吸收程度來定量的特點而建立起來的一種分析方法。紫外-可見分光光度法是分光光度法中最常用的檢測方法，其中最為經(jīng)典的是鹽酸萘乙二胺分光光度法，這一方法的原理是在一定的酸度條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)，在與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，使用紫外-可見分光光度計進(jìn)行檢測，在540nm附近有最大波長。因其投資相對較小、操作簡單從而被廣泛應(yīng)用。1.2.2色譜法高效液相色譜法是色譜法中檢測亞硝酸鹽最常用的方法。這一方法的實驗原理是除去樣品中蛋白質(zhì)、脂肪后，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)，再與N-1-萘乙二胺偶合之后，進(jìn)行色譜分析。若采用反相高效液相色譜法測定醬菜制品中亞硝酸鹽的含量，則該方法應(yīng)選擇四丁基溴化銨作為離子對試劑，與亞硝酸鹽的陰離子形成中性締合物，采用甲醇-混合磷酸鹽作為流動相，使用非極性鍵合相柱進(jìn)行分離并定量檢測。反相高效液相色譜法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、線性范圍大等優(yōu)點，并能夠同時測定醬菜制品中亞硝酸鹽和其他組分的含量，樣品中的其他組分如脂肪、色素、蛋白質(zhì)等對其檢測不構(gòu)成干擾。測定結(jié)果與國家標(biāo)準(zhǔn)法比較，并無顯著性差異。1.2.3研究內(nèi)容醬菜的主要原料是新鮮蔬菜，利用各種不同的腌漬工藝制作而成的蔬菜制品。作為常用的食品添加劑中的發(fā)色劑和防腐劑的硝酸鹽和亞硝酸鹽，其大量存在于各類腌醬食品中，并且在醬腌菜的生產(chǎn)過程中和長期儲存中，部分硝酸鹽會轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。很久之前我國就已經(jīng)開始食用醬菜類食品，其中醬蘿卜是人們喜愛的佐餐食品之一。所以本文選擇已腌制完成并儲藏一段時間的醬蘿卜為試驗樣品，經(jīng)過樣品前處理后，使用鹽酸萘乙二胺反光光度法和反相高效液相色譜法對其含有的亞硝酸鹽含量進(jìn)行測定并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，從而了解醬菜中含有的亞硝酸鹽含量是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)。第二章實驗部分2.1鹽酸萘乙二胺分光光度法2.1.1實驗原理樣品除去蛋白質(zhì)和脂肪后，在一定的酸度條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)，在與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料。使用紫外-可見分光光度計進(jìn)行檢測，在540nm附近有最大波長。2.1.2儀器與試劑氯化銨緩沖溶液(pH9.6~9.7)：量取250.0mL蒸餾水至500mL容量瓶中，準(zhǔn)確量取10.00mL鹽酸并移入容量瓶中，震蕩搖勻，準(zhǔn)確量取25.00mL氫氧化銨并移入容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。氫氧化鈉溶液（0.50mol/L）：準(zhǔn)確稱取5.00g氫氧化鈉，加水溶解，并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。硫酸鋅溶液（0.45mol/L）：準(zhǔn)確稱取30.00g硫酸鋅（ZnSO4·7H2O），加水溶解并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。對氨基苯磺酸溶液：準(zhǔn)確稱取2.50g對氨基苯磺酸，溶解于175mL水和75mL冰乙酸中，放置于500mL棕色瓶中，搖勻，室溫保存，待用。鹽酸萘乙二胺溶液（1g/L）：準(zhǔn)確稱取0.2g鹽酸萘乙二胺至燒杯中，加入60%乙酸溶液溶解，并轉(zhuǎn)移至200mL棕色容量瓶中，加水稀釋，搖勻，在冰箱中保存，穩(wěn)定一周，待用。顯色劑：使用已配置好的鹽酸乙二胺溶液和對氨基苯磺酸溶液等體積混合，待用。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱,125.0mg的亞硝酸鹽于硅膠干燥器中并干燥24小時，干燥完成后，加水溶解，并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，加入50.0mL氯化銨緩沖溶液，加水稀釋至刻度線，搖勻，放置于4℃處并避光保存，待用。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：臨用前，吸取2.00mL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置于200mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，待用。紫外-可見分光光度計：UV-722N型紫外-可見分光光度計分析天平：萬分之一電子天平比色管：50mL，8個移液管：25.00mL，1.00mL，各一根容量瓶：200mL，2個，250mL，5個，500mL，2個小型粉碎機若干燒杯若干量筒水浴鍋漏斗2.1.3實驗步驟（1）樣品處理將醬菜置于打碎機中打碎，混勻后，從中稱取約10.0g醬菜并置于100mL的燒杯中，加70mL水和12mL氫氧化鈉溶液，搖勻。加入適量的氫氧化鈉溶液，將樣品的pH值調(diào)為8，并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中加10mL硫酸鋅溶液，搖勻。如不產(chǎn)生白色沉淀，再補加2-5mL氫氧化鈉，搖勻。置于60℃水浴中，加熱10分鐘，取出后冷卻至室溫，加水至刻度線，搖勻。放置0.5小時，用濾紙過濾，棄去初濾液20mL，收集待測。(2)測定亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：吸取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液，相當(dāng)于0,2.5,5,10,15,20,25μg亞硝酸鈉。分別置于50mL帶塞比色管中。在比色管中加入9.0mL氯化銨緩沖液，在加入5.0mL60%乙酸后，立即加入5.0mL顯色劑，加水至刻度線，搖勻，在暗處靜置25分鐘。用1cm比色皿，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長540nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，。樣品測定：吸取10.0mL上述濾液于50mL帶塞比色管中，加入9.0mL氯化銨銨緩沖液，在加入5.0mL60%乙酸后，立即加入5.0mL顯色劑，加水至刻度線，搖勻，在暗處靜置25分鐘。用1cm比色皿，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長540nm處測吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得相應(yīng)的亞硝酸鹽含量，并計算出實際樣品中的亞硝酸鹽的含量。空白試樣用蒸餾水代替樣品以相同步驟測量。2.1.4紫外-可見分光光度計的使用方法開機檢測首先檢查儀器是否有毀壞后，連接電源，打開電源開關(guān)。打開吸收池樣品室蓋，取出樣品室內(nèi)遮光物，預(yù)熱20min以上。對可見光區(qū)波長的準(zhǔn)確度進(jìn)行檢測和校正。吸收池的配套檢測石英吸收池在220nm處，玻璃吸收池在440nm處，裝入適量的蒸餾水，以一個吸收池為參照物，測量其透射比，透射比的偏差小于0.5%則證明可以配套使用。樣品測量首先使用標(biāo)準(zhǔn)溶液找出最大吸收波長，再在最大吸收波長下測出樣品的吸光度。結(jié)束工作取出吸收池，倒出液體，清洗并晾干后放入盒中保存。將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上樣品室蓋，關(guān)閉電源，清理工作臺。2.1.5數(shù)據(jù)處理2.1.5.1實驗條件優(yōu)選（1）pH值配置一系列被測物質(zhì)溶液酸度不同，濃度相同，顯色劑用量相同的溶液，并依次測量其吸光度，做出A-pH曲線，找出最合適的溶液pH值。表2.1不同酸度值的吸光度酸度值45678910吸光度（A）0.2940.4680.5970.6930.7180.6920.624圖2.1A-pH曲線由實驗知，當(dāng)pH=8時，最有利于實驗的進(jìn)行。（2）顯色劑用量相同顯色劑用量首先配置一系列被測物質(zhì)濃度相同顯色劑用量不同的溶液，依次測量其吸光度，做A-cr曲線，找出曲線平臺部分，選擇一個合適的用量。表2.2不同用量顯色劑的吸光度顯色劑用量(mL)0.01.02.03.04.05.06.007.08.0吸光度（A）0.000.2760.4620.5880.6760.7160.6920.6320.544圖2.2A-cr圖像由實驗知，當(dāng)加入5.00mL顯色劑時，最有利于實驗的測定。（3）吸收曲線在實驗中入射光波長應(yīng)選擇被測物質(zhì)的最大吸收波長的光為入射波長，這樣靈敏度高，準(zhǔn)確度也好。當(dāng)有干擾物質(zhì)存在時，應(yīng)遵循“吸收最大，干擾最小”的原則，來選擇波長。所以在做實驗時應(yīng)先找出被測物質(zhì)的最大吸收波長。表2.3不同波長的吸光度波長520522524526528530532吸光度0.2460.2960.3450.3910.4350.4990.564波長534536538540542544546吸光度0.6110.6490.6910.7240.7120.6900.654波長548550552554556558560吸光度0.6010.5450.4610.4110.3240.2450.214表2.4不同波長的吸光度波長536537538539540光度0.6490.6670.6910.7050.724波長541542543544545吸光度0.7200.7120.6950.6900.668由實驗知，當(dāng)波長為540nm時有最大吸收波長。2.1.5.2樣品測定（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線表2.5在波長540nm處測定的吸光度值亞硝酸鹽濃度（μg/mL）0.00.10.20.40.60.81.0吸光度（A）0.0220.1420.2650.4920.7240.9581.18圖2.3亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)過計算，得出本方法的線性濃度范圍（μg/mL）為：0-1.20；相關(guān)系數(shù)為：0.999。線性方程為:y=1.148x+0.035,相關(guān)系數(shù)為0.999。（2）樣品測定表2.6線性濃度范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限組分線性濃度范圍（μg/mL）相關(guān)系數(shù)檢出限（mg/kg）亞硝酸鹽0-1.200.9991.00表2.7樣品測定結(jié)果樣品質(zhì)量（g）9.3349.3329.333吸光度（A）0.0810.0780.080亞硝酸鹽含量（mg/kg）3.2643.2633.266經(jīng)計算樣品實驗結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為：0.15%（3）回收率從實驗中選取3個樣品，稱取重量相等做平行實驗，在其中一份定量加入對應(yīng)實驗的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定兩者的含量，計算加標(biāo)回收率。表2.8樣品中亞硝酸鹽回收率試驗樣品亞硝酸鹽編號本底值μg加入量μg測定值μg回收率（%）138.62057.896.0238.65083.495.6338.6100137.298.6經(jīng)實驗表明，樣品的加標(biāo)回收率達(dá)到95%以上，能滿足對食品中亞硝酸鹽含量的測定。2.2高效液相色譜法2.2.1實驗原理是在除去樣品中蛋白質(zhì)和脂肪后，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)，再與N-1-萘乙二胺偶合之后，進(jìn)行色譜分析。若采用反相高效液相色譜法測定醬菜制品中亞硝酸鹽的含量，則該方法應(yīng)選擇四丁基溴化銨作為離子對試劑，與亞硝酸鹽的陰離子形成中性締合物，采用甲醇-混合磷酸鹽作為流動相，使用非極性鍵合相柱進(jìn)行分離并定量檢測。2.2.2儀器與試劑甲醇：光譜純飽和硼砂溶液（50.0g/L）：準(zhǔn)確稱取5.0g硼酸鈉，用熱水中溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，放置冷卻后，待用。亞鐵氰化鉀溶液（106.0g/L）：準(zhǔn)確稱取53.0g亞鐵氰化鉀，加水溶解并轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。醋酸鋅溶液（220.0g/L）：準(zhǔn)確稱取110g醋酸鋅加30mL冰乙酸用于水并轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（200mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.100g的亞硝酸鈉放置于硅膠干燥器中干燥24h，干燥完成后加水溶解并轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，搖勻，待用。液相色譜儀：島津LC-10A型液相色譜儀0.45um微孔濾膜容量瓶：100mL1個500mL3個若干燒杯若干量筒2.2.3實驗條件色譜柱：Shim-packCLC-ODSφ6×150mm預(yù)柱：Shim-packODS流動相：甲醇一混合磷酸鹽溶液，四丁基溴化銨作為離子對試劑流速：1.0mL／min柱溫：25℃檢測波長：20nm進(jìn)樣量：20μL2.2.4試驗步驟（1）樣品預(yù)處理稱取已絞碎混勻的樣品5.0g左右，并放置于100mL燒杯中，加入2.5mL硼砂飽和溶液，攪拌均勻。使用70℃左右的蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中。放入沸水浴中加熱15分鐘，取出后冷卻至室溫。然后一邊搖動容量瓶，一邊緩慢加入5mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻后，再加入5mL醋酸鋅溶液，將蛋白質(zhì)沉淀。加水至刻度線，搖勻，靜置片刻。取上層清夜，使用0.45μm濾膜濾過，收集待測。（2）流動相的選擇作為流動相的是甲醇-混合磷酸鹽溶液，以20:80的比例配，離子對試劑選擇四丁基溴化銨。流動相進(jìn)行初始平衡時因為色譜柱含有離子對試劑的緣故，色譜柱吸收和釋放離子對試劑的過程緩慢。所以色譜柱平衡較慢，必須在確保保留值能重現(xiàn)后，方可進(jìn)行測定。（3）測定在相同的色譜條件下,分別測出樣品的色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖，并對照比較。根據(jù)色譜峰的保留時間確定，采用峰面積外標(biāo)法定量。2.2.5液相色譜儀的使用（1）開機準(zhǔn)備選擇并安裝色譜柱和保護(hù)柱，選擇并過濾流動相，檢查儲液瓶中的流動相是否足夠，檢查溶劑過濾器是否插入至瓶底，清空廢液瓶，檢查排液管管道是否通暢。（2）開機開啟穩(wěn)壓電源，待高壓紅燈亮起后，按順序依次打開輸液泵，柱溫箱，紫外檢測器和色譜工作站。（3）參數(shù)設(shè)置打開輸液泵電源開關(guān)后，待儀器加電自檢完畢后，進(jìn)入操作版面，依次設(shè)置流動相流量數(shù)值，儀器在上述流量下的最大限壓和最小限壓。（4）沖洗管道將排液閥旋轉(zhuǎn)至打開，按動purge鍵，輸液泵將以10mL/min流量排除管道氣泡，當(dāng)確認(rèn)管道內(nèi)無氣泡后，在此按動按扭方可停止沖洗工作。（5）數(shù)據(jù)分析將六通進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)到load的位置，用平通注射器將待測樣品注入，轉(zhuǎn)回rnject的位置，同時按動工作站的start鍵，儀器將開始采集色譜數(shù)據(jù)，繪制色譜圖，待色譜峰完全繪制出后，按下stop鍵，一起將會停止工作并對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，后可進(jìn)行打印工作。2.2.6數(shù)據(jù)處理2.2.6.1標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖在上述的色譜條件下對標(biāo)準(zhǔn)待測溶液進(jìn)行測定,得到標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖,見圖2.4。保留時間為10.1min。圖2.4液相色譜圖2.2.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表2.9亞硝酸鹽的濃度與峰面積濃度（mg/mL）1521384759峰面積105125171198234圖2.5亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制亞硝酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果如圖2.5所示,在0-80.00μg/mL范圍內(nèi),峰面積y與濃度x的線性關(guān)系良好。線性方程為:y=2.8950x+62.360,相關(guān)系數(shù)為0.999。2.2.6.3樣品測定根據(jù)IUPAC的規(guī)定倍噪音為樣品檢出限。該方法的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限如表2.10所示。表2.10線性濃度范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限組分線性濃度范圍（μg/mL）相關(guān)系數(shù)檢出限（mg/kg）亞硝酸鹽0-80.000.9990.08表2.11亞硝酸鈉含量結(jié)果測定次數(shù)123平均值亞硝酸鹽含量（mg/kg）3.2653.2643.2663.265經(jīng)計算樣品實驗結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為：0.10%2.2.6.4加標(biāo)回收率從實驗中選取3個樣品，稱取重量相等做平行實驗，在其中一份定量加入對應(yīng)實驗的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定兩者的含量，計算加標(biāo)回收率。表2.12樣品中亞硝酸鹽回收率試驗樣品亞硝酸鹽編號本底值μg加入量μg測定值μg回收率（%）158.92078.3297.1258.950107.396.8358.9100156.597.6經(jīng)實驗表明，樣品的加標(biāo)回收率達(dá)到95%以上，能滿足對食品中亞硝酸鹽含量的測定。2.3結(jié)果與討論2.3.1實驗結(jié)果通過鹽酸萘乙二胺分光光度法實驗得到亞硝酸鹽含量C(μg/mL)在540nm波長處有最大吸收峰。標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸鹽線性范圍在0～1.20μg/mL，其線性方程為y=1.148x+0.035，相關(guān)系數(shù)為0.999，醬菜中所含的亞硝酸鹽含量符合國家標(biāo)準(zhǔn)。該方法還具有設(shè)備簡單、操作快捷、實用、分析結(jié)果的準(zhǔn)確度符合食品檢驗的要求。通過高效液相色譜法實驗得到醬菜中所含的亞硝酸鹽含量符合國家標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸鹽線性范圍在0～80μg/mL，其線性方程為:y=2.8950x+62.360，相關(guān)系數(shù)為0.999。高效液相色譜具有檢測的分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性好，定量精密度高，應(yīng)用范圍廣，線性范圍大等特點。2.3.2試驗方法比較鹽酸萘乙二胺法優(yōu)點是該方法具有應(yīng)用廣泛、靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、分析成本低、操作簡便、快速的特點。其缺點是只能測定亞硝酸鹽，不能同時測其它物質(zhì)。反相高效液相色譜法具有檢測的分辨率高，靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性好，定量精密度高，應(yīng)用范圍廣，線性范圍大，常見的食品添加劑均不形成干擾等優(yōu)點。缺點是所用試劑有毒，對實驗人員與環(huán)境有危害。相比較而言，反相高效液相色譜法能夠同時測定鹵肉制品中亞硝酸鹽和其他組分的含量，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、線性范圍大等優(yōu)點。樣品中的其他組分如脂肪、色素、蛋白質(zhì)等對其檢測不構(gòu)成干擾。并且實驗結(jié)果與國家標(biāo)