實驗動物學完整版本

實驗動物學1.實驗動物學緒論2.實驗動物質量控制3.常用實驗動物4.實驗動物營養(yǎng)與飼料5.實驗動物環(huán)境和設施6.基因工程動物7.“3Rs”理論及其研究進展8.怎樣才能作好動物實驗實驗動物學緒論實驗動物：是指經(jīng)人工培育的、遺傳背景清楚、對其攜帶微生物和寄生蟲實行控制、用于科學實驗、教學、檢定及藥品、生物制品生產(chǎn)的動物。實驗用動物：實驗動物、家畜、野生動物、伴侶動物實驗動物科學內(nèi)容：實驗動物、實驗動物醫(yī)學、比較醫(yī)學、動物實驗1988年，國家科委發(fā)布《實驗動物管理條例》1996年10月，《北京市實驗動物管理條例》出臺，于2005年1月1日實施實驗動物倫理：是人與實驗動物關系的倫理信念、道德態(tài)度和行為規(guī)范。主要體現(xiàn)在尊重實驗動物的價值和權利。實驗動物福利：實驗動物的一種康樂狀態(tài)。在此狀態(tài)下，其基本需求得到滿足，而痛苦被減至最小。五項基本福利：一，提供適當?shù)那鍧嶏嬎捅３纸】岛途λ枰氖澄?，使動物不受饑渴之苦二，提供適當?shù)臈鏊軌蚴孢m地休息和睡眠，使動物不受困頓不適之苦三，做好防疫，預防疾病和給患病動物及時診治，使動物不受疼痛、傷病之苦四，保證擁有良好的條件和處置（包括安樂死），使動物不受恐懼和精神上的痛苦五，提供足夠的空間、適當?shù)脑O施以及與同類動物伙伴在一起，使動物能夠自由表達正常的習性動物實驗需要考慮實驗動物倫理的幾個環(huán)節(jié)：實驗目的確定和必要性評估、實驗設計遵循3Rs原則、實驗操作過程避免或減輕動物疼痛及恐懼、日常飼養(yǎng)及護理、安樂死CRO：ContractResearchOrganizationInclude:Clinicaltrial、PreclinicalresearchAAALAC認證（國際實驗動物管理評估和認證協(xié)會）實驗動物遺傳學控制實驗動物按遺傳學控制分類：近交系、封閉群（遠交群）雜交群近交系：經(jīng)連續(xù)20代以上的全同胞兄妹交配或親子交配，近交系數(shù)大于99%，品系內(nèi)所有個體都可追溯到第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。近交系數(shù)：群體中某個體通過遺傳攜帶兩個同源等位基因的概率。命名：大寫英文字母或大寫英文字母加阿拉伯數(shù)字命名。BALB,DBA,TA1,C3H等，還有例外：如129等名稱縮寫：C57BL/6B6BALB/cCDBA/2D2C3HC3主要特征：基因位點的純合性、遺傳組成的同源性、表型的一致性、長期遺傳的穩(wěn)定性、遺傳特征的可分辨性、背景資料的完整性動物個體具有相同的遺傳組成和特性，因而對實驗反應極為一致,只需用少量的動物，即可得到非常規(guī)律的實驗結果；動物個體之間組織相容性抗原一致，異體移植不產(chǎn)生排斥反應；每個近交系都有各自鮮明的生物學特點。亞系：由同一個近交系分離出來的有不同特性的分支，這些分支間有遺傳差異，稱為該品系的亞系。亞系的形成1.兄妹交配20-40代時形成的分支；主要原因是殘留雜合2.某分支與其他分支分開繁殖超過100代；主要原因是突變3.發(fā)現(xiàn)一個分支與其他分支的差異。原因為殘留雜合、突變或遺傳污染命名：在品系名稱后加一道斜線（/），斜線后標明亞系的符號，亞系的符號可以是以下三種：數(shù)字，如DBA/1、DBA/2等。培育或產(chǎn)生亞系的單位或人的縮寫英文名稱，第一個字母用大寫，以后的字母用小寫。使用縮寫英文名稱應注意不要和已公布過的名稱重復。例如：A/He，表示A近交系的Heston亞系；CBA/J，表示由Jackson保持的CBA近交系的亞系。當一個保持者保持的一個近交系具有兩個以上的亞系時，可在數(shù)字后再加保持者的縮寫英文名稱來表示亞系。如：C57BL/6J，C57BL/10J分別表示由美國杰克遜研究所保持的C57BL近交系的兩個亞系。作為以上命名方法的例外情況是一些建立及命名較早，并為人們所熟知的近交系，亞系名稱可用小寫英文字母表示，如BALB/c、C57BR/cd等。由于遺傳污染形成的亞系，通常與原品系之間遺傳差異較大，因此對這樣形成的亞系應重新命名。例如由GLaxo保持的A近交系在發(fā)生遺傳污染后，重新命名為A2G。近交系名稱中常見的縮寫符號：f(fosternursing):代乳、o(ovary):卵巢移植、p:表示移植的胚胎經(jīng)過冷凍處理、e(egg):受精卵轉輸、BR:BarrierReared近交系動物命名實例：DBA/1fC57BL/6JDBA:小鼠品系名1：亞系名f：表示代乳C57BL:代乳母鼠品系名稱6：亞系名J：亞系名特殊類型的近交系：重組近交系：由兩個近交系雜交后，經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。命名：由兩個親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X重組同類系：由兩個近交系雜交后，子代與兩個親代中的一個進行數(shù)次回交（通常2次），通過不對特殊基因進行選擇的近親交配而育成的近交系。命名：兩個親代近交系縮寫名稱中間加小寫字母c。同源突變系：兩個近交系，除了一個指明位點等位基因不同外，其遺傳基因全部相同的品系。命名：由發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號（用英文斜體印刷體），二者之間以連接號分開。如：DBA/Ha-D同源導入系：通過雜交、互交或回交等方式將一個基因導入到近交系中，所形成的新的近交系只在一個很小的染色體片段上的基因不同，也稱同類系。命名由以下三部分組成：a.接受導入近交系縮寫名稱；b.提供導入基因的近交系縮寫名稱并與a之間用英文句號分開；c.導入基因符號（英文斜體），與b之間用連字符分開。如：B10.129-H-12b,表示該同類系背景為C57BL/10,導入基因為H-12b,基因提供者為129。封閉群：以非近親交配方式進行繁殖生產(chǎn)的實驗動物種群,在不從外部引入新個體的條件下,至少連續(xù)繁殖4代以上,稱為一個封閉群,或叫遠交群。命名：封閉群由2-4個大寫英文字母命名,種群名稱前標明保持者的英文縮寫名稱,第一個字母須大寫,后面字母小寫,一般不超過4個字母。保持者名稱與種群名稱之間用冒號分開。N:NIH美國衛(wèi)生研究院（N)保持的NIH封閉群小鼠Lac:LACA英國實驗動物中心（Lac)保持的LACA封閉群小鼠特例：Wistar大鼠，日本的ddy小鼠等特點：遺傳組成具有很高的雜合性；具有類似于人類群體遺傳異質性的遺傳組成；具有較強的繁殖力、生活力和抵抗力；突變種所攜帶的突變基因通常導致動物在某方面的異常，從而成為生命科學研究的模型常用封閉群動物：昆明小鼠（KM)、NIH小鼠、ICR小鼠；Wistar大鼠、SD大鼠；Hartley豚鼠；日本大耳白兔、新西蘭白兔、青紫藍兔；Beagle狗雜交群：由不同品系或種群之間雜交產(chǎn)生的后代雜交一代動物（F1代)：兩個不同近交系或種群雜交所生的第一代動物命名：雌性親代名稱在前，雄性親代名稱居后，二者之間以大寫英文字母―X‖相連，將以上部分用括號括起，再在其后標明雜交的代數(shù)（如F1、F2等）例如：（C57BL/6XDBA/2）F1=B6D2F1表示以C57BL/6為母系,DBA/2為父系雜交后生育的雜交一代,可簡寫為B6D2F1.特征和應用：遺傳和表型上的一致性：表型變異率低，對周圍環(huán)境變化適應性較強，實驗反應高度均一；雜交優(yōu)勢：具較強的生命力和對疾病的抵抗能力，壽命較長，適合于保存某些有害基因和長期慢性致死實驗，也可作為代乳動物以及卵、胚胎和卵巢移植的受體；雜合的遺傳組成：同時具有兩個親本品系的特點，可接受兩個親本品系的細胞、組織、器官和腫瘤移植。如何保持實驗動物遺傳穩(wěn)定？1嚴格的繁育制度2按期進行遺傳監(jiān)測：毛色基因測試法；生化標記基因檢測法；下頜骨測定法；皮膚移植法實驗動物微生物與寄生蟲控制實驗動物按微生物控制程度分級：1.普通級動物2.清潔級動物3.無特定病原體動物(SpecificPathogenFree,SPF)4.無菌動物1.普通級動物：飼養(yǎng)在普通環(huán)境中，不攜帶人畜共患病和動物烈性傳染病病原體的動物。普通級動物應排除的病原體：鼠痘病毒、流行性出血熱、狂犬病、猴B病毒、沙門氏細菌、志賀氏細菌、結核分枝桿菌、皮膚真菌、弓形體等2.清潔級動物：飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，除普通級動物應排除的病原體外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原體。3.無特定病原體動物(SPF)：飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，無特定病原體的動物。4.無菌動物：飼養(yǎng)在隔離環(huán)境，體內(nèi)外無任何可檢出的生命體●已知菌動物：動物體內(nèi)外所攜帶的生命體是已知的,也可叫已知菌動物?！裣ど鷦游铮合ど鷦游锸怯蔁o細菌動物植入已知細菌而得到的。常用實驗動物小鼠一般特性：性情溫順、膽小易驚，對外來刺激敏感；晝伏夜出，傍晚開始活躍；喜歡啃咬，非同窩雄鼠好斗雄鼠可分泌醋酸銨臭氣；白化小鼠怕強光；不耐餓、不耐熱剖學特點：門齒終身生長，需經(jīng)常磨損來維持恒定；無汗腺,尾有四條明顯的血管；胃容量小,約1-1.5ml；淋巴系統(tǒng)發(fā)達,外界刺激可使淋巴系統(tǒng)增生；雌性為雙子宮,成Y型；有褐色脂肪組織,參與代謝和增加熱能；雄鼠生殖器官中有凝固腺，分泌物在交配后凝固與雌性陰道和子宮頸內(nèi)形成陰栓；雄鼠脾臟比雌鼠明顯大，可達到50%生理學特點：成熟早,繁殖力強,一般雌鼠35-50日齡,雄鼠45-60日齡成熟;雌鼠性周期4-5天,妊娠期19-21天,哺乳期20-22天,胎產(chǎn)仔5-16只,每年6-10胎,生育期1年;為全年多發(fā)情動物;壽命約為2-3年。大鼠一般特性：性情溫順；嗅覺發(fā)達，味覺很差，對營養(yǎng)缺乏非常敏感（特別是VA)喜安靜環(huán)境，噪音對其繁殖影響很大對環(huán)境中的粉塵、氨氣和硫化氫等極為敏感，會引起肺大面積壞死對濕度極為敏感，太低易致環(huán)尾癥解剖學特點●門齒終生生長，需磨損維持其恒定；食道與十二指腸相距很近，胃中有一條皺折，收縮時會堵住噴門口；●肝臟再生能力強，無膽囊，來自各葉的膽管形成總膽管，開口于十二指腸的乳突；汗腺極不發(fā)達?！穹谓Y構特別。左肺為1個大葉，右肺分成4葉●心臟和外周循環(huán)與其他哺乳動物不同。心臟的血液供給既來自冠狀動脈，也來自冠狀外動脈●無扁桃體；眼角膜無血管；有棕色脂肪組織生理學特點●壽命為3-3.5年；2月齡時性成熟，為全年多發(fā)情動物；妊娠期19-23天；不能嘔吐豚鼠一般生物學特性●草食性；膽小、溫順、對外界刺激極為敏感。不傷人，不打斗，喜歡安靜、干燥、清潔的環(huán)境●喜群居,有專制型社會行為，1-2雄鼠處于統(tǒng)治地位●聽覺發(fā)達，能識別多種不同的聲音，當有尖銳的聲音刺激時，常表現(xiàn)耳廓微動，稱為普萊厄反射或聽覺耳動發(fā)射●有食糞癖，食軟糞補充營養(yǎng)，幼子從母鼠糞獲取正常菌叢解剖學特點●耳蝸網(wǎng)發(fā)達，聽覺敏銳，音域廣；上唇分裂，嚼肌發(fā)達；胸腺在頸部，位于下頜骨角到胸腔入口之間●盲腸極大，占腹腔容積三分之一；陰莖端有兩個特殊的角形物，呈圓錐狀；雌性有陰道閉合膜，一對乳腺生理學特點●性成熟早，雌鼠30-45日齡，雄鼠70日齡，妊娠期59-72天,一般產(chǎn)仔3-4只，哺乳期2-3周●出生時即被毛完整，一小時后可走動，數(shù)小時后能吃食●壽命一般4-5年，最長可達8年。2月齡體重可達350克，5月齡可達700克●自動調(diào)節(jié)體溫能力較差，飼養(yǎng)最適溫度18-22度;●體內(nèi)缺乏左旋葡萄糖內(nèi)酯氧化酶，其自身不能合成維生素C●易被致敏、引起變態(tài)反應，對免疫抑制劑敏感應用●免疫學血清中含有豐富的補體，血清學診斷上的―補體‖就是由豚鼠血清制成，常用補體結合試驗來進行實驗診斷；●營養(yǎng)學體內(nèi)不能合成維生素C,對維生素C缺乏十分敏感，如果飼料中缺乏時，很快會出現(xiàn)一系列壞血病癥狀，是目前唯一用于研究實驗性壞血病的動物；●各種傳染病的研究：豚鼠對很多致病菌和病毒十分敏感過敏反應或變態(tài)反應的研究；豚鼠對缺氧的耐受性強；毒物對皮膚局部作用實驗倉鼠（地鼠）一般生物學特性雜食性動物，有儲存食物的習性，可將食物存于頰囊內(nèi)牙齒堅硬，可咬斷細鐵絲；有食仔癖；晝伏夜出，嗜睡，熟睡時全身松軟，如死亡狀，不易醒?室溫18-22度為宜，低于9度時可出現(xiàn)冬眠（中國地鼠無冬眠現(xiàn)象）；好斗，受驚嚇時會咬人，雌性比雄性大且兇猛解剖學特點●口腔內(nèi)兩側各有一個頰囊，常用來運輸和儲存食物；中國地鼠無膽囊；盲腸較大，結腸長（水的利用率高）生理學特點●妊娠期15-17天，哺乳期21天，每年可產(chǎn)5-7胎，每胎產(chǎn)仔約7只，平均壽命2-3年；成年體重約為150克地鼠對皮膚移植的反應特別，封閉群內(nèi)個體間皮膚移植?？纱婊?，并能長期生存下來，但不同群體間移植則100%排斥頰囊缺少組織相容性反應，可進行腫瘤移植家兔一般生物學特性●草食性動物，性情溫順，群居性差；聽覺嗅覺靈敏，膽小怕驚；喜干怕熱；夜行性、嗜眠性●食糞特性；喜磨牙，有啃木、扒土習慣解剖學特點●六顆切齒，比嚙齒動物多一對小切齒；●胸腔由縱隔分為互不相通的左右兩部，縱隔由膈胸膜和縱隔胸膜兩層胸膜組成，肺被肋胸膜和肺胸膜隔開，心臟又被心包胸膜隔開。因此，開胸心臟手術無需人工呼吸；●頸部神經(jīng)血管特殊，有減壓神經(jīng)的獨立分支和迷走神經(jīng)與交感神經(jīng)干完全分開生理學特點●恒溫動物，對致熱物質反應敏感，適于用做熱源實驗●刺激性排卵，妊娠期30-33天，產(chǎn)仔數(shù)4-10只，哺乳期40-45天，生育年齡5-6年，平均壽命8年●胃常處于排空狀態(tài)，不會嘔吐；尿液呈堿性(pH8.2)，饑餓時尿液變酸(pH6-7)，幼兔尿偏酸犬一般生物學特性●嗅覺、聽覺、觸覺靈敏●視力很差，視角25度以下，視野20-30米，紅綠色盲●正常的犬鼻尖呈油狀滋潤，觸摸有涼感●喜歡肉類的脂肪，習慣啃骨頭，味覺差解剖學特點●嗅腦、嗅覺器官、嗅神經(jīng)發(fā)達，鼻粘膜上布滿嗅神經(jīng)；無鎖骨，肩胛骨由骨骼肌連接軀體●食道全部由橫紋肌構成；發(fā)達的心血管和神經(jīng)系統(tǒng)，內(nèi)臟與人相似●唾液中缺少淀粉酶；皮膚汗腺極不發(fā)達，趾墊有少量汗腺比格犬：又稱小獵兔犬貓一般生物學特性：交配后24小時開始排卵，屬典型刺激性排卵。對嘔吐反應靈敏，受機械和化學刺激易咳嗽；平衡感好，血壓穩(wěn)定動物實驗替代方法3R：Reduction（減少）：在科學研究中，通過科學合理的實驗設計，使用少量動物獲取同樣多的實驗數(shù)據(jù)或使用一定數(shù)量的動物獲得更多實驗數(shù)據(jù)的科學方法。絕對數(shù)量的減少（實驗動物用量下降）—相對數(shù)量的減少（實驗數(shù)據(jù)獲取量上升）Replacement（替代）：使用沒有知覺的實驗材料（體外方法）替代活體動物（體內(nèi)方法），或使用低等動物替代高等動物進行試驗，并獲得相同實驗效果的科學方法。Refinement（優(yōu)化）：在符合科學原則的基礎上，通過改善實驗環(huán)境條件，善待動物，提高動物福利；或完善實驗程序和改進實驗技術，避免或減輕給動物造成的與實驗目的無關的疼痛和緊張不安的科學方法。動物實驗仁慈終點：仁慈終點是動物遭受疼痛、痛苦或是動物瀕臨死亡前的最早指征，它是人為確定的、具有典型的臨床表現(xiàn)、并在達到試驗目的前提下可以終止試驗的某一階段（點）。選擇仁慈終點的目的是能夠在對大程度上減輕動物所承受痛苦?？萍疾吭?006年11月7日發(fā)布了科學技術部令第11號《國家科技計劃實施中科研不端行為處理辦法（試行）》，明確見―違反實驗動物保護規(guī)范‖列為六種不端行為之一，需要進行堅決治理。實驗動物營養(yǎng)與飼料水對水的攝取:飼料中（不推薦用青飼料作為水源，可能會伴隨潛在寄生蟲感染）;飲水蛋白質粗蛋白：蛋白質：由氨基酸組成非蛋白氮：未結合成蛋白質分子的個別氨基酸、植物體中由無機氮合成蛋白質的中間產(chǎn)物和植物蛋白質經(jīng)酶類和細菌分解后的產(chǎn)物等必須氨基酸與非必須氨基酸●必須氨基酸：動物體內(nèi)不能合成，必須由飼料來提供。其中，賴氨酸、蛋氨酸和色氨酸在植物性飼料中常不足，缺乏還會影響其它氨基酸利用，又被稱為限制性氨基酸?！穹潜仨毎被幔簞游矬w內(nèi)能夠合成。氨基酸平衡與氨基酸失衡●氨基酸失衡：一種或幾種必需氨基酸過多或過少，相互間比例與動物的需要不一致，從而造成飼料利用率降低，生長遲緩、繁殖力下降的現(xiàn)象。蛋白質含量不足或氨基酸比例不當●生長發(fā)育緩慢，體重減輕；抵抗力下降，貧血，低蛋白血癥，水腫等；影響生殖。蛋白質含量過高:引起代謝紊亂，嚴重者甚至出現(xiàn)酸中毒脂肪來源:動物性脂肪、植物性脂肪亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸在動物體內(nèi)不能合成，稱為必需脂肪酸。必需脂肪酸對維持細胞及亞細胞結構的功能和完整性很重要，還參與類脂代謝，在調(diào)節(jié)膽固醇代謝，特別是輸送、分解和排泄方面有重要意義。亞油酸是合成前列腺素的原料。碳水化合物及其營養(yǎng)功能分為粗纖維：纖維素、半纖維素、木質素等所組成草食性動物，粗纖維是必不可少的，如不足可造成消化機能紊亂，消化道疾病等。反芻動物和馬屬動物，粗纖維在瘤胃及盲腸中經(jīng)發(fā)酵形成揮發(fā)性脂肪酸（乙酸、丙酸、丁酸），參與碳水化合物代謝，通過三羧酸循環(huán)，形成高能磷酸化合物，產(chǎn)生熱能?？扇苄蕴妓衔锏V物質常量元素（占動物體重的0.01％以上）包括鈣、磷、鈉、氯、硫、鎂、鉀等微量元素（不足體重的0.01％）包括鐵、銅、鋅、錳、碘等元素。鈣和磷：含量最多，占機體礦物質總量的70％以上，既要保證適量的鈣磷數(shù)量又要保持兩者適宜的比例維生素大多數(shù)在動物體內(nèi)不能合成，必須由飼料或腸道寄生的細菌合成后提供。正常情況下,水溶性維生素和維生素K不會缺乏，但在高溫滅菌時應當給予補充。豚鼠和靈長類動物體內(nèi)不能合成維生素C，必須在飼料中供給。脂溶性維生素：DAKE,吸收后可在體內(nèi)貯存，短期供給不足不會對生長發(fā)育和健康產(chǎn)生不良影響。維生素K:一般不會缺乏，因廣泛存在于飼料中，且大腸內(nèi)的細菌也能合成，但無菌動物可發(fā)生維生素K缺乏。水溶性維生素:BC.由于很少或幾乎不在體內(nèi)貯存，水溶性維生素短時間缺乏或不足均會引起體內(nèi)某些酶活性的改變，阻抑相應的代謝過程，從而影響動物生長發(fā)育和抗病力具有食糞癖的動物如兔，可從糞中得到維生素B族的補充各種營養(yǎng)素間的關系能量物質和蛋白質的比例（也稱為蛋能比）應適當，不當會影響營養(yǎng)素的利用率，甚至造成營養(yǎng)障礙粗纖維與其他營養(yǎng)素的利用一般呈負相關，但對于草食動物是必需的一種營養(yǎng)素蛋白質的供給量對某些維生素如A、D、B2等的吸收也有明顯的影響脂類含量與維生素尤其是脂溶性維生素的吸收有明顯關系高脂飼料會影響鈣的吸收，高蛋白質飼料則能提高機體對鈣磷的吸收實驗動物的營養(yǎng)需要維持需要生長需要繁殖需要影響動物營養(yǎng)需要的主要因素遺傳和環(huán)境因素：不同品種動物營養(yǎng)需要明顯不同；各品系間營養(yǎng)需要有明顯差異；在隔離或屏障環(huán)境中飼養(yǎng)動物其營養(yǎng)需要和同品系在普通環(huán)境中飼養(yǎng)動物的營養(yǎng)需要差別明顯小鼠營養(yǎng)需要特點：飼料中含18-20%左右的蛋白質即可；喜糖；泌乳期喜脂；對維生素A的過量很敏感,特別是妊娠小鼠,過量會造成胚胎畸形；對維生素A和D的需要量較高，應注意補充。大鼠營養(yǎng)需要特點：18-20%的蛋白質；生長期的大鼠易發(fā)生脂肪酸缺乏，飼料中必需脂肪酸的需要量應占熱能物質的1.3％；對鎂的需要量較高，應注意補充。生長期以后蛋白質需要量銳減，可適當減少蛋白質量；豚鼠營養(yǎng)需要特點：對幾種必需氨基酸需要量高，尤其是精氨酸；粗纖維需要量高，不足可發(fā)生排糞較粘和脫毛現(xiàn)象；不能自身合成維生素C，對其缺乏特別敏感，地鼠營養(yǎng)需要特點:像反芻動物一樣有效利用非蛋白氮;蛋白質需要量高，如不足成年地鼠將會出現(xiàn)性機能減退，幼鼠則生長發(fā)育遲緩,一般要求達到21-24%;膽固醇代謝較特殊家兔營養(yǎng)需要特點：草食性，應注意提高飼料粗纖維含量；蛋白質：14-17%；可耐受高鈣；初生時鐵儲備高，故不易貧血；通過食糞行為可利用腸道微生物合成的B族維生素和維生素K狗營養(yǎng)需要特點：能耐受高脂肪，要求日糧中有一定水平的不飽和脂肪酸；維生素A需要量大。盡管腸道內(nèi)微生物可合成B族維生素，但仍需要補充維生素B12；肉食性，應考慮適口性，動物性蛋白應占全部蛋白飼料的三分之一，蛋白質含量要求22-25%猴營養(yǎng)需要特點：自身不能合成維生素C貓營養(yǎng)需要特點：飼料中需加一定量牛黃酸；飼料中亞油酸含量應大于1%飼料的消毒：干熱、濕熱、輻照、藥物熏蒸動物實驗及動物實驗技術實驗動物選擇原則：相似性、特殊性、標準化、規(guī)格化、經(jīng)濟性大鼠肝臟再生能力強，切除60-70%肝葉仍有再生能力，適合肝外科實驗研究。但大鼠無膽囊，不能用作膽囊功能研究。人類疾病動物模型：是研究中所建立的具有人類疾病模擬性表現(xiàn)的動物實驗對象和相關材料動物模型復制原則：相似性、可重復性、可靠性、適用性喝可控性、易行性喝經(jīng)濟性動物模型分類按產(chǎn)生原因分類：自發(fā)性動物模型、誘發(fā)性或實驗性動物模型影響動物實驗結果的主要因素：R=(A+B+C)×D±EA:動物種的共同反應B:動物品種、品系特有的反應C:動物的個體反應D:環(huán)境因素（包括實驗處理）E:實驗誤差A,B,C是由實驗動物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實驗動物，在嚴格控制環(huán)境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個理想的實驗結果R影響動物實驗的主要因素：動物因素、環(huán)境因素、營養(yǎng)因素、實驗技術因素基本動物實驗技術動物的編號：染色法：一般適用于短期實驗，大、小鼠常用耳緣剪孔法：適用于長期實驗，大、小鼠常用掛牌法：適用于貓、犬等如何做好動物實驗？1、明確目的及必要性2、確認必要性―3R‖原則；動物實驗倫理和動物福利3、作好實驗設計：對照原則隨機化原則重復原則均衡性原則4、選擇適宜的實驗動物：實驗動物遺傳特性的選擇實驗動物微生物等級的選擇實驗動物數(shù)量、規(guī)格和性別的選擇5、做好實驗操作和實驗條件保障工作6、搞好動物實驗結果的統(tǒng)計、分析和資料的整理、歸檔工作研究論文中有關實驗動物的描述：(1)品種、品系描述清楚；(2)來源明確；(3)體重明確；(4)等級明確；(5)飼養(yǎng)環(huán)境和實驗環(huán)境明確；(6)性別明確；(7)有對飼養(yǎng)方式的描述(如飼料類型、營養(yǎng)水平、照明方式、溫度、濕度要求)；(8)所用動物數(shù)量準確；(9)對動物的健康狀況的描述詳細；(10)對動物實驗的處理方式有單獨清楚的交代；(11)動物福利倫理審查情況。轉基因動物定義:用實驗的方法將外源基因導入早期胚胎細胞，使之整合于細胞基因組中而建立的動物品系。整合的外源基因稱為轉基因（transgene)轉基因小鼠的制備原理與方法(一)轉基因小鼠制備的基本程序：1.選擇小鼠品系，可以用遠交系也可以用近交系。一般采用兩種近交系的雜交一代。2.準備不育雄鼠和假孕母鼠。用輸精管結扎的方法制備不育雄鼠，不育雄鼠與雌鼠交配可獲得假孕母鼠。3.收獲受精卵-超排卵4.將導入外源基因的受精卵植入假孕母鼠的輸卵管或子宮內(nèi)發(fā)育。5.首建轉基因鼠(founder)中轉基因的檢測。6.通過繁育建立轉基因小鼠品系。（1）.互交得到轉基因純合子小鼠（2）.回交至少10代建立純系轉基因小鼠（二）外源基因導入方法：1.顯微注射法。2.逆轉錄病毒載體法。3.電脈沖法。轉基因動物的應用：1.基因功能的研究2.建立轉基因動物生物反應器3.異種器官移植基因打靶（Genetargeting）(一)基因打靶的原理：DNA同源重組的原理打靶載體(targetingvector)：根據(jù)DNA同源重組的原理，導入的外源基因必須和靶基因有一定的同源序列。因此，外源基因導入前必須經(jīng)過精巧的構建，經(jīng)構建的外源基因稱為打靶載體(targetingvector)。(二)基因打靶的方法：進行基因打靶要經(jīng)歷以下步驟：（1）構建打靶載體。――在打靶載體中需要一個與靶基因同源的DNA片段，這一片段稱為同源重組指導序外源基因插入這一同源序列之中。（2）打靶載體導入受體細胞(常用胚胎干細胞(embryonicstemcell，即ES細胞)。外源基因導入ES細胞與否，還需經(jīng)過G418和GANC培養(yǎng)基篩選。由于同源重組的頻正負選擇法：－（3）打靶ES細胞導入囊胚。（4）囊胚植入假孕母鼠子宮發(fā)育?；虼虬行∈蟮姆庇没虼虬械姆椒óa(chǎn)生的第一代子鼠為嵌合體小鼠，并非小鼠的全部細胞中都整合有導入的外源基因，為獲得純合子的轉基因小鼠，還需要用打靶后出生的雄性小鼠與提供囊胚的正常雌鼠交配，即回交。回交后出生的子代鼠中有雜合子的小鼠(-/+)。再用雜合子小鼠互交，從出生的子代鼠中可鑒定、篩選出純合子的基因打靶小鼠。(三)組織特異性基因打靶：Cre/loxP系統(tǒng)(四)外源基因的時間可控性表達：用編碼Cre重組酶與人雌激素受體(ER)融合蛋白的基因制備了Cre–ER轉基因小鼠，給這種轉基因小鼠注射人雌激素，可誘導Cre–ER的大量表達。再用插入兩個反向loxP序列之間的基因制備另一種基因打靶小鼠，并使該基因DNA序列與其上游的啟動子方向相反，則該基因必須依賴Cre重組酶調(diào)轉方向后方能表達。實驗動物環(huán)境設施控制實驗動物環(huán)境設施控制：一、實驗動物設施概念：是從事飼養(yǎng)、育種、保種、生產(chǎn)、動物實驗等的建筑物、設備以及運營管理在內(nèi)的總和。它是由實驗動物繁育、生產(chǎn)設施和動物實驗設施兩部分組成。二、實驗動物環(huán)境設施分類：分為三級，控制程度從低到高，依次為普通環(huán)境：教學等用途的普通實驗動物屏障環(huán)境：清潔實驗動物及SPF隔離環(huán)境：悉生、無菌實驗動物及SPF單走廊房間的壓強：SPF室>內(nèi)室>緩沖間>外室層流架：正壓型層流架主要用于清潔動物或SPF動物的飼養(yǎng)；負壓型層流架，主要用于感染動物的飼養(yǎng)。三實驗動物飼養(yǎng)常用的輔助設施：籠具、籠架、飲水裝置、運輸籠和墊料等水：屏障和隔離環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)的實驗動物飲用水須經(jīng)滅菌處理實驗動物的飲水一般無需作蒸溜、離子交換或反滲透等處理，有助于動物對微量元素的利用。墊料：吸濕性好、塵埃少、無異味、無毒性、無油脂的材料。環(huán)境因素對