微生物檢測步驟

微生物操作流程1培養(yǎng)基制備：按培養(yǎng)基標簽使用量，用濾紙稱量培養(yǎng)基至三角瓶中，放置電爐（加石棉網(wǎng)）加熱至沸騰取下；加熱時用玻璃棒攪拌防止糊底。乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基用刻度吸管或移液器取50ml（也可以加10ml培養(yǎng)基，后續(xù)加入樣品液對應(yīng)為1ml）加入試管中，加小倒管，小倒管中不能有氣泡，蓋上管塞。0.9%生理鹽水制備：取氯化鈉9g加蒸餾水991g，攪拌至氯化鈉全部溶解，配制成0.9%生理鹽水。實驗用水：蒸餾水2滅菌：將盛裝培養(yǎng)基和生理鹽水的三角瓶口，鑷子、剪刀、移液器槍頭、乳糖發(fā)酵管用報紙包扎，乳糖發(fā)酵管放入燒杯，放入高壓蒸汽滅菌器滅菌121度30min，滅菌后通過傳遞窗傳入無菌室，用酒精噴壺對表面消毒后放置在不銹鋼臺上。3傳遞窗使用規(guī)則：使用前后要開啟紫外殺菌30min，傳遞窗兩側(cè)門嚴格執(zhí)行一開一關(guān)，嚴禁同時打開。4無菌室使用前對無菌室紫外滅菌30min，開啟空氣凈化≥1h，使用時提前30min關(guān)掉紫外，潔凈臺紫外滅菌30min；使用時關(guān)掉紫外，開啟排風系統(tǒng)。5無菌室進出流程：一更換鞋或者帶鞋套，二更更換實驗服，緩沖間洗手消毒后進入無菌室，進入無菌室后盡量少走動。7打開潔凈臺排風系統(tǒng)，用75%酒精擦拭操作臺面消毒，將傳遞窗傳遞進入物品及一次性培養(yǎng)皿放入潔凈臺。8樣品制備及無菌操作（在潔凈臺中操作）：樣品液制備：用酒精噴壺對手部消毒，從均質(zhì)袋底部取出均質(zhì)袋，不要碰觸袋子開口，打開袋子放在天平上的大燒杯里，剪刀用酒精棉球消毒后剪取樣品10+1g，加入生理鹽水200g，將袋子口折疊拍打揉搓樣品約60下。如需對樣品進行稀釋，用移液器吸取1ml制備液，放入9ml無菌生理鹽水中，就稀釋為10倍，以此類推。(衛(wèi)材一般不需要再稀釋)無菌操作：細菌菌落總數(shù)和真菌菌落總數(shù)操作，用移液槍取1ml所需濃度樣品液加入平皿中，加入時，平皿不能完全打開，僅開啟一半小口加入樣品即可，倒入15-20ml培養(yǎng)基，平皿在桌面旋轉(zhuǎn)混勻，分別做3個培養(yǎng)皿，凝固后從傳遞窗傳遞至培養(yǎng)間，培養(yǎng)皿倒置放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，一摞可放置8-10個培養(yǎng)皿，避開培養(yǎng)箱通風口，放置培養(yǎng)基水分過度流失。大腸菌群操作，取下乳糖發(fā)酵管塞，用移液槍取5ml所需濃度樣品液加入乳糖發(fā)酵管中，蓋好管塞。空白對照：另取新的槍頭吸取1ml滅菌生理鹽水加入平皿中，倒入培養(yǎng)基，分別做細菌菌落總數(shù)和真菌菌落總數(shù)空白培養(yǎng)皿；吸取1ml滅菌生理鹽水加入乳糖發(fā)酵管中，做大腸菌群空白對照。9培養(yǎng)條件：檢驗項目培養(yǎng)溫度培養(yǎng)周期觀察記錄細菌35度2天每天觀察菌落大腸桿菌35度1天培養(yǎng)基渾濁，小倒管有氣泡（陽性）真菌25度7天在第3、5、7每天觀察菌落10菌落計數(shù)：平皿生長菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)（20），單位cfu/g11標準產(chǎn)品≤200cfu/g空氣落菌≤2500cfu/m3工作臺表面≤20cfu/cm2工人手表面≤300cfu/只手無菌室3沉降菌/皿潔凈臺1沉降菌/皿其他檢測1手部檢測：用浸在10ml生理鹽水中的滅菌棉簽，在五指指尖到指端來回涂擦10次，剪去手接觸部分棉簽，將棉簽放入10ml滅菌生理鹽水試管中，混勻，取1ml加平皿加培養(yǎng)基，剪刀要滅菌或用酒精棉消毒。菌落計數(shù)：平皿生長菌落數(shù)乘以10，單位cfu/只手2工作設(shè)備臺面：用浸在10ml生理鹽水中的滅菌棉簽，涂抹5cm*5cm面積表面10次，剪去手接觸部分棉簽，將棉簽放入10ml滅菌生理鹽水試管中，混勻，取1ml加平皿加培養(yǎng)基，剪刀要滅菌或用酒精面消毒。菌落計數(shù)：平皿生長菌落數(shù)乘以10除以面積，單位cfu/cm23空氣落菌：事先準備細菌菌落總數(shù)培養(yǎng)基35度培養(yǎng)24h，檢查無污染，在待檢處打開平皿蓋，放置5min，35度培養(yǎng)48h觀察菌落計數(shù)：平皿生長菌落數(shù)乘以50000除以