血常規(guī)復檢、鏡檢標準操作程序

血常規(guī)復檢、鏡檢標準操作程序目的用于指導血常規(guī)復檢、鏡檢。該SOP的變動程序標準操作程序的變動可由任一是用本程序的工作人員提出并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。血常規(guī)復檢、鏡檢標準WBC小于3.0×109或大于15×109；100fl-150fl出現(xiàn)高尖峰；PLT小于60×109；Hb小于50g/L；特殊病人和特殊病情；必須復查，必須推血片鏡檢；并登記。操作程序1.由本科工作人員重新采血。1.立即測定室內(nèi)質(zhì)控，觀測結果是非在控，在控，則再次測定，確認。并手工計數(shù)，參照相關手工計數(shù)操作程序。結果不在控，查找原因，排除后，則再測室內(nèi)質(zhì)控測定。在控確認，則再次測定。確認。并手工計數(shù)，參照相關手工計數(shù)操作程序。涂片染色鏡檢。白細胞手工計數(shù)標本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血。標本要求：抗凝劑采用EDTAK2抗凝。用手指末梢血作白細胞檢驗時，如手指有凍瘡，則主張采用耳垂血。標本儲存：取材后應立即推制成血涂片，并盡快送檢。標本運輸：保持干燥，室溫運輸。血液經(jīng)稀酸稀釋后,成熟紅細胞全部被溶解,注入計數(shù)池后,在顯微鏡下計數(shù)白細胞.《試劑》冰醋酸2ml蒸餾水98ml操作步驟1.用吸管準確吸取末梢血20ul（WBC小于3.0×109吸取40ul）；拭去管尖外部的余血,將吸管插入小試管中稀釋液的底部,輕輕將血放出,并吸取上層清液,洗試管數(shù)次,最后混合.2.充池,靜置2-3分鐘,待白細胞下沉.3.用低倍鏡計數(shù)4角4個大方格內(nèi)的白細胞數(shù).計算白細胞數(shù)/L=4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)×50×106參考范圍成人:(4-10)×109/L兒童:(5-12)×109/L新生兒:(15-20)×109/L注意事項1.標本采集時不能擠壓過甚,針刺深度必須適當.2．大小方格內(nèi)壓線細胞應按數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù).3．稀釋液要過濾,小試管,計數(shù)板必須清潔,以免雜質(zhì),微粒等誤認為細胞.4.計數(shù)時,兩次重復計數(shù)誤差不得超過10%.涂片染色檢查。染深藍色，含空泡或呈泡沫狀。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)細致呈網(wǎng)狀排列，可見1-2個發(fā)生母細胞化的結果。Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)偽足。核形狀及結構與I型相同或不同，染色質(zhì)較粗糙致密。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍或灰藍色，有透明感，邊緣處著色較深藍色?？捎猩贁?shù)空泡。（2）受放射線損傷后淋巴細胞形態(tài)變化：通過放射生物學的研究以及對射線損傷病人觀察，證實淋巴細胞是白細胞中對電離輻射最敏感的細胞。人體遭受較小劑量的電離輻射之后，雖未出現(xiàn)明顯臨床癥狀，但血中淋巴細胞的數(shù)量卻已顯著減少。若經(jīng)較大劑量照射后，淋巴細胞迅速減少，劑量越大，減少得越嚴重以致衰竭，與此同時受損傷的淋巴細胞還出現(xiàn)形態(tài)學改變，如核固縮、核破壞、雙核的淋巴細胞以及含有衛(wèi)星核的淋巴細胞。后者是指胞質(zhì)中主核之旁出現(xiàn)小核也稱微核，是射線損傷后較為特殊的所見。（3）淋巴細胞性白血病時形態(tài)學變化：在急、慢性淋巴細胞白血病時，不但出現(xiàn)各階段的原幼細胞，且處于各分階段的白血病的細胞都有特殊的形態(tài)變化。紅細胞形態(tài)在良好的染色血涂片上，正常紅細胞的大小形態(tài)較為一致，直徑為6.7～7.7μm，染色淡紅色，中央著色較邊緣淡。各種病因作用于紅細胞生理進程的不同階段引起相應的病理變化，導致某些類型貧血的紅細胞產(chǎn)生特殊的形態(tài)變化，可從染色血涂片上紅細胞的大小、形態(tài)、染色等方面反映出來。此種形態(tài)學改變與血紅蛋白測定、紅細胞計數(shù)結果相結合可粗略地推斷貧血原因，對貧血的診斷和鑒別診斷有很重要的臨床意義。紅細胞的形態(tài)變化主要表現(xiàn)在以下四個方面：紅細胞大小改變1.小紅細胞（microcyte）直徑小于6μm者稱為小紅細胞，正常人遇見。如果血涂片中出現(xiàn)較多染色過淺的小紅細胞，提示血紅蛋白合成障礙，可能由于缺鐵引起；或者是珠蛋白代謝異常引起的血紅蛋白病。而遺傳性球形細胞增多癥的小紅細胞，其血紅蛋白充盈良好，生理性中心淺染區(qū)消失。2.大紅細胞（macrocyte）直徑大于10μm。見于溶血性貧血及巨幼細胞貧血。3.巨紅細胞（megalocyte）直徑大于15μm。最常見于缺乏葉酸及維生素B12所致的巨幼細胞性貧血。其胞體所以增大是因為缺乏上述因子時，幼稚紅細胞內(nèi)DNA合成不足，不能按時分裂所致。如果血涂片中同時存在分葉過多的中性粒細胞則巨幼細胞性貧血可能性更大。4.紅細胞大小不均（anisocytosis）是指紅細胞之間直徑相差一倍以上而言。常見于嚴重的增生性貧血血涂片中。而巨幼細胞性貧血時尤為明顯，可能與骨髓粗制濫造紅細胞有關。紅細胞形態(tài)改變1.球形紅細胞（spherocyte）細胞直徑小于正常。厚度增加常大于2μm。無中心淺染色區(qū)，似球形。常見于遺傳性球形細胞增多癥和伴有球形細胞增多的其它溶血性貧血。如自身免疫性溶血性貧血、新生兒溶血病以及紅細胞酶缺陷所致溶血性貧血等。2.橢圓形紅細胞（elliptocyte）細胞呈卵圓形、桿形、長度可大于寬度3-4倍，最大直徑可達12.5μm，橫徑可為2.5μm。此種紅細胞置于高滲、等滲、低滲溶液或正常人血清內(nèi)，其橢圓形保持不變，但幼紅細胞及網(wǎng)織紅細胞均不呈橢圓形。在遺傳性橢圓形細胞增多癥病有血涂片中此種紅細胞可達25%，甚至高達75%（正常人約占1%）。3.靶形紅細胞（targetcell）紅細胞中心部位染色較深，其外圍為蒼白區(qū)域，而細胞邊緣又深染，形如射擊之靶。有的中心深染區(qū)不像孤島而像從紅細胞邊緣延伸的半島狀態(tài)或柄狀，而成不典型的靶形紅細胞。靶形紅細胞直徑可比正常紅細胞大，但厚度變薄，因此體積可正常。常見于各種低色素性貧血。在珠蛋白生成障礙性貧血時尤易見到?？赡芤騂bA含量貧乏而又分布不勻所致應注意與在血涂片制作中未及時固定而引起的改變相區(qū)別。4.鐮形紅細胞（sicklecell）形如鐮刀狀。這是由于紅細胞內(nèi)存在著異常血紅蛋白S所致，在缺氧情況下尤易形成此尖紅細胞。因此檢查鐮形紅細胞需將血液制成濕片，然后加入還原劑如偏亞硫酸病。5.口形紅細胞（stomatocyte）紅細胞中央有裂縫，中心蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的口形或魚口。在正常人偶見。如積壓涂片中出現(xiàn)較多口形紅細胞，見于口形紅細胞增多癥。少量出現(xiàn)可見于彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）、酒清中毒。6.棘細胞（acanthocyte）該紅細胞表面有針尖狀突起，其間距不規(guī)則。突起的長度和寬度右不一。在β-脂蛋白缺乏癥病人的血涂片中出現(xiàn)較多。也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。須注意與皺縮紅細胞區(qū)別。皺縮紅細胞周邊呈鋸齒形排列緊密、大小相等，外端較尖。7.裂片細胞（schistocyte）為紅細胞碎片或不完整的紅細胞。大小不一。外形不規(guī)則，有各種形態(tài)如刺形、盔形、三角形、扭轉(zhuǎn)形等。正常人血涂片中裂片細胞小于2%，彌漫性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血時出現(xiàn)較多。8.紅細胞形態(tài)不整（poikilocytosis）指紅細胞形態(tài)發(fā)生各種明顯改變的情況而言，可呈淚滴狀、梨形、棍棒形、新月形等，最常見于巨幼細胞性貧血?？赡芤蜇氀獓乐氐秩狈υ希诠撬鑳?nèi)粗制濫造；也可能因紅細胞脆性增大，在推片時碎裂所致。紅細胞內(nèi)血紅蛋白含量改變1.正常色素性（normochromic）正常紅細胞在瑞特染色的血片中為淡紅色圓盤狀，中央有生理性空白區(qū)，通常稱正常色素性。除見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白血病。2.低色素性（hypochromic）紅細胞的生理性中心淺染色區(qū)擴大，甚至成為環(huán)圈形紅細胞，提示其血紅蛋白含量明顯減少，常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生楊障礙性貧血、鐵幼粒細胞性貧血，某些血紅蛋白病時也常見到。3.高色素性（hyperchromic）指紅細胞內(nèi)生下性中心淺染區(qū)消失，整個紅細胞均染成紅色，而且胞體也大。其平均紅細胞血紅蛋白的含量是增高的，但平均血紅蛋白濃度多屬于正常。最常見于巨幼細胞性貧血。4.嗜多色性（polychromatic）屬于尚未完全成熟的紅細胞，故細胞較大，由于胞質(zhì)中含多少不等的嗜堿性物質(zhì)RNA而被染成灰色藍色。嗜多色性紅細胞增多提示骨髓造紅細胞功能活躍。在增生性貧血時增多，溶血性貧血時最為多見。紅細胞中出現(xiàn)異常結構1.堿性點彩紅細胞（basophilicstipplingcell）簡稱點彩紅細胞，指在瑞特氏染色條件下，胞質(zhì)內(nèi)存在嗜堿性深藍色顆粒的紅細胞，屬于未完全成熟紅細胞，其顆粒大小不一、多少不等、正常人血涂片中很少見到，僅為萬分之一。有鉛、鉍、汞中毒時增多，常作為名鉛中毒的診斷的篩選指標。有人認為是由于紅細胞的膜受重金屬損傷后，其胞質(zhì)中的核糖體發(fā)生聚集性引起，也可能是由于血紅蛋白合成過程中原卟啉與鐵結合受損所致，伴有再生紊亂現(xiàn)象。2.染色質(zhì)小體（howelljollysbody）位于成熟或幼紅細胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈圓形，有1-2μm大小，染紫紅色，可1至數(shù)個，已證實為核殘余物，常見于巨幼細胞性貧血、溶血性貧血及脾切除術后。3.卡波環(huán)（cabotring）在嗜多色性或堿性點彩紅細胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)的紫紅色細線圈狀結構，有時繞成8字形。現(xiàn)認為可能是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致常與染色質(zhì)小體同時存在。見于巨細胞性貧血和鉛中毒患者。4.有核紅細胞（nucleatederyhrocyte）即幼稚紅細胞，存在于骨髓中。正常成人外周血液中不能見到。1周之內(nèi)嬰兒的血涂片可見到少量。在成人外周血涂片中出現(xiàn)有核紅細胞屬病理現(xiàn)象，最常見于各種溶血性貧血。由于大量紅細胞破壞后，骨髓增生，除網(wǎng)織紅細胞大量入血外，還有一些有核紅細胞提前釋放入血，這說明骨髓的調(diào)節(jié)功能良好。另一種可能是造血系統(tǒng)惡性疾患或其它部位的癌腫轉(zhuǎn)達移到骨髓，最常見于急、慢性白血病及紅白血病。后者可見更早階段的幼紅細胞，并伴有形態(tài)上巨幼樣變及其它畸變。綜合以上紅細胞形態(tài)變化，結合紅細胞及血紅蛋白減低程度，可以初步作出貧血的形態(tài)學診斷（見下表）。常見各類貧血的形態(tài)學診斷簡表血涂片中紅細胞形態(tài)學所見病因推斷參考化驗項目紅細胞血紅蛋白網(wǎng)織紅細胞其它紅細胞大小不均，以小型為主，有明顯中心染區(qū)擴大缺鐵性貧血↓↓↓↑紅細胞大小，形態(tài)大致正常再生障礙性貧血↓↓↓血小板↓同上，多色性紅細胞較易見到急性失血↓↓↑中性分葉↑同上，易見嗜多色性紅細胞，亦可見到有核紅細胞急性溶血↓↓↑↑尿中有游離Hb，血小板正?；颉t細胞大小不均，大紅細胞及巨紅細胞易見到，血紅蛋白量豐富，生理性中心淺染區(qū)常見多色及有核紅細胞缺乏維生素B12及葉酸引起的巨幼細胞性貧血↓↓↓↑血小板正?；颉儺惖臐撛趤碓慈〔牟划敗Ｍ科^厚或過薄，影響形態(tài)觀察。操作注意事項1.取材后，必須立即涂片。2.推好的血膜片應在空氣中搖動，使其盡快干燥，以免細胞變形。天氣寒冷或潮濕時，應于37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小。3.根據(jù)血膜厚薄，細胞量多少及室內(nèi)溫度等把握好染色時間，使染色效果滿意。4.鏡檢時循序檢查，必要時用油鏡確認；并注意整體情況。血小板手工計數(shù)。將血液用適當?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯?，混勻注人計?shù)池內(nèi)計數(shù)，再算出每升血液中血小板數(shù)。試劑（1）草酸銨法稀液：分別溶解草酸銨1.0g及EDTA·Na20.012g，合并加蒸餾水至100ml,混勻（2）許汝和稀釋液：分別溶解尿素（AR級）10g、枸櫞酸鈉0.5g于蒸餾水至100ml,再加40％甲醛溶液0.1ml,混勻，過濾，保存于冰箱中備用?！恫僮鳌罚?）于清潔試管中加入稀釋液0.38ml。（2）準確吸取毛細血管血20ul(WBC小于60×109吸取40ul)，擦去管尖外附著血液，置于血小板稀釋液內(nèi)，立即充分混勻。街完全溶血后再次混勻1min。（3）取上述均勻的血小板懸液1滴，注入計數(shù)池內(nèi)，靜置10~15min，使血小板下沉。（4）用高倍鏡計數(shù)中央1個大方格（即400個小格）內(nèi)血小板，乘以0.2×109即為每升血液內(nèi)血小板數(shù)。質(zhì)量保證方案血小板稀釋液要清潔，配成后應過濾。防止微粒和細菌污染。試管吸管也應清潔、干凈。（2）針刺應稍深，使血流暢通。拭去第一滴血后，首先采血小板測事實上，操作應迅速，防止血小板聚集和破壞采取標本后盡快計數(shù)，以免影響結果。（3）血液加入稀釋液內(nèi)要充分混勻，滴入計數(shù)池后一定要靜置10～15min。室溫高時注意保持計數(shù)池周圍的濕度，以免水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結果。（4）計數(shù)時光線要適中，不可太強，應注意有折光的性的血小板和雜質(zhì)、灰塵相區(qū)別。附在血細胞旁邊的血小板也要注意，不要漏數(shù)。（5）如在