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DB34DB34/T2515—2015豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法RT-PCRassayforporcineepidemicdiarrheavirus安徽省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I1本標準規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒（porcineepPEDV：豬流行性腹瀉病毒（porcineepidemicPCR：聚合酶鏈式反應（polymerasechainreactiRT-PCR：反轉錄聚合酶鏈式反應（reversetranscription-polymeraDEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyroTaq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）dNTP：脫氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribM-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloneymurinelPBS：磷酸緩沖液（phosphatebuffersolution）TAE：Tris-乙酸電泳緩沖液（trisa25.11磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01mol/L，——下游引物5’-CCCATGAAGCACTTTCTCACTATC-5.15陽性對照樣品：PEDV接種的VE采取病死或剖殺豬的小腸內容物，按1:5倍心管中，8000rpm離心10min，取上清36.2.412000g4℃離心15min，吸取上層水相移入新的離心管中，加將PCR擴增產物5μL與2μL上樣緩沖液混合，點樣于1％瓊脂糖凝膠板加樣孔中，瓊脂糖凝膠板一側點樣孔加入DL2000DNAMarker（分子質量標準物），緩沖液為1×TAE，以5V/cm電被檢樣品出現(xiàn)663bp擴增條帶為PEDV核酸陽性，未出現(xiàn)663bp41——陰性對照樣品；2——陽性對照樣品；3、4——陽性樣品。5A.1.3量取0.2moL/L磷酸氫二鈉溶液36mL，0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液14mL，稱取氯5g，用滅菌去離子水溶解稀釋至100A.2.10.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉（EDTA）溶液（pH8.——滅菌雙蒸水——氫氧化鈉——滅菌雙蒸水——羥基甲基氨基甲烷（Tris分析純）——冰乙酸——0.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液(pH8.0)——滅菌雙蒸水

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