DB34T 4203-2022 豬腸外致病性大腸桿菌分離鑒定規(guī)程

34RegulationfordetectionofextraintestinalpathogenicEscherichiacolifromswineI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1GB4789.38食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)GB4789.41食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)?zāi)c桿菌科檢驗(yàn)4.1顯微鏡：10×~100×。4.4冰箱：0℃~4℃。4.1030%甘油緩沖鹽水溶液：見附錄A中A.24.19大腸桿菌0抗原單因子標(biāo)準(zhǔn)血清。保存與運(yùn)輸：病料樣品采集后不能及鹽水溶液中，保存時間不超過72h。樣品均需采取低溫(0℃~4℃)保存和運(yùn)輸。35.2.6腸外致病性大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化群鑒定4A.1飽和氯化鈉溶液A.1.1成分A.1.2制法將38.0g～39.0g氯化鈉加入100mL蒸餾水中，充分?jǐn)嚢?，待完全溶解混勻后，分裝于采樣A.230％甘油緩沖鹽水溶液A.2.1成分A.2.2制法A.3.1成分A.3.2制法5業(yè)6取O抗原分別與大腸桿菌的O抗原單因子血清進(jìn)行玻片凝集反應(yīng)。即O抗原和O抗原單因子血清各取混合物作對照，觀察有無自凝集現(xiàn)象。玻片凝集試驗(yàn)判定標(biāo)+-a)O抗原單因子定型血清的稀釋：采取倍0.5mL加入第1管，在管內(nèi)反復(fù)吹打6～8清稀釋倍數(shù)分別是1:20，1:40，1:80b)加入抗原：向各支試管中分別加入0.5mLO抗原，此時血清稀釋倍數(shù)相應(yīng)增大一倍；3)凝集強(qiáng)弱判斷（以“＋”表示確定抗體凝集效價時，應(yīng)以出現(xiàn)“++?（50凝集現(xiàn)象?“++++?液體完全透明，100％凝集，管底出現(xiàn)大片的?“+++?液體幾乎透明，75％凝集，管底有明顯的傘狀沉淀，震蕩時呈小或大絮片狀；7?“++?液體中等混濁，50％凝集，管底有中等量的傘狀沉淀，震蕩時呈小絮片狀；?“+?液體透明度不明顯，25％凝集，管底有少許不明顯的傘狀沉淀；?“-?抗原抗體不凝集，液體混濁、無透明度，管底無傘狀沉淀，但由于菌體自然下沉，管82×PCRMasterMix、超純水、瓊脂糖、10mg/ML溴化乙錠（EB）、TBE緩（10×LoadingBuffer）、相對分子質(zhì)量Mar豬腸外致病性大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化群PCR鑒定用引物yjaAyjaA-FyjaA-RTspE4.C2-FD.2.2ExPEC的系統(tǒng)進(jìn)化群分D.2.3.1用100mL1×TAE緩沖液制備1.0%瓊脂糖