母驢人工授精技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30

CCSB43

DB1307

張家口市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1307/T394—2022

母驢人工授精技術(shù)規(guī)程

2022-10-27發(fā)布2022-11-27實(shí)施

張家口市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1307/T394—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由張家口市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：陽(yáng)原縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、張家口桑陽(yáng)牧業(yè)有限公司、張家口市農(nóng)產(chǎn)品

質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心。

本文件主要起草人：曾申明、龐潔、沈?qū)W梅、王海麗、韓海軍、武開(kāi)、白海賓、閆冬梅、肖江龍、

賈建平、祁建平、李靖、李楠、王佳敏。

I

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母驢人工授精技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了母驢人工授精的發(fā)情鑒定、精液準(zhǔn)備、輸精、妊娠鑒定、數(shù)據(jù)記錄和廢棄物無(wú)害化處

理操作技術(shù)要求。

本文件適用于張家口地區(qū)內(nèi)母驢的人工授精操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T39171—2020廢塑料回收技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)與定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

hCG

指人絨毛膜促性腺激素。

3.2

GnRH

指促性腺激素釋放激素。

3.3

CASA

指計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)。

4發(fā)情鑒定

4.1試情法

挑選體質(zhì)健壯、性欲旺盛的種公驢進(jìn)行試情。牽拉種公驢在母驢圈舍外部通道走動(dòng)，或者拴系在母

驢圈內(nèi)的柱樁上。處于發(fā)情期的母驢表現(xiàn)出愿意接近公驢，并有弓腰舉尾、陰唇閃合、頻繁排尿、后肢

張開(kāi)、兩耳向頸部收攏、口部頻繁開(kāi)合等行為；未發(fā)情母驢則躲避公驢，甚至在公驢靠近時(shí)，有蹴踢和

啃咬等抗拒行為。

4.2B超直腸發(fā)情鑒定

1

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4.2.1所需設(shè)備及試劑

B型超聲波診斷儀、一次性長(zhǎng)臂手套、潤(rùn)滑劑、促排卵藥物、注射器。

4.2.2母驢的發(fā)情鑒定

將待檢母驢用保定欄固定后，檢查者在操作前修剪并磨平指甲，清洗消毒手臂，戴上一次性長(zhǎng)臂手

套并抹上潤(rùn)滑劑，在母驢后方將手握成錐形緩慢插入肛門。若直腸內(nèi)有糞便可用手清除，待直腸內(nèi)部干

凈且直腸壁舒緩時(shí)，將手臂深入觸摸卵巢。然后，將B型超聲波診斷儀探頭握在手心，平行并緊貼直腸

壁下緣，依次檢查母驢子宮體、子宮角和卵巢卵泡發(fā)育狀態(tài)。卵泡發(fā)育形態(tài)參照附錄B.1。母驢發(fā)情階

段一般分為以下四個(gè)階段：

a)間情期：卵泡上有多個(gè)小卵泡、直徑為10mm～20mm；子宮角和子宮體回聲均勻，沒(méi)有液體存

留；此階段母驢陰道干澀，不接受爬跨，抗拒直腸檢查；

b)發(fā)情前期：卵巢上出現(xiàn)優(yōu)勢(shì)卵泡，體積增加較快，卵泡內(nèi)充滿液體，卵泡直徑一般為20mm～30

mm；子宮角出現(xiàn)水腫，陰道有少量稀薄粘液流出；部分母驢出現(xiàn)發(fā)情行為，表現(xiàn)為接近公驢，少部分出

現(xiàn)口部反復(fù)開(kāi)合、兩耳向頸部收攏；

c)發(fā)情期：優(yōu)勢(shì)卵泡快速生長(zhǎng)，直徑達(dá)到30mm以上，此時(shí)母驢出現(xiàn)明顯的發(fā)情行為，主動(dòng)接近公

驢、接受爬跨、頻繁排尿，口部反復(fù)開(kāi)合、兩耳向頸部收攏；子宮角水腫明顯；

d)發(fā)情后期：卵泡破裂排卵，檢查時(shí)可見(jiàn)明顯黃體，母驢性情逐漸安靜；子宮角水腫消失。

4.2.3發(fā)情母驢的處理

診斷結(jié)束后，準(zhǔn)確記錄母驢的卵泡、子宮和黃體狀態(tài)，在母驢后背標(biāo)記卵泡發(fā)育情況，挑選出優(yōu)勢(shì)

卵泡直徑在30mm以上的母驢，注射l.0mL的GnRH類似物或2000IUhCG，優(yōu)勢(shì)卵泡直徑在35mm

的母驢在當(dāng)天下午輸精，而優(yōu)勢(shì)卵泡直徑在30mm～35mm的母驢在第二天下午進(jìn)行輸精。

5精液準(zhǔn)備

5.1所需設(shè)備及試劑

一次性長(zhǎng)臂手套、顯微鏡、CASA系統(tǒng)、量筒、溫度計(jì)、恒溫水浴鍋、假陰道、集精杯、稀釋液、

潤(rùn)滑劑、高壓蒸汽滅菌鍋、精液分裝瓶、燒杯、毛巾、溫水、消毒液、酒精、紗布、20mL注射器、載

玻片、蓋玻片。

5.2采精前準(zhǔn)備

5.2.1稀釋液的準(zhǔn)備

在發(fā)情鑒定當(dāng)天，按照發(fā)情母驢的數(shù)量準(zhǔn)備稀釋液，力求新鮮，稀釋液配好后要進(jìn)行滅菌，然后在

4℃保存。在采精前半小時(shí)，將稀釋液置于37℃水浴鍋中預(yù)熱待用。

5.2.2采精器具的準(zhǔn)備

采精所用的器具及相關(guān)用品，提前清洗消毒，安裝假陰道時(shí)，將內(nèi)胎兩頭翻轉(zhuǎn)套在外殼的兩端，并

用橡膠圈加以固定，然后用70%酒精對(duì)內(nèi)部進(jìn)行消毒，放入35℃恒溫箱中備用。

5.2.3發(fā)情母驢的準(zhǔn)備

挑選發(fā)情母驢，要求性情溫順，將母驢牽到采精大廳拴系在欄柱上，用清水沖洗母驢臀部和外陰部，

可收集發(fā)情母驢尿液以刺激公驢性欲。

2

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5.3精液采集

5.3.1假陰道的準(zhǔn)備

預(yù)先向安裝好的假陰道夾層中灌入40℃～42℃熱水，灌注量以假陰道夾層體積的2/3為宜，到采

精時(shí)假陰道內(nèi)溫度為38℃左右。假陰道內(nèi)腔壓力主要靠充氣來(lái)調(diào)節(jié)，可根據(jù)采精公驢陰莖大小進(jìn)行調(diào)

整，假陰道在灌水充氣后，內(nèi)胎呈“Y”型，入口為較淺的漏斗狀為宜。采精前將潤(rùn)滑劑均勻涂抹在假

陰道入口至內(nèi)胎1/3深處，或者在采精前用精液稀釋液沖洗。假陰道結(jié)構(gòu)，參見(jiàn)附錄B.2。

5.3.2公驢外生殖器的清洗

待公驢陰莖勃起后，用0.1%高錳酸鉀溶液擦洗陰莖及包皮，再用無(wú)菌溫水沖洗，最后用滅菌紗布

或紙巾擦干。

5.3.3精液采集

采精時(shí)，采精員右手持假陰道把柄處，將假陰道靠在右臂肘處，當(dāng)公驢爬跨時(shí)，立即站立于母驢右

后側(cè)，迅速將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)。陰莖插入假陰道后經(jīng)幾次抽動(dòng)即可射精，射精后順勢(shì)使陰莖從假陰道

中退出，將假陰道的集精杯端緩慢下傾，并打開(kāi)活塞放氣，迅速將精液送入精液處理室進(jìn)行品質(zhì)鑒定和

稀釋。

5.4精液品質(zhì)鑒定

精液品質(zhì)鑒定要求在37℃條件下進(jìn)行，檢查操作要迅速、輕緩，避免人為損傷精子，取樣要均勻，

評(píng)定結(jié)果要準(zhǔn)確而客觀。

5.4.1精液體積

將集精杯中的精液沿裝有三層專用濾紙漏斗一側(cè)，緩緩倒入帶刻度的無(wú)菌量筒中，去除精液中的灰

塵和雜質(zhì)等。然后，讀取量筒的數(shù)值，記錄精液體積。射精量一般為30mL～150mL。

5.4.2顏色

驢精液在正常情況下為乳白色或灰白色，精子密度越高顏色越深，反之越淺。精液若出現(xiàn)紅色、綠

色、黃褐色等異常顏色，不能用于輸精。

5.4.3氣味

新鮮公驢精液略帶腥味，出現(xiàn)濃烈刺鼻性氣味的精液不能用于輸精。

5.4.4密度

用CASA系統(tǒng)直接測(cè)定或用血球計(jì)數(shù)板結(jié)合稀釋倍數(shù)計(jì)算精液密度。

5.4.5活力

精液分析需在安裝37℃恒溫臺(tái)的顯微鏡上進(jìn)行，用CASA系統(tǒng)直接測(cè)定；或統(tǒng)計(jì)視野下直線前進(jìn)運(yùn)

動(dòng)的精子占總精子數(shù)的比例，至少需要統(tǒng)計(jì)三個(gè)不同視野的數(shù)值，然后取平均數(shù)。精子活力在70%以上

的精液才可用于輸精。

5.4.6畸形率

3

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公驢精液一般每一個(gè)月檢查一次畸形率。用CASA系統(tǒng)直接測(cè)定；或者精液與姬姆薩溶液或藍(lán)墨水

混合后在載玻片上涂片，等風(fēng)干后，在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)形態(tài)異常精子占總精子數(shù)的比例，至少需要統(tǒng)計(jì)三

個(gè)不同視野的數(shù)值，然后取平均數(shù)。精子畸形率不超過(guò)15%的精液才可用于輸精。

5.5精液稀釋

精液采集后，立即將精液等量倒入50mL離心管中，配比平衡后，放入普通離心機(jī)，在室溫條件下，

1000×g離心10min。離心結(jié)束后，去除上清液至剩余體積約5mL左右。根據(jù)輸精母驢數(shù)和總精子數(shù)，

確定稀釋倍數(shù)（每個(gè)輸精劑量為10mL，其中至少含有10億個(gè)有效精子）。然后，緩慢加入預(yù)熱的稀釋

液，在稀釋過(guò)程中輕輕搖動(dòng)。在稀釋后，緩慢將離心管顛倒3～5次，使精子和稀釋液充分混勻，混勻

后再檢測(cè)一次精子活力，確保精子活力沒(méi)有下降。最后，分裝到輸精瓶或無(wú)膠塞的一次性塑料注射器中，

即可進(jìn)行輸精。注意，在整個(gè)處理和運(yùn)輸過(guò)程中，防止劇烈震蕩而導(dǎo)致的精子畸形率上升。

6輸精

輸精應(yīng)在專門的配種室進(jìn)行。發(fā)情母驢在保定后，將尾部纏繞吊起，掏除直腸里的宿糞。先用含中

性皂液的清水洗滌母驢外陰部糞污，再用清水沖洗，擦干后消毒，準(zhǔn)備輸精。輸精管可以用牛輸精槍外

套，或豬子宮深部輸精軟管，要求無(wú)菌。輸精時(shí)，輸精員站在母驢后側(cè)，右手并攏呈錐形，將輸精管尖

端夾持于食指與中指間，手心略向左下方伸入陰道，并緩慢向前觸摸子宮頸口，用拇指輕輕捅開(kāi)子宮頸，

順勢(shì)將輸精管插入子宮頸內(nèi)約10cm處，擠壓精液分裝軟瓶或推動(dòng)注射器，將精液緩慢注入子宮內(nèi)，然

后拉出輸精管，并輕輕按摩子宮頸，防止精液回流。母驢在輸精后48h檢查排卵狀況，如果沒(méi)有排卵

還需要再輸精一次，直至排卵。

7妊娠鑒定

妊娠鑒定在輸精后的第21天進(jìn)行。妊娠鑒定時(shí)將待檢母驢保定，利用直腸B型超聲波診斷儀檢查

子宮體、子宮角和卵巢，操作方法同母驢發(fā)情鑒定。妊娠母驢卵巢上有黃體，胚胎顯示為黑色圓球，并

在子宮腔內(nèi)游離；已附植的胚胎顯示為黑色囊泡，胎兒為白色懸掛于子宮內(nèi)壁。胚胎發(fā)育參見(jiàn)附錄B.3。

8數(shù)據(jù)記錄

詳細(xì)記錄母驢的卵泡發(fā)育情況、公驢精液品質(zhì)及配種妊娠等情況，記錄格式參見(jiàn)附錄A。

9廢棄物無(wú)害化處理

母驢人工授精過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物處理按GB/T39171—2020執(zhí)行。

4

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附錄A

（資料性）

母驢人工授精操作記錄表

A.1母驢發(fā)情檢查與配種記錄

記錄表的格式見(jiàn)表A.1。

表A.1母驢發(fā)情檢查與配種記錄表

下次

卵巢子宮輸精施用藥物

日期序號(hào)耳號(hào)檢查其他

左側(cè)右側(cè)情況公驢號(hào)劑量時(shí)間名稱劑量時(shí)間

1

2

A.2公驢精液采集與處理記錄

記錄表的格式見(jiàn)表A.2。

表A.2公驢精液處理與輸精記錄表

采精日期序號(hào)耳號(hào)射精量精子密度活力畸形率稀釋倍數(shù)配種數(shù)配種母驢號(hào)妊娠母驢號(hào)

1

2

A.3母驢妊娠檢查記錄

記錄表的格式見(jiàn)表A.3。

表A.3母驢妊娠檢查記錄表

卵巢

日期序號(hào)耳號(hào)妊娠狀態(tài)其他

左側(cè)右側(cè)

1

2

5

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附錄B

（資料性）

母驢卵泡發(fā)育、妊娠診斷B超影像及假陰道結(jié)構(gòu)

B.1卵泡發(fā)育的B超影像

圖B.l卵泡發(fā)育的B超影像

SF：小卵泡；CL：黃體

B.2假陰道結(jié)構(gòu)

圖B.2假陰道結(jié)構(gòu)

B.3胚胎發(fā)育的B超影像

圖B.3胚胎發(fā)育B超影像

箭頭所指為胚泡（左）和胚體（右）

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由張家口市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：陽(yáng)原縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、張家口桑陽(yáng)牧業(yè)有限公司、張家口市農(nóng)產(chǎn)品

質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心。

本文件主要起草人：曾申明、龐潔、沈?qū)W梅、王海麗、韓海軍、武開(kāi)、白海賓、閆冬梅、肖江龍、

賈建平、祁建平、李靖、李楠、王佳敏。

I

DB1307/T394—2022

母驢人工授精技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了母驢人工授精的發(fā)情鑒定、精液準(zhǔn)備、輸精、妊娠鑒定、數(shù)據(jù)記錄和廢棄物無(wú)害化處

理操作技術(shù)要求。

本文件適用于張家口地區(qū)內(nèi)母驢的人工授精操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T39171—2020廢塑料回收技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)與定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

hCG

指人絨毛膜促性腺激素。

3.2

GnRH

指促性腺激素釋放激素。

3.3

CASA

指計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)。

4發(fā)情鑒定

4.1試情法

挑選體質(zhì)健壯、性欲旺盛的種公驢進(jìn)行試情。牽拉種公驢在母驢圈舍外部通道走動(dòng)，或者拴系在母

驢圈內(nèi)的柱樁上。處于發(fā)情期的母驢表現(xiàn)出愿意接近公驢，并有弓腰舉尾、陰唇閃合、頻繁排尿、后肢

張開(kāi)、兩耳向頸部收攏、口部頻繁開(kāi)合等行為；未發(fā)情母驢則躲避公驢，甚至在公驢靠近時(shí)，有蹴踢和

啃咬等抗拒行為。

4.2B超直腸發(fā)情鑒定

1

DB1307/T394—2022

4.2.1所需設(shè)備及試劑

B型超聲波診斷儀、一次性長(zhǎng)臂手套、潤(rùn)滑劑、促排卵藥物、注射器。

4.2.2母驢的發(fā)情鑒定

將待檢母驢用保定欄固定后，檢查者在操作前修剪并磨平指甲，清洗消毒手臂，戴上一次性長(zhǎng)臂手

套并抹上潤(rùn)滑劑，在母驢后方將手握成錐形緩慢插入肛門。若直腸內(nèi)有糞便可用手清除，待直腸內(nèi)部干

凈且直腸壁舒緩時(shí)，將手臂深入觸摸卵巢。然后，將B型超聲波診斷儀探頭握在手心，平行并緊貼直腸

壁下緣，依次檢查母驢子宮體、子宮角和卵巢卵泡發(fā)育狀態(tài)。卵泡發(fā)育形態(tài)參照附錄B.1。母驢發(fā)情階

段一般分為以下四個(gè)階段：

a)間情期：卵泡上有多個(gè)小卵泡、直徑為10mm～20mm；子宮角和子宮體回聲均勻，沒(méi)有液體存

留；此階段母驢陰道干澀，不接受爬跨，抗拒直腸檢查；

b)發(fā)情前期：卵巢上出現(xiàn)優(yōu)勢(shì)卵泡，體積增加