維生素EVitaminE專業(yè)知識講座

化學(xué)名稱：（±）-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氫吡喃醇

分子式：C31H52O3472.75維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第1頁維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第2頁維生素E維生素E為α-生育酚及其各種酯類。分天然品（右旋體）和合成品（消旋體）。普通藥用具為合成品，即消旋體。中國藥典（）收錄:VitaminEInjection;VitaminEPowderVitaminESoftCapsules;VitaminETablets維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第3頁維生素結(jié)構(gòu)維生素E為苯并二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上有一個乙?；恿u基，故又稱為生育酚。

化學(xué)名稱為:（±）-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氫吡喃醇醋酸酯。

主要有α、β、γ和δ等各種異構(gòu)體，其中以α-異構(gòu)體生理活性最強(qiáng)。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第4頁維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第5頁維生素E性質(zhì)溶解性:黃色或黃色透明粘稠液體，在無水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶，在水中不溶。水解性:苯環(huán)上含有乙酰化酚羥基，在酸性或堿性溶液中加熱可水解生成游離生育酚，故常作為特殊雜質(zhì)進(jìn)行檢驗。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第6頁維生素E性質(zhì)氧化性:維生素E在無氧條件下對熱穩(wěn)定，加熱200℃也不破壞，但對氧十分敏感，遇光、空氣可被氧化。其氧化產(chǎn)物為α-生育醌和α-生育酚二聚體。紫外吸收特征維生素E中苯環(huán)上有酚羥基，固有紫外吸收，其無水乙醇液在284nm波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收，其吸收系數(shù)為41.0～45.0。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第7頁判別試驗維生素E生育紅（橙紅色）硝酸反應(yīng):維生素E在硝酸條件下，水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化為鄰醌結(jié)構(gòu)生育紅而顯橙紅色。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第8頁三氯化鐵反應(yīng)原理:維生素E在堿性條件下，水解生成游離生育酚，生育酚經(jīng)乙醚提取后，可被Fecl3氧化成對-生育醌；同時Fe3+被還原為Fe2+，F(xiàn)e2+與聯(lián)吡啶生成紅色配位離子。方法:取本品約10mg，加乙醇制KOH試液2ml,煮沸5min,放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖，靜置使分層；取乙醚液2ml，加2-2‘-聯(lián)吡啶乙醇溶液(0.5100）數(shù)滴，應(yīng)顯血紅色。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第9頁三氯化鐵反應(yīng)對-生育酚維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第10頁三氯化鐵反應(yīng)血紅色維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第11頁紫外光譜法

維生素E0.01％無水乙醇液,在284nm波長有最大吸收；在254nm波優(yōu)點(diǎn)有最小吸收,可供判別。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第12頁薄層色譜法 將供試品點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙醚（4：1）為展開劑，展開10cm～15cm后，取出，于空氣中晾干，噴以濃硫酸，在105℃加熱5min，α-生育酚醋酸酯和α-生育醌Rf值分別為0.5.0.7和0.9。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第13頁其它方法（判別）氣相色譜法USP(24)紅外光譜法BP(),JP(14)維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第14頁三、雜質(zhì)檢驗一、酸度目標(biāo):檢驗維生素E制備過程中引入游離醋酸。方法:取乙醇與乙醚各15ml，置錐形瓶中，加酚酞指示液0.5ml，滴加NaOH滴定液（0.1ml/L)至微顯粉紅色，加本品1.0g，溶解后，用NaOH滴定液（0.1ml/L)滴定，不得超出0.5ml。（CH.P)維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第15頁二、生育酚起源:制備過程中未酯化原理:利用游離生育酚還原性，可被硫酸鈰定量氧化。故在一定條件下以消耗硫酸鈰滴定液（0.01mol/L)體積來控制游離生育酚限量。方法:（硫酸鈰滴定法）取本品0.10g,加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液一滴，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰滴定液（0.01mol/L)不得過0.5ml.維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第16頁生育酚檢驗生育酚:Ce4+＝1:2生育酚分子量為430.7中國藥典要求維生素E中所含游離生育酚≤2.15％每1ml硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于0.002154g游離生育酚。計算L=（T×V）/S×100%=0.002154×1.0/0.10×100％＝2.15％維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第17頁含量測定:氣相色譜法CH.P（）BP()USP(24)高效液相色譜法JP(14)（外標(biāo)法）熒光分光光度法維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第18頁判別測定方法選擇判別:氣相色譜法USP(24)紅外光譜法BP(),JP(14)含量測定:氣相色譜法CH.P（）BP()USP(24)高效液相色譜法JP(14)（外標(biāo)法）熒光分光光度法維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第19頁氣相色譜法Ch.p(）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以硅酮(OV-17)為固定相，涂布濃度為2％；柱溫為265℃。理論板數(shù)按維生素E計算應(yīng)不低于500，維生素E峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰分離度應(yīng)大于2。校正因子測定:取正三十二烷適量，加正己烷溶解并稀釋成每1ml中含1.0ml溶液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取維生素E對照品約20mg，精密稱定，置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml，密塞，振搖使溶解，取1～3ul注入氣相色譜儀，計算校正因子。測定法:取本品約20mg，精密稱定，置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml密塞，振搖使溶解，取1～3ul注入氣相色譜儀，測定，計算，即得。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第20頁氣相色譜法BP()雖采取正三十二烷為內(nèi)標(biāo),但Rf≥1.4;USP(24)采取十六酸十六醇酯為內(nèi)標(biāo),Rf≥1.0維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第21頁高效液相色譜法（JP(14)外標(biāo)法）色譜條件色譜柱:內(nèi)徑4mm，長15cm～30cm不銹鋼柱固定相:填充粒經(jīng)5um~10um十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相:甲醇-水（49:1）檢測波長:292nm維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第22頁高效液相色譜法方法:取維生素E供試品和生育酚對照品各約0.05g，精密稱定，分別溶于無水乙醇中，并準(zhǔn)確稀釋至50.0ml，即得供試品溶液和對照品溶液；精密吸收兩種溶液各20ul注入高效液相色譜儀，統(tǒng)計色譜圖，分別測量維生素E峰高Hx和Hr供試品中生育酚量（mg)＝mr×Hx/Hrmr為生育酚對照品量（mg）；Hx和Hr分別為供試品和對照品中生育酚峰高。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第23頁同時熒光掃描技術(shù)在同時掃描兩個兩個單色器波長情況下，由測得熒光強(qiáng)度信號與對應(yīng)激發(fā)波光或發(fā)射波長組成光譜圖，與通常熒光法比較含有以下優(yōu)點(diǎn)：1、使光譜簡化；2、使譜帶窄化；3、減小光譜重合現(xiàn)象；4.降低散射光影響。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第24頁同時熒光 熒光法維生素E熒光峰和溶劑拉曼光譜重合,影響熒光法靈敏度及準(zhǔn)確性。 同時熒光掃描法選擇適當(dāng)△λ,可有效地消除溶劑拉曼光譜干擾,提升測定方法靈敏度及準(zhǔn)確性。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第25頁同時熒光掃描法儀器:日立F-4010型光譜分光光度計。維生素E對照品溶液:dl-α-生育酚用正己烷配成1mg/ml，放4℃冰箱保留，臨用時再用無水乙醇稀釋成4.0mg/L。維生素EVitaminE專業(yè)知識講座第26頁方法 在熒光分光光度計上以發(fā)射、激發(fā)波長間隔△λ為40nm，在220nm～400nm掃描同時熒光光譜，測定同時熒光峰（337nm）熒光強(qiáng)度信號值。熒光光度計工作條件為雙狹縫10nm，響應(yīng)時間2s，掃描速度600