DB34T 3650-2020 水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 酶聯(lián)免疫吸附法　　

DB34DB34/T3650—2020水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定酶聯(lián)免疫吸附法DeterminationofresiduesofnitrofuranmetabolitesinaquaticProductsELISAmethod2020-06-22發(fā)布2020-07-22實(shí)施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗室用水規(guī)農(nóng)業(yè)部1192號公告-1-2009水產(chǎn)苗定。試樣中殘留的硝基呋喃代謝物、HRP酶標(biāo)記抗原共同競爭板上的抗體，加TMB底物后的顏色——包括：呋喃唑酮代謝物（AOZ）測定試劑盒、呋喃它酮代謝物（AMOZ）測定試劑盒、呋喃西林4.6.1呋喃唑酮代謝物（AOZ）標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（ng/mL0，0.0224.6.2呋喃它酮代謝物（AMOZ）標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（ng/mL0，0.04.6.3呋喃西林代謝物(SEM)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（ng/）：4.6.4呋喃妥因代謝物(AHD)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（ng/）：5.5恒溫振蕩器。溫控范圍：室溫～100℃,溫控精度：±0.5℃所有操作應(yīng)在20℃~25℃室溫下進(jìn)行。AOZ、AMOZ、SEM和AHD測定試劑盒及所有試劑，使用前30.5mL鹽酸溶液（4.3）和80μL衍生化試劑（4.6.6劇烈振蕩1min，置于恒溫振蕩器中此最終試液體積（v）為1mL，所代表的相應(yīng)的位置。在每孔中，加入100μL標(biāo)準(zhǔn)緣混勻1min，蓋上板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于22.5℃±2.5℃避光孵育30min；取出酶標(biāo)板，在吸水紙上拍打，完全去除孔中液體。每孔加入100μLTMB底物（4.6.8），蓋上板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于22.5℃±2.5℃避光孵育20min后，加入100μL終止液（4.6.9），輕輕振蕩混勻標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光率按式（1）計算，百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均00A——標(biāo)準(zhǔn)工作液或試液的百分吸光率，%;B——非0濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液或試液的平均吸光度值，%;應(yīng)的試樣中硝基呋喃類代謝物濃度（c），再乘以），），4X——硝基呋喃類代謝物含量，單位為微克每千克(μg/kg）；AMOZ、SEM和AHD空白試樣中添加0.05μg/kg～5μg/kg，AOZ空白試樣中添加％～5A.1呋喃唑酮代謝物（AOZ）測定2℃~8℃的溫度下儲存。已包被的酶標(biāo)板(AOZ-coatedPlate)（可標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)（ng/mL：0，0.02，0.06，0.18，0.54，1.62）......AOZ酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugate)...........................................620×濃縮洗液(WashingSolution).....................................終止液(StopBuffer)................TMB底物(TMBSubstrate)......................50mM2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)............A.2呋喃它酮代謝物（AMOZ）測定2℃~8℃的溫度下儲存。已包被的酶標(biāo)板（AMOZ-coatedPl標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)（ng/mL：0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4）.........AMOZ酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugate)...........................................6mL20×濃縮洗液(WashingSolution).....................................終止液(StopBuffer)................TMB底物(TMBSubstrate)......................50mM2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)............A.3呋喃西林代謝物(SEM)測定試2℃~8℃的溫度下儲存。已包被的酶標(biāo)板（SEM-coatedPlate)（可標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)（ng/mL：0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4）.........6SEMZ酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugate)...........................................6mL20×濃縮洗液(WashingSolution)............................終止液(StopBuffer)..........................................14mLTMB底物(TMBSubstrate)................................50mM2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde).....................A.4喃妥因代謝物(AHD)測定試2℃~8℃的溫度下儲存。已包被的酶標(biāo)板(AHD)-coatedPla標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)（ng/mL：0，0.025，0.1，0.4，1.6，AHD)酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugate)...........................................6mL20×濃縮洗液(WashingSolution)............................終止液(StopBuffer)..........................................14mLTMB底物(