藥物分析課件全國普通高等?？平逃帉W類規(guī)劃教材齊永秀主編-第4章藥物定量分析方法與分析法的檢驗

第一節(jié)定量分析方法

第二節(jié)分析樣品前處理第三節(jié)藥品質量標準分析方法驗證第四章藥物定量分析與分析方法的驗證

藥品的含量測定是指準確測定藥品有效成分或指標性成分的含量。含量測定是評價藥品質量、判斷藥物優(yōu)劣和保證藥品療效的重要手段?，F(xiàn)行版藥典收載的3456種藥品中，有1519種涉及到含量測定。常用的含量測定方法有化學分析法（重量法和容量法）、光譜法（紫外-可見分光光度法和熒光分析法）、色譜法（氣相色譜法、薄層掃描法、高效液相色譜法）等?；瘜W分析法是以物質的化學反應為基礎的分析方法。根據(jù)其反應類型、操作方法的不同，又可將其分為重量法和容量法。第一節(jié)定量分析方法一化學分析法重量分析法是稱取一定重量的供試品，采用某種方法或通過某種物理或化學變化是被測組分從樣品中分離出來并轉化為一定的稱重形式，在根據(jù)供試品中被測組分的重量，計算組分的百分含量。（一）重量分析法優(yōu)點：結果準確、可重現(xiàn)；適用范圍廣。缺點：操作繁瑣、費時；靈敏度低，對低含量組分測定誤差大。

1重量分析法的特點2.重量分析法的計算問題：換算因素（或重量因素）F：

是指被測組分的摩爾質量與稱重形式的摩爾質量比，用F表示。

F=a×Ma/b×Mb

式中：a,b為使待測組分存在形式與稱重形式中含有的待測元素原子數(shù)或分子數(shù)相等的最小公倍數(shù)；Ma為供試品中待測組分的摩爾質量，g/mol;Mb為待測組分稱重形式的摩爾質量，g/mol。含量（%）=(Wb×F/Wa)×100%Wb：稱量形式重量Wa：試樣重量（二）容量分析法容量分析法即滴定分析法，是根據(jù)一種已知濃度的試劑溶液和被測物質完全作用時所消耗的體積，來計算被測物質含量的方法。容量分析通常用于測定較高含量或中含量組分，即被測組分的含量一般在1%以上，有時也可用于測定微量組分。容量分析比較準確，測定的相對誤差可達0.1%。1容量分析法的特點

a測定準確

b專屬性較差2容量分析法的計算問題

a滴定溶液配制與標定計算

b分析結果處理

(1)滴定度及其計算：

滴定度系指規(guī)定濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的質量。被測藥物分子（A）與滴定劑（B）之間按一定（mol）比進行反應，反應為：

aA+bB→cC+dD

滴定度T=m×（a/b）×Mm：滴定液摩爾濃度（mol/L）

a：被測藥物摩爾數(shù)b：滴定劑摩爾數(shù)

M：被測藥物的豪摩爾質量

原理：當物質與輻射相互作用時，物質內部發(fā)生能級躍遷。記錄由能級躍遷所產(chǎn)生的輻射能隨波長的變化所得的圖譜，從而利用物質光譜進行定性，定量和結構分析。二光譜分析法1特點：a靈敏度高（100~0.1μg/ml）b準確度高，相對誤差為2%~5%c應用廣泛，可以應用計算分光光度計不經(jīng)分離直接測定混合物中各組分的含量。2朗伯——比爾定律：A=ElC（一）紫外—可見分光光度儀a配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池；b在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸光度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確；c吸收峰波長在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內，以最大吸光度的波長作為測定波長，記錄吸光度。3測定步驟a按各品種項下的方法，分別配置供試品溶液和對照品溶液；b在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度；c計算供試品的百分含量含量（%）=（Ax/Ar)×Cr×n/W×100%

注：對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100%±10%，所用溶劑也應完全一致（1）對照品比較法注射用硫噴妥鈉含量測定：精密稱取硫噴妥鈉0.25g，置于500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液稀釋成每1ml中約5μg的溶液，問稀釋倍數(shù)是多少？思考題：按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件的吸收系數(shù)計算含量。公式見式（4-9）（2）吸收系數(shù)法第三節(jié)藥品質量標準分析方法驗證概述：

1藥物分析方法驗證的目的：是證明所采用的分析方法是否適合于相應的檢測要求；

2質量標準分析方法驗證的項目：鑒別試驗的方法、雜質限度檢查，原料或制劑中有效成分含量測定；

3質量標準分析驗證內容：準確度、精確度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍、耐用性。（一）定義：是指用該方法測定結果與真實值接近的程度，用回收率表示（二）回收率的測定方法原料藥：可用已知純度對照品或樣品進行測定；或與已建準確度的另一方法測定的結果進行比較?；厥章剩?）=（測得量/加入量）×100%2.制劑：要考察輔料對回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對照品的方法作回收率試驗，然后計算。

回收率%=（測定值—本底值）/加入量×100%

一、準確度

3.雜質定量測定的準確度（1）向原料藥或制劑中加入已知量雜質后測定、判斷。（2）若不能得到雜質或降解產(chǎn)物，可用本法所測結果與另一成熟的方法進行比較。（三）準確度數(shù)據(jù)的要求：二、精密度

是指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次測定結果之間的接近程度。通常用偏差、標準偏差或相對偏差表示。1.偏差(deviation,d)d=測得值-平均值=Xi-X2.標準偏差（standarddeviation,SD或S）S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對標準差(relativestandarddeviation,RSD)也稱變異系數(shù)RSD=標準偏差/平均值×100%=S/X×100%

（二）表示方法1.重復性在相同條件下,由一個分析人員測定所得結果的精密度。2.中間精密度在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果的精密度。實際意義是為了考察隨機變動因素對精密度的影響而設計3.重現(xiàn)性在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度。（三）精密度試驗的要求1樣品分析要求：取樣次數(shù)應滿足統(tǒng)計學處理要求，一般大于等于4次。

2不同分析方法，對精度的要求不同：容量與重量法：RSD小于0.2%~0.5%

紫外分光光度儀：RSD小于1.5%

高效液相色譜：RSD小于2%

薄層色譜：RSD小于4%四、檢測限和定量限

檢測限（limitofdetection,LOD)：是指試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量，是限度檢驗指標。它無需測定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。定量限（limitofquantitation,LOQ)是指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質和降解產(chǎn)物進行定量測定時，要求LOQ.常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10時相應的濃度進行測定。常用的方法：目視法用已知濃度被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。五、線性（一）定義是指在設定的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。（二）線性的獲得線性通常是制備一系列濃度的供試品溶液（至少5種濃度），測定，以測得的響應信號作為函數(shù)，以被測物濃度作為自變量，作線性回歸。（三）數(shù)據(jù)要求應列出回歸方程、相關系數(shù)和線性圖。六范圍（一）定義是指達到一定精密度、準確度和線性、測試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。范圍的規(guī)定值，在試驗研究開始前應確立驗證的范圍和試驗方法。（二）范圍的確定原料藥和制劑含量