藥物分析課件全國(guó)普通高等專(zhuān)科教育藥學(xué)類(lèi)規(guī)劃教材齊永秀主編-第4章藥物定量分析方法與分析法的檢驗(yàn)

第一節(jié)定量分析方法

第二節(jié)分析樣品前處理第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證第四章藥物定量分析與分析方法的驗(yàn)證

藥品的含量測(cè)定是指準(zhǔn)確測(cè)定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量。含量測(cè)定是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣和保證藥品療效的重要手段?，F(xiàn)行版藥典收載的3456種藥品中，有1519種涉及到含量測(cè)定。常用的含量測(cè)定方法有化學(xué)分析法（重量法和容量法）、光譜法（紫外-可見(jiàn)分光光度法和熒光分析法）、色譜法（氣相色譜法、薄層掃描法、高效液相色譜法）等?；瘜W(xué)分析法是以物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。根據(jù)其反應(yīng)類(lèi)型、操作方法的不同，又可將其分為重量法和容量法。第一節(jié)定量分析方法一化學(xué)分析法重量分析法是稱(chēng)取一定重量的供試品，采用某種方法或通過(guò)某種物理或化學(xué)變化是被測(cè)組分從樣品中分離出來(lái)并轉(zhuǎn)化為一定的稱(chēng)重形式，在根據(jù)供試品中被測(cè)組分的重量，計(jì)算組分的百分含量。（一）重量分析法優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果準(zhǔn)確、可重現(xiàn)；適用范圍廣。缺點(diǎn)：操作繁瑣、費(fèi)時(shí)；靈敏度低，對(duì)低含量組分測(cè)定誤差大。

1重量分析法的特點(diǎn)2.重量分析法的計(jì)算問(wèn)題：換算因素（或重量因素）F：

是指被測(cè)組分的摩爾質(zhì)量與稱(chēng)重形式的摩爾質(zhì)量比，用F表示。

F=a×Ma/b×Mb

式中：a,b為使待測(cè)組分存在形式與稱(chēng)重形式中含有的待測(cè)元素原子數(shù)或分子數(shù)相等的最小公倍數(shù)；Ma為供試品中待測(cè)組分的摩爾質(zhì)量，g/mol;Mb為待測(cè)組分稱(chēng)重形式的摩爾質(zhì)量，g/mol。含量（%）=(Wb×F/Wa)×100%Wb：稱(chēng)量形式重量Wa：試樣重量（二）容量分析法容量分析法即滴定分析法，是根據(jù)一種已知濃度的試劑溶液和被測(cè)物質(zhì)完全作用時(shí)所消耗的體積，來(lái)計(jì)算被測(cè)物質(zhì)含量的方法。容量分析通常用于測(cè)定較高含量或中含量組分，即被測(cè)組分的含量一般在1%以上，有時(shí)也可用于測(cè)定微量組分。容量分析比較準(zhǔn)確，測(cè)定的相對(duì)誤差可達(dá)0.1%。1容量分析法的特點(diǎn)

a測(cè)定準(zhǔn)確

b專(zhuān)屬性較差2容量分析法的計(jì)算問(wèn)題

a滴定溶液配制與標(biāo)定計(jì)算

b分析結(jié)果處理

(1)滴定度及其計(jì)算：

滴定度系指規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。被測(cè)藥物分子（A）與滴定劑（B）之間按一定（mol）比進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)為：

aA+bB→cC+dD

滴定度T=m×（a/b）×Mm：滴定液摩爾濃度（mol/L）

a：被測(cè)藥物摩爾數(shù)b：滴定劑摩爾數(shù)

M：被測(cè)藥物的豪摩爾質(zhì)量

原理：當(dāng)物質(zhì)與輻射相互作用時(shí)，物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生能級(jí)躍遷。記錄由能級(jí)躍遷所產(chǎn)生的輻射能隨波長(zhǎng)的變化所得的圖譜，從而利用物質(zhì)光譜進(jìn)行定性，定量和結(jié)構(gòu)分析。二光譜分析法1特點(diǎn)：a靈敏度高（100~0.1μg/ml）b準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2%~5%c應(yīng)用廣泛，可以應(yīng)用計(jì)算分光光度計(jì)不經(jīng)分離直接測(cè)定混合物中各組分的含量。2朗伯——比爾定律：A=ElC（一）紫外—可見(jiàn)分光光度儀a配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池；b在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確；c吸收峰波長(zhǎng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)，以最大吸光度的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，記錄吸光度。3測(cè)定步驟a按各品種項(xiàng)下的方法，分別配置供試品溶液和對(duì)照品溶液；b在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度；c計(jì)算供試品的百分含量含量（%）=（Ax/Ar)×Cr×n/W×100%

注：對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100%±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致（1）對(duì)照品比較法注射用硫噴妥鈉含量測(cè)定：精密稱(chēng)取硫噴妥鈉0.25g，置于500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液稀釋成每1ml中約5μg的溶液，問(wèn)稀釋倍數(shù)是多少？思考題：按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件的吸收系數(shù)計(jì)算含量。公式見(jiàn)式（4-9）（2）吸收系數(shù)法第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證概述：

1藥物分析方法驗(yàn)證的目的：是證明所采用的分析方法是否適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求；

2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)的方法、雜質(zhì)限度檢查，原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；

3質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精確度、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍、耐用性。（一）定義：是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示（二）回收率的測(cè)定方法原料藥：可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較?；厥章剩?）=（測(cè)得量/加入量）×100%2.制劑：要考察輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算。

回收率%=（測(cè)定值—本底值）/加入量×100%

一、準(zhǔn)確度

3.雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度（1）向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)后測(cè)定、判斷。（2）若不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法所測(cè)結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。（三）準(zhǔn)確度數(shù)據(jù)的要求：二、精密度

是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果之間的接近程度。通常用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)偏差表示。1.偏差(deviation,d)d=測(cè)得值-平均值=Xi-X2.標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation,SD或S）S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relativestandarddeviation,RSD)也稱(chēng)變異系數(shù)RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%=S/X×100%

（二）表示方法1.重復(fù)性在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。2.中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。實(shí)際意義是為了考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響而設(shè)計(jì)3.重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。（三）精密度試驗(yàn)的要求1樣品分析要求：取樣次數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)處理要求，一般大于等于4次。

2不同分析方法，對(duì)精度的要求不同：容量與重量法：RSD小于0.2%~0.5%

紫外分光光度儀：RSD小于1.5%

高效液相色譜：RSD小于2%

薄層色譜：RSD小于4%四、檢測(cè)限和定量限

檢測(cè)限（limitofdetection,LOD)：是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)指標(biāo)。它無(wú)需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。定量限（limitofquantitation,LOQ)是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求LOQ.常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行測(cè)定。常用的方法：目視法用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。五、線性（一）定義是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。（二）線性的獲得線性通常是制備一系列濃度的供試品溶液（至少5種濃度），測(cè)定，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為函數(shù)，以被測(cè)物濃度作為自變量，作線性回歸。（三）數(shù)據(jù)要求應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。六范圍（一）定義是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。范圍的規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開(kāi)始前應(yīng)確立驗(yàn)證的范圍和試驗(yàn)方法。（二）范圍的確定原料藥和制劑含量