化妝品中非那西丁的檢驗(yàn)方法

附件3化妝品中非那西丁的檢驗(yàn)方法DeterminationofPhenacetininCosmetics1范圍本方法規(guī)定了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中非那西丁的含量。本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、粉類等化妝品中非那西丁的定性與定量。2方法提要樣品以乙腈為溶劑提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性、定量離子對峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。本方法取樣量為0.5g時，檢出濃度為0.012mg/kg，最低定量濃度為0.04mg/kg。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇，色譜純。3.2乙腈，色譜純。3.3氯化鈉。3.450%乙腈：取乙腈、水等體積混合，搖勻。3.5飽和氯化鈉溶液：稱取40g氯化鈉（3.3），置于250mL磨口錐形瓶中，加入100mL水，超聲15min，即得。3.6標(biāo)準(zhǔn)品：非那西?。ㄓ⑽拿Q：Phenacetin，分子式：C10H13NO2，CAS：62-44-2），純度≥98%。3.7標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：精密稱取非那西丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確到0.00001g）于10mL容量瓶中，加入甲醇（3.1）溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，轉(zhuǎn)入棕色儲液瓶中，4℃避光保存，有效期3個月。3.8標(biāo)準(zhǔn)中間液：精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.7），用甲醇（3.1）稀釋成質(zhì)量濃度為10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗器（≥250W）。4.4渦旋混合儀。4.5高速離心機(jī)。5分析步驟5.1空白基質(zhì)提取液稱取空白試樣0.5g（精確到0.0001g），置于15mL具塞比色管中，自“加入飽和氯化鈉溶液2mL”起與樣品同法處理（5.4），作為空白基質(zhì)提取液。該基質(zhì)提取液進(jìn)入質(zhì)譜后，在非那西丁的特征離子峰保留時間處未出峰且未檢出其特征離子對，則確認(rèn)為空白基質(zhì)提取液，可用于下一步實(shí)驗(yàn)。空白樣品的性狀應(yīng)與待測化妝品盡量基本一致。5.2基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中間液精密量取非那西丁標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.8）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（5.1）稀釋至刻度，搖勻，制成非那西丁濃度為100μg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中間液?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中間液現(xiàn)用現(xiàn)配。5.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備精密量取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2）0.1、0.2、0.5、1、2、5mL，用空白基質(zhì)提取液（5.1）配制濃度為1.0、2.0、5.0、10、20、50μg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。5.4樣品處理膏霜乳類、液體類、凝膠類：稱取樣品0.5g（精確到0.0001g），置于15mL離心管中，加入飽和氯化鈉溶液（3.5）2mL，渦旋30s，分散均勻，準(zhǔn)確加入乙腈（3.2）10mL，渦旋30s，超聲提取10min，靜置至室溫，以8000r/min轉(zhuǎn)速離心5min。準(zhǔn)確吸取上清液5mL，加50%乙腈（3.4）定容至10mL，混勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。粉類：稱取樣品0.5g（精確到0.0001g），置于15mL離心管中，準(zhǔn)確加入乙腈（3.2）10mL，渦旋30s，超聲提取10min，靜置至室溫，以8000r/min轉(zhuǎn)速離心5min。準(zhǔn)確吸取上清液5mL，加50%乙腈（3.4）定容至10mL，混勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。5.5參考液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用條件色譜條件色譜柱：C18色譜柱（2.1mm×100mm，2.7μm），或等效色譜柱；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：2μL；流動相A：水，流動相B：乙腈；流速：0.3mL/min。表1梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.090102.090105.025755.110907.010907.190109.09010質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。表2非那西丁的監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE（V）非那西丁180.1110.2*26138.114*為推薦的定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。5.6定性判定取供試品溶液（5.4）與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，非那西丁的特征離子峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的保留時間偏差小于±2.5%，且選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的監(jiān)測離子對的相對豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在非那西丁。表3定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%5.7定量測定在“5.5”項液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用條件下，取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（5.3）依次測定，以非那西丁的系列濃度為橫坐標(biāo)，其定量離子對色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取“5.4”項下處理得到的待測溶液進(jìn)樣，將非那西丁定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算非那西丁的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，按“6”項下公式，計算樣品中非那西丁的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計算式中：ω—樣品中非那西丁的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg；ρ—供試品溶液中非那西丁的質(zhì)量濃度，μg/L；V—樣品定容體積，mL；m—樣品取樣量，g；D—