輸血科試劑性能驗證操作規(guī)程

輸血科試劑性能驗證操作規(guī)程1、目的本文件規(guī)定了輸血科所用重點試劑性能驗證的相關(guān)操作程序，以確保輸血科試驗的質(zhì)量，使檢驗結(jié)果更準確。2、適用范圍本文件適用于輸血科ABO血型、RhD血型、鹽水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝膠法血型鑒定及交叉配血，新生兒溶血篩查試驗，抗人球蛋白試驗等試驗項目檢驗過程的質(zhì)量控制管理。3、職責輸血科技術(shù)人員負責本實驗室所用試劑質(zhì)量的管理。4、內(nèi)容:4.1ABO試劑紅細胞性能驗證4.1.1外觀檢查:參照質(zhì)量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。試管法檢測的試劑紅細胞濃度為3％～5％（其他濃度應(yīng)標注對應(yīng)的適用方法）。試劑紅細胞要求外觀無溶血，使用效期大于3個月。4.1.2抗原特異性和抗原強度檢測:(1)材料和試劑:待檢紅細胞;抗A、抗B試劑血清。(2)方法:將試管排成5排。第1、2排每列9支，每管加生理鹽水0.2ml,在前兩列第1管分別各自加0.2m1抗A、抗B血清，倍比稀釋，做好標識；后3排每排3個試管，標記抗A、抗B，抗D加入對應(yīng)抗體1滴，再分別加入A、B、O試劑紅細胞懸液1滴；置于室溫孵育15分鐘，3400轉(zhuǎn)/分離心15秒，肉眼觀察。(3)結(jié)果:A型紅細胞至少應(yīng)與1:128倍稀釋以上的抗A出現(xiàn)明顯肉眼可見凝集，與抗B、抗D不反應(yīng)；B型紅細胞應(yīng)至少應(yīng)與1:64倍稀釋的抗B出現(xiàn)明顯肉眼可見凝集，與抗A、抗D不反應(yīng)。4.1.3抗原親和力檢測:(1)材料和試劑:待檢紅細胞;抗A、抗B試劑血清、玻片。(2)方法:親和力：將抗-A、抗-B血型試劑分別與紅細胞懸液于玻片上混勻，搖晃觀察凝集。（3）結(jié)果：抗-A血型試劑與A1、A2、A2B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應(yīng)分別不長于15s、30s、45s；抗-B血型試劑與B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應(yīng)不長于15s；且在3min內(nèi)凝集塊應(yīng)達到1mm2以上。4.2抗A、抗B試劑血清性能驗證:4.2.1外觀檢測：要求無渾濁、無污染，顏色符合常規(guī)標準。4.2.2抗A、抗B特異性及抗體效價檢測:(1)材料和試劑:待檢血清，A1，A2、B型試劑紅細胞(5%)(2)方法:按每列9支試管排成3列，每管加生理鹽水0.2m1,將血清倍比稀釋，加入相應(yīng)的試劑紅細胞懸液0.2ml,同時做紅細胞懸液對照。領(lǐng)取置于室溫孵育15分鐘，3400轉(zhuǎn)/分離心15秒，肉眼觀察。(3)結(jié)果:效價：抗-A對A1細胞效價應(yīng)不小于1:128，對A2細胞應(yīng)不小于1:32，與B細胞不反應(yīng)，抗-B效價應(yīng)不小于1:128，與A細胞不反應(yīng)。4.2.3抗A、抗B抗體親和力檢測:(1)材料和試劑:試劑紅細胞;抗A、抗B試劑血清、玻片。(2)方法:親和力：將抗-A、抗-B血型試劑分別與紅細胞懸液于玻片上混勻，搖晃觀察凝集。（3）結(jié)果：抗-A血型試劑與A1、A2、A2B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應(yīng)分別不長于15s、30s、45s；抗B血型試劑與B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應(yīng)不長于15s；且在3min內(nèi)凝集塊應(yīng)達到1mm2以上。4.2.4抗A、抗B試劑血清冷凝集素和不規(guī)則抗體測定。(1)材料和試劑:待檢血清;抗篩細胞3例;B型試劑紅細胞3例(測抗A用);A型試劑紅細胞3例(測抗B用)，配制3%-5%懸液;抗人球蛋白。(2)方法:取試管排成3列，每列3支。在管中加待檢血清0.1mL,再分別加入5%抗篩細胞（3支細胞的混合）0.1mL，第1列放置于37°C,孵育1小時，做抗人球蛋白實驗。第2列放置于4°C,第3列放置于20°C,均孵育1小時，肉眼觀察結(jié)果。以B型紅細胞懸液取代抗篩細胞測定抗A,以A型紅細胞懸液取代抗篩細胞測定抗B。(3)結(jié)果:全部試管均不得出現(xiàn)凝集或溶血反應(yīng)，以及緡錢狀、冷凝集、細菌性凝集和理化凝集等非特異性凝集。4.3.1質(zhì)控頻率:每批1次，每次隨機抽檢1盒檢測。4.3抗D試劑血清性能驗證4.3.1物理檢查:參照質(zhì)量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.3.2抗D試劑血清抗體效價檢測:(1)材料和試劑:待檢血清，Rh(D)陽性試劑紅細胞(2%--5%).(2)方法:按每列9支試管排成2列，每管加生理鹽水0.2m1,將血清倍比稀釋，加入相應(yīng)的試劑紅細胞懸液0.2ml,同時做紅細胞懸液對照。置于18--22°C孵育15分鐘，3400轉(zhuǎn)/分離心15秒，肉眼觀察。(3)結(jié)果:抗體效價以產(chǎn)生“+”凝集的待檢血清最高稀釋度計算,不計紅細胞懸液體積。兩列試管終點相同作為待檢血清凝集效價，并應(yīng)符合以下要求：如兩列終點相差一管，且效價均符合要求，則以凝集效價低的為終點;如兩列終點相差一管，有一列效價不符合要求，則取雙倍量待檢血清復(fù)試。(4)抗體效價質(zhì)量要求:抗D效價不應(yīng)低于128。4.3.3抗D試劑血清特異性和親和力檢測:(1)材料和試劑:待檢血清;RhD陽性（R1R1）和陰性試劑紅細胞(2%-5%)。(2)方法:按每列5支試管排成2列，各管加待檢血清0.lml，在各試管中分別加入RhD陽性和陰性試劑紅細胞0.1mL同時做紅細胞懸液對照。置于18-22°C孵育15分鐘，3400轉(zhuǎn)/分離心15秒，肉眼觀察。親和力實驗參考4.2.3.(3)結(jié)果:待檢血清應(yīng)與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生凝集，而與RhD陰性試劑紅細胞不發(fā)生凝集，與R1R1細胞親和力應(yīng)不大于20s。4.4抗人球蛋白卡和篩選紅細胞的性能驗證4.4.1物理檢查:參照質(zhì)量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.4.2方法:用已知的弱抗血清檢測，同時做陰性對照。具體操作執(zhí)行輸血科相關(guān)檢驗項目的標準操作規(guī)程。4.5、凝聚胺試劑的性能驗證4.5.1物理檢查:參照質(zhì)量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.5.2方法: